CN101824098A - 快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法 - Google Patents
快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101824098A CN101824098A CN201010112061A CN201010112061A CN101824098A CN 101824098 A CN101824098 A CN 101824098A CN 201010112061 A CN201010112061 A CN 201010112061A CN 201010112061 A CN201010112061 A CN 201010112061A CN 101824098 A CN101824098 A CN 101824098A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- alcohol
- heparin sodium
- sodium heparin
- resin
- precipitation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法，本发明采用离子交换法去除大量杂质，结合双氧水氧化法，大大提高肝素钠的色泽、效价，再用酒精快速沉淀法分离肝素钠中的多硫酸软骨素，保证肝素钠的收率达到85％以上，效价在180u/mg以上，各项指标完全符合USP、EP标准。本发明比报道的丙酮萃取法效果更加显著，因为多硫酸软骨素与肝素钠同属多糖类物质，对乙醇、丙酮等有机溶剂的溶解性非常低，因此有机溶剂萃取法分离效果不好，特别是肝素钠中多硫酸软骨素较高时分离效果更不明显。而快速沉淀法是根据多硫酸软骨素绝对分子量比肝素钠大、结构上又有差异等特点设计的，本发明操作简单、分离效果显著。
Description
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及将多硫酸软骨素从肝素钠中分离出去的方法。
背景技术：
肝素钠来源于猪小肠粘膜，是一种含有硫酸基的酸性粘多糖，是典型的抗凝血药，能阻止血液的凝结过程，防止血栓的形成。因为肝素钠在α-球蛋白参与下，能抑制凝血酶原转变成凝血酶。肝素钠还具有澄清血浆脂质，降低胆固醇和增强抗癌药物的效用等作用。临床广泛用作外科手术前后防止血栓形成和栓塞，输血时预防血液凝固和作为保存新鲜血液的抗凝剂，广泛用于预防血栓疾病、治疗心机梗塞和肾病患者的渗血治疗，还可以用于清除小儿肾病形成的尿毒症。肝素软膏在皮肤病的治疗与化妆美容中也广泛应用。我国是肝素钠产量最大的国家，国际市场的肝素钠产品原料70％以上均来自中国。随着需求的增加，肝素钠的价格这几年一路攀升，因此有些肝素钠中被人为的加入多硫酸软骨素。多硫酸软骨素是一种类肝素物质，具有与肝素钠一样的抗凝血性质，其结构性质与肝素钠基本相似，经检测与肝素钠的区别在于：1、肝素钠是右旋结构，多硫酸软骨素是左旋结构；2、多硫酸软骨素的绝对分子量比肝素钠的大；3、核磁检测其峰值比肝素钠后出现。
2008年2月，美国因注射肝素钠出现4例死亡，多例不良反应的医疗事故，成为震惊世界的“肝素钠事件”。经有关专家分析，上述事故可能是因为肝素钠中含有多硫酸软骨素有关联。我国政府十分重视并关注事态发展，国家药监局召开专门会议，要求加强管理，一律召回含有多硫酸软骨素的肝素钠。
从肝素钠中分离多硫酸软骨素，迄今为止，除了有机溶剂萃取分离法外，未见其它有关分离技术的报道。而有机溶剂萃取分离法存在以下缺陷：一是由于多硫酸软骨素与肝素钠同属多糖类物质，对乙醇、丙酮等有机溶剂的溶解性非常低，因此有机溶剂萃取法分离效果不好，特别是肝素钠中多硫酸软骨素较高时分离效果更不明显。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法，利用多硫酸软骨素的绝对分子量比肝素钠大的特点，在酒精中多硫酸软骨素比肝素钠沉淀快，而肝素钠仍然留在上清酒精中，从而实现多硫酸软骨素与肝素钠的分离。
为了实现上述技术问题，本发明采取以下技术方案予以实现：
快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法，包括下列步骤：
(1)溶解：在搅拌状态下，将粗品肝素钠加入反应釜内的水中，粗品肝素钠与水的重量比为1∶9-20，升温至55℃±5℃，搅拌4-6小时，使肝素钠完全溶解；
(2)过滤：过滤，收集滤液。
(3)树脂吸附：将滤液泵入处理好的吸附柱，流出的液体循环泵入吸附；
(4)清洗：待流出液效价检测恒定后，停止吸附；用水清洗干净树脂；再用3-5倍树脂体积的1.0-1.5mol/L盐水清洗树脂；
(5)洗脱：配制2-3倍树脂体积的3-4mol/L盐水洗脱树脂，收集洗脱液；
