CN101756889A - 一种拉米夫定酯注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种拉米夫定酯注射液及其制备方法，由拉米夫定酯、非水溶剂、助溶剂和注射用水组成，其中拉米夫定酯与非水溶剂的重量体积比(g/ml)为1∶10-100，优选1∶15-60，非水溶剂在处方中的用量比为20～60％(v/v)，助溶剂用量为1～20％(w/v)，每支注射液中含拉米夫定酯0.5或1.0g/ml。本发明的拉米夫定酯注射液经加速稳定性试验，动物溶血试验、热源检查、刺激性试验以及过敏性试验，表明完全符合规定标准。具有质量稳定，起效迅速，毒副作用低的特点，避免了在临床稀释使用时出现溶液浑浊、无法给药等问题的发生，可满足临床的需要。

Description

一种拉米夫定酯注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于中药制剂技术领域，涉及拉米夫定酯注射制剂，更具体的说，是一种拉米夫定酯注射液及其制备方法。

背景技术

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种世界性疾病发展中国家发病率高，据统计全世界无症状携带者(HBsAg携带者)超过2.8亿，我国占1亿以上。多数无症状其中1/3出现肝损害的临床表现。特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见无黄疽型HBsAg持续阳性者易慢性化。本病主要通过血液及日常生活密切接触传播，另一方式为母婴传播乙肝疫苗的应用是控制和预防乙型肝炎的根本措施。

拉米夫定酯(Adefovir)为腺嘌呤核苷类似物，它可与腺苷酸竞争性掺入病毒DNA链，作为DNA链的终止物抑制DNA聚合酶，终止DNA链的合成，而使病毒的复制受到抑制。拉米夫定酯还可以诱导内生性α-干扰素，增加自然杀伤细胞(NK)的活力和刺激机体的免疫反应。因此有较强的抗HIV、HBV及疱疹病毒的作用。Adefovir dipivoxil为拉米夫定酯的口服制剂。在治疗慢性乙肝时，其药量是治疗HIV感染的10％到25％，且毒副作用较小。

拉米夫定酯水溶性差，几不溶于水，又非亲脂性物质。该成分的这一特殊物理性质几乎成为将其开发成药品过程中的一个瓶颈，无论是口服还是注射给药，制剂的研制极其迟缓，我们在实验研究中发现，如下的问题：

(1)拉米夫定酯在上述公开的溶剂中溶解度是极其有限，即使在溶解作用较好的乙醇中溶解度也仅为0.25％(g/100ml)左右，而且在加一定量水稀释时即有沉淀析出。

(2)上述发明专利中提到的注射剂，用丙二醇-乙醇为溶媒，仅提到混合溶媒之间的配比，未提到药物和混合溶媒之间的配比。因这类注射剂临床使用时不能直接注射，而是需要用注射用水，氯化钠或葡萄糖输液稀释后给药，如在制剂处方中对药物与非水溶剂比例非水溶剂在处方中的比例不加以限定和不添加适当助溶剂以提高溶液稳定性，当临床用适当溶媒稀释使用时，即会出现溶液浑浊无法给药等问题，很难达到注射给药的要求。

(3)上述发明公开的实施例1中，采用100％非水溶剂溶解拉米夫定酯得到了所述注射液。但我们在实验研究中发现，上述注射液在加入注射用水至10ml时溶液即出现浑浊，达不到注射给药的要求。实验证明：非水溶剂确实能提高拉米夫定酯的溶解度，但在注射剂处方中必须与拉米夫定酯、水、助溶剂以合理的配比，经适当的步骤和方法制备，才能够获得符合注射给药要求的注射液。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷与不足，提供一种可以用任意比例的注射用水、氯化钠或葡萄糖输液稀释，而保持溶液澄明度的拉米夫定酯注射液及其制备方法。

本发明的目的是通过下述技术方案来实现：

本发明的拉米夫定酯注射液，由拉米夫定酯、非水溶剂、助溶剂和注射用水组成，其中拉米夫定酯与非水溶剂的重量体积比(g/ml)为1∶10-100，优选1∶15-60，非水溶剂在处方中的用量比为20～60％(v/v)，助溶剂用量为1～20％(w/v)，每支注射液中含拉米夫定酯0.5或1.0g/ml。

