CN101723768B

CN101723768B - 对酚酸类化合物羟乙基化的方法及其制品

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Publication number: CN101723768B
Application number: CN 200910311838
Authority: CN
Inventors: 杨小生; 谷小珂; 朱海燕; 马琳; 杨娟; 郝小江
Original assignee: Key Laboratory of Natural Product Chemistry of Guizhou Academy of Sciences
Current assignee: Key Laboratory of Natural Product Chemistry of Guizhou Academy of Sciences
Priority date: 2009-12-18
Filing date: 2009-12-18
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2029-12-18
Also published as: CN101723768A

Abstract

本发明提供一种对酚酸类化合物羟乙基化的方法及其制品；以环氧乙烷为羟乙基化试剂，催化量碱的作用下，在耐压密封容器中，一定温度下进行羟乙基化反应。通过本方法，可高收率得到羟乙基产物，且副产物少，后处理方便。成功地将该方法应用在不同类型的酚酸类化合物的羟乙基化产物的合成中，提高了其稳定性和水溶性，改变或延展了生物活性，为广泛开发和应用酚酸类羟乙基化衍生物提供了关键的制备方法和技术。

Description

对酚酸类化合物羟乙基化的方法及其制品

本发明是一种合成技术，对酚酸类化合物羟乙基化的方法、特别是羟乙基化衍生物的制备方法及其制品。

含有酚羟基、羧酸等酸性基团的化合物(统称酚酸类化合物)如黄酮苷和苷元、有机酸、单宁等普遍存在于植物、微生物中，具有广泛的生物活性。但这些化合物由于溶解性差或稳定性差或代谢过快，导致吸收差或生物利用度低，限制了这些化合物的开发和应用。羟乙基衍生物的制备为一有效的选择。

临床药物曲克芦丁或维脑路通为芦丁分子中羟基的羟乙基化衍生物，不仅增大了芦丁的溶解度，而且扩大了其药理作用和临床应用范围(李茂星，谢景文，葛欣.芦丁的药效学研究进展.华西药学杂志，2000，15(6)：450-451)。葛根素羟乙基化产物已经证实了具有多种生物活性。因此，以黄酮类化合物为代表的酚酸类化合物的羟乙基化方法的有效建立，具有重要的意义。

目前羟乙基化的方法主要是氯乙醇法(杨若林，李娜，Bo Xuan，等.葛根素衍生物的制备及其活性[J].中国药科大学学报，1999，30(2)：81-85)和环氧乙烷法(侯殿杰，王建武，孙建龙.7，4`-二-氧-(β-羟乙基)葛根素的制备研究[J].中国药物化学杂志，2002，12(2)：103-104)。氯乙醇法存在收率低反应时间长的问题，不大适合大量样品的制备；环氧乙烷法大多采用一定温度下将环氧乙烷通入至反应液内，虽然得到了较高的收率，但环氧乙烷沸点低，极易气化，且有较大毒性和较宽的爆炸极限，此操作方法在操作过程中存在诸多不便，且存在环境污染等问题。因此经过反复试验和反应条件的摸索，我们发现以环氧乙烷作为羟乙基化试剂，在催化量的无机碱作用下，封闭容器中，可高收率得到酚酸类化合物的羟乙基化产物，副产物少，后处理纯化方便。

本发明的目的在于：提供一种对酚酸类化合物羟乙基化的方法及其制品；它以环氧乙烷为羟乙基化试剂，在密闭反应器中，在一定温度下和无机碱的作用下，对含有酚羟基、羧酸基团的有机分子进行羟乙基化，制备酚酸类化合物的羟乙基衍生物，从而达到增加酚酸类化合物的稳定性和水溶性、改变了某些生物活性的效果。

本发明是这样实现的：一种对酚酸类化合物羟乙基化的方法，以环氧乙烷为羟乙基化试剂，在密闭反应器中，在水和/或有机溶剂中，一定温度下和无机碱的作用下，对含有酚羟基、羧酸基团的有机分子进行羟乙基化，制备酚酸类化合物的羟乙基衍生物。

