CN101787030A

CN101787030A - 一种抗hiv的化合物摩鲁新l的制备与应用方法

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Publication number: CN101787030A
Application number: CN201010119851A
Authority: CN
Inventors: 周英
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-03-09
Filing date: 2010-03-09
Publication date: 2010-07-28

Abstract

本发明公开了一种抗HIV的化合物摩鲁新L的制备与应用方法，制备方法是取干燥的桑白皮，用水或水溶性有机溶剂提取；合并提取液，过滤，滤液用有机溶剂萃取分离，萃取物减压浓缩成浸膏，应用色谱方法将浸膏进行分离纯化，即得到本发明的摩鲁新L；应用方法是将具有抗HIV活性的摩鲁新L加入药物载体，混合，制粒，干燥，然后按照常规的药剂制备方法制成颗粒剂、或胶囊、或片剂、或口服液、或注射剂；或者加入载体，按照常规方法制成保健饮料或保健食品。本发明的具有抗HIV活性的摩鲁新L，通过实验证明了该化合物对HIV-LTR序列活性的抑制率可达95％以上，可用于制备抗艾滋病病毒的药物。本发明方法简单易行，适合推广应用。

Description

一种抗HIV的化合物摩鲁新L的制备与应用方法

技术领域

本发明涉及天然物质的生物活性成分，具体而言涉及从桑白皮中提取的化合物及其应用方法。

背景技术

艾滋病严重威胁着人类的健康，对艾滋病的治疗主要是在抗艾滋病病毒方面。临床上尚缺少有效、安全、低毒的抗艾滋病病毒药物。目前，从天然资源中发展新的抗艾滋病病毒药物逐渐成为研究中的一个热点。

摩鲁新L(morus ignin L)是从中药桑白皮(Cortex Mori)中提取的一种黄酮类化合物。迄今为止，尚无利用摩鲁新L抑制HIV、预防或治疗由HIV引起的感染的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗HIV的化合物摩鲁新L的制备方法，从而为新的抗HIV药物的研究开发提供基础条件。

本发明的又一目的是提供抗HIV的化合物摩鲁新L的应用方法，以促进其在防治艾滋病中的实际应用。

发明人在研究中首次发现，从中药桑白皮中提取的摩鲁新L具有很好的抑制HIV-LTR序列活性的功效，HIV-LTR序列是艾滋病病毒复制的关键区域，抑制了该序列的活性就能抑制艾滋病病毒复制，从而达到治疗艾滋病的目的。发明人所要解决的技术问题是提供摩鲁新L在治疗艾滋病的药物中的应用以及摩鲁新L的提取分离方法。

发明人经过反复研究，提供的摩鲁新L的制备方法是：取干燥的桑白皮，用水或水溶性有机溶剂提取；合并提取液，过滤，滤液用有机溶剂萃取分离，萃取物减压浓缩成浸膏，应用色谱方法将浸膏进行分离纯化，即得摩鲁新L，该化合物为黄色粉末，熔点214～217℃，紫外光谱吸收峰为270nm，可溶于甲醇、乙醇、丙酮，不溶于水，其分子式为C₂₅H₂₆O₇，分子量438，结构式为：

上述提取过程中，所述提取方法为浸提或回流提取；所述水或水溶性有机溶剂加入的量是桑白皮的4～10倍，提取温度为20℃～90℃，提取1～6次，每次5min～48h；所述水溶性有机溶剂是浓度为100％以下的含1～6个碳原子的醇、或烷、或酯的水溶液。

上述过滤过程中，滤液用0.5～2倍量有机溶剂萃取；萃取所用的有机溶剂为中极性或低极性有机溶剂。

上述萃取分离过程所用的有机溶剂是石油醚、己烷、苯、乙醚、氯仿、二氯甲烷、一氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等中低极性有机溶剂中的一种或多种。

