CN101810606A

CN101810606A - 2-(6-羟基-2′,3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在制备单胺氧化酶抑制剂中的应用

Info

Publication number: CN101810606A
Application number: CN 201010124803
Authority: CN
Inventors: 邓虹珠; 易延逵
Original assignee: Southern Medical University
Current assignee: Southern Medical University
Priority date: 2010-03-12
Filing date: 2010-03-12
Publication date: 2010-08-25

Abstract

本发明涉及2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃的新用途，即2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在制备单胺氧化酶抑制剂中的应用和2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在制备防治老年性痴呆的药物中的应用。

Description

2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在制备单胺氧化酶抑制剂中的应用

技术领域

本发明涉及苯骈呋喃衍生物的用途，具体涉及2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在制药领域中的用途。

背景技术

胡枝子为豆科胡枝子属Lespedeza virgata(Thurb)DC的细梗胡枝子的全草，广泛分布于全国各省区。对于胡枝子属植物的药用价值早在《救荒本草》、《分类草药性》、《滇南本草》中就有记载，其茎叶及根入药，味微苦，性平，具强筋益肾，健脾祛湿，润肺清热之功效，在民间广为应用，为湖北民间治疗肾炎的习用药材，用于治疗慢性肾小球肾炎、肾盂肾炎等病症。以胡枝子为主药的肾炎四味片对慢性肾小球肾炎疗效肯定，副作用小，已载入国家基本医疗保险甲类药品目录，鉴于肾炎四味片确切的疗效，该药广泛被研究人员用于同类课题研究中的阳性对照药。

自上世纪30年代末至今，国内外许多学者对胡枝子的化学成分进行了大量的研究，已鉴定了生物碱、黄酮、甾醇、三萜、有机酸等多种化学成分，其中，公开号为CN101100463的专利申请中公开了一种胡枝子的乙醇提取物，其名称为2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃，其结构如式I所示。该化合物常温常压下为黄绿色无规则粉末，目前已发现该化合物具有抗氧化性，可有效提高SOD和GSH-P_X活性，在治疗肾炎中具有显著的效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃的新用途。

2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃的新用途是用于制备单胺氧化酶抑制剂。

本发明人所述2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃可从胡枝子中提取得到，具体方法可参照公开号为CN101100463的专利申请文件的相关描述。

2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃具有抑制单胺氧化酶活性的作用，可制备单胺氧化酶抑制剂，即用于制备治疗与单胺氧化酶活性异常升高相关的药物。本发明人还发现，2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃可使老年性痴呆小鼠脑组织中异常升高的单胺氧化酶酶活降低至接近正常的水平，结合其还具有提高SOD和GSH-P_X活性的作用，推断该化合物可通过抑制脑组织单胺酶活性和抗氧化来防治老年性痴呆的作用，并通过实验进一步证实该化合物具有防治老年性痴呆的作用，可用于制备防治老年性痴呆的药物。

本发明所述抑制剂和防治老年性痴呆的药物分别是由2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃与相应的辅料组成，其中所述的药物可以是常见的片剂、胶囊剂、注射剂等制剂。上述抑制剂和药物中，2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在的含量均为30～60％(W/W)。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面将通过以下药效试验和实施例进一步阐述本发明的技术效果。

例1

1、2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃的制备：

按公开号为CN101100463的专利申请中所述实施例1记载的方法制备。

2、效果实验

实验一：2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃对单胺氧化酶抑制活性的测试

用pH 7.6、0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制浓度为0.05mg/ml的单胺氧化酶A型(MAO-A)和0.15mg/ml单胺氧化酶B型(MAO-B)样品液。2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃采用DMSO溶解，分别配制成150μg/ml、300μg/ml、450μg/ml浓度的溶液。

样品对MAO-A型抑制活性的测试：取495μl的MAO-A缓冲液加入药物溶于DMSO溶液的样品5μl于37℃保温5min，取此混合物140μl放置96孔板，同时加入10μl溶于缓冲液中的底物Kynuramine dihydrobromide并使其最终的浓度为500μmol/L，自动混匀后在37℃条件下，测试波长为360nm进行动力学模式测试。每间隔5min进行测定一次。

相对抑制率(％)＝(1-ΔAm/ΔAc)×100

式中：ΔAm为反应后样品的吸光度在一定反应时间内的增值；ΔAc为空白对照吸光度在一定反应时间内的增值。

样品对MAO-B型抑制活性的测试：方法同MAO-A型，但MAO-B的浓度为0.15mg/ml，步骤和操作过程不变。按照上述方法加入供试样品，进行抑制单胺氧化酶活性测试。

每个浓度样品设3个重复，采用不含待测的DMSO溶液为空白对照，结果见表1。

表1药物对单胺氧化酶的相对抑制率(x±s)

表1的结果表明，2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃具有一定的体外抑制单胺氧化酶活性，当2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃反应浓度为450μg/ml时，对MAO-A的抑制率分别为39.74％，对MAO-B的抑制率分别为32.59％。另外发现2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃对单胺氧化酶抑制活性呈明显的量效关系，随着2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃浓度的增加，其抑制活性增强。

实验二：对脑组织单胺氧化酶的影响

昆明种老龄小鼠(10月龄)随机分成6租，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，除空白对照组以每日0.18g/kg给予生理盐水外，其余各组给予D-半乳糖，每日120mg/kg，op，造模45天。阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组从造模第30天开始给药。给药方式为：