具体的说：以环氧乙烷为羟乙基化试剂，在承受压力为5-6兆帕的密闭反应器中、在水和/或有机溶剂中，反应液温度控制在50-80℃之间，反应时间为6-12小时，在无机碱的作用下，对含有酚羟基、羧酸基团的有机分子进行羟乙基化，制备酚酸类化合物的羟乙基衍生物。

酚酸类化合物是指含有酚羟基(Ar-OH)和(或)羧酸基(COOH)的有机化合物(分子)；本发明所指含有酚羟基和羧基有机分子包括：灯盏花乙素、岩豆素、槲皮素、葛根素、芦丁、银杏总黄酮、茶多酚、红景天总黄酮、没食子酸、苯甲酸或迷迭香酸。

本发明最佳的的反应液温度为60-65℃、时间为9-10小时；采用的无机碱氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠和碳酸氢钾中的任意一种；用量为催化量，即0.05-0.2倍摩尔；最佳的无机碱用量为为0.1倍当量。本发明采用溶剂为水，或有机溶剂甲醇，乙醇，异丙醇，正丁醇，丙酮，氯仿，二氯甲烷，苯，乙酸乙酯，二甲亚砜，吡啶，乙腈，四氢呋喃，1，4-二氧六环中的任一或混合组合。

具体地说，按照体积比计算，本发明采用的溶剂为：甲醇/水1∶9~9∶1或者是乙醇/水1∶9~9∶1或者是氯仿/甲醇1∶9~9∶1或者是二氯甲烷/乙腈1∶9~9∶1。

本发明中，收集反应后的母液或粗品用大孔树脂、聚酰胺、硅胶柱层析或反相硅胶柱层析的方法处理、分离和纯化。

本发明使用的反应容器为用不锈钢或聚四氟乙烯材质制作，实验发现这样的容器比较安全。

本发明对酚酸类化合物羟乙基化的方法所得到的产品。

为了达到更佳的效果，本发明进行的实验中优选了如下技术方案：

一、羟乙基化反应及条件优化

由于葛根素可以大量购买和羟乙基葛根素为生物活性物质，因此，以葛根素为原料来优化酚酸类化合物的反应条件，建立其制备方法。

1.材料和仪器

葛根素(上海君创生物科技有限公司，＞95％)；环氧乙烷(分析纯国药集团化学试剂有限公司)；氢氧化钠(分析纯，成都金山化学试剂有限公司)；高压密封反应罐(可采用高压密封消化罐，也可自制；AB-8大孔吸附树脂(天津南开和成科技有限公司)；色谱纯甲醇；0.1％磷酸水溶液。

INOVO 400MHz核磁共振波谱仪(美国瓦里安公司)，四甲基硅烷(TMS)为内标；HEWLETTPAKARD质谱仪；Agilent 1100高效液相色谱仪(Agilent 1100色谱工作站)。

2.合成路线和步骤

将精密称重的葛根素加到高压密封消化罐内，加一定体积的水(A)，一定摩尔比的氢氧化钠(B)，冰浴冷却至较低温度(0-5℃)，加一定体积环氧乙烷(D)，密封，放入一定温度的水浴中搅拌反应6小时。反应结束后，将反应液冷却至室温，经大孔树脂(AB-8)吸附，水洗除杂后，用甲醇洗脱，浓缩，得到羟乙基葛根素粗品。合成路线图。

3.对照品和含量测定方法的建立

采用环氧乙烷法合成羟乙葛根素对照品，运用核磁共振技术结合质谱数据分析确定了结构(谷小珂，张建新，朱海燕，杨小生，郝小江，羟乙基葛根素的旋转异构现象，中国药科大学学报，2009，40(1)：51-53)。HPLC检测其纯度为一个单峰。

