CN101813631A - 卡介菌多糖核酸注射液多糖快速测定方法 - Google Patents

卡介菌多糖核酸注射液多糖快速测定方法 Download PDF

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CN101813631A CN 201010133471 CN201010133471A CN101813631A CN 101813631 A CN101813631 A CN 101813631A CN 201010133471 CN201010133471 CN 201010133471 CN 201010133471 A CN201010133471 A CN 201010133471A CN 101813631 A CN101813631 A CN 101813631A
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acid injection
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polyose nuclear
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CN 201010133471
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Inventor
江克光
阎晓文
赵赢
刘小峰
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ZHEJIANG WANMA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
ZHEJIANG WANMA PHARMACEUTICAL CO Ltd
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Abstract

本发明公开了卡介菌多糖核酸注射液多糖快速测定方法是：取注射液中间体5毫升加2％的碘液100微升，摇匀后立即在分光光度计700纳米波长下读取数据，即刻获取多糖的含量，整个测定时间只有5～10分钟。本发明方法是快速测定卡介菌多糖核酸注射液对多糖含量，对于中间体含量的监控起到至关重要的作用，缩短了整个生产周期，降低质量风险，降低了生产总成本。

Description

卡介菌多糖核酸注射液多糖快速测定方法
技术领域
本发明涉及卡介菌多糖核酸注射液制备过程中多糖测定新工艺，特别涉及到卡介菌多糖核酸注射液配制中快速测定方法，采用碘法显色获得可靠的数据。
背景技术
卡介菌多糖核酸(BCG Polysaccharide and Nucleic)具有调节人体的免疫功能、主要用于预防和治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘。
现有的卡介菌多糖核酸注射液制备全过程是：取一定数量的原料放入容器内，按比例加0.9％的氯化钠溶液，搅拌溶解，再加活性炭脱色除热原，然后脱炭过滤，除菌过滤，最后取样测定含量，等待灌封。中间体含量控制根据《中国生物制品规程2000版》中卡介菌多糖核酸注射液制造及检定规程，采用蒽酮法测定多糖含量，整个测定的时间需要3小时左右，目前国内生产厂家一般采用这种经典的测定方法。
我公司目前卡介菌多糖核酸注射液中间体测定方法是，采用碘法测定，测定时间只需数分钟，而数据可靠。该方法的使用大大的缩短了生产时间，同时也降低了注射液配制过程中时间过长的质量风险。
发明内容
本发明提供了卡介菌多糖核酸注射液制备过程中多糖测定新工艺，采用碘法测定多糖含量，获得卡介菌多糖核酸注射液可靠数据。
卡介菌多糖核酸注射液多糖快速测定方法是：取注射液中间体5毫升加2％的碘液100微升，摇匀后立即在分光光度计700纳米波长下读取数据，即刻获取多糖的含量，整个测定时间只有5～10分钟。
本发明缩短了生产时间，即采用碘对多糖特殊的显色，在700纳米获得的数据与多糖的浓度完全成正比，符合比尔定律。
实施例1
卡介菌多糖核酸注射液多糖快速测定方法是取卡介菌多糖核酸注射液的中间体20毫升，分别取5毫升加入3支试管内，每支试管内加2％的碘液100微升，摇匀后立即在分光光度计700纳米波长下读取数据计算，即刻获取多糖的含量，整个测定时间只有5～10分钟。
比较实施例1
标准葡萄糖管制备：取无水葡萄糖，以生理氯化钠溶液准确稀释至1.0mg/ml，为标准葡萄糖储备液。精确量取储备液2.5ml容量瓶中，以生理氯化钠溶液稀释至刻度，为标准葡萄糖溶液(100μg/ml)。
样品：分别取卡介菌多糖核酸注射液中间体1.0毫升加入3支试管内，每支试管内加新鲜配制的蒽酮混合液4.0ml混匀。
标准品：精确量取标准葡萄糖溶液(100μg/ml)0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，加生理氯化钠溶液补至1.0ml，然后将样品和标准品一起放入沸水浴20分钟，拿出冷却至室温，在分光光度计上于620nm波长测定A值。
结果计算：以标准葡萄糖浓度与对应A值求回归公式，应用该公式计算样品多糖含量。整个测定的时间大约需3小时。
新老多糖测定方法对比
  名称   老工艺比较实施例1   新工艺比较实施例1
  样品   取中间体1ml   取中间体5ml
  测定方法   蒽酮混合液4ml   2％碘液200μl
  测定波长   620nm   700nm
  测定时间   约3小时   5～10分钟
注：蒽酮法测定的时间包括做标准曲线
历年来碘法测定的数据与蒽酮法的数据进行比较
2006年生产的卡介菌多糖核酸注射液中间体碘法测定与成品蒽酮法比较
批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法
  20060101   0.30   0.33   20060302   0.32   0.33   20060611   0.31   0.32
  20060102   0.30   0.32   20060303   0.31   0.33   20061001   0.31   0.31
  20060103   0.31   0.32   20060304   0.30   0.33   20061002   0.31   0.32
  20060104   0.31   0.31   20060305   0.31   0.33   20061003   0.32   0.33
  20060105   0.31   0.31   20060306   0.31   0.33   20061004   0.33   0.31
  20060106   0.31   0.32   20060307   0.32   0.34   20061005   0.32   0.32
  20060107   0.31   0.31   20060308   0.33   0.33   20061006   0.32   0.31
  20060108   0.32   0.32   20060309   0.32   0.33   20061007   0.32   0.32
  20060109   0.33   0.31   20060310   0.30   0.31   20061008   0.31   0.31
  20060110   0.31   0.30   20060311   0.31   0.32   20061009   0.30   0.32
批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法
