CN101731258B - 芳香基异硫氰酸酯和烯丙基异硫氰酸酯的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种芳香基异硫氰酸酯和烯丙基异硫氰酸酯的组合物，其重量比为1∶9～9∶1。本发明还提供了上述组合物在制备防治土传病原菌、土壤线虫的农药熏蒸剂中的应用。本发明的优点在于，本发明的芳香基异硫氰酸酯与烯丙基异硫氰酸酯的组合物，以烯丙基异硫氰酸酯为主要活性成分，芳香基异硫氰酸酯为增效成分，能够延长药剂的作用时间，提高防治效果，增效显著，同时能够减少药剂使用量，减少环境污染，对环境更为友善，对人畜安全。

Description

芳香基异硫氰酸酯和烯丙基异硫氰酸酯的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及农药领域，特别涉及一种芳香基异硫氰酸酯和烯丙基异硫氰酸酯的组合物及其在制备农药熏蒸剂中的应用。

背景技术

异硫氰酸酯(ITCs)类化合物广泛存在于十字花科植物中，尤其是芸苔属和辣根属植物的产出量比较可观。不同的植物中所含有的异硫氰酸酯类化合物的种类不同，其中大部分植物中含有烯丙基异硫氰酸酯(AITC)，芳香基异硫氰酸酯，丙基异硫氰酸酯，4-异戊烯基异硫氰酸酯，5-甲亚硫基戊异硫氰酸酯，6-甲亚硫基己基异硫氰酸酯，7-甲亚硫基庚基异硫氰酸酯等，各种类型的ITCs共存于植物组织中。

经研究发现，ITCs除了具有调味作用外，还具有多种生物活性，能有效杀灭或抑制细菌，如对霍乱弧菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌、结核菌、沙门氏杆菌、白喉菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等均有较强的抑制作用；对真菌，如宛氏拟青霉菌、啤酒酵母等也具有较高的抑菌率。特别是对AITC的研究引起了人们的普遍重视。

CN1076332，公开日1993年9月22日，公开了一种含有异硫氰酸酯与带醛基或酮基的多元醇的抗菌组合物，主要用于处理微生物、蔬菜保鲜和处理易腐品。其缺点在于，该组合物的应用主要局限于对有害微生物的防治上，应用范围窄；并且，使用方法复杂、不方便。

CN101133739，公开日2008年3月5日，公开了以AITC为主要活性成分的熏蒸剂产品，用于防治土壤、粮仓、纺织品仓库和烟草仓库等的有害微生物和有害昆虫及线虫，还公开了该熏蒸剂的使用量。

但是，本发明人在用上述熏蒸剂产品进行土壤熏蒸试验时发现，AITC单剂存在穿透能力有限，作用时间短，且易受土壤水分影响等缺点。

为了解决上述问题，本发明人对ITCs进行了单一化合物及其组合物的生物活性筛选，发现两种或两种以上ITCs复配时可以产生增效作用，增加作用时间与作用效果，提高防治效果，降低药剂用量，减少环境污染。将两种或两种以上的异硫氰酸酯的组合物用于防治土传病原真菌、细菌、土壤线虫未见公开报道和申请专利。

发明内容

本发明的目的在于提供一种芳香基异硫氰酸酯与烯丙基异硫氰酸酯的组合物。

本发明的另一目的在于提供所述组合物在制备防治土传病原菌、土壤线虫的农药熏蒸剂中的应用。

为了实现本发明的目的，本发明的芳香基异硫氰酸酯与烯丙基异硫氰酸酯(AITC)的组合物，其重量比为1∶9～9∶1，优选的是1∶1～6∶1，更优选的是2∶1～5∶1。

所述芳香基异硫氰酸酯为苯基异硫氰酸酯、苄基异硫氰酸酯、1-苯基乙基异硫氰酸酯、2-苯基乙基异硫氰酸酯、对氯苯基异硫氰酸酯、邻氯苯基异硫氰酸酯或对三氟甲基苯基异硫氰酸酯。

本发明组合物在制备防治土传病原菌、土壤线虫的农药熏蒸剂中的应用，其可以通过本领域的常规方法，根据不同应用场合，制成不同的农药熏蒸剂剂型，如油剂、水乳剂、可溶性液剂或颗粒剂等。

其中，所述油剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯    1～60％，

芳香基异硫氰酸酯    0.25～20％，

抗氧化剂            0.1～2％，

溶剂                10～85％，

植物油补齐至100％；

所述抗氧化剂为抗坏血酸类物质或没食子酸戊酯；所述溶剂为甲苯、二甲苯、乙酸乙酯或环己酮；所述植物油为粗菜籽油、棉油或粗豆油。

其制备过程为：定量称取芳香基异硫氰酸酯与AITC，混合均匀后，加入抗氧化剂充分拌匀。再将准确定量称取的植物油及溶剂充分混匀。最后将上述两种溶液在配制罐中混合并持续搅拌1～3小时。产品分装于双重阻隔塑料瓶中或内涂阻隔层的铝瓶中，密封贮藏。