检测方法：Waters sun fire C-18色谱柱(4.6×150)，流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液(25∶75)，流速1.0ml/min，检测波长250nm，柱温35℃，进样量1.0ml。

样品的测定：羟乙基葛根素粗品和精密称重的对照品均用色谱纯甲醇定容至25ml，自动进样，通过对比羟乙基葛根素的峰面积来计算粗品中羟乙基葛根素的质量，从而计算反应产率。

4.正交实验法优化合成工艺

设置反应溶剂体积(A)、葛根素和氢氧化钠的摩尔比(B)、反应温度(C)、环氧乙烷的量(D)四个因素进行正交实验以优化其合成工艺。每个因素确定三个水平，因素水平见表1。

表1因素和水平正交表

根据上述因素和水平，以羟乙基葛根素的含量作为考察指标，列出L9(3⁴)正交设计表，结果见表2。

表2正交试验结果

No.	A	B	C	D	yield/％
						1	1	1	1	1	0
2	1	2	2	2	25.22
						3	1	3	3	3	0
4	2	1	2	3	74.22
						5	2	2	3	1	25.91
6	2	3	1	2	16.31
						7	3	1	3	2	19.17
8	3	2	1	3	39.69
						9	3	3	2	1	5.75
K₁	8.41	31.13	18.67	10.55
						K₂	38.81	30.27	35.06	20.23
K₃	21.54	7.35	15.02	37.97
						R	30.4	23.78	20.04	27.42

实验结果表明四个因素的影响次序为A＞D＞B＞C，最佳反应条件为：A₂B₁C₂D₃。

用上述优化出的反应条件对反应时间做单因素考察。实验结果见表3。

表3时间单因素实验的结果

time/h	4	6	8	10	12
						yield/％	28.22	59.60	82.71	92.66	91.09

对优化出来的条件做了稳定性实验，收率为90.83％和92.81％，实验结果表明确定的反应条件可行。

4.羟乙基葛根素的纯化

反应结束后，将反应液冷却至室温，经大孑L树脂吸附(D101或AB-8)或聚酰胺材料，水洗除杂后，用甲醇洗脱，浓缩，得到羟乙基葛根素；进一步精制可采用硅胶、凝胶柱层析。

采用新的羟乙基花方法来制备羟乙基葛根素，弥补了已有方法的弊端，简化了实验操作，减少了环境污染。

总之，基于现有羟乙基葛根素的制备工艺问题，我们发现了一种新的、可通用的酚酸类化合物的羟乙基化方法方法：在一定温度(50~80℃)下，以环氧乙烷为羟乙基化试剂，在密封耐压反应器中，催化量碱氢氧化钠水溶液的作用下，在水或有机溶剂中反应，可高收率地将酚酸类化合物转化成为羟乙基衍生物。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1)本发明提供的对酚酸类化合物的羟乙基化方法未见文献报道。

2)本发明提供的对酚酸类化合物的羟乙基化方法具有通用性和实用性：弥补了已有方法的弊端，简化了实验操作，减少了环境污染。

3)本发明提供的羟乙基化酚酸类化合物保持或延展了原型化合物的生物活性；改善了原型化合物的水溶性。

为验证本发明内容可行性，我们利用如上优化的羟乙基化方法，开展了如下典型酚酸类化合物的羟乙基化反应及其羟乙基化物的活性研究。

附图说明：附图1是用反应收率和时间作折线制作的图，表明9-10h为本发明最佳反应时间。附图2是本发明HPLC检测其纯度为一个单峰的实验图。

本发明的实施例：

实施例1：灯盏花乙素的羟乙基化

灯盏花乙素100mg(0.22mmol)，置于高压密封消化罐内，加25ml水分散，加氢氧化钠0.87mg(0.022mmol)，冰浴冷却后加环氧乙烷2ml，密封后置于60℃水浴中反应10h。反应液上大孔树脂(AB-8)，水洗除杂后用甲醇洗脱，浓缩后湿法上样，聚酰胺柱层析，乙酸乙酯∶甲醇10∶1洗脱，得目标产物DZH-1(淡黄色粉末96mg，收率74.7％)。目标产物的结构及波谱数据：

DZH-1：淡黄色粉末MS-ESI：617[M+Na]⁺，595[M+H]⁺，EI-MS：418(苷元，1)，400(1)，374(31)，356(21)，330(100)，286(17)，168(15)；¹HNMR(DMSO，400MHz)，？12.96(1H，s，Ar-OH)，8.03(2H，d，J＝9Hz，C_2’，6’-H)，7.12(2H，d，J＝9Hz，C_3’，5’-H)，7.06(1H，s，C₃-H)，6.93(1H，s，C₈-H)，4.82~5.60(糖上质子)，3.96~4.23(6H，m，C_a1，a2，a3-H)，3.60~3.75(6H，m，C_b1，b2，b3-H)；¹³CNMR(DMSO，100MHz)，？182.5(C-4)，168.9(C-6``)，164.0(C-2)，162.0(C-4`)，156.1(C-7)，152.7(C-8a)，152.2(C-5)，131.6(C-6)，128.5(C-2’，6’)，122.7(C-1`)，115.1(C-3’，5’)，106.1(C-4a)，103.4(C-1``)，99.7(C-3)，94.1(C-8)，75.5，75.4，73.0，71.3(糖上碳信号)，74.6，70.0，66.6(C_a1，C_a2，C_a3)，60.3，59.5，59.5，58.8(C_b1，C_b2，C_b3).

实施例2：岩豆素羟乙基化

岩豆素100mg(0.29mmol)置于高压密封消化罐中，25ml甲醇溶解，加氢氧化钠1.16mg(0.029mmol)，冰浴冷却后，加环氧乙烷2ml，密封，置于65℃水浴中，反应9h.反应结束后，浓缩反应液，经大孔树脂后采用制备薄层法分离纯化，展开系统为氯仿∶甲醇20∶1展开。得产物YDS-1(黄色固体粉末36mg，收率57.3％)，YDS-2(黄色固体粉末46mg，收率81.6％)，经结构鉴定YDS-1为双羟乙基取代岩豆素，YDS-2为单羟乙基取代的岩豆素。目标产物的结构及波谱数据：

YDS-1：黄色固体粉末EI-MS：432(M⁺，6)，414(M⁺-18，52)，401(M⁺-31，100)，388(M⁺-44，18)，373(24)，355(34)，341(49)，329(47)，301(13)；¹HNMR(CDCl₃，400MHz)，？7.87(2H，d，J＝9Hz，C_2’，6’-H)，7.03(2H，d，J＝9Hz，C_3’，5’-H)，6.64(1H，s，C₃-H)，4.32~4.39(4H，m，C_a1，a2-H)，3.85~3.88(4H，m，C_b1，b2-H)，4.07，3.95，3.86(9H，s，-OCH₃)；¹³CNMR(CDCl₃，100MHz)，？178.5(C-4)，162.5(C-2)，161.8(C-4`)，150.5(C-8a)，147.8(C-7)，147.7(C-6)，143.9(C-5)，138.3(C-8)，127.8(C-2’，6’)，123.2(C-1`)，114.7(C-4a)，114.6(C-3’，5’)，106.7(C-3)，77.2and76.2(C_a1，C_a2)，61.5and61.3(C_b1，C_b2)，62.3，61.4，55.5(-OCH₃).

YDS-2：黄色固体粉末EI-MS：388(M⁺，100)，373(M⁺-15，73)，355(9)，344(M⁺-44，4)，329(70)，315(7)，301(19)，286(7)；¹HNMR(CDCl₃，400MHz)，？12.66(1H，s，C₅-OH)，7.89(2H，d，J＝9Hz，C_2’，6’-H)，7.04(2H，d，J＝9Hz，C_3’，5’-H)，6.62(1H，s，C₃-H)，4.37~4.39(2H，m，C_a1-H)，3.70~3.85(2H，m，C_b1-H)，4.02，3.99，3.90(9H，s，-OCH₃)；¹³CNMR(CDCl₃，100MHz)，？183.0(C-4)，164.1(C-2)，162.8(C-4`)，151.3(C-5)，149.6(C-8a)，145.7(C-7)，136.8(C-6)，133.4(C-8)，128.1(C-2’，6’)，123.2(C-1`)，114.6(C-3’，5’)，107.5(C-4a)，103.8(C-3)，76.3(C_a1)，61.4(C_b1)62.2，61.2，55.5(-OCH₃).

实施例3：槲皮素羟乙基化

取槲皮素(100mg，0.33mmoL)用25mL甲醇溶解，转移到高压密封消化罐内，加催化量的氢氧化钠(1.32mg，0.033mmoL)，冰浴冷却，加环氧乙烷2mL，密封后置于60℃水浴中反应9h，将反应液浓缩、大孔树脂预处理后，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇15∶1洗脱，得目标产物HPS-1(淡黄色粉末139mg)，收率为88％。经结构鉴定产物为四羟乙基槲皮素。目标产物的结构及波谱数据：

HPS-1：淡黄色粉末EI-MS：478(M⁺，100)，460(M⁺-18，99)，434(M⁺-44，44)，416(26)，390(18)，346(33)，302(36)，197(15)；¹HNMR(DMSO，400MHz)，？12.59(1H，s，C₅-OH)，7.81(1H，s，C_2’-H)，7.79(1H，d，J＝9Hz，C_6’-H)，7.14(1H，d，J＝9Hz，C_5’-H)，6.77(1H，s，C₈-H)，6.35(1H，s，C₆-H)，4.01~4.12(8H，m，C_{a1，a2，a3，a4}-H)，3.60~3.76(8H，m，C_{b1，b2，b3，b4}-H)；¹³CNMR(DMSO，100MHz)，？178.2(C-4)，164.7(C-7)，160.9(C-5)，156.4(C-5)，155.4(C-2)，151.2(C-4`)，148.0(C-3`)，137.4(C-3)，122.5(C-6’)，122.3(C-1`)，113.8(C-2`)，113.0(C-5’)，105.2(C-4a)，98.3(C-6)，92.9(C-8)，73.9，70.7，70.6，70.4(C_a1，C_a2，C_a3，C_a4)，60.3，59.7，59.5，59.4(C_b1，C_b2，C_b3，C_b4).

实施例4：银杏总提物的羟乙基化

银杏总黄酮220mg(含量大于70％)，分置两个高压密封消化罐内，各加水25ml，氢氧化钠0.5mg，冰浴冷却后加环氧乙烷2ml，密封后置于50℃水浴中反应12h。反应结束后，上大孔树脂(AB-8)水洗除杂后甲醇洗脱，浓缩得羟乙基化粗品256mg.通过核磁共振氢谱检测，羟乙基化银杏总黄酮在化学位移？.1-4.8ppm间出现相似的羟乙基质子信号。

实施例5：茶多酚的羟乙基化

茶多酚1.0g(含量大于85％)，分置两个高压密封消化罐内，各加25ml水，氢氧化钠0.75mg，冰浴冷却后加环氧乙烷3ml，密封后置于80℃水浴中反应16h。反应结束后，上大孔树脂(AB-8)水洗除杂后甲醇洗脱，浓缩得羟乙基化粗品750mg.通过核磁共振氢谱检测，羟乙基化茶多酚在化学位移？.0-5.0ppm间出现相似的羟乙基质子信号。

实施例6：羟乙基葛根素和羟乙基灯盏花素水溶性的测试

黄酮化合物羟乙基化研究的目的是希望增加其水溶性、化学稳定性，以提高生物利用度，降低体内代谢速度。因此，对合成的两个羟乙基化黄酮化合物的水溶解性和原料做了对比实验。

实验方法：称取一定质量的样品于试管内，量取一定体积的分析纯甲醇和蒸馏水，将之缓慢滴加入试管内使样品溶解(室温下)，当样品完全溶解时，计算加入的体积。通过比较原料和羟乙基化产物加入溶剂的体积，定性的比较结构修饰前后的溶解性差异。

实验结果：

(1)10mg葛根素室温下(操作时温度26℃)用分析纯甲醇0.2ml能完全溶解，若用蒸馏水需5ml完全溶解。10mg羟乙基葛根素室温下(操作时温度26℃)用分析纯甲醇1.8ml(少许加热)能完全溶解，若用蒸馏水需2.5ml完全溶解。

(2)2mg灯盏花素室温下(操作时温度23℃)用分析纯甲醇0.23ml能完全溶解，若用蒸馏水加入3ml加热、或超声震荡仍有大部分未溶。2mg羟乙基灯盏花素室温下(操作时温度23℃)加入分析纯甲醇2.0ml仍有少许不溶物，若用蒸馏水需1.5ml完全溶解。

结论：通过平行实验对比，能显著看到：羟乙基后，产物的脂溶性均降低，水溶性显著提高。

本发明得到的羟乙基化衍生物具有稳定性和水溶性增加，改变或延展了某些生物活性。为此，我们还做了以下的实验：

羟乙基化衍生物的生物活性比较

1.抗血小板聚集活性

采用诱导剂(PAF、ADP)诱导血小板聚集，根据正常血小板最大聚集率与加入样品后血小板最大聚集率来判断样品对血小板聚集有无抑制作用以及作用的强弱。抑制率的计算公式如下：

抑制率(％)＝(正常聚集对照组最大聚集率-样品组最大聚集率)/正常聚集对照组最大聚集率×100

结果如下：

(1)对PAF(血小板活化因子，终浓度4.5nmol/L)诱导的血小板聚集的抑制作用(表4)结果如下：

表4对PAF诱导的血小板聚集的抑制作用

样品编号	终浓度(mol/L)	抑制率(％)
			ggs	1×10^-3mol/L	9.41±11.24(n＝4)
ggs^-1	1×10^-3mol/L	0(n＝4)
			dzh	1×10^-3mol/L	12.15±8.11(n＝4)
dzh-1	1×10^-3mol/L	16.51±0.61(n＝4)
			乙酰水柄酸	1×10^-3mol/L	32.19±10.85(n＝4)

注：ggs为葛根素，dzh为灯盏花乙素：ggs-1为羟乙基葛根素：dzh-1为羟乙基灯盏花乙素

(2)对ADP(终浓度为5衸ol/L)诱导的血小板聚集的抑制作用(表5)结果如下：

表5对ADP诱导的血小板聚集的抑制作用

样品编号	终浓度(mol/L)	抑制率(％)
			ggs	1×10^-3mol/L	9.71±8.56(n＝4)
ggs-1	1×10^-3mol/L	14.02±12.74(n＝4)
			DZH	1×10^-3mol/L	14.11±13.94(n＝4)
DZH-1	1×10^-3mol/L	8.02±9.28(n＝4)
			乙酰水柄酸	1×10^-3mol/L	32.19±10.85(n＝4)

注：ggs为葛根素，dzh为灯盏花乙素；ggs-1为羟乙基葛根素；dzh-1为羟乙基灯盏花乙素

从上述活性筛选结果看：(1)在对抗PAF诱导的血小板聚集抑制活性模型上，灯盏花乙素羟乙基化产物(DZH-1)有一定的抑制作用，且较灯盏花乙素(DZH)效果好；葛根素羟乙基化物(ggs-1)没有活性；(2)在对抗ADP诱导的血小板聚集抑制活性模型上，葛根素羟乙基化物(ggs-1)的活性略高于葛根素(ggs)；灯盏花乙素羟乙基化产物(DZH-1)的抑制活性低于灯盏花乙素(DZH)。

从总体上看，黄酮化合物经羟乙基化后，其羟乙基化衍生物的体外血小板聚集抑制活性与原型化合物活性相当或有变化

2.抗H₂O₂致PCl2细胞损伤保护作用

首先用MTT法评价样品在预设浓度下对PCl2细胞生长的抑制程度，确定合适的样品浓度，再通过H₂O₂致PCl2细胞损伤模型评价样品对H₂O₂损伤的抑制作用。具体为：将特定浓度的样品预作用PCl2细胞24小时后，弃去含样品的培养液，加入含H₂O₂的培养基作用一定时间致PCl2损伤后，加入过氧化氢酶终止损伤，培养24小时后，MTT法检测细胞存活或生长情况，计算样品对H₂O₂损伤的抑制率，由抑制率的大小评价样品活性情况。

结果如下表6所示：

表6对H₂O₂诱导PCl2细胞损伤保护活性

样品编号	终浓度μg/ml	样品对PCl2细胞的抑制率(％)	样品对H₂O₂损伤的抑制率(％)
				ggs	200	0	20.78±18.53
	20	0	29.87±11.52
					2	0	1.620±6.73
ggs-1	200	0	0
					20	0	35.40±11.5
	2	0	31.21±0.96
				YDS-1	200	25.82	0
	20	0	11.50±19.9
					2	1.605	12.08±6.10
YDS-2	200	0	0
					20	0	15.50±14.6
	2	0	43.60±2.55
				CDFC	200	0	0
	20	0	28.90±13.6
					2	0	51.00±4.26
CDF	200	0	0
					20	0	25.12±2.21
	2	0	35.18±8.37
				DZH-1	200	0	0
	20	0	22.27±4.67
					2	0	33.89±2.46
HPS-1	200	0	0
					20	0	7.810±9.69
	2	0	48.26±15.0
				VE	200	0	47.42±3.66

注：ggs为葛根素；YDS为岩豆素：CDFC茶多酚；ggs-1为羟乙基葛根素；dzh-1为羟乙基灯盏花乙素：CDF为茶多酚羟乙基化物；YDS-2和YDS-2为岩豆素的羟乙基化物；HPS-1为斛皮素羟乙基化物。VE为生育酚。

以上结果显示：

(1)除了葛根素ggs对H₂O₂诱导的PCl2细胞损伤只有微弱保护作用外，羟乙基化物灯盏花素(DZH-1)、岩豆素(YDS-2)、槲皮素(HPS-1)、CDF茶多酚(CDF)、均具有细胞损伤保护活性，且较VE为生育酚(VE)作用强。

(2)羟乙基化葛根素(ggs-1)比葛根素(ggs)的活性高。

总之，羟乙基化黄酮衍生物保持了H₂O₂诱导的PCl2细胞损伤保护活性，且活性有所增加，其中槲皮素(HPS-1)活性较好。

Claims

1.一种对酚酸类化合物羟乙基化的方法，其特征在于：以环氧乙烷为羟乙基化试剂，在承受压力为5－6兆帕的密闭反应器中、以水或甲醇为溶剂，反应液温度控制在60－65℃之间，反应时间为9-10小时，在0.1倍摩尔氢氧化钠的作用下，对含有酚羟基、羧酸基团的有机分子进行羟乙基化，制备酚酸类化合物的羟乙基衍生物；所述含有酚羟基、羧酸基团的有机分子为：灯盏花乙素或岩豆素；所述反应容器用不锈钢或聚四氟乙烯材质制作。

2.按照权利要求1所述的对酚酸类化合物羟乙基化的方法，其特征在于：收集反应后的母液或粗品用大孔树脂、聚酰胺、硅胶柱层析或反相硅胶柱层析的方法处理、分离和纯化。

3.灯盏花乙素的羟乙基化产物，即羟乙基灯盏花乙素，其结构式为。

4.岩豆素的羟乙基化产物，即双羟乙基岩豆素和单羟乙基岩豆素，其结构式分别为

。