  20060111   0.30   0.31   20060501   0.30   0.31   20061010   0.31   0.32
  20060112   0.33   0.31   20060502   0.30   0.32   20061011   0.30   0.31
  20060113   0.32   0.31   20060503   0.32   0.32   20061012   0.31   0.32
  20060114   0.31   0.32   20060504   0.30   0.30   20061101   0.32   0.32
  20060115   0.32   0.32   20060505   0.28   0.30   20061102   0.30   0.31
  20060201   0.32   0.32   20060506   0.30   0.31   20061103   0.30   0.32
  20060202   0.32   0.32   20060507   0.30   0.32   20061104   0.31   0.31
  20060203   0.31   0.32   20060508   0.30   0.32   20061105   0.31   0.31
  20060204   0.33   0.30   20060509   0.36   0.34   20061106   0.37   0.34
  20060205   0.32   0.30   20060510   0.34   0.34   20061107   0.32   0.35
  20060206   0.31   0.30   20060601   0.30   0.28   20061108   0.32   0.36
  20060207   0.32   0.32   20060602   0.33   0.30   20061109   0.32   0.36
  20060208   0.32   0.29   20060603   0.33   0.32   20061110   0.34   0.35
  20060209   0.33   0.30   20060604   0.36   0.31   20061111   0.33   0.34
  20060210   0.31   0.29   20060605   0.32   0.32   20061201   0.34   0.34
  20060211   0.31   0.32   20060606   0.29   0.32   20061202   0.33   0.33
  20060212   0.33   0.32   20060607   0.31   0.32   20061203   0.32   0.32
  20060213   0.33   0.32   20060608   0.31   0.32   20061204   0.33   0.33
  20060214   0.32   0.32   20060609   0.31   0.32   20061205   0.33   0.33
  20080301   0.31   0.33   20060610   0.31   0.31   20061206   0.31   0.31
2007年生产的卡介菌多糖核酸注射液中间体碘法测定与成品蒽酮法比较
批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法
  20070101   0.33   0.34   20070511   0.34   0.34   20070638   0.31   0.34
  20070102   0.32   0.34   20070601   0.33   0.32   20070801   0.32   0.34
  20070103   0.34   0.33   20070602   0.34   0.32   20070802   0.30   0.34
  20070104   0.32   0.33   20070603   0.35   0.31   20070803   0.31   0.34
  20070105   0.32   0.33   20070604   0.34   0.34   20070804   0.34   0.35
  20070106   0.33   0.33   20070605   0.34   0.32   20070805   0.33   0.34
  20070107   0.32   0.32   20070606   0.34   0.32   20070806   0.35   0.36
  20070108   0.33   0.32   20070607   0.34   0.32   20070807   0.35   0.36
  20070109   0.33   0.33   20070608   0.34   0.32   20070901   0.32   0.35
  20070110   0.35   0.33   20070609   0.33   0.32   20070902   0.30   0.34
  20070301   0.32   0.32   20070610   0.34   0.32   20070903   0.31   0.35
  20070302   0.31   0.33   20070611   0.33   0.31   20070904   0.34   0.35
  20070303   0.33   0.33   20070612   0.31   0.32   20070905   0.33   0.34
  20070304   0.32   0.33   20070613   0.32   0.32   20070906   0.35   0.35
  20070305   0.31   0.32   20070614   0.35   0.34   20070907   0.35   0.34
  20070306   0.32   0.32   20070615   0.31   0.32   20070908   0.34   0.36
  20070401   0.33   0.33   20070616   0.32   0.32   20070909   0.34   0.35
  20070402   0.34   0.33   20070617   0.31   0.31   20070910   0.34   0.36
  20070403   0.36   0.33   20070618   0.31   0.32   20071001   0.34   0.35
  20070404   0.35   0.34   20070619   0.31   0.31   20071002   0.33   0.35
  20070405   0.33   0.34   20070620   0.31   0.31   20071003   0.33   0.36
批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法
  20070406   0.34   0.32   20070621   0.34   0.32   20071004   0.34   0.35