(6)一次醇沉：将洗脱液泵入醇沉罐，按体积的1-1.5倍加入重量浓度为95％、或95％以上的酒精，搅拌约半小时，静置约12小时，收集肝素钠沉淀；
(7)氧化：将肝素钠沉淀按10000-20000IU/L溶解于0.5-0.7mol/L氯化钠溶液中，用碱调PH10-12，再按体积的2-3％加入双氧水，在30-40℃下，氧化8-12小时；
(8)快速沉淀：氧化结束后，降温至10-20℃，将PH调至5-6，澄清过滤，收集滤液；搅拌下缓慢加入酒精至溶液中酒精的重量浓度为30-38％，再搅拌30分钟，静置；用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，收集沉淀；再静置，用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，再收集沉淀物；如此重复，直至连续静止4小时罐底没有沉淀，再向溶液中补加酒精至溶液中酒精的重量浓度为45-50％，静止沉淀10-12小时，将肝素钠完全沉淀；
分别将每次收集的沉淀物送检测，不含多硫酸软骨素的沉淀物合并后进入下一工序；
(9)脱水烘干：将步骤(8)的沉淀物加入酒精中，搅拌捣碎，溶液中的酒精重量浓度在85％以上，静止12小时，真空抽滤，得到的固体物在70-80℃真空干燥，即得到不含多硫酸软骨素的肝素钠。
步骤(8)所述的将沉淀物取样烘干检测，吸光度OD260应小于0.1，若不合格，应重复氧化和快速沉淀这两道工序过程，如合格才能进入下一工序。
与现有技术相比，本发明的优点是：
本发明采用离子交换法去除大量杂质，结合双氧水氧化法，大大提高肝素钠的色泽、效价，再用酒精快速沉淀法分离肝素钠中的多硫酸软骨素，保证肝素钠的收率达到85％以上，效价在180u/mg以上，各项指标完全符合USP、EP标准。
本发明快速沉淀法分离多硫酸软骨素比报道的丙酮萃取法效果更加显著，因为多硫酸软骨素与肝素钠同属多糖类物质，对乙醇、丙酮等有机溶剂的溶解性非常低，因此有机溶剂萃取法分离效果不好，特别是肝素钠中多硫酸软骨素较高时分离效果更不明显。而快速沉淀法是根据多硫酸软骨素绝对分子量比肝素钠大、结构上又有差异等特点设计的，本发明操作简单、分离效果显著。经分离后的肝素钠符合注射级肝素钠原料质量要求。
附图说明：
图1为分离前含有多硫酸软骨素的肝素钠核磁图谱；
图2为分离后的肝素钠核磁图谱；
图3为多硫酸软骨素核磁图谱。
图1中峰①为肝素钠，峰②为多硫酸软骨素峰③为硫酸皮肤素。图2中峰①为肝素钠。图3中峰②为多硫酸软骨素。
如图1所示，没有分离前含多硫酸软骨素的肝素钠核磁图谱中，多硫酸软骨素峰非常明显，显示含量较高。如图2所示，分离后的肝素钠核磁图谱中，已没有图1、图3所示的相应峰值位置的峰，说明本发明的快速沉淀法不仅能够分离除去肝素钠中的多硫酸软骨素，而且除去了其他杂质。
具体实施方式：
(1)溶解：开启水阀，向反应釜内加入1500L饮用水，边搅拌边将150亿总效价粗品肝素钠(粗品肝素钠效价为100IU/毫克，粗品肝素钠与水的重量比为1∶10)加入反应釜中，开启蒸汽，升温至55℃±5℃，搅拌5小时，使肝素钠完全溶解；
(2)过滤：100目滤网过滤，少量水清洗滤渣，收集滤液和洗液(两者合并)；
(3)树脂吸附：将滤液泵入处理好的共有3000L阴离子交换树脂吸附柱，控制流速50L/h，流出液接入桶内循环泵入吸附24小时；
(4)清洗：待流出液效价检测恒定后，停止吸附。吸附残液排空。用水清洗干净树脂，再配制10000L1.0mol/L盐水清洗树脂；
(5)洗脱：配制10000L的3mol/L盐水洗脱树脂，洗脱液收集；
(6)一次醇沉：将洗脱液泵入醇沉罐，加入12000L重量浓度为95％的酒精，搅拌半小时，静置12小时，收集肝素钠沉淀；
(7)氧化：将肝素钠沉淀加入3000L饮用水中，搅拌使其溶解完全，接着加入氯化钠100Kg，混合均匀后用重量浓度为20％的氢氧化钠调PH至11，再加入重量浓度为20％的双氧水80L，并保持在35℃的温度下，氧化10小时；
(8)快速沉淀：氧化结束后，降温至15℃，用盐酸将PH调至5.5，澄清过滤，收集滤液；搅拌下缓慢加入重量浓度为95％的酒精，使溶液中酒精的重量浓度为35％，再搅拌30分钟，静置；用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，收集沉淀；再静置，用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，再收集沉淀物；如此重复，直至连续静止4小时罐底没有沉淀，再向溶液中补加重量浓度为95％的酒精至溶液中酒精的重量浓度为47％，静止沉淀11小时，将肝素钠完全沉淀；分别将每次收集的沉淀物送QA检测，不含多硫酸软骨素的沉淀物合并后进入下一工序；
(9)脱水烘干：将步骤(8)的沉淀物加入酒精中，搅拌捣碎，溶液中的酒精重量浓度在85％以上，静止12小时，真空抽滤，得到的固体物在55℃真空干燥，得到不含多硫酸软骨素的肝素钠72.8Kg，效价180IU/mg，其它指标均符合美国药典、欧洲药典标准。