阳性对照组：Vit E，按50mg/kg体重灌胃给药，每天一次；

低剂量组：2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃，按50mg/kg体重灌胃给药，每天一次；

中剂量组：2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃，按100mg/kg体重灌胃给药，每天一次；

高剂量组：2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃，按200mg/kg体重灌胃给药，每天一次。

于造模第45天将小鼠断头处死，取出大脑，制成脑组织匀浆，取适量加甲醇稀释，滤过，采用紫外可见分光光度法测定小鼠单胺氧化酶活性。

实验结果如表2所示。由表2可知2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃低剂量组、中剂量组和高剂量组的单胺氧化酶活性明显低于模型组，表明2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃对单胺氧化酶具有抑制作用，且随着其用量的增加，对单胺氧化酶的抑制效果更加显著，其中中剂量组和高剂量组的效果与公认的单胺氧化酶抑制剂Vit E抑制效果相当。

表2 2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃

对实验动物脑组织单胺氧化酶活性的影响(x±s)(n＝10)

组别单胺氧化酶活力(U/h.mgprot-1)

空白对照组 7.85±1.64

模型组(D-半乳糖) 15.32±3.01

阳性组(Vit-E) 10.42±1.2

低剂量组 11.32±3.7

中剂量组 10.64±4.1

高剂量组 10.21±3.2

实验三、对老龄小鼠学习记忆功能的影响

昆明种老龄小鼠(10月龄)随机分组，分成如下组别(每组10只，用药剂量按体重比与人用剂量比较计算)：

空白对照组：给予生理盐水2ml/100g体重灌胃，每日1次；

高剂量组：2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃，按200mg/kg体重灌胃给药，每天一次；

药物每天上午8:00～9:00灌胃给予，动物自由进食与饮水，保证饲养环境适宜的温度(24±1℃)、湿度和安静。连续给药30天后分别进行以下试验：

①水迷宫法：利用水迷宫，测定小鼠在迷宫内所需时间。

②避暗测试法：计算潜伏期与错误次数。被动回避条件反射箱大小为36×12×12cm。分明暗两间，明间顶盖上方置一台灯，暗间底部安铜栅，通以36伏电流，明暗两室之间有一直径为3cm的洞口，反射连接一记时器，记录动物从明间通过洞口进入暗间的潜伏期。实验时将小白鼠头部背着洞口放入明间，小白鼠一进入暗间立即受到电击，而记时器则同时停止记时，取出小鼠，记录每组动物进入暗间的平均潜伏期和记录5min内进入暗间(错误反应)的动物百分率。

表3学习记忆试验结果表(n＝10)

结果如表3所示，2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃各剂量组与空白对照组之间在水迷宫时间、潜伏期两指标中有显著性差异，剂量间存在剂量差异性，但无显著性差异；说明2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃能增强老龄小鼠学习记忆功能。

实验三、对老年性痴呆模型小鼠学习记忆能力及脑组织脂褐质含量的影响

昆明种老龄小鼠(10月龄)随机分组，分成如下组别，每组10只，除空白对照组给予生理盐水每日0.18g/kg外，其余各组给予D-半乳糖，每日120mg/kg，op。造模45天。造模第30天开始给药，此后给药、造模同时进行至45天。正常对照组、模型对照组每日给生理盐水0.18g/kg，iv；阳性组给VitE。每日0.05/kg，iv；药物组分别给予小鼠2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃溶液，按低、中、高剂量组(分别为50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)给药，iv，每天1次；给药30d后开始采用水迷宫法测定小鼠学习记忆能力。小鼠测定学习记忆能力后断头处死，取出脑组织，按脂褐质试剂盒说明书操作测定脑组织脂褐质含量。

表4 2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃

对实验动物学习记忆能力及脑组织脂褐质含量的影响(x±s) (n＝10)

结果如表4所示，模型组学习记忆能力明显低于空白组。2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃高、中、低剂量组学习记忆能力均明显高于模型组，与空白组比较无明显差异，剂量间存在剂量差异性，但无显著性差异；模型组脑组织脂褐质含量明显高于空白组。2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃高、中、低剂量组脂褐质含量明显低于模型组，与空白组比较无明显差异，剂量间存在剂量差异性，但无显著性差异。

例2

取2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃30g，淀粉70g，混匀，用70％乙醇制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁0.1g，混匀，压片，包薄膜衣。

用法用量：口服，每天1次，每次服用1～2片(相当于胡枝子酚60mg～120mg)。

例3

取2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃50g，加入淀粉50g，混合均匀，按常规方法制成胶囊剂，每粒胶囊含有120～240mg取2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃。

用法用量：口服，每天1次，每次1～2粒。

例4

取2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃60g，加入植物油40g，混合均匀，按常规方法制成软胶囊剂，每粒软胶囊剂含有120～240mg取2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃.

用法用量：口服，每天1次，每次1～2粒。

例5

取2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃40g，用注射用水溶解并定容至100毫升，按常规方法制成注射剂，每支含有120～240mg该化合物。

用法用量：肌肉注射/静脉注射，每天一次，每次一支。

Claims

1.2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在制备单胺氧化酶抑制剂中的应用。

2.2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃在制备防治老年性痴呆药物中的应用。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂中2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃的含量为30～60％(W/W)。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的药物中2-(6-羟基-2′，3′-二甲氧基苯基)-6-羟基-7-甲氧基苯骈呋喃的含量为30～60％(W/W)。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物为片剂、胶囊剂或注射剂。