CN101721677A - 一种胸腺五肽口服微球制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种胸腺五肽口服微球制剂及其制备方法。该口服微球制剂的原料组成为胸腺五肽、明胶、丙交脂-乙交脂共聚物、二氯甲烷、聚乙烯醇-124、抑肽酶或胰蛋白酶抑制剂、甘胆酸钠或去氧胆酸钠或癸酸钠。本发明胸腺五肽口服微球制剂口服生物利用率高，在不降低临床疗效的同时可替代注射给药，克服了频繁的注射给患者带来诸多痛苦和不便。

Description

一种胸腺五肽口服微球制剂及其制备方法

发明领域

本发明涉及一种药物制剂及其制备方法，特别涉及一种胸腺五肽口服微球制剂及其制备方法。

背景技术

胸腺五肽(thymopentin，TP-5)由精氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸、酪氨酸五种氨基酸组成，化学名称为N-[N-[Nα-[Nα-L-精氨酰-L-赖氨酸]-L-α-天门冬氨酰]-L-缬氨酰]-L-酪氨酸，是胸腺分泌物中的一种胸腺生成素II的有效部分。

胸腺五肽是一种细胞免疫调节药物，具有诱导T细胞分化、促进T淋巴细胞亚群发育成熟并活化的功能；胸腺五肽具有增强巨噬细胞吞噬能力，增强红细胞免疫功能，提高自然杀伤细胞(NK)活性，提高白介素-2(IL-2)的生成水平及受体表达水平，促进外周血单核细胞γ-干扰素的产生，增强血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性等作用。临床上胸腺五肽主要用于治疗慢性肝炎、各种原发性或继发性T细胞缺陷疾病、严重感染、耐药性结核、自身免疫功能紊乱性疾病、各种细胞免疫功能低下的疾病以及恶性肿瘤的辅助治疗等。

胸腺五肽是一个小分子多肽，在体内半衰期极短(约为30s)。因为胸腺五肽的稳定性较差，在胃肠道中易受胃酸和各种消化道酶的作用而被降解失活；同时，由于胸腺五肽水溶性较强，脂溶性差，加之人体肠道表面紧密联结所构成的生物膜屏障极大的阻碍了胸腺五肽从胃肠道的吸收，使其口服生物利用度极低。目前，胸腺五肽主要的临床给药途径为静脉或皮下注射，给药间隔多为每日或隔日1次，对于需要长期治疗的患者，频繁的注射会带来诸多痛苦和不便，患者依从性较差。众所周知，口服给药是最容易为患者所接受的一种给药方式，因此，研制一种新型的胸腺五肽口服给药制剂以提高其口服生物利用度是十分必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胸腺五肽口服微球制剂，本发明的另一个目的在于提供该制剂的制备方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现：

本发明口服微球制剂的原料组成为：

胸腺五肽                    0.1～0.8重量份

明胶                        0.1～1.5重量份

丙交脂-乙交脂共聚物         2-20重量份

二氯甲烷                    18～42体积份

聚乙烯醇-124                5～20重量份

抑肽酶                      0.01～0.2重量份

甘胆酸钠                    0.1～2重量份。

本发明口服微球制剂的原料组成优选为：

胸腺五肽                    0.5重量份

明胶                        0.4重量份

丙交脂-乙交脂共聚物         9重量份

二氯甲烷                    30体积份

聚乙烯醇-124                10重量份

抑肽酶                      0.05重量份

甘胆酸钠                    0.2重量份。

本发明口服微球制剂的原料组成优选为：

胸腺五肽                    0.4重量份

明胶                        0.2重量份

丙交脂-乙交脂共聚物         4重量份

二氯甲烷                    20体积份

聚乙烯醇-124                5重量份

抑肽酶                      0.15重量份

甘胆酸钠                    1.5重量份。

本发明口服微球制剂的原料组成优选为：

胸腺五肽                    0.7重量份

明胶                        1.3重量份

丙交脂-乙交脂共聚物         16重量份

二氯甲烷                    40体积份

聚乙烯醇-124                21重量份

抑肽酶                      0.03重量份

甘胆酸钠                    0.5重量份。

本发明口服微球制剂的制备方法包括如下步骤：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在1～8体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为20％-40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在3～5℃用匀浆机6500～15000rpm高速震荡乳化1～5分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于450～750体积份注射用水中，制成浓度为1％-3％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂，在3～5℃用匀浆机6500～15000rpm高速震荡乳化3～8分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在25～30℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷10～15小时，或在2～8℃下减压挥发二氯甲烷1～5小时，离心，收集微球；用注射用水洗涤1～5次，每次15～25体积份，加入5％甘露醇水溶液15～25体积份重新分散，在-35～-45℃下，经冷冻干燥12～18小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

本发明制剂的制备方法优选为：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在4体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在4℃用匀浆机13000rpm高速震荡乳化3分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于600体积份注射用水中，制成浓度为2％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在4℃用匀浆机13000rpm高速震荡乳化5分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在28℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷13小时，或在5℃下减压挥发二氯甲烷3小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤3次，每次20体积份，加入5％甘露醇水溶液20体积份重新分散，在-40℃下，经冷冻干燥5小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

本发明制剂的制备方法优选为：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在5体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为30％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在4℃用匀浆机10000rpm高速震荡乳化3分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于500体积份注射用水中，制成浓度为2％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在4℃用匀浆机10000rpm高速震荡乳化5分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在28℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷12小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤3次，每次20体积份，加入5％甘露醇水溶液20体积份重新分散，在-40℃下，经冷冻干燥15小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

本发明制剂制备方法还可以优选为：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在2体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为20％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在3℃用匀浆机7000rpm高速震荡乳化2分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于480体积份注射用水中，制成浓度为1％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在3℃用匀浆机14000rpm高速震荡乳化4分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在26℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷11小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤2次，每次18体积份，加入5％甘露醇水溶液18体积份重新分散，在-38℃下，经冷冻干燥14小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

本发明制剂制备方法还可以优选为：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在7体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在5℃用匀浆机14000rpm高速震荡乳化4分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于700体积份注射用水中，制成浓度为3％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在5℃用匀浆机7000rpm高速震荡乳化7分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，搅拌均匀，在5℃下减压挥发二氯甲烷3小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤4次，每次22体积份，加入5％甘露醇水溶液22体积份重新分散，在-42℃下，经冷冻干燥16小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

其中，上述抑肽酶可以用胰蛋白酶抑制剂替代，用量为0.05～0.5重量份，优选0.08重量份、0.4重量份或0.06重量份；甘胆酸钠可以用去氧胆酸钠或癸酸钠代替，用量为0.1～2重量份，优选0.1重量份、1.5重量份或0.5重量份。

上述发明及其制备方法中所述的重量份和体积份的关系是：g/mL。

本发明制剂最佳载药量为1％～20％；微球的平均粒度在1～50微米之间。

本发明制剂有效的提高了胸腺五肽的口服生物利用度，在不降低临床疗效的同时，使口服给药成为胸腺五肽可选择的临床给药途径之一。

附图说明

图1：胸腺五肽HPLC测定线性关系考察；

图2：胸腺五肽HPLC色谱图；

图3：胸腺五肽微球粒度分布图。

下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1  胸腺五肽口服微球制备工艺正交设计试验研究

1、试剂：

聚乙烯醇(polyvinyl alcohol，PVA-124，CH₂CHOH)北京化学试剂公司(日本进口分装)批号：20060613；

甘露醇(Mannitol，CH₂(OH)(CHOH)₄CH₂OH)天津基准化学试剂有限公司，批号：20060124；

丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA，Mr＝10000，LA∶GA＝75∶25)抚顺天元生物材料有限公司，批号：050512，；

胸腺五肽(Thymopentin，TP-5)四川凯捷生物医药科技发展有限公司，批号：20071115；

水为纯净水，其它试剂均为市售分析纯。

2、仪器：

IKA-T25基本型均质机，

Works GuangZhou广州仪科实验室技术有限公司；

IKA-RH basic2 Magnetic Stirrer加热磁力搅拌器，

WorksGuangZhou广州仪科实验室技术有限公司；

GL-21C高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；

LGJ0.5冷冻干燥机，北京四环科学仪器厂；

Mastersizer2000激光粒度分布测定仪，英国Malvern公司；

JSM-35CF扫描电子显微镜(日本电子公司)；

精密电子天平(德国Sartorius BT25S，BS224S)；

Waters高效液相色谱仪(2996 Photodiode Array Detector；2695Separations Module，Empower色谱工作站，美国Waters公司)；C₁₈蛋白分析专用柱(200×4.6mm mm，5μm，大连依利特公司)。

3、实验方法

(1)胸腺五肽口服微球的制备

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶或胰蛋白酶抑制剂、甘胆酸钠溶解在3mL注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在15mL二氯甲烷中，作为油相0；在3～5℃用高速均质机高速震荡乳化，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于600mL注射用水中，制成水溶液，作为水相W₂；在3～5℃用高速均质机高速震荡乳化，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在25～30℃下温和搅拌(＜100rpm)挥发二氯甲烷12小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤3次，每次20mL，加入1％甘露醇水溶液20mL重新分散，在-40℃下，经冷冻干燥15小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球。

通过对微球得率、粒度分布影响较大的丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)浓度(0相)、聚乙烯醇浓度(W₂相)、乳化搅拌速度等因素进行研究。设计三因素三水平正交试验表进行试验，以确定影响微球得率、粒度分布各因素的主次作用。正交设计试验方案，见表1。

表1  因素水平表L9(₃ ⁴)

(2)色谱条件：

色谱柱：依利特C₁₈蛋白分析专用色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)；柱温：30℃；检测波长：275nm；流动相：0.05mol/L磷酸缓冲液(PH7.0)-甲醇(90∶10)；流速：1.0mL·min^-1；进样量：20μL。

(3)对照品溶液及供试品溶液的制备

取胸腺五肽标准品，精密称定，加流动相溶解并稀释定容，配制成浓度为0.5mg·mL^-1的溶液，摇匀，作为对照品溶液。另精密称取胸腺五肽口服微球样品50mg，置10ml容量瓶中，以含20％乙腈的流动相溶解微球，并加流动相至刻度，摇匀，定容，作为供试品溶液。

(4)线性关系考察

取胸腺五肽标准品，分别用流动相配成不同浓度的胸腺五肽标准品溶液，按上述色谱条件分别取20μL注入色谱仪，进行分析，每个浓度平行测定3次，记录色谱峰面积。以胸腺五肽浓度(C)为横坐标，峰面积(A)作线性回归分析，得回归方程A＝2×10⁶C-8491.1，r＝0.998。结果表明，胸腺五肽在质量浓度0.01345～0.1345mg·mL^-1内与峰面积呈良好的线性关系。结果见表2，图1。

表2  胸腺五肽HPLC测定线性关系考察

(5)精密度考察

取胸腺五肽标准品，准确称定，加流动相溶解并稀释成浓度为0.03mg·mL的溶液，按上述色谱条件连续测定5次，根据色谱峰计算精密度，结果见表3，结果表明，标准溶液的峰面积RSD％＝1.46％，表明方法精密度良好。

表3  胸腺五肽HPLC检测精密度考察

(6)加样回收率试验

精密称取已知胸腺五肽含量的胸腺五肽口服微球50mg，精密加入胸腺五肽对照品1mg，照供试品溶液项下的制备方法制备，平行操作5份，依法测定，并计算回收率。结果表明，回收率分别为99.68％，101.36％，100.77％，99.01％，101.94％；平均回收率为100.55％，RSD％为1.20％，回收率符合方法学要求。

(7)稳定性试验

取一份供试品溶液，在0，6，12，18，24h分别进样20μL，依法检测，结果峰面积的RSD％为2.92％，表明供试品溶液中胸腺五肽在24h内基本稳定。

(8)胸腺五肽口服微球载药量和包封率的测定

取上述供试品溶液依法测定，以外标法计算样品中胸腺五肽的含量，并按照下式计算微球的载药量和包封率(结果见表4)：

微球载药量＝(微球中的胸腺五肽重量/微球重量)×100％

包封率＝(实际载药量/理论载药量)×100％。

(9)HPLC法测定胸腺五肽对照品与口服微球的图谱，结果见附图2，结果表明：在此色谱条件下胸腺五肽标准对照品与受试样品中的胸腺五肽有相同的保留时间，而且样品中的胸腺五肽分离度良好。

(10)胸腺五肽口服微球的粒径测定

将所制备的胸腺五肽口服微球以水混悬后，超声分散，用Mastersizer-2000型激光粒度分布测定仪测定微球的粒度分布，结果见表4，附图3。

表4胸腺五肽微球制备工艺正交实验结果

4、实验结果

胸腺五肽口服微球制备工艺正交实验结果见表2，采用综合加权-直观分析法由表2中的实验结果可知，因素A对微球的包封率影响最大，其次为因素C，因素B影响最小；PLGA浓度增加，包封率也随之增高；因为包封率越大越好，同时考虑到微球平均粒径越小越容易被机体吸收，故最佳微球制备工艺为A₃B₂C₃，即PLGA浓度为40％，PVA浓度为2％，乳化搅拌速度为13000rpm时所制备的微球包封率较高，此为最佳工艺。

实验例2 胸腺五肽口服微球制备工艺的重现行与稳定性实验研究

1、实验材料：同实验例1。

2、实验方法

按照实验例1中胸腺五肽口服微球制备工艺正交实验结果得出的最优生产工艺条件，重复实验3次，并同时按照实验例1中相关实验方法考察所制备微球的包封率、载药量、粒度分布等指标，以评价胸腺五肽口服微球微球制备工艺的重现性。

3、实验研究结果，见表5。

表5 胸腺五肽口服微球制备工艺的重现行实验结果

由表5中实验结果可以看出，所重复制备的三批次胸腺五肽口服微球的包封率、载药量和粒度分布较为均匀，相对标准偏差(RSD％)较小，说明制备工艺有较好的重现性和稳定性。

实验例3 胸腺五肽口服微球制剂体外释放度的实验研究

1、试剂和仪器

胸腺五肽口服微球(自制)；梅特勒-科利多AB265-S电子分析天平；SWB-2000恒温水浴摇床(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；Waters高效液相色谱仪(2996Photodiode Array Detector；2695 Separations Module，Empower色谱工作站，美国Waters公司)；C₁₈蛋白分析专用柱(200×4.6mm mm，5μm，大连依利特公司)；水为纯净水，其它试剂均为市售分析纯。

2、实验方法

取胸腺五肽口服微球制剂100mg，精密称定，置15ml具塞试管中，加入释放介质(pH 7.0的磷酸缓冲液，内含0.01％苯扎氯胺)10ml/管，置于37℃(±1℃)恒温水浴摇床中，在1小时、2小时、6小时、12小时、24小时时分别用注射器取出2.5ml，用0.45μ滤膜过滤，初滤液0.2ml加回原试管，精密称取续滤液2g(±0.02g)置于进样瓶中，余液和滤膜加回原试管并即时补充2ml溶剂，按1.2项下HPLC法测定胸腺五肽含量；按下式计算释放度。

3、实验结果

胸腺五肽口服微球制剂体外释放度实验结果见表6：

表6胸腺五肽口服微球制剂体外释放度实验结果(n＝3)

由表6可以看出胸腺五肽口服微球的体外释放存在明显的两相，前2h处于药物的快速释放期，胸腺五肽在此阶段的累积释放量达到(37.90±1.10)％，存在一定的突释，此后进入药物的缓慢释放期，24h后胸腺五肽的累积释放量为(61.76±2.63)％。

实验例4 胸腺五肽口服微球的初步药效学实验观察

1实验材料：

1.1药品与试剂胸腺五肽(Thymopentin，TP-5，四川凯捷生物医药科技发展有限公司，批号：20071115)；口服胸腺五肽微球(本室自制，批号：20080630)；注射用环磷酰胺(CTX，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：08050321)；肝素抗凝的真空采血管(山东成武县医用制品厂，批号：20070720)；FITC anti-mouse CD3，PE anti-mouse CD4，PE/Cy5.5anti-mouse CD8a，RBC Lysis Buffer(Biolegend Ltd，美国)；PBS缓冲盐(北京博奥森公司，批号080527)。

1.2实验动物  昆明种小鼠，雌雄兼用，体重20±2g，由山西医科大学实验动物中心提供。

1.3实验仪器FACSCalibur流式细胞仪，美国Becton Dickinson公司。

2实验方法

2.1分组与给药将小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半；即①空白对照组；②模型对照组③胸腺五肽皮下注射组④胸腺五肽口服组⑤胸腺五肽微球口服组。各组动物适应性喂养3d后，除正常对照组外，其余各组于实验前3d腹腔注射CTX 40mg·kg^-1·d^-1，使其产生免疫抑制反应，正常对照组注射等体积生理盐水。按体质量换算表中的折算比计算每只小鼠应给予的给药剂量，从第1个实验日至第7个实验日，按下表分组连续给药7日，每日给药1次，第8d结束实验。各组小鼠自由进食、饮水。实验分组、给药方式及检测结果见表7。

表7 试验分组与给药方式

*与模型对照组相比较，P＜0.05

2.2末次给药结束后，小鼠称重，小鼠眼眶取血2mL，以肝素抗凝的真空采血管收集，混匀，备用。手术摘取小鼠胸腺、脾脏，计算脏器指数。

2.3流式细胞法测定T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺

2.3.1吸取肝素抗凝的全血样品100μL，加入三色荧光标记抗体(CD3、CD4、CD8抗体)10μL，漩涡振荡使充分混匀，室温避光孵育30min；

2.3.2加入红细胞溶解液2mL溶血5min后，1200r/min离心10min，弃去上清液；

2.3.3将沉淀中加入PBS缓冲液2mL，混匀后，1200r/min离心5min，弃去上清液；重复上述操作用2次，总计用PBS缓冲液洗涤3次；

2.3.4将用PBS缓冲液洗涤后的细胞沉淀加1mL PBS缓冲液稀释并混匀，然后用流式细胞仪进行检测。

3实验结果

小鼠T淋巴细胞亚群检测结果见表7。由表7可见小鼠注射环磷酰胺后T细胞亚群中CD4/CD8比值明显升高，胸腺五肽皮下注射组和胸腺五肽微球口服组CD4/CD8比值明显降低，与模型对照组有显著性差异(P＜0.05)；胸腺五肽口服组与模型对照组无显著差异(P＞0.05)。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：胸腺五肽口服微球

胸腺五肽                    0.5kg

明胶                        0.4kg

丙交脂-乙交脂共聚物         9kg

二氯甲烷                    30L

聚乙烯醇-124                10kg

抑肽酶                      0.05kg

甘胆酸钠                    0.2kg；

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在5L注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在30l二氯甲烷中，制成浓度为30％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在4℃用匀浆机10000rpm高速震荡乳化3分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将10kg聚乙烯醇-124溶解于500L注射用水中，制成浓度为2％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在4℃用匀浆机10000rpm高速震荡乳化5分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在28℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷12小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤3次，每次20L，加入5％甘露醇水溶液20L重新分散，在-40℃下，经冷冻干燥15小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球；胸腺五肽口服微球最佳载药量为1％～20％；微球的平均粒度在1～50微米之间。

实施例2：胸腺五肽口服微球片剂

胸腺五肽                    0.4kg

明胶                        0.2kg

丙交脂-乙交脂共聚物         4kg

二氯甲烷                    20L

聚乙烯醇-124                5kg

抑肽酶                      0.15kg

甘胆酸钠                    1.5kg；

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在2L注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在20L二氯甲烷中，制成浓度为20％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在3℃用匀浆机7000rpm高速震荡乳化2分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于480L注射用水中，制成浓度为1％的聚乙烯醇-124水溶液，在3℃用匀浆机14000rpm高速震荡乳化4分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在26℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷11小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤2次，每次18L，加入5％甘露醇水溶液18L重新分散，在-38℃下，经冷冻干燥14小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球；胸腺五肽口服微球最佳载药量为1％～20％；微球的平均粒度在1～50微米之间；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂。

实施例3：胸腺五肽口服微球胶囊剂

胸腺五肽                    0.7kg

明胶                        1.3kg

丙交脂-乙交脂共聚物         16kg

二氯甲烷                    40L

聚乙烯醇-124                21kg

抑肽酶                      0.03kg

甘胆酸钠                    0.5kg；

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在7L注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在40L二氯甲烷中，制成浓度为40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在5℃用匀浆机14000rpm高速震荡乳化4分钟，将油水两相混合均匀制成W₁/0相，将聚乙烯醇-124溶解于700L注射用水中，制成浓度为3％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在5℃用匀浆机7000rpm高速震荡乳化7分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在5℃下减压挥发二氯甲烷3小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤4次，每次22L，加入5％甘露醇水溶液22L重新分散，在-42℃下，经冷冻干燥16小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；胸腺五肽口服微球最佳载药量为1％～20％；微球的平均粒度在1～50微米之间；加入常规辅料，采用常规方法制成胶囊剂。

实施例4：胸腺五肽口服微球

胸腺五肽                0.5kg

明胶                    0.4kg

丙交脂-乙交脂共聚物     9kg

二氯甲烷                30L

聚乙烯醇-124            10kg

抑肽酶                  0.05kg

甘胆酸钠                0.2kg；

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在4L注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在30L二氯甲烷中，制成浓度为40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在4℃用匀浆机13000rpm高速震荡乳化3分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于600L注射用水中，制成浓度为2％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在4℃用匀浆机13000rpm高速震荡乳化5分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在28℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷13小时，或在5℃下减压挥发二氯甲烷3小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤3次，每次20L，加入5％甘露醇水溶液20L重新分散，在-40℃下，经冷冻干燥5小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

Claims (13)

1.一种胸腺五肽口服微球制剂，其特征在于该微球制剂的原料组成为：

胸腺五肽              0.1～0.8重量份

明胶                  0.1～1.5重量份

丙交脂-乙交脂共聚物   2-20重量份

二氯甲烷              18～42体积份

聚乙烯醇-124          5～20重量份

抑肽酶                0.01～0.2重量份

甘胆酸钠              0.1～2重量份。

2.如权利要求1所述的口服微球制剂，其特征在于该微球制剂的原料组成为：

胸腺五肽              0.5重量份

明胶                  0.4重量份

丙交脂-乙交脂共聚物   9重量份

二氯甲烷              30体积份

聚乙烯醇-124          10重量份

抑肽酶                0.05重量份

甘胆酸钠              0.2重量份。

3.如权利要求1所述的口服微球制剂，其特征在于该微球制剂的原料组成为：

胸腺五肽              0.4重量份

明胶                  0.2重量份

丙交脂-乙交脂共聚物   4重量份

二氯甲烷              20体积份

聚乙烯醇-124          5重量份

抑肽酶                0.15重量份

甘胆酸钠               1.5重量份。

4.如权利要求1所述的口服微球制剂，其特征在于该微球制剂的原料组成为：

胸腺五肽               0.7重量份

明胶                   1.3重量份

丙交脂-乙交脂共聚物    16重量份

二氯甲烷               40体积份

聚乙烯醇-124           21重量份

抑肽酶                 0.03重量份

甘胆酸钠               0.5重量份。

5.如权利要求1-4任一所述的口服微球制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在1～8体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为20％-40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在3～5℃用匀浆机6500～15000rpm高速震荡乳化1～5分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于450～750体积份注射用水中，制成浓度为1％-3％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在3～5℃用匀浆机6500～15000rpm高速震荡乳化3～8分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在25～30℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷10～15小时，或在2～8℃下减压挥发二氯甲烷1～5小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤1～5次，每次15～25体积份，加入5％甘露醇水溶液15～25体积份重新分散，在-35～-45℃下，经冷冻干燥12～18小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

6.如权利要求5所述的口服微球制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在4体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在4℃用匀浆机13000rpm高速震荡乳化3分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于600体积份注射用水中，制成浓度为2％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在4℃用匀浆机13000rpm高速震荡乳化5分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在28℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷13小时，或在5℃下减压挥发二氯甲烷3小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤3次，每次20体积份，加入5％甘露醇水溶液20体积份重新分散，在-40℃下，经冷冻干燥5小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

7.如权利要求5所述的口服微球制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在5体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为30％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在4℃用匀浆机10000rpm高速震荡乳化3分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于500体积份注射用水中，制成浓度为2％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在4℃用匀浆机10000rpm高速震荡乳化5分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在28℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷12小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤3次，每次20体积份，加入5％甘露醇水溶液20体积份重新分散，在-40℃下，经冷冻干燥15小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

8.如权利要求5所述的口服微球制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在2体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为20％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在3℃用匀浆机7000rpm高速震荡乳化2分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于480体积份注射用水中，制成浓度为1％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在3℃用匀浆机14000rpm高速震荡乳化4分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，在26℃下温和搅拌，挥发二氯甲烷11小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤2次，每次18体积份，加入5％甘露醇水溶液18体积份重新分散，在-38℃下，经冷冻干燥14小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

9.如权利要求5所述的口服微球制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

将胸腺五肽、明胶、抑肽酶、甘胆酸钠溶解在7体积份注射用水中，制成水溶液，作为水相W₁；将丙交脂-乙交脂共聚物溶解在二氯甲烷中，制成浓度为40％的丙交脂-乙交脂共聚物二氯甲烷溶液，作为油相0；在5℃用匀浆机14000rpm高速震荡乳化4分钟，将油水两相混合均匀制成W_I/0相，将聚乙烯醇-124溶解于700体积份注射用水中，制成浓度为3％的聚乙烯醇-124水溶液，作为水相W₂；在5℃用匀浆机7000rpm高速震荡乳化7分钟，与前W₁/0相进行乳化包和，得到W₁/0/W₂相，搅拌均匀，在5℃下减压挥发二氯甲烷3小时，离心，收集微球，用注射用水洗涤4次，每次22体积份，加入5％甘露醇水溶液22体积份重新分散，在-42℃下，经冷冻干燥16小时后，分装，即得胸腺五肽口服微球制剂；加入常规辅料，采用常规方法制成片剂、胶囊剂。

10.如权利要求1-4任一所述的口服微球制剂，其特征在于其中抑肽酶用胰蛋白酶抑制剂替代，用量为0.05～0.5重量份；甘胆酸钠用去氧胆酸钠或癸酸钠代替，用量为0.1～2重量份。

11.如权利要求1-4任一所述的口服微球制剂，其特征在于其中抑肽酶用胰蛋白酶抑制剂替代，用量为0.08重量份、0.4重量份或0.06重量份；甘胆酸钠用去氧胆酸钠或癸酸钠代替，用量为0.1重量份、1.5重量份或0.5重量份。

12.如权利要求5-9任一所述的口服微球制剂的制备方法，其特征在于其中抑肽酶用胰蛋白酶抑制剂替代，用量为0.05～0.5重量份；甘胆酸钠用去氧胆酸钠或癸酸钠代替，用量为0.1～2重量份。

13.如权利要求5-9任一所述的口服微球制剂的制备方法，其特征在于其中抑肽酶用胰蛋白酶抑制剂替代，用量为0.08重量份、0.4重量份或0.06重量份；甘胆酸钠用去氧胆酸钠或癸酸钠代替，用量为0.1重量份、1.5重量份或0.5重量份。

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