  20070407   0.33   0.32   20070622   0.34   0.32   20071101   0.36   0.35
  20070408   0.32   0.32   20070623   0.33   0.33   20071102   0.34   0.35
  20070409   0.33   0.32   20070624   0.33   0.33   20071103   0.32   0.32
  20070410   0.33   0.32   20070625   0.33   0.32   20071104   0.34   0.33
  20070411   0.33   0.32   20070626   0.31   0.32   20071105   0.34   0.35
  20070412   0.30   0.30   20070627   0.32   0.33   20071106   0.32   0.33
  20070501   0.33   0.32   20070628   0.33   0.34   20071107   0.33   0.34
  20070502   0.35   0.32   20070629   0.31   0.33   20071108   0.33   0.34
  20070503   0.33   0.31   20070630   0.32   0.33   20071109   0.33   0.32
  20070504   0.33   0.31   20070631   0.32   0.32   20071110   0.34   0.34
  20070505   0.33   0.33   20070632   0.34   0.35   20071111   0.35   0.34
  20070506   0.33   0.33   20070633   0.32   0.33   20071112   0.37   0.35
  20070507   0.32   0.33   20070634   0.35   0.35   20071113   0.33   0.36
  20070508   0.33   0.32   20070635   0.35   0.34   20071114   0.37   0.34
  20070509   0.32   0.33   20070636   0.32   0.33   20071115   0.37   0.34
  20070510   0.33   0.34   20070637   0.32   0.33   20071116   0.37   0.35
2008年生产的卡介菌多糖核酸注射液中间体碘法测定与成品蒽酮法比较
批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法 批号   中间体碘法   成品蒽酮法
  20080101   0.34   0.32   20080201   0.33   0.34   20080311   0.32   0.33
  20080102   0.35   0.33   20080102   0.32   0.35   20080312   0.32   0.32
  20080103   0.33   0.30   20080103   0.33   0.34   20080313   0.32   0.32
  20080104   0.37   0.35   20080104   0.35   0.35   20080314   0.32   0.33
  20080105   0.38   0.35   20080301   0.33   0.34   20080315   0.34   0.34
  20080106   0.37   0.34   20080302   0.33   0.33   20080316   0.31   0.31
  20080107   0.37   0.34   20080303   0.37   0.35   20080317   0.30   0.31
  20080108   0.38   0.38   20080304   0.35   0.35   20080401   0.32   0.31
  20080109   0.38   0.35   20080305   0.37   0.35   20080402   0.31   0.31
  20080110   0.34   0.34   20080306   0.34   0.35   20080403   0.33   0.30
  20080111   0.34   0.34   20080307   0.33   0.34   20080404   0.32   0.31
  20080112   0.34   0.30   20080308   0.33   0.34   20080405   0.31   0.31
  20080113   0.36   0.36   20080309   0.33   0.33   20080406   0.35   0.35
  20080114   0.33   0.33   20080310   0.30   0.33   20080407   0.33   0.36
2009年生产的卡介菌多糖核酸注射液中间体碘法测定与成品蒽酮法比较
批号   中间体碘法 成品蒽酮法 批号 中间体碘法 成品蒽酮法 批号 中间体碘法 成品蒽酮法
  20090101   0.34   0.32   20090212   0.32   0.33   20090509   0.30   0.35
  20090102   0.35   0.32   20090213   0.33   0.36   20090510   0.34   0.35
  20090103   0.35   0.32   20090214   0.35   0.34   20090511   0.34   0.34
批号   中间体碘法 成品蒽酮法 批号 中间体碘法 成品蒽酮法 批号 中间体碘法 成品蒽酮法
  20090104   0.34   0.31   20090401   0.31   0.34   20090512   0.34   0.35
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根据四年共318批多糖测定数据统计，碘法测定的平均值为0.3294，蒽酮法测定的平均值为0.3297，两者之间的平均差是0.0003。极个别同一批号的绝对差是0.05，占3批，绝对差为0.04，占10批。
本发明方法快速测定多糖的方法，大大缩短了卡介菌多糖核酸注射液生产时等待灌封时间，降低质量风险。便于针剂车间生产，缩短了整个生产周期，降低了生产总成本。
虽然以上具体描述了本发明某些实施方案和实施例，但本领域所属技术人员应当理解，在不脱离本发明基本精神和范围的前提下可对本发明实施方案进行各种修改和替换，而这些修改和替换均应包括在本发明的等同范围内。

Claims (1)

1.卡介菌多糖核酸注射液多糖快速测定方法，其特征在于：多糖测定新方法是：取注射液中间体5毫升加2％的碘液100微升，摇匀后立即在分光光度计700纳米波长下读取数据，即刻获取多糖的含量，整个测定时间只有5～10分钟。
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