CN101760565A - 一种悬浮芯片技术检测hpv方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种悬浮芯片技术检测HPV方法，它包括以下步骤：一，用PCR-悬浮芯片技术，设计HPV的通用引物和型特异性探针，步骤二，利用生物信息学设计和合成用于PCR扩增HPV的通用引物、不同基因型HPV的探针以及不同基因型HPV的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床宫颈糜烂患者的标本纯化核酸、MY-PCR扩增后与荧光微球进行杂交，检测荧光信号进行基因分型；步骤三，基于流式细胞术的高通量检测方法-悬浮芯片技术，利用一系列不同种类的微小、分散的微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒-待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。
Description
技术领域
本发明涉及一种悬浮芯片技术检测HPV方法
背景技术
人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses，HPV)感染与人类多种肿瘤特别是宫颈癌的发生、发展密切有关。而宫颈癌为女性最常见的癌症之一，其发病率仅次于乳腺癌。全球每年新发病例约40万且有超过20万妇女死于该病。在发展中国家，由于宫颈癌筛查工作的不完善，其发生率是发达国家的6倍。近年，年轻宫颈癌患者有明显上升趋势，发病以每年2％～3％速度增长，对妇女的身心健康造成极大的危害。因此，对宫颈癌进行早期筛查的一项重要内容就是对HPV的检测。
发明内容
本发明提供了一种悬浮芯片技术检测HPV方法，它不但通量高，检测所需标本量少，而且快速，可靠性高，重复性好。
本发明采用了以下技术方案：1一种悬浮芯片技术检测HPV方法，它包括以下步骤：一，用PCR-悬浮芯片(PCR-SAT)技术，设计HPV的通用引物和型特异性探针；步骤二，利用生物信息学设计和合成用于PCR扩增HPV的通用引物、不同基因型HPV的探针以及不同基因型HPV的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床宫颈糜烂患者的标本纯化核酸、MY-PCR扩增后与荧光微球进行杂交，检测荧光信号进行基因分型；步骤三，基于流式细胞术的高通量检测方法-悬浮芯片技术，利用一系列不同种类的微小、分散的微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒-待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量，各种微球的荧光强度能标记上不同的探针可以捕获到不同的待测物，以此达到高通量检测的目的。
本发明具有以下有益效果：(1)通量高：目前有100种微球可供研究使用。(2)检测所需标本量少：本技术用0.1ml的血清就可进行10种以上病毒的检测。(3)快速：传统的核酸杂交需要多次洗涤的步骤，而该技术是对单个微球进行检测，不存在本底影响的问题，基本上不需洗涤，因此所需的实验时间短；并且，配上自动加样器和蠕动泵，微球通过荧光检测仪的速度可以达到1000个/秒以上。100个相同探针微球的检测就具有统计学意义，因此，100种地址微球通过荧光检测仪的检测只需10秒，可以连续高效地进行多样本分析。(4)可靠性高：本技术是对多个微球荧光信号进行单独检测后，用配套的软件进行统计分析，使检测结果更加精确、可靠，传统的核酸杂交技术是对分子集合的光学信号进行检测得到结果，不进行统计。(5)重复性好：不同种类的微球分别标记后混合，再分装成小份，用于分别检测各标本，各小份的性质完全一致。该技术经试给检测灵敏度和特异性达均到98％以上，检测变异系数小于5％。
具体实施方式
本发明利用PCR-悬浮芯片(PCR-SAT)技术，设计HPV的通用引物和型特异性探针对HPV基因型进行高通量检测，再利用生物信息学设计和合成用于PCR扩增HPV的通用引物、不同基因型HPV的探针以及不同基因型HPV的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床官颈糜烂患者的标本纯化核酸、MY-PCR扩增后与荧光微球进行杂交，检测荧光信号进行基因分型，最后基于流式细胞术的高通量检测方法-悬浮芯片技术(suspension arraytechnology，SAT)。基本原理近似于ELISA的检测，即利用一系列不同种类的微小、分散的微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒-待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。不同种类的微球有特定的荧光强度，大小一致，标记上不同的探针可以捕获到不同的待测物，以此达到高通量检测的目的。
Claims (1)
1.一种悬浮芯片技术检测HPV方法，它包括以下步骤：一，用PCR-悬浮芯片(PCR-SAT)技术，设计HPV的通用引物和型特异性探针，步骤二，利用生物信息学设计和合成用于PCR扩增HPV的通用引物、不同基因型HPV的探针以及不同基因型HPV的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床宫颈糜烂患者的标本纯化核酸、MY-PCR扩增后与荧光微球进行杂交，检测荧光信号进行基因分型；步骤三，基于流式细胞术的高通量检测方法-悬浮芯片技术，利用一系列不同种类的微小、分散的微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒-待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量，各种微球的荧光强度能标记上不同的探针可以捕获到不同的待测物，以此达到高通量检测的目的。
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Publications (1)
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Family
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Family Applications (1)
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| CN200810234081A Pending CN101760565A (zh) | 2008-11-21 | 2008-11-21 | 一种悬浮芯片技术检测hpv方法 |
Country Status (1)
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|---|---|
| CN (1) | CN101760565A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103131760A (zh) * | 2011-12-05 | 2013-06-05 | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 | 一种可以同时检测六种治病微生物的悬浮芯片检测方法 |
| CN105219872A (zh) * | 2015-11-04 | 2016-01-06 | 吴艾霖 | 流式液相芯片急性高原病纤溶酶原激活抑制物-1基因rs1799889位点检测试剂盒 |
| CN108374039A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-08-07 | 武汉尚码生物科技有限公司 | 一种人乳头瘤病毒的快速检测方法、液相芯片及试剂盒 |
| CN111257205A (zh) * | 2018-11-30 | 2020-06-09 | 山东大学 | 一种细胞分布分析方法 |
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2008
- 2008-11-21 CN CN200810234081A patent/CN101760565A/zh active Pending
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| CN108374039B (zh) * | 2018-02-01 | 2021-05-28 | 武汉尚智堂生物科技有限公司 | 一种人乳头瘤病毒的快速检测方法、液相芯片及试剂盒 |
| CN111257205A (zh) * | 2018-11-30 | 2020-06-09 | 山东大学 | 一种细胞分布分析方法 |
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20100630 |