上述色谱分离过程所用的色谱方法是柱色谱、高效液相色谱、薄层色谱等常用色谱方法中的一种或几种。

HIV的复制和HIV-LTR序列的活性有直接关系，发明人对摩鲁新L在抑制HIV-LTR序列活性方面的作用进行了研究和验证，具体如下：

称取所制备的摩鲁新L10mg，加入适量已处理好的含有BF-24细胞的培养基中，其中BF-24细胞是被接有氯霉素乙酰转移酶基因的HIV-LTR序列转染的。上述已加入摩鲁新L的培养基，在37℃条件下培养16小时，并以相同条件作对照。通过ELISA实验分析，对照组培养基中的HIV-LTR序列活性良好，而加入摩鲁新L的培养基中的HIV-LTR序列活性在很大程度上被抑制，其抑制率为96.0％，说明摩鲁新L具有很好的抑制HIV复制的活性。整株病毒实验时，当摩鲁新L浓度为10μg/mL时，检测基因表达量平均值为157.67，其抑制率为33.8％。

本发明的具有抗HIV活性的摩鲁新L的应用方法，是将具有抗HIV活性摩鲁新L与淀粉、可溶性淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、环糊精、甘露醇、乳糖、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、蒸馏水、乙醇、甘油、蜂蜜、单糖浆、注射用水、注射用油等药物辅料中的一种或多种按照常规的药剂制备方法制成颗粒剂、或丸剂、或胶囊、或片剂、或口服液、或注射剂，即可用于治疗艾滋病；或者加入糖精钠、甜蜜素、麦芽糖醇、山梨糖醇、木糖醇、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢铵、苋菜红、胭脂红、柠檬黄、日落黄、焦糖色素、香精、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苹果酸、营养强化剂等食品辅料中的一种或多种，按照常规方法制成保健饮料或保健食品，用于预防艾滋病。

本发明首次公开了一种从桑白皮中提取得到的具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L，通过实验证明了该化合物对HIV-LTR序列活性的抑制率可达95％以上，可用于制备抗艾滋病病毒的药物。本发明所提供的提取方法简单易行，非常适合推广应用。

具体实施方式

以下实施例可以进一步说明本发明，但实施例并不限定本发明的范围。

实施例1：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入65％的乙醇溶液3000mL，于室温下浸泡3次，每次24h，合并浸泡液，过滤，滤液用1倍量乙酸乙酯萃取，萃取物在50℃下减压浓缩成浸膏，以石油醚和乙酸乙酯为洗脱系统，将浸膏经硅胶柱进行分离纯化，收集纯化石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1的组分中的黄色颗粒即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L。

将摩鲁新L按照药典规定量加入药物载体，制成注射剂。用于治疗艾滋病。

实施例2：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入10倍量水于90℃回流提取6次，每次5h，合并提取液，过滤，滤液用0.5倍量氯仿萃取，萃取物减压浓缩成稠膏状，以石油醚和乙酸乙酯为洗脱系统，将浸膏经硅胶柱进行分离纯化，收集纯化石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1的组分中的黄色颗粒即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L(morusignin L)。

将摩鲁新L(morusignin L)按照药典规定的使用量加入药物载体，混合，制粒，干燥，即得颗粒剂。用于治疗艾滋病。

实施例3：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入65％的甲醇-水溶液1000ml，于室温下浸泡6次，每次24h，合并提取液，过滤，滤液用1倍量氯仿萃取，萃取物减压浓缩成稠膏状，以石油醚和乙酸乙酯为洗脱系统，将浸膏经硅胶柱进行分离纯化，收集纯化石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1的组分中的黄色颗粒即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L。

将摩鲁新L按照药典规定的使用量加入药物载体，混合，制粒，干燥，压片，即得片剂。用于治疗艾滋病。

实施例4：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入65％的乙醇溶液3000mL，于室温下浸泡4次，每次24h，合并浸泡液，过滤，滤液用1倍量乙酸乙酯萃取，萃取物在50℃下减压浓缩成浸膏，浸膏用无水乙醇溶解，以摩鲁新L标准品为对照，应用高效液相制备色谱分离纯化，即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L。

