CN101731281A - 舒展曲霉抑菌剂的生产方法及其作为抑菌剂的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种舒展曲霉抑菌剂的生产方法，该方法通过工业化生产，大量获取舒展曲霉活菌及其代谢产物，培养的尖孢镰刀菌及其代谢产物作为生物农药使用，具有很高的经济价值和良好的应用前景。本发明的还提供舒展曲霉作为生物抑菌剂的应用。用舒展曲霉培养代谢产物的方法，首先将培养基置入培养容器内，经适当温度灭菌后，接种尖孢镰刀菌至培养基，控制培养基的温度、湿度、压力、pH条件，培养后，将培养基连同舒展曲霉活菌、孢子及其代谢产物一起混合，再经干燥、浓缩做成固体或粉末状成品。

Description

舒展曲霉抑菌剂的生产方法及其作为抑菌剂的应用

技术领域：

本发明涉及一种真菌及其代谢产物的培养方法，具体讲为舒展曲霉及其孢子和代谢产物的培养方法，及其作为抑菌剂的应用。

背景技术：

舒展曲霉(Aspergillus effuses Tiraboschi)是一种曲霉属丝状真菌，腐生于土壤中，能竞争性地抑制引起多种植物枯萎病等病害发生的尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的生长繁殖，是西瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、番茄枯萎病、辣椒枯萎病等多种植物枯萎病病原菌的天然拮抗微生物。

发明内容：

本发明目的在于发明一种微生物抑菌剂，利用舒展曲霉生产活菌、孢子及其代谢产物，通过工业化生产，大量获取舒展曲霉、孢子及其代谢产物的人工培养方法。

本发明的另一目的是提供舒展曲霉及其孢子和作为生物抑菌剂的应用。

本发明的目的是通过以下措施实现的：

舒展曲霉抑菌剂的生产方法，其特征是：首先将培养基置入培养容器内，经适当温度灭菌后，接种舒展曲霉至培养基，控制培养基的温度、湿度、压力、pH条件，培养后，将舒展曲霉活菌、或孢子及其代谢产物一起混合后，再经干燥、浓缩做成固体或粉末状成品。

培养过程中，培养基按重量kg/重量kg的百分比为：2-6％麦麸、0.5-8％菜籽饼粉、0.5-10％玉米粉、0.1-1.5％硫酸铵、0-0.7％磷酸氢二钾、0-0.15％硫酸镁，以自来水配制，控制pH5.5-6.5，做成固体培养基；

将培养基置于高压灭菌锅中进行高温灭菌55-75分钟，保持灭菌锅中温度为120-124℃，压力为0.12-0.18Mpa；取出已灭菌的培养基，放置在无菌接种室内冷却，并放置2-3天；冷却后，采用上次方法再灭菌一次；

第二次灭菌后，当培养基降温至32℃左右时，接种尖孢镰刀菌，接种量占培养基的重量比为1～7％，控制培养室温度为28-30℃，进行培养；

培养过程中翻动培养基，经5～7天培养后，将舒展曲霉活菌、或孢子及其代谢产物一起混合后，再经干燥、浓缩做成固体或粉末状成品。

培养过程中翻动或搅动培养基，1-2天内每天翻动或搅动次3-5次；3-5天内每天翻动或搅动8-13次；6-7天内每天翻动或搅动4-6次；或搅动培养池内培养基。

本发明培养的活菌、孢子及其代谢产物作为生物抑菌剂应用。

本发明将微生物生长培养基置入培养容器内经灭菌后，接种一定量的舒展曲霉，在一定的温度、湿度、压力、pH条件下，并通以无菌空气，经一段时间培养后，再经干燥、浓缩、粉碎、调配后制成固体或粉末或液体状成品。

本发明利用舒展曲霉生产病原菌的抑菌剂，是一种无公害的生物农药，无污染、低残留，既能满足作物生产的需要，又能保护天敌，降低生产成本，增加农民收入，同时利用现代微生物工艺技术能很容易实现室内工业化、规模化生产，生产条件和生产过程容易人工调控，质量容易控制，产品能进行连续化、批量化生产，特别是作为生物农药使用的舒展曲霉制剂能大大降低生产和使用成本，提高产品单位效价(抑菌效果)，具有很高的经济价值和良好的应用前景。

舒展曲霉在生长过程中与病原菌争夺营养和空间，并分泌拮抗物质直接抑制尖孢镰刀菌的生长，从而控制植物病害的发生，是一种生态有益真菌。

由于其很强的腐生性和抗逆性，能在土壤中存活多年，施用到植物和土壤后，能较长时间的对植物病原菌尖孢镰刀菌产生抑制作用，因此是有很有前途的生物农药。其孢子、活菌和代谢产物可用于防治葫芦科、茄科、禾本科等农作物的枯萎病，有独特的效果，用量省、效果好、污染少、环境友好，因此是农林牧及园艺上的优良生物农药，有利于人类可持续发展和生态平衡。