本发明所述的溶解拉米夫定酯用非水溶剂是指生理可耐受的乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇(200，400)等溶剂中的一种或几种的混合溶剂。

所述助溶剂包括葡萄糖、山梨醇、甘露醇等，最好为葡萄糖或山梨醇。

特别需要强调的是拉米夫定酯与非水溶剂的比例，这点对于制备保持溶液澄明度，符合注射给药要求的注射液来说是至关重要的。如拉米夫定酯所占比例过大，则原料药在非水溶剂中会达到饱和浓度，当制备过程中加处方量的水稀释时溶液即会出现不同程度的浑浊现象，导致过滤困难和不必要的原料浪费以及影响注射液中药物含量恒定等情况，增加生产难度；拉米夫定酯比例过小，则会不必要地增加非水溶媒用量，影响临床用药安全性。

我们通过大量的处方筛选试验，摸索出既可提高拉米夫定酯溶解性，又可以满足注射用药要求的合理的制剂处方和制备方法，通过使用适量的非水溶剂和助溶剂，增加拉米夫定酯的溶解度和保持溶液的稳定性，避免在临床稀释使用时出现溶液浑浊、无法给药等问题的发生，尽可能降低非水溶剂的用量，提高了原药浓度，增加了临床使用的安全性。

本发明提供的处方和技术生产的注射剂，可以用任意比例的注射用水，氯化钠或葡萄糖输液稀释，而保持溶液的澄明度，适合静脉注射给药。

本发明提供拉米夫定酯注射液规格为2ml、5ml，每种规格注射液拉米夫定酯含量为0.5或1mg/ml。

本发明所用的拉米夫定酯原料为本实验室自制，经HPLC检测，拉米夫定酯的含量在98％以上。

本发明拉米夫定酯注射液的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：(1)取适量拉米夫定酯，在0～100℃最好为40～80℃溶于适量非水溶剂中(2)加入适量注射用水(3)加入适量助溶剂，溶解，补足注射用水(4)用灭菌垂熔玻璃漏斗或其他配制注射液用过滤方法过滤，灌封、灭菌即得。

为进一步说明拉米夫定酯注射液的积极效果，本发明人对所制备的注射液分别进行了加速稳定性实验、过敏性试验、全身用药刺激性试验、溶血试验等实验，结果表明：本发明的拉米夫定酯注射液质量稳定，安全性符合注射剂质量要求，可满足临床用药需要。现分述如下：

一、拉米夫定酯注射液加速稳定性实验：

对本发明的方法制备而得的拉米夫定酯注射液，按加速稳定性试验法进行了稳定性研究。稳定性试验考察的项目分别为性状、pH值、澄明度、含量测定等项。

材料与方法

样品批号：060626、070716

1)试验条件：37～40℃，相对湿度75％。

2)考察时间：0月、2个月、3个月、6个月。

3)考察项目：性状、PH值、澄明度、拉米夫定酯含量测定；试验结果：如表2-1和2-2所示，拉米夫定酯注射液在本试验条件下很稳定。

表1 样品加速稳定性试验报告

样品：拉米夫定酯注射液(批号：060626)

表2 样品加速稳定性试验报告

样品：拉米夫定酯注射液(批号：0710718)

二、拉米夫定酯注射液全身用药刺激性试验

试验材料：

受试药拉米夫定酯注射液，规格：1ml/支，每支含拉米夫定酯1.0mg，

批号：060624，临用时用无菌生理盐水溶解配制成所需浓度。

试验方法：

选取4只健康的新西兰种白兔，体重为3～3.4kg，饲养一周后供试验用。分别与兔子的左耳耳缘静脉推注TD，右耳注射无菌生理盐水作为参比对照，每次1mg/kg，药液浓度为0.6mg/ml，连续给予3天。在末次给药后肉眼观察血管的外观状况，然后在距离注射部位1cm处向耳根部方向取一段1.5cm左右的血管，用1％的福尔马林溶液固定，进行病理组织学检查。试验结果：