所述水乳剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯(AITC)    1～20％，

芳香基异硫氰酸酯          0.25～10％，

乳化剂                    12～28％，

抗坏血酸                  0.1～2％，

溶剂                      10～30％，

植物油                    1～15％，

用水补齐至100％；

其中，所述乳化剂为T4103、TX-10(以上两种乳化剂为南京太化生产)、农乳500号、602(以上两种乳化剂为钟山石化生产)、OP-10、Well201、Well205、M30(以上四种乳化剂为福建威尔化工生产)；所述溶剂为乙酸乙酯或环己酮。

其制备过程为：定量称取芳香基异硫氰酸酯和AITC，混合均匀后，加入抗坏血酸充分拌匀。将准确定量称取的乳化剂和溶剂充分混匀。最后将上述两种溶液在配制罐中持续搅拌1～3小时。产品分装于双重阻隔塑料瓶中玻璃瓶或内涂阻隔层的铝瓶中，密封贮藏。

所述可溶性液剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯(AITC)        1～40％，

芳香基异硫氰酸酯              0.2～30％，

乳化剂                        12～30％，

抗坏血酸                      1～10％，

溶剂补齐至100％；

其中，乳化剂为T4103(南京太化生产)、农乳500号、农乳600号、602(以上三种为钟山石化生产)、OP-10、Well201、Well205、M30(以上四种为福建威尔化工生产)中的一种或几种；所述溶剂为乙酸乙酯、二甲苯、甲醇、乙醇或一线油的一种或几种，其中，优选的是重量比1∶1的二甲苯与一线油的混合溶剂，或重量比1∶1的甲醇与乙醇的混合溶剂。

其制备过程为：定量称取芳香基异硫氰酸酯和AITC，混合均匀后，加入抗坏血酸充分拌匀。将准确定量称取的农用乳化剂和溶剂充分混匀。最后将上述两种溶液在配制罐中持续搅拌1～3小时。产品分装于双重阻隔塑料瓶中，密封贮藏。

所述颗粒剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯    1～5％，

芳香基异硫氰酸酯    0.5～2％，

粉料                65～85％，

包膜材料            1～20％，

固化剂              1～8％；

其中，所述粉料为沸石粉、粘土、白炭黑、膨润土；所述包膜材料为亚麻油、蓖麻油或大豆油的两种以上；所述固化剂为酚醛树脂。

所述粉料还包括重量百分数40～65％的改性淀粉和12.5～20％的辅料；其中，所述改性淀粉为羟甲基淀粉、α-环糊精；所述辅料包括交联剂、阴离子表面活性剂、粘合剂及氯化钾。具体地说，所述交联剂为甲醛、脲醛等；所述阴离子表面活性剂为木质素磺酸钠、二烷基磺基琥珀酸等；所述粘合剂为阿拉伯明胶、聚乙烯醇(PVAl7-88)等。

其制备过程为：定量称取芳香基异硫氰酸酯和AITC，混合均匀后，用粉料吸附药液备用。称取包膜材料及固化剂，充分搅拌混匀，然后加入吸附药液后的粉料，搅拌混合均匀。产品分装于尼龙塑料袋中，密封贮藏。

颗粒剂的制备过程还可以是：定量称取芳香基异硫氰酸酯和AITC，混合均匀，制成混合药液备用。将改性淀粉在水中搅拌糊化，然后加入阴离子表面活性剂及交联剂，混合均匀，使其自然凝胶一段时间后，加入粉料、氯化钾及粘合剂，混合均匀，用造粒器造粒，通过分级筛筛选得到所需粒径的颗粒，干燥，然后用其吸附上述混合药液，备用。最后称取包膜材料及固化剂，充分搅拌混匀，加入上述吸附混合药液后的颗粒，搅拌混合均匀。产品分装于尼龙塑料袋中，密封贮藏。

以上生产过程均在密闭条件下由机器完成，要避免人员直接接触药液。

本发明人在对ITCs进行单一化合物及其组合物的生物活性筛选时发现：脂肪类ITCs的抑菌、杀线虫的熏蒸活性随着碳链的增加而显著降低，芳香类ITCs的挥发性不及脂肪类ITCs，但芳香类ITCs在培养基中的抑菌效果、线虫悬液中的触杀效果要好于脂肪类的ITCs，在所有供试的ITCs中，AITC的熏蒸效果最好。

通过对ITCs单剂和组合物的筛选，发明人发现以AITC和芳香基异硫氰酸酯进行复配，其组合物的生物活性较单剂增效显著，其中，芳香基异硫氰酸酯优选为苯基异硫氰酸酯、苄基异硫氰酸酯或2-苯基乙基异硫氰酸酯。发明人进一步进行了上述ITCs组合物的配比筛选，发现当AITC与芳香基异硫氰酸酯的重量比在1∶9～9∶1时，均有良好的增效作用，其中，优选配比为1∶1～6∶1，最优选的配比为2∶1～5∶1。

上述AITC与芳香基异硫氰酸酯的组合物，在增加作用时间与作用效果的同时，减少AITC的使用量，对环境更友好，形成一种更理想的生物源熏蒸剂。以该组合物为有效成分的农药熏蒸剂适用于温棚土壤、保护地等不同场合的熏蒸，其具有良好的杀菌、杀线虫等生物活性，可以熏杀植物根结线虫，及多种有害土传病原真菌与细菌。