本发明跟现有技术相比具有如下优点：

本发明中的使用的舒展曲霉是一种常见的土壤和环境微生物，对人体和动物无害，环境友好，生产方法简便，易于操作，生产过程中没有有毒废气、废液和废渣产生，不同于化学杀菌剂的生产，不需要高温、高压和易燃易爆原辅材料，节省能源，降低生产和使用成本，产品为无公害制剂，环境友好，有利于可持续发展。本发明接种使用的尖孢镰刀菌可以从相关大学、科研机构获得。

具体实施方式：尖孢镰刀菌

现举两个实施例，进一步说明。

实例一：固体培养方法

1、培养环境彻底消毒，包括培养池、曲盘、塑料袋、培养室及培养室内空气。

2、将2-6％麦麸、0.5-8％菜籽饼粉、0.5-10％玉米粉、0.1-1.5％硫酸铵、0-0.7％磷酸氢二钾、0-0.15％硫酸镁等加入适量水份，调整含水量达50％左右，pH4-5.5，做成固体培养基，将固体培养基置于培养池、曲盘或塑料袋中。

3、将袋装上述原料置于高压灭菌锅中进行高温灭菌60分钟，保持灭菌锅中温度为121℃，压力为0.15MPa。

4、取出已灭菌的袋装培养基，放置在无菌接种室内冷却，并放置2-3天。

5、将放置2-3天的灭菌袋装培养基再次高温灭菌一次，方法同3，杀灭上次灭菌过程中存活的孢子，冷却。

6、当袋中培养基降温至31℃左右时，接种尖孢镰刀菌，接种量占培养基的重量比为1～11％，控制培养室温度为28-30℃。放置在培养室的培养池或培养架上进行培养，如塑料袋培养，在接种后将塑料袋均匀打孔。

7、培养过程中应多次翻动塑料袋或曲盘，1-2天内每天翻动次3-5次；3-5天内每天翻动6-10次；6-9天内每天翻动4-6次；或搅动培养池内培养基，以使培养基均匀透气，以利尖孢镰刀菌均匀生长充分利用培养料。

8、固体培养法经6～9天培养后，将舒展曲霉活菌、或孢子及其代谢产物一起混合后，再经干燥、浓缩做成固体或粉末状成品，成品为活菌产品。

实施例二：

将本发明培养的活菌产品作为生物抑菌剂，一般用于镰刀菌属真菌性病原菌。将含有活菌和或孢子的粉剂兑水稀释500-2000倍对植物叶片或土壤喷雾使用，5-7天抑病率50-80％以上；如在喷雾时在水中加入1％左右的表面活性剂如洗涤剂等则效果更好；如在20天内连续使用2次则效果更好，防病率达85％以上；使用时不可与化学杀菌剂混合使用。

Claims (4)

1.舒展曲霉抑菌剂的生产方法，其特征是：首先将培养基置入培养容器内，经适当温度灭菌后，接种尖孢镰刀菌至培养基，控制培养基的温度、湿度、压力、pH条件，培养后，将培养基连同舒展曲霉活菌、孢子及其代谢产物一起混合后，再经干燥、浓缩做成固体或粉末状成品。

2.根据权利要求1所述舒展曲霉抑菌剂的生产方法，其特征是：培养过程中，培养基按重量kg/重量kg的百分比为：5-12％麦麸、0.5-5％花生饼粉、0.8-7％玉米粉、0.1-1.5％硫酸铵、0-0.6％磷酸氢二钾、0-0.1％硫酸镁，以自来水配制，控制pH5-6.5，做成固体培养基；

将培养基置于高压灭菌锅中进行高温灭菌55-60分钟，保持灭菌锅中温度为120-125℃，压力为0.12-0.15Mpa；取出已灭菌的培养基，放置在无菌接种室内冷却，并放置2-3天；冷却后，采用上次方法再灭菌一次；

第二次灭菌后，当培养基降温至34℃左右时，接种尖孢镰刀菌，接种量占培养基的重量比为1～10％，控制培养室温度为28-32℃，进行培养；

培养过程中翻动或搅动培养基，经6～9天培养后，将培养基连同舒展曲霉活菌、孢子及其代谢产物一起混合后，再经干燥、浓缩做成固体或粉末状成品。

3.根据权利要求1所述舒展曲霉抑菌剂的生产方法，其特征是：培养过程中翻动或搅动培养基，1-3天内每天翻动或搅动次4-6次；4-6天内每天翻动或搅动8-12次；7-9天内每天翻动或搅动5-6次；或搅动培养池内培养基。

4.权利要求1所培养的舒展曲霉抑菌剂作为抑菌剂的应用。