(10)粉碎包装：将步骤(9)的产品取出，进行120目粉碎，并称重包装，同时取样送检。
Claims (2)
1.快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法，其特征在于包括下列步骤：
(1)溶解：在搅拌状态下，将粗品肝素钠加入反应釜内的水中，升温至55℃±5℃，搅拌4-6小时，使肝素钠完全溶解；
(2)过滤：过滤，收集滤液。
(3)树脂吸附：将滤液泵入处理好的吸附柱，流出的液体循环泵入吸附；
(4)清洗：待流出液效价检测恒定后，停止吸附；用水清洗干净树脂；再用3-5倍树脂体积的1.0-1.5mol/L盐水清洗树脂；
(5)洗脱：配制2-3倍树脂体积的3-4mol/L盐水洗脱树脂，收集洗脱液；
(6)一次醇沉：将洗脱液泵入醇沉罐，按体积的1-1.5倍加入重量浓度为95％、或95％以上的酒精，搅拌半小时，静置12小时，收集肝素钠沉淀；
(7)氧化：将肝素钠沉淀按10000-20000IU/L溶解于0.5-0.7mol/L氯化钠溶液中，用碱调PH10-12，再按体积的2-3％加入双氧水，在30-40℃下，氧化8-12小时；
(8)快速沉淀：氧化结束后，降温至10-20℃，将PH调至5-6，澄清过滤，收集滤液；搅拌下缓慢加入酒精至溶液中酒精的重量浓度为30-38％，再搅拌30分钟，静置；用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，收集沉淀；再静置，用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，再收集沉淀物；如此重复，直至连续静止4小时罐底没有沉淀，再向溶液中补加酒精至溶液中酒精的重量浓度为45-50％，静止沉淀10-12小时，将肝素钠完全沉淀；
分别将每次收集的沉淀物送检测，不含多硫酸软骨素的沉淀物合并后进入下一工序；
(9)脱水烘干：将步骤(8)的沉淀物加入酒精中，搅拌捣碎，溶液中的酒精重量浓度在85％以上，静止12小时，真空抽滤，得到的固体物在70-80℃真空干燥，即得到不含多硫酸软骨素的肝素钠。
2.如权利要求1所述的快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法，其特征在于：步骤(3)所述的树脂为阴离子交换树脂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101120619A CN101824098B (zh) | 2010-02-12 | 2010-02-12 | 快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101120619A CN101824098B (zh) | 2010-02-12 | 2010-02-12 | 快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101824098A true CN101824098A (zh) | 2010-09-08 |
| CN101824098B CN101824098B (zh) | 2011-06-22 |
Family
ID=42688281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101120619A Active CN101824098B (zh) | 2010-02-12 | 2010-02-12 | 快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101824098B (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101942040A (zh) * | 2010-09-16 | 2011-01-12 | 山东海科化工集团有限公司 | 肝素钠中多硫酸软骨素的去除方法 |
| CN102633906A (zh) * | 2011-04-11 | 2012-08-15 | 南通天龙畜产品有限公司 | 一种粗品肝素钠生产过程中多硫酸软骨素的去除方法 |
| CN103209997A (zh) * | 2010-09-14 | 2013-07-17 | 国立大学法人宫崎大学 | 高纯度肝素及其制备方法 |
| CN103804522A (zh) * | 2013-11-24 | 2014-05-21 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种提高肝素钠纯度的方法 |
| CN103864958A (zh) * | 2013-11-24 | 2014-06-18 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种制备高纯度肝素钠的方法 |