给药一侧与生理盐水一侧的耳尖部病变皆一致，皮下组织内有轻度慢性炎细胞浸润，以淋巴细胞为主。表皮完好，无损伤，无增生，皮下附属腺无病变。

给药侧软骨正常，软骨外有空泡空隙，两旁血管充血，两只充血较严重，另两只充血较轻。皮肤表皮完好，无缺损，皮下组织无炎症，附属腺无病变。

给生理盐水侧，耳中部仅见软骨外有空泡空隙，血管不充血，表皮上皮完好无损，皮下组织无炎症，附属腺无病变。

结论：

本品连续给药后，给药侧与对照侧的耳尖部均有轻度的炎症，可能是注射操作不当引起，与用药无关；给药一侧耳中部出现充血，但未见炎症。病理检查未出现异常的变化。在本试验中，连续应用拉米夫定酯注射液未见有血管刺激性。

三、拉米夫定酯的过敏性试验

试验材料：

拉米夫定酯注射液，规格：1ml/支，每支含拉米夫定酯1.0mg，临用时用无菌生理盐水溶解配制成0.6mg/ml的浓度。

阳性药：卵白蛋白(Albimin egg)，Sigma公司产品，华美生物工程公司分装，批号：BP0038。用无菌生理盐水配制成4％的浓度。

试验方法：

选取体重250～350g的豚鼠20只，随机分成两组，每组10只。每只豚鼠隔日肌肉注射药液0.5ml，共注射3次，其中5只在第1次注射药物后14天再从股静脉注射原药液1ml，进行抗原攻击，另外5只在第1次注射药物后21天再从颈静脉注射药液1ml，进行抗原攻击。在抗原攻击后，如有过敏反应，则在注药后几分钟内发生，根据豚鼠表现进行平分，平分标准见下表。如果高于2分为有过敏反应，2分以下表明该药无致敏作用。

试验设两组，一组为拉米夫定酯注射液组，给予拉米夫定酯注射液，一组为阳性对照组，给予卵白蛋白。

反应级数	反应症状
		0	无明显反应
1	有轻微抓鼻、颤抖或竖毛
		2	有几次咳嗽、有抓鼻、颤抖或竖毛
3	多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等
		4	痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡

试验结果：

抗原攻击后的动物表现评分见下表

结论：本试验中，黄芪注射液没有引起动物的过敏反应。

四、拉米夫定酯溶血试验

2％细胞混悬液的制备：取兔血20ml，用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液，加5～10ml的生理盐水，摇匀，2000～2500rpm离心5分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用5～10ml生理盐水如法洗涤3～次，至上清液不显红色为止。将所得红血球用生理盐水配成2％的悬液，供试验用。取拉米夫定酯注射液用生理盐水配制成0.15mg/ml的溶液备用。

试验方法：取试管7只，按表3配比量依次加入2％红细胞悬液和生理盐水，混匀后，于37恒温箱放置半小时，然后分别加入不同量的药液(第六管为对照管)，摇匀后，置37恒温箱中。开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察2小时，如溶液呈透明红色，即表示溶血，如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。

表3拉米夫定酯注射液溶血反应试验

试验结果显示1～5号试管未出现溶血反应或凝集反应，说明拉米夫定酯注射液在本试验条件下不产生溶血反应和凝集反应。

具体实施方式：

下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明。但不以任何方式限制本发明。

实施例1

处方：拉米夫定酯         1.0g

      乙醇               200ml

      丙二醇             150ml

      山梨醇             35g

      水                 补足至1000ml

制法：取拉米夫定酯，在60℃下溶于处方量丙二醇中，加入处方量乙醇，搅匀，搅拌下加入部分水，再加入山梨醇溶解后，补水至1000ml，用灭菌垂熔玻璃漏斗过滤，灌封，即得1ml规格拉米夫定酯注射液500支。以本制备方法制备而得的样品，经加速稳定性试验(附录1)证明在试验条件下有很好的稳定性，各项指标均符合注射剂标准(中国药典2000年版附IU)。