将摩鲁新L按照药典规定量加入药物载体，制成胶囊剂，用于治疗艾滋病。

实施例5：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入80％的甲醇溶液3000mL，85℃回流提取3次，每次6h，合并浸泡液，过滤，滤液用1倍量氯仿萃取，萃取物在50℃下减压浓缩成浸膏，浸膏用无水甲醇溶解，以摩鲁新L标准品为对照，应用高效液相制备色谱分离纯化即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L。

将摩鲁新L(morusignin L)按照药典规定量加入药物载体，制成丸剂。用于治疗艾滋病。

实施例6：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入10倍量50％的甲醇，于60℃下回流提取5次，每次6h，合并提取液，过滤，滤液用1倍量乙酸乙酯萃取，萃取物在50℃下减压浓缩成浸膏，浸膏用无水乙醇溶解，以摩鲁新L(morusignin L)标准品为对照，应用高效液相制备色谱分离纯化即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L(morusignin L)。

将摩鲁新L按照药典规定量加入药物载体，制成口服液，用于治疗艾滋病。

实施例7：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入70％的乙醇溶液3000mL，于室温下浸泡3次，每次浸泡24h，合并浸泡液，过滤，滤液用氯仿萃取，萃取物在40℃减压浓缩成稠膏状，以摩鲁新L标准品为对照，应用薄层制备色谱分离纯化即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L。

将摩鲁新L按照常规使用量加入药物载体，制成保健药品，用于预防艾滋病。

实施例8：将干燥的桑白皮粉碎，过40目筛，称取500g，加入10倍量的60％的甲醇，于80℃回流提取3次，每次8h，合并浸泡液，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，萃取物在40℃减压浓缩成稠膏状，以摩鲁新L标准品为对照，应用薄层制备色谱分离纯化即得具有抑制HIV-LTR序列活性的化合物摩鲁新L。

将摩鲁新L按照常规使用量加入食物载体，制成保健食品，用于预防艾滋病。

Claims

1.一种抗HIV的化合物摩鲁新L的制备方法，其特征是：取干燥的桑白皮，用水或水溶性有机溶剂提取；合并提取液，过滤，滤液用有机溶剂萃取分离，萃取物减压浓缩成浸膏，应用色谱方法将浸膏进行分离纯化，即得摩鲁新L；

所述摩鲁新L化合物为黄色粉末，熔点214～217℃，紫外光谱吸收峰为270nm，可溶于甲醇、乙醇、丙酮，不溶于水，其分子式为C₂₅H₂₆O₇，分子量438，结构式为：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的提取过程中，提取方法为浸提或回流提取；所述水或水溶性有机溶剂加入的量是桑白皮的4～10倍，提取温度为20℃～90℃，提取1～6次，每次5min～48h；所述水溶性有机溶剂是浓度为100％以下的含1～6个碳原子的醇、或烷、或酯的水溶液。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述过滤过程中，滤液用0.5～2倍量有机溶剂萃取；萃取所用有机溶剂为中极性或低极性有机溶剂。

4.根据权利要求1或3之一所述的制备方法，其特征在于所述萃取分离过程所用的有机溶剂是石油醚、己烷、苯、乙醚、氯仿、二氯甲烷、一氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等中低极性有机溶剂中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述色谱方法是柱色谱、高效液相色谱、薄层色谱等常用色谱方法中的一种或几种。

6.按照权利要求1制备的抗HIV的化合物摩鲁新L的应用方法，其特征是：将具有抗HIV活性摩鲁新L与淀粉、可溶性淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、环糊精、甘露醇、乳糖、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、蒸馏水、乙醇、甘油、蜂蜜、单糖浆、注射用水、注射用油等药物辅料中的一种或多种按照常规的药剂制备方法制成颗粒剂、或丸剂、或胶囊、或片剂、或口服液、或注射剂，即可用于治疗艾滋病；或者加入糖精钠、甜蜜素、麦芽糖醇、山梨糖醇、木糖醇、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢铵、苋菜红、胭脂红、柠檬黄、日落黄、焦糖色素、香精、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苹果酸、营养强化剂等食品辅料中的一种或多种，按照常规方法制成保健饮料或保健食品，用于预防艾滋病。