| CN104163877A (zh) * | 2014-08-26 | 2014-11-26 | 淮安麦德森制药有限公司 | 硫酸软骨素的制备方法 |
| CN104177512A (zh) * | 2014-08-26 | 2014-12-03 | 淮安麦德森制药有限公司 | 催化法生产低分子硫酸软骨素的方法 |
| CN104198635A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-12-10 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种应用快速分离蛋白纯化仪检测肝素钠中多硫酸软骨素的方法 |
| CN116012383A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-04-25 | 山东鑫晟生物技术股份有限公司 | 用于硫酸软骨素生产监测的数据处理方法 |
-
2010
- 2010-02-12 CN CN2010101120619A patent/CN101824098B/zh active Active
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103209997B (zh) * | 2010-09-14 | 2016-03-16 | 国立大学法人宫崎大学 | 高纯度肝素及其制备方法 |
| CN103209997A (zh) * | 2010-09-14 | 2013-07-17 | 国立大学法人宫崎大学 | 高纯度肝素及其制备方法 |
| CN101942040A (zh) * | 2010-09-16 | 2011-01-12 | 山东海科化工集团有限公司 | 肝素钠中多硫酸软骨素的去除方法 |
| CN101942040B (zh) * | 2010-09-16 | 2012-06-06 | 山东海科化工集团有限公司 | 肝素钠中多硫酸软骨素的去除方法 |
| CN102633906A (zh) * | 2011-04-11 | 2012-08-15 | 南通天龙畜产品有限公司 | 一种粗品肝素钠生产过程中多硫酸软骨素的去除方法 |
| CN103804522A (zh) * | 2013-11-24 | 2014-05-21 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种提高肝素钠纯度的方法 |
| CN103864958A (zh) * | 2013-11-24 | 2014-06-18 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种制备高纯度肝素钠的方法 |
| CN103804522B (zh) * | 2013-11-24 | 2016-09-28 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种提高肝素钠纯度的方法 |
| CN105440164A (zh) * | 2013-11-24 | 2016-03-30 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种提高肝素钠纯度的方法 |
| CN104198635A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-12-10 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种应用快速分离蛋白纯化仪检测肝素钠中多硫酸软骨素的方法 |
| CN104198635B (zh) * | 2014-08-13 | 2016-09-07 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种应用快速分离蛋白纯化仪检测肝素钠中多硫酸软骨素的方法 |
| CN104177512A (zh) * | 2014-08-26 | 2014-12-03 | 淮安麦德森制药有限公司 | 催化法生产低分子硫酸软骨素的方法 |
| CN104163877A (zh) * | 2014-08-26 | 2014-11-26 | 淮安麦德森制药有限公司 | 硫酸软骨素的制备方法 |
| CN116012383A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-04-25 | 山东鑫晟生物技术股份有限公司 | 用于硫酸软骨素生产监测的数据处理方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101824098B (zh) | 2011-06-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101824098B (zh) | 快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法 | |