本发明的优点在于，本发明的芳香基异硫氰酸酯与AITC的组合物以AITC为主要活性成分，芳香基异硫氰酸酯为增效成分，能够延长药剂的作用时间，提高防治效果，增效显著，同时能够减少药剂使用量，减少环境污染，对环境更为友善，对人畜安全。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步说明本发明，但不以任何形式限制本发明的范围。

实施例1 8％AITC和2％苄基异硫氰酸酯(BITC)组合物油剂的生产

准确定量称取含量为94％(注：本发明中的含量均为重量百分数)的AITC原药(注：本发明中的异硫氰酸酯原药及提取液均为武汉乐立基生物科技有限公司生产)4.25kg，再称取含量为4％的BITC提取母液25kg，在2M3调配罐中充分混匀。加入准确称取的抗坏血酸0.5kg，并再次充分混匀。再向调配罐中准确投入10.125kg乙酸乙酯和10.125kg植物油，充分混匀，持续搅拌1小时。配制得到50kg AITC和BITC组合物的油剂产品。

抽样分析，结果表明产品中AITC的含量为8.01％，BITC的含量为2.00％。将产品分装入内涂有阻隔材料的铝罐中，每罐5kg，共计10罐。密封罐口，贴上标签即为有效组份含量为10％的组合物油剂产品。

实施例2 11.7％AITC和1.3％的苄基异硫氰酸酯组合物水乳剂的生产

准确称取含量为94％的AITC原药249kg，含量90％的苄基异硫氰酸酯原药28.9kg，抗坏血酸20kg，在调配罐中将三者充分搅拌均匀。再向调配罐中定量加入农用乳化剂TX-10 200kg，乙酸乙酯366kg，植物油350kg，加入水786.1kg，边加边搅拌，全部物料加入之后，继续用搅拌机搅拌1小时，配制得到2吨AITC和BITC组合物的油剂产品。

取样化验，结果表明产品中含AITC的量为11.98％，苄基异硫氰酸酯含量为1.30％，最终得到有效组份含量为13.3％的组合物产品，产品用500mL玻璃瓶装，瓶口密封，贴上标签。

实施例3 1％AITC和6％2-苯基乙基异硫氰酸酯组合物油剂的生产

准确定量称取含量为20％的AITC提取母液50kg，再称取含量为90％的苄基异硫氰酸酯原药66.7kg，在2M³调配罐中充分混匀。加入准确称取的抗坏血酸30kg，并再次充分混匀。再向调配罐中准确投入450kg乙酸乙酯和450kg植物油，充分混匀。持续搅拌3小时。配制得到1吨AITC和BITC组合物的油剂产品。

抽样分析，结果表明产品中AITC的含量为1.00％，BITC的含量为5.99％。将产品分装入内涂有阻隔材料的铝罐中，每罐5kg，共计200罐。密封罐口，贴上标签即为有效组份含量为7％的组合物油剂产品。

实施例4 4％AITC和4％2-苯基乙基异硫氰酸酯组合物可溶性液剂的生产

准确定量称取含量为20％AITC提取母液100kg及含量为90％的2-苯基乙基异硫氰酸酯原药22.2kg，在调配罐(1)中充分混匀，加入准确称取的抗坏血酸15kg，再次充分混匀。在调配罐(2)中加入农乳600号10kg、乳化剂OP-10 50kg，混合后再加入乙酸乙酯385kg，充分混匀。将调配罐(2)中的物料通过管道全部移入调配罐(1)中，密封罐口后开动搅拌机搅拌2小时。配制得到500kgAITC和2-苯基乙基异硫氰酸酯组合物可溶性液剂产品。

抽样分析，结果表明产品中AITC的含量为4.01％，2-苯基乙基异硫氰酸酯含量为3.99％，最终得到有效组份含量为8％的可溶性液剂产品，将产品分装入双重阻隔的塑料瓶内，每瓶装药500mL。

实施例5 0.9％AITC和8％的苯基异硫氰酸酯组合物水乳剂的生产

准确称取含量为9％的AITC植物提取母液100kg，含量为90％的苯基异硫氰酸酯原药89kg，抗坏血酸20kg，在调配罐中将三者充分搅拌均匀。定量加入农用乳化剂Well201 100kg，乙酸乙酯180kg，植物油150kg，水361kg，边加边搅拌，全部物料加入之后，继续用搅拌机搅拌3小时，配制得到1吨AITC和苯基异硫氰酸酯组合物水乳剂产品。

取样化验，结果表明产品中AITC的含量为0.91％，苯基异硫氰酸酯含量为8.0％，最终得到有效组份含量为8.9％的组合物水乳剂产品，产品用500mL玻璃瓶装，瓶口密封。

实施例6 5％AITC和1％苄基异硫氰酸酯组合物可溶性液剂的生产

准确定量称取含量为94％的AITC原药106.4kg及含量为90％的苄基异硫氰酸酯原药22.3kg。将两种活性药液在调配罐(1)中充分混匀，加入准确称取的抗坏血酸29.3kg，并再次充分混匀。在调配罐(2)中加入农乳500号40kg、乳化剂602 200kg，混合均匀后再加入二甲苯801kg，一线油801kg，充分混匀。将调配罐(2)中的1842kg物料通过管道全部移入调配罐(1)中，密封罐口后开动搅拌机搅拌1小时。配制得到AITC和苄基异硫氰酸酯组合物可溶性液剂产品2吨。

抽样分析，结果表明产品中AITC的含量为5.01％，苄基异硫氰酸酯含量为0.995％，最终得到有效组分含量为6％的组合物可溶性液剂产品，将产品分装入双重阻隔的塑料瓶内，每瓶装药500mL。

实施例7 4％AITC和1％邻氯苯基异硫氰酸酯组合物颗粒剂的生产

准确定量称取含量为94％的AITC原药8.5kg和含量为90％的邻氯苯基异硫氰酸酯原药2.2kg，混合均匀，制成混合药液备用。

将10kg羟甲基淀粉加入35kg水中，在30℃糊化120min，且在加热过程中不断搅拌；然后将糊化的羟甲基淀粉、2kg木质素磺酸钠和0.5kg甲醛在20℃下以300r/min搅拌混合50min；接着在25℃下自然凝胶8h；然后加入100kg粘土、55kg氯化钾、5kg聚乙烯醇通过圆盘造粒器造粒，转速在90r/min，通过分级筛，筛选得到粒径为3～10mm的颗粒，干燥，然后吸附上述混合药液。

称取6kg蓖麻油和6kg大豆油，7kg酚醛树脂，充分搅拌混匀，加入吸附药液后的颗粒，搅拌混合均匀，配制得到200kg AITC和邻氯苯基异硫氰酸酯组合物颗粒剂产品。

抽样分析，结果表明产品中AITC的含量为4％，苄基异硫氰酸酯含量为0.995％，最终得到有效组分含量为5％的组合物产品，将产品分装入塑料袋中，封口，每袋装500g。

实施例8 3％AITC和2％的对氯苯基异硫氰酸酯组合物颗粒剂的生产

准确定量称取含量为94％的AITC原药6.39kg和含量为95％的对氯苯基异硫氰酸酯原药4.21kg，混合均匀，待用。用170kg市售的40目黄色颗粒沸石粉(pH中性)吸附上述混合药液。

称取6.7kg亚麻油和5.7kg大豆油，7kg酚醛树脂，充分搅拌混匀，然后加入上述吸附药液后的沸石粉，搅拌混合均匀。配制得到200kg AITC和对氯苯基异硫氰酸酯组合物颗粒剂产品。

抽样分析，结果表明产品中AITC的含量为3％，苄基异硫氰酸酯含量为1.995％，最终得到有效成分含量为5％的组合物颗粒剂产品200kg，将产品分装入塑料袋中，封口，每袋装500g。

实施例9

取黄瓜根结线虫危害严重的土壤搅拌均匀，并装入100个花盆，每盆2kg，其中空白组和处理组各50盆。然后将实施例1生产的组合物油剂产品按重量比稀释1000倍，处理组每盆土壤施药300mL，用土覆盖。将处理组和空白组均浇入少量的清水，用聚氯乙烯塑料膜密封7天后，敞开4天，然后播种刚萌芽的“本地王”黄瓜(湖北富悦种子有限公司)种子于花盆中，空白组与处理组每盆均为5粒种子，正常培育60天。

统计结果，发现空白组死苗率达到60％，且植株矮小枯黄，每克黄瓜根中的根结数为234个；处理组死苗率仅为10％，且每克根中的根结数仅为65个，根结数显著下降。

实施例10

在湖北武汉华中农业大学蔬菜基地，挑取常年种植黄瓜且长期受黄瓜根结线虫严重危害的田块，划分大小一致的16个小区，每个小区面积为40m²，随机分为空白组、药剂对照组、AITC单剂组以及组合物试验组，在每个小区中开258穴，穴间距为15cm，采用穴施灌根方法施药，其中，对照组药剂为线虫速净(20％甲基阿维灭线磷微粒剂，山东汉高生物工程有限公司)，AITC单剂组药剂为10％辣根素乳油(武汉乐立基生物科技有限公司)、组合物试验组药剂为实施例1方法生产的组合物油剂，分别按重量比稀释2000倍，每穴施药600mL，两个月后统计每克根的根结数，结果表明，与空白组相比，对照组、AITC单剂组、组合物试验组的防效分别为50％、68.5％、85％。

实施例11

在广西桂林蔬菜试验基地，选择一块空心菜根结线虫感染严重的田块，划分大小一致的16个小区，每个小区面积为100m²，随机分成空白组、药剂对照组、AITC单剂组及组合物试验组。其中，对照组药剂为13％辛硫磷乳油(湖北仙隆化工股份有限公司)，AITC单剂组药剂为13％辣根素乳油(武汉乐立基生物科技有限公司)、组合物试验组药剂为实施例2方法生产的组合物水乳剂，分别按重量比稀释1200倍，直接泼浇，用药量为15g/m²，覆聚氯乙烯塑料膜，土壤熏蒸处理7天，间隔14天，敞开4天后，移栽“本地王”空心菜幼苗(湖北富悦种子有限公司)，正常培养两个月。

统计每克根的根结数，结果表明，与空白组相比，药剂对照组、AITC单剂组以及组合物试验组的防效分别为49.2％、78％、89％。

实施例12

在湖北武汉东西湖区惠慈农场大棚基地，选取一块常年受根结线虫感染严重的田块，随机分为空白组、AITC单剂组、组合物试验组，共12个小区，每个小区面积25m²。其中，空白组不施药，AITC单剂组施用13％辣根素水乳剂(武汉乐立基生物有限公司)，组合物试验组施用实施例2生产的组合物水乳剂，药剂分别按重量比稀释1500倍。各组田地开同样大小的穴，每个小区170穴，穴间距为15cm，每穴施药300mL，覆盖尼龙薄膜，熏蒸7d后，敞气5d。然后，移栽生长一致的“中杂七号”番茄幼苗(湖北富悦种子有限公司)于穴中，每组240株，正常培养两个月。

统计结果表明，空白组死亡率达到50％，且植株矮小枯黄，平均每株有效生物量(干重)为4.5g。13％辣根素水乳剂、组合物试验组死亡率仅为25％、10％，干重分别为9.6g、18.5g，组合物药剂较空白组、13％辣根素水乳剂分别提高了311％、92.3％。

实施例13

在花盆中装入立枯丝核菌侵染严重的土壤，每盆用土3kg，共装150盆。从中随机选取50盆，每盆灌清水300mL作为空白对照组；另取50盆施用8％辣根素乳油(武汉乐立基生物有限公司)作为AITC单剂组；另外50盆施用实施例3生产的组合物油剂作为组合物试验组。先用双层尼龙薄膜袋将灌水后的空白组包裹严实，然后将AITC单剂组及组合物试验组的药剂各稀释800倍，灌施，每盆灌药水300mL，覆土，用保鲜膜密封。将三组土壤在太阳下晒5天后，去除包裹的薄膜，敞气5天，然后移栽“聚宝3号”西瓜苗(湖北富悦种子有限公司)，每盆两株，同等管理条件下培养40天。

结果表明，空白组100棵瓜秧死亡89棵，AITC单剂组死亡26棵，而组合物试验组100棵瓜秧仅死亡4棵，防效达96％。

实施例14

用番茄枯萎病侵染严重的土壤装入缽中，每缽用土6kg，共装缽60个。其中随机选取30缽，每缽灌清水300mL作为空白对照组；另外30缽施用实施例4生产的组合物可溶性液剂作为组合物试验组。先用双层尼龙质薄膜袋将灌水后的空白对照组包裹严实，然后将实施例4生产的组合物可溶性液剂按重量比稀释1000倍，灌施，每缽灌药水300mL，覆土，尽快用尼龙质薄膜袋按包空白对照组的方法严密包裹起来，密闭7天，去除包裹的薄膜后，敞气5天。然后移栽“中杂七号”番茄幼苗(湖北富悦种子有限公司)，每缽两株，同等管理条件下培养40天。

结果表明，空白对照组60棵番茄苗死亡54棵，组合物试验组60棵瓜秧仅死亡3棵，防效达95％。

实施例15

在湖北长阳高山蔬菜基地，选取一块根肿病侵染严重的田块，划分为三个小区，每个小区面积为100m²，随机分为空白组、AITC单剂组以及组合物试验组，各组中每隔0.6m开一个沟，沟深10～15cm，采用灌沟方式施药。其中空白组施用清水，AITC单剂组施用8.9％辣根素油剂(武汉乐立基生物科技有限公司)，组合物试验组施用实施例5生产的组合物水乳剂产品，药剂含量均为8.9％，按重量比稀释1200倍灌沟，每沟用量为10L，覆土，然后铺上聚氯乙烯塑料膜，密闭七天后，敞气四天。然后种上“乌金白”白菜(湖北富悦种子有限公司)，播种后各组管理措施相同。到白菜收获季节，检查根肿情况。

结果表明，空白组根肿感染率为95％，AITC单剂组根肿感染率为28％、组合物试验组根肿感染率仅为10％。

实施例16

将十字花科软腐病感染严重的土壤搅拌均匀，装入120个花盆中，其中空白组60盆，处理组60盆，每盆2kg。然后将实施例6生产的组合物可溶性液剂产品按重量比稀释300倍，每盆施药300mL，埋入盆中约5cm深处，将处理组和空白组均浇入少量的清水，用聚氯乙烯塑料膜密封7天后，敞开4天，然后播种“乌金白”白菜(湖北富悦种子有限公司)种子于花盆中，空白组与试验组均播种300粒种子，每盆5粒，正常培养20天后统计出苗率。

结果表明，空白组几乎没有存活；试验组的死亡率仅为13.1％。

实施例17

在山东青州北方根结线虫感染严重的蔬菜基地，划分大小一致的12个小区，每区面积为100m²，随机分为空白组、对照组以及组合物试验组。各区中每隔0.5m开沟，沟深8～15cm。其中空白组施用清水；对照组施用20％甲基阿维灭线磷微粒剂(山东汉高生物工程有限公司)，施药量为25g/m²；组合物试验组施用实施例7生产的组合物颗粒剂产品，施药量为100g/m²。施药后覆土一个星期，然后种植“本地王”黄瓜(湖北富悦种子有限公司)，分三季种植，播种后各组管理措施相同。到黄瓜收获季节，统计黄瓜根结数，计算防效。

2009年5月23日统计结果表明，试验组、对照组的防效分别为87％、65.2％；2009年8月31日统计结果表明，试验组、对照组的防效分别为75.23％、35.2％；2009年10月23日统计结果表明，试验组、对照组的防效分别为65％、21％。

以下通过ITCs单一化合物及其组合物生物活性实验，进一步说明本发明。

实验例1 ITCs单一化合物油剂对病原菌熏蒸生物活性的研究

将相应植物可药用部分粉碎，经水解、水蒸汽蒸馏纯化，再精馏，分别制备出不同的无色或黄色油状ITCs，其纯度均大于90％。

将此油状物分别配置成不同含量的油剂。测定其对多种病原菌的熏蒸生物活性，发现不同的异硫氰酸酯对常见真菌有强烈的熏蒸作用。测定结果见表1。

表1 不同浓度的异硫氰酸酯对土传病原真菌熏蒸活性

结果表明，ITCs单一化合物浓度为10μg/mL时对棉花黄萎病、立枯丝核菌、草莓灰霉病菌、番茄枯萎病菌等都具有强烈的熏蒸活性，且随着碳链的增长，熏蒸活性下降，然而丁基异硫氰酸酯表现出负效应；其中，AITC的生物活最高性，即使浓度仅为2μg/mL的AITC对病原菌菌丝生长的抑制率也能达到90％以上。

AITC对四种土传病原真菌的熏蒸活性如表2所示。

表2 AITC对四种土传病原真菌室内熏蒸活性

	LC50(μg/mL)	置信域	LC95(μg/mL)	置信域
					棉花黄萎病	0.32	0.097～0.55	1.80	1.09～4.06
立枯丝核菌	0.22	0.081～0.37	1.63	1.10～2.78
					草莓灰霉	0.52	0.048～1.17	3.01	1.32～3.61
番茄枯萎	0.17	0.097～0.26	0.98	0.76～1.26

参照上述方法，测定不同浓度的ITCs单一化合物对土传病原细菌的抑制率，结果如表3所示。

表3 不同浓度的异硫氰酸酯对土传病原细菌熏蒸活性

与表1对比，结果表明，与病原真菌相比，病原细菌耐受能力显著上升。从表3中还可以看出，随着碳链的增长，ITCs的熏蒸活性降低，其中，AITC表现出最高的生物活性。

AITC对四种土传病原真菌的熏蒸活性如表4所示。

表4 AITC对两种土传病原细菌熏蒸活性

	LC50(μg/mL)	置信域	LC95(μg/mL)	置信域
					根癌土壤杆菌	5.19	3.40～9.94	18.18	9.58～24.06
十字花科软腐病菌	8.38	4.06～11.04	28.81	10.1～32.50

实验例2 ITCs单一化合物油剂对病原菌触杀生物活性的研究

将相应植物可药用部分粉碎，经水解、水蒸汽蒸馏纯化，再精馏，分别制备出不同的无色或黄色油状ITCs，其纯度均大于90％。

将上述油状物分别配置成不同含量的油剂。采用抑菌圈法测定不同ITCS单一化合物对番茄枯萎病菌(土传病原真菌)和根癌土壤杆菌(土传病原细菌)的抑制效果，结果如表5所示(以最高抑制药剂抑制效果为对照菌圈)。

表5 ITCs单一化合物对土传病原菌的触杀活性

从表5可以看出，苯基、苄基、2-苯基乙基异硫氰酸酯等芳香基异硫氰酸酯在培养基上的抑菌活性优于脂肪族异硫氰酸酯；且苄基异硫氰酸酯、2-苯基乙基异硫氰酸酯的活性较高。

采用生长速率法分别测定苄基异硫氰酸酯、2-苯基乙基异硫氰酸酯对番茄枯萎病菌、立枯丝核菌抑菌活性，采用菌落记数法分别测定上述两种异硫氰酸酯对根癌土壤杆菌抑菌活性，结果如表6、表7所示。

表6 苄基异硫氰酸酯对三种病原真菌、细菌触杀活性

	LC50(μg/mL)	置信域	LC95(μg/mL)	置信域
					番茄枯萎菌	6.4	3.39～24.41	40.75	13.42～87.19
立枯丝核菌	5.13	2.65～23.50	34.52	10.58～75.47
					根癌土壤杆菌	32.05	15.90～97.39	140.53	53.1～167.18

表7 2-苯基乙基异硫氰酸酯对三种病原真菌、细菌触杀活性

	LC50(μg/mL)	置信域	LC95(μg/mL)	置信域
					番茄枯萎菌	4.9	3.93～6.48	26.04	17.61～42.92
立枯丝核菌	3.67	2.34～7.91	33.28	13.24～96.49
					根癌土壤杆菌	29.44	12.24～34.82	135.58	39.50～148.77

实验例3 ITCs组合物油剂对病原菌生物活性的研究

将按照实验例1所述的方法分离制备的AITC和芳香基异硫氰酸酯分别按照不同的重量比组合，并用丙酮配成不同浓度的组合物，对病原菌的生物活性进行复配筛选。

采用直接熏土法，研究不同配比的组合物对土壤中真菌的室内熏蒸活性测定(该土壤中的真菌主要为半知菌亚门尖镰孢属的番茄枯萎病菌)。熏蒸3d后检查结果，以平均菌落数计算EC₅₀，并使用孙云沛公式计算共毒系数CTC。

表8 组合物对土壤中真菌的增效研究

处理	EC50(μL/kg)	CTC
			AITC	11.97	-
2-Phenylethyl ITC	17.23	-
			A∶P＝1∶1	15.50	83.61
A∶P＝1∶4	12.30	105.36
			A∶P＝1∶9	15.30	169.14
A∶P＝9∶1	9.20	179.40
			A∶P＝4∶1	7.30	212.66

注：表中“A”代表AITC(烯丙基异硫氰酸酯)，“P”代表2-Phenylethyl ITC(2-苯基乙基异硫氰酸酯)。

从表8可以看出，当AITC与2-苯基乙基异硫氰酸酯的重量比为4∶1时，对以半知菌亚门尖镰孢属的番茄枯萎病菌为主的土壤真菌的抑制作用较强，当浓度为10.5μL/kg时，其抑制率大于80％，经统计分析，其EC₅₀为7.3μL/kg，共毒系数为212.66，显著增效。

参照上述方法，进行不同配比的组合物对土壤中细菌的室内熏蒸生物活性测定。熏蒸3d后检查结果，取其平均菌落数计算EC₅₀，并使用孙云沛公式计算出共毒系数(CTC)。

表9 组合物对土壤中细菌的室内熏蒸生物活性

处理	EC50(μL/kg)	CTC
			AITC	21.80	-
2-Phenylethyl ITC	20.30	-
			A∶P＝1∶1	23.45	91.28
A∶P＝1∶4	25.76	83.09
			A∶P＝1∶9	23.43	92.36
A∶P＝9∶1	18.54	110.25
			A∶P＝4∶1	14.56	141.86

注：表中“A”代表AITC(烯丙基异硫氰酸酯)，“P”代表2-Phenylethyl ITC(2-苯基乙基异硫氰酸酯)。

从表9可以看出，由AITC和芳香基异硫氰酸酯组成的组合物在其重量比为9∶1～4∶1时，对供试的病菌都有一定的增效作用，尤其当AITC与2-苯基乙基异硫氰酸酯在4∶1时，对土壤细菌的CTC值达到141.86，有一定的增效作用；其EC₅₀为14.56μL/kg，对土壤中细菌有一定的抑制作用。

实验例4 不同ITCs单一化合物制剂对根结线虫熏蒸活性的研究

采用干燥器离体熏蒸法进行不同ITCs单一化合物对根结线虫的室内熏蒸活性测定。分别熏蒸24h、48h、72h后取出，在带有底光源的显微镜下统计二十四孔盘，每个视野中线虫数约为200头，观察并记载线虫死亡情况。

按实验例1方法分离制备不同的ITCs，并用丙酮配成有效成分含量均为5μg/mL的不同药剂，对仓储害虫的生物活性的初步筛选，其结果见表10。

表10 不同ITCs单一化合物对南方根结线虫熏蒸活性的研究

从表10可以看出，相同浓度下(5μg/mL)，AITC的24h的熏蒸效果达到98％，而其他ITCs均处于70％以下。另外，乙基、丁基、苯基异硫氰酸酯也表现出较好的熏蒸活性，72h的线虫校正死亡率分别为80.22％、89.57％、87.42％。大多数的芳香基异硫氰酸酯的熏蒸活性低于脂肪族异硫氰酸酯。

AITC对南方根结线虫的熏蒸活性如表11所示。

表11 AITC对南方根结线虫熏蒸活性

药剂	LC50(μg/mL)	置信域	LC95(μg/mL)	置信域
					AITC	0.46	0.43～0.50	2.17	1.91～2.50

实验例5 不同ITCs单一化合物对根结线虫触杀活性的研究

用24孔盘法，配制一定浓度的含药悬液，并加入准备好的南方根结线虫二龄幼虫，在24h、48h后观察统计线虫死亡率并计算校正死亡率，结果如表12所示。

表12 不同ITCs单一化合物对根结线虫触杀活性

从表12可以看出，随着碳链的增长，ITCs的触杀活性提高。整体而言，芳香基异硫氰酸酯的触杀活性高于脂肪族异硫氰酸酯，尤其是苄基异硫氰酸酯、2-苯基乙基异硫氰酸酯的活性较高。

上述两种异硫氰酸酯的触杀活性结果如表13所示。

表13两种异硫氰酸酯(48h)对南方根结线虫触杀活性

	LC50(μg/mL)	置信域	LC95(μg/mL)	置信域
					苄基异硫氰酸酯	6.41	5.25～7.53	32.17	27.86～38.24
2-苯基异硫氰酸酯	7.32	7.90～10.75	35.57	30.77～42.63

实验例6 芳香基异硫氰酸酯与AITC组合物室内联合毒力的测定

按照实验例1的方法分离制备的AITC和芳香基异硫氰酸酯分别按照不同的重量比组合，并用丙酮配成不同浓度的组合物药剂，对南方根结线虫二龄幼虫的生物活性进行复配筛选，其结果如表14所示。

表14 AITC与BITC复配制剂对南方根结线虫室内生物活性

处理	LC50(μg/mL)	CTC
			AITC	5.40	-
BITC	9.98	-
			A∶B＝1∶1	8.56	71.26
A∶B＝1∶2	9.67	58.53
			A∶B＝1∶4	12.10	76.03
A∶B＝1∶9	10.50	78.42
			A∶B＝9∶1	3.90	199.94
A∶B＝4∶1	3.50	235.26
			A∶B＝2∶1	4.89	168.39

注：表中“A”代表AITC(烯丙基异硫氰酸酯)，“B”代表BITC(苄基异硫氰酸酯)

从表14可以看出，由AITC和芳香基异硫氰酸酯组成的组合物在重量比为9∶1～4∶1时，对供试的南方根结线虫都有一定的增效作用，尤其以AITC和芳香基异硫氰酸酯的重量比为4∶1时，对南方根结线虫的CTC值为235.26，增效作用显著，且LC₅₀值显著降低。

实验例7 AITC与BITC组合物制剂对南方根结线虫的盆栽试验

在武汉市东西湖区蔬菜种植基地中，采集根结线虫病发病严重的番茄地的耕作层(深度约0～15cm)土壤，将上述土壤保温、保湿，并埋入已感染根结线虫病的病番茄根，让其在土壤中腐烂。经过一段时间后，该土壤中就含有大量的番茄根结线虫幼虫。然后将上述土壤(绝对含水量约为20％)混合均匀，装入花盆中，每盆2kg。然后，按下列浓度梯度：10、50、125μL/kg(有效成分/土壤)，分别将AITC、BITC及其不同配比的组合物制剂埋入盆中约5cm深处，再浇入少量的清水，用聚氯乙烯塑料膜密封7d，敞开4d，然后播种刚萌芽的“本地王”黄瓜(湖北富悦种子有限公司)种子于花盆中。同时，设置使用浓度为40mg/kg的20％甲基阿维灭线磷微粒剂(线虫速净，山东汉高生物工程有限公司)为药剂对照组(药剂ck)和不施任何药剂的处理为空白对照组(ck)，空白对照组12盆，药剂对照组12盆，试验组每个配比三个浓度，四个重复，共计12盆。在相同的水肥管理条件下栽培，两个月后统计结果，结果如表15所示。

表15 不同配比的AITC与BITC组合物制剂对南方根结线虫盆栽试验结果

注：表中“A”代表AITC(烯丙基异硫氰酸酯)，“B”代表BITC(苄基异硫氰酸酯)

从表15中可以看出，单剂AITC、BITC的防治效果，在50μL/kg处理时，平均防效分别达到66％、57％；AITC与芳香基异硫氰酸酯的重量比为4∶1的组合物药剂，在浓度为10μL/kg时，防效能够达到55％，显著提高了AITC的防治效果，减少了AITC的使用量。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方案及对比实验对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种芳香基异硫氰酸酯和烯丙基异硫氰酸酯的组合物，其特征在于，芳香基异硫氰酸酯与烯丙基异硫氰酸酯的重量比为2:1~5:1；所述芳香基异硫氰酸酯为苄基异硫氰酸酯或2-苯基乙基异硫氰酸酯。

2.权利要求1所述的组合物在制备防治土传病原菌、土壤线虫的农药熏蒸剂中的应用。

3.根据权利要求2所述的熏蒸剂，其特征在于，所述熏蒸剂的剂型为油剂、水乳剂、可溶性液剂或颗粒剂。

4.根据权利要求3所述的熏蒸剂，其特征在于，所述油剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯     1~60%，

芳香基异硫氰酸酯     0.25~20%，

抗氧化剂             0.1~2%，

溶剂                 10~85%，

植物油补齐至100%；

所述抗氧化剂为抗坏血酸类物质或没食子酸戊酯；所述溶剂为甲苯、二甲苯、乙酸乙酯或环己酮；所述植物油为粗菜籽油、棉油或粗豆油。

5.根据权利要求3所述的熏蒸剂，其特征在于，所述水乳剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯     1~20%，

芳香基异硫氰酸酯     0.25~10%，

乳化剂               12~28%，

抗坏血酸             0.1~2%，

溶剂                 10~30%，

植物油               1~15%

用水补齐至100%；

其中，所述乳化剂为T4103、TX-10、农乳500号、602、OP-10、Well201、Well205、M30；所述溶剂为乙酸乙酯或环己酮。

6.根据权利要求3所述的熏蒸剂，其特征在于，所述可溶性液剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯     1~40%，

芳香基异硫氰酸酯     0.2~30%，

乳化剂               12~30%，

抗坏血酸             1~10%，

溶剂补齐至100%；

其中，乳化剂为T4103、农乳500号、农乳600号、602、OP-10、Well201、Well205、M30中的一种或几种；所述溶剂为乙酸乙酯、二甲苯、甲醇、乙醇或一线油中的一种或几种。

7.根据权利要求3所述的熏蒸剂，其特征在于，所述颗粒剂的组分按重量百分数为：

烯丙基异硫氰酸酯     1~5%，

芳香基异硫氰酸酯     0.5~2%，

粉料                 65~85%，

包膜材料             1~20%，

固化剂               1~8%；

其中，所述粉料为沸石粉、粘土、白炭黑、膨润土；所述包膜材料为亚麻油、蓖麻油或大豆油的一种或几种；所述固化剂为酚醛树脂。

8.根据权利要求7所述的熏蒸剂，其特征在于，所述粉料还包括重量百分数40~65%的改性淀粉和12.5~20%的辅料；其中，所述改性淀粉为羟甲基淀粉、α-环糊精；所述辅料为交联剂、阴离子表面活性剂、粘合剂及氯化钾。