本注射液3支(1.0mg×2ml)加入到250、500ml规格的5％葡萄糖输液和氯化钠输液中未出现浑浊等异常现象，动物溶血试验、热源检查、刺激性试验以及过敏性试验表明完全符合规定标准。

实施例2：

处方：拉米夫定酯        1.0g

      乙醇              400ml

      甘油              10ml

      葡萄糖            100g

      水                补足至1000ml

制备方法：取处方量的拉米夫定酯，室温下溶于处方量的乙醇和甘油中，搅拌溶解后，加入部分注射用水，搅匀后，加入葡萄糖，搅拌溶解，再补注射用水至1000ml，过滤，灌封，灭菌，即得5ml规格拉米夫定酯注射液200支。

实施例3：

处方：拉米夫定酯           1.0g

      乙醇                 300ml

      丙二醇               100ml

      葡萄糖               50g

      水                   补足至1000ml

制备方法：取处方量的拉米夫定酯，40℃下溶于处方量的乙醇和丙二醇的混合溶液中，搅拌下加入部分水，再加入葡萄糖，溶解后补注射用水至1000ml，过滤，灌封，灭菌，即得2ml规格拉米夫定酯注射液500支。

实施例4：

处方：拉米夫定酯         0.5g

      乙醇               250ml

      山梨醇             80g

      水                 补足至1000ml

制备方法：取处方量的拉米夫定酯，30℃下溶于处方量的乙醇溶液中，搅拌溶解后加入部分水，再加入山梨醇，溶解后补注射用水至1000ml，过滤，灌封，灭菌，即得10ml规格拉米夫定酯注射液100支。

实施例5：

处方：拉米夫定酯         1.0g

      丙二醇             400ml

      葡萄糖             25g

      水                 补足至1000ml

制备方法：取处方量的拉米夫定酯，50℃下溶于处方量的丙二醇溶液中，搅拌下加入部分水，再加入葡萄糖，补注射用水至1000ml，过滤，灌封，灭菌，即得5ml规格拉米夫定酯注射液200支。

实施例6：

处方：拉米夫定酯             1.0g

      乙醇                   200ml

      聚乙二醇200            300ml

      甘露醇                 20g

      水                     补足至1000ml

制备方法：取处方量的拉米夫定酯，40℃下溶于处方量的乙醇和聚乙二醇200的混合溶液中，搅拌下加入部分水，再加入甘露醇，溶解后补注射用水至1000ml，过滤，灌封，灭菌，即得10ml规格拉米夫定酯注射液100支。

实施例7：

处方：拉米夫定酯      1.0g

      乙醇            300ml

      丙二醇          200ml

      甘露醇          50g

      水              补足至1000ml

制备方法：取处方量的拉米夫定酯，70℃下溶于处方量的乙醇和丙二醇的混合溶液中，搅拌下加入部分水，再加入甘露醇，溶解后补注射用水至1000ml，过滤，灌封，灭菌，即得2ml规格拉米夫定酯注射液500支。

Claims (5)

1.一种拉米夫定酯注射液，其特征在于由拉米夫定酯、非水溶剂、助溶剂和注射用水组成，其中拉米夫定酯与非水溶剂的重量体积比(g/ml)为1∶10-100，非水溶剂在处方中的用量比为20～60％(v/v)，助溶剂用量为1～20％(w/v)，每支注射液中含拉米夫定酯0.5或1.0g/ml。

2.如权利要求1所述的拉米夫定酯注射液，其特征在于：所述拉米夫定酯与非水溶剂的重量体积比为1∶15-60。

3.如权利要求1或2或3所述的拉米夫定酯注射液，其特征在于：所述非水溶剂为乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇中的一种或几种的混合溶剂。

4.如权利要求1所述的拉米夫定酯注射液，其特征在于：所述助溶剂为葡萄糖、山梨醇、甘露醇、环己六醇中的一种或几种。

5.一种拉米夫定酯注射剂的制备方法，该方法按以下步骤进行：取适量拉米夫定酯，在适当温度下溶于适量非水溶剂中；加入适量注射用水；加入适量助溶剂，溶解，补足注射用水；过滤，灌封、灭菌即得。