| CN101575385B (zh) | 萃取法分离肝素钠中的多硫酸软骨素的方法 | |
| CN101519458B (zh) | 一种从粗老绿茶中提取茶多糖和茶多酚的方法 | |
| CN111187366B (zh) | 一种黄精多糖的双水相萃取方法 | |
| CN102070727B (zh) | 一种肝素钠的提取方法 | |
| CN108047343B (zh) | 伊贝母总多糖的制备方法及其应用 | |
| CN1557841A (zh) | 从茶叶中综合提取茶多糖、茶多酚、茶氨酸、咖啡碱的方法 | |
| CN110272932A (zh) | 一种灵芝孢子粉多糖肽的制备方法 | |
| CN102453106A (zh) | 一种白芨多糖的制备方法 | |
| CN101314621A (zh) | 一种南瓜多糖及其制备方法 | |
| CN103044560A (zh) | 一种白芨多糖的制备方法 | |
| CN103923201A (zh) | 一种海马活性糖蛋白的制备方法 | |
| CN110540603B (zh) | 知母多糖及其制备方法、鉴定方法和应用 | |
| CN102432691B (zh) | 一种从芦根中提取多糖的方法 | |
| CN1785308A (zh) | 具有抗肿瘤作用的植物总生物碱提取物的提取工艺及制剂 | |
| CN110123854B (zh) | 一种基于北柴胡组分的抗炎活性药物组合物及其应用 | |
| CN115010823B (zh) | 一种调节肠道菌群的车前子多糖及其制备方法与应用 | |
| CN114539132B (zh) | 一种水热酸控醇提桑叶中dnj方法 | |
| CN1884571B (zh) | 从石蒜属植物中提取多糖的工艺方法 | |
| CN112794925B (zh) | 一种阳春砂多糖及其制备方法和应用 | |
| CN109628523A (zh) | 枸杞多糖提取分离和纯化方法、枸杞糖肽及降血糖药物 | |
| CN114632105A (zh) | 一种牡丹籽粕综合利用方法及其应用 | |
| CN108359021B (zh) | 一种快速制备具有抗病毒和免疫调节活性的亚麻籽多糖的方法 | |
| CN1563104A (zh) | 中药附子中多糖的提取和纯化方法 | |
| CN101759803A (zh) | 水蛭素的生理盐水-聚乙二醇双水相提取法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 223005 Hefei North Road, Huaian economic and Technological Development Zone, Jiangsu 58 Patentee after: HUAIAN MAIDESEN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 223001 Hefei North Road, Huaian Economic Development Zone, Jiangsu 58 Patentee before: HUAIAN MDC CHEMICAL Co.,Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Separation of chondroitin polysulfate from heparin sodium by rapid precipitation Effective date of registration: 20211226 Granted publication date: 20110622 Pledgee: Huaian Qingjiang puyintai financing Company limited by guarantee Pledgor: HUAIAN MAIDESEN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2021320000412 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20230116 Granted publication date: 20110622 Pledgee: Huaian Qingjiang puyintai financing Company limited by guarantee Pledgor: HUAIAN MAIDESEN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2021320000412 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |