CN101721435A

CN101721435A - 一种灵芝孢子粉纳米硒复合物及其制备方法

Info

Publication number: CN101721435A
Application number: CN200910185881A
Authority: CN
Inventors: 张胜义; 余春富; 蒋帮铜; 吴杰颖; 金葆康; 田玉鹏
Original assignee: Anhui University
Current assignee: Anhui Province Kangmeilai Dabieshan Biotechnology Co., Ltd.; Anhui University
Priority date: 2009-12-10
Filing date: 2009-12-10
Publication date: 2010-06-09
Anticipated expiration: 2029-12-10
Also published as: CN101721435B

Abstract

一种灵芝孢子粉纳米硒复合物是由破壁灵芝孢子粉与二氧化硒水溶液在还原剂抗坏血酸和添加剂生物胶或生物寡糖作用下通过混合、还原反应和真空干燥得到的灵芝孢子粉纳米硒复合物。复合物中破壁灵芝孢子粉含量0.8～95g/g，纳米硒10～100μg/g。本复合物将灵芝孢子粉和纳米硒的防癌抗癌、预防和治疗心脑血管疾病、提高人体免疫能力等作用结合在一起，通过功能协同作用，增强了二者的生物学效应，特别适用于保健、食品、医药等领域。

Description

一种灵芝孢子粉纳米硒复合物及其制备方法

一、技术领域

本发明涉及一种保健品及其加工方法，确切地说是一种具有医疗保健功能的灵芝孢子粉纳米硒复合物及其制备方法。

二、背景技术

灵芝是祖国中医药宝库中珍贵的药用植物，古代称之为“仙草”。孢子粉是在灵芝发育后期，从灵芝菌褶中弹射出来的极微小卵形生殖细胞，它凝聚了灵芝的精华，含有更丰富的多糖肽、腺嘌呤核苷、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素、酶、三萜类、有机锗、微量元素等特殊成份，且更适合人体肠胃直接吸收。孢子粉对人完全没有毒性，是一种安全可靠的医疗保健品。

有关研究结果表明，孢子粉可以迅速提高人体免疫能力、降低血压、降低血糖、降低胆固醇、改善微循环、避免心脑血管病、宁心安神、促进睡眠、健脾开胃、镇咳平喘、养颜美容、延年益寿、消除疲劳以及扶正固本的功效。特别是孢子粉中的三萜类、核苷类化合物可以破坏恶性肿瘤细胞特有的端粒酶，抑制其无限增殖及变异细胞生长，切断肿瘤细胞的DNA链，使其失去生长能力，直至凋亡。孢子粉还具有抗放射功能，能减轻或消除放化疗引起的白细胞减少，阻止癌细胞转移，消除癌症特有的剧痛、提高治疗的耐受性，增进食欲、使肿瘤缩小，预防癌症术后复发。

硒是人体必需的微量元素，补硒可有效预防和治疗多种疾病。硒具有抗氧化、抗衰老、抗辐射、抗有害重金属、保护肝脏、免疫调节等方面的作用，对治疗肝炎、关节炎、白内障、心血管疾病有显著作用。硒是人体内抗氧化系统中最重要的酶一谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心，其清除自由基效能是维生素E的500倍。特别是硒可以显著预防基因突变，保护修复细胞，降低肺癌、肠癌、胃癌、血癌等癌症的发病率，对肿瘤病人的放化疗也有明显的辅助治疗作用。因此，硒是人体重要的抗癌因子，被确定为“营养性防癌剂”，有“抗癌之王”之称。另外，硒对治疗爱滋病、预防克山病也有很好的作用。与无机化合态硒和有机硒相比，纳米硒具有高安全性及高生物活性的特点。例如：在急性毒性(LD50)方面，纳米硒为113mg/kg，而无机化合态硒仅为15mg/kg，有机硒为35mg/kg；在生物效应方面，纳米硒清除羟自由基的效率为无机化合态硒的5倍，为有机硒的2.5倍。另外，纳米硒在低剂量下就可以显示出抑制肿瘤和免疫调节保健作用。

三、发明内容

本发明旨在提供一种用于保健、食品、医药等领域的灵芝孢子粉纳米硒复合物，所要解决的问题是使灵芝孢子粉与纳米硒有效复合的制备方法。

本发明的思路是将灵芝孢子粉和纳米硒的防癌抗癌、预防和治疗心脑血管疾病、提高人体免疫能力等作用结合在一起，通过功能协同作用，增强二者的生物学效应。一般情况下，天然灵芝孢子粉中也含有微量硒元素，但由于含量很少，不能发挥其功效。本发明采用一定的方法将具有高效低毒特征的纳米硒与灵芝孢子粉复合，所得复合物可以充分发挥纳米硒与灵芝孢子粉的生物学功效。所述的灵芝孢子粉是破壁灵芝孢子粉。纳米硒是单质态。

本发明所称的灵芝孢子粉纳米硒复合物是由破壁灵芝孢子粉与二氧化硒水溶液在还原剂抗坏血酸和添加剂生物胶或者生物寡糖作用下通过混合、反应、干燥后得到的灵芝孢子粉纳米硒复合物，复合物中破壁灵芝孢子粉含量0.8～0.95g/g，纳米硒含量10～100μg/g。

本灵芝孢子粉纳米硒复合物的制备方法，以破壁灵芝孢子粉和二氧化硒(SeO₂)为原料，包括混合、反应和干燥，其特征是二氧化硒水溶液与过量的还原剂抗坏血酸以及添加剂生物胶或者生物寡糖混合、研磨反应至混合物呈红色(纳米硒呈红色)时加入破壁灵芝孢子粉，混合均匀后真空干燥得到灵芝孢子粉纳米硒复合物。

在混合添加剂时，可以一次性加在含SeO₂的混合物中，也可以先部分加在含SeO₂的混合物中，余量随破壁灵芝孢子粉一道加入含纳米硒的混合物中。

混合破壁灵芝孢子粉亦然，即也可以先部分加在含SeO₂的混合物中，余量再加入含纳米硒的混合物中。

所述的添加剂选自生物胶或者生物寡糖，生物胶包括瓜尔豆胶、黄原胶或羧甲基纤维素钠等，生物寡糖包括壳聚糖、壳寡糖或环糊精等。

本发明所用还原剂为抗坏血酸，制备时抗坏血酸大大过量。剩余的抗坏血酸自身是一种人体必需维生素，具有抗氧化等营养保健功能。此外，抗坏血酸在产品中具有稳定作用，可以预防灵芝孢子粉有效成分及纳米硒被空气氧化变质。

本发明所用的添加剂为生物胶(瓜尔豆胶或黄原胶或羧甲基纤维素钠)或生物寡糖(壳聚糖或壳寡糖或环糊精)。此类添加剂为天然产物或由天然产物衍生而成，不仅自身具有多种营养保健功能和高的安全性，而且在产品中还具有如下作用：(1)吸附和包裹作用：可以减少灵芝孢子粉中有效成分孢子油三萜类化合物的挥发，防止纳米硒颗粒团聚，使灵芝孢子粉与纳米硒均匀、稳定、紧密地结合在一起；(2)悬浮和润滑作用，可以使产品形成性质稳定、分散均匀的水溶液，有利于人体吸收，且能改善产品口感。

本发明的技术方案是通过常温常压下的固液反应使灵芝孢子粉与纳米硒复合，经过适当处理最终得到组成结构均匀稳定、性能优良的复合物。各步反应均不涉及产物分离过程，只需将水溶剂除去，适合工业化生产。

制备复合物时，所用灵芝孢子粉为破壁灵芝孢子粉，所用硒原料为SeO₂，通过与还原剂抗坏血酸作用生成单质硒，在添加剂作用下形成分散均匀的纳米硒并与灵芝孢子粉复合。

制备时，改变原料配比可以调节产品中灵芝孢子粉和纳米硒的含量(灵芝孢子粉含量0.80～0.95g/g；纳米硒的含量10～100μg/g)。

用红外光谱仪(IR)、紫外光谱仪(UV)测定产物的光谱吸收特征，用扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)测定产物的形貌、粒径大小及分散性，用X射线衍射仪(XRD)测定纳米硒的晶型结构。测试结果表明：灵芝孢子粉的粒径在微米量级；纳米硒的粒径为20-50nm，为无定形结构；产物中的灵芝孢子粉的组成和结构没有发生明显变化，其粉粒表面吸附有纳米硒颗粒和添加剂等。

四、附图说明

图1是红外光谱吸收图。图中1为灵芝孢子粉吸收图，2为本复合物吸收图。比较1和2，两者相似，说明本复合物中灵芝孢子粉的主要成分没有变化。

图2是紫外光谱图。图中1为灵芝孢子粉谱图，2为本复合物谱图。比较1和2，两者相似，说明本复合物中灵芝孢子粉的主要成分没有变化。

图3是纳米硒透射电镜图。纳米硒粒径20～50nm。

图4是纳米硒XRD衍射图。说明纳米硒是无定形结构。

图5是灵芝孢子粉扫描电镜图。微粒表面光滑。

图6是本复合物扫描电镜图。复合物表面粗糙，说明灵芝孢子粉表面复合有纳米硒和添加剂。

五、具体实施方式

(一)复合物制备实施例

1、准确称量0.014g SeO₂，将其溶解在100ml水中，取2.0ml加入1.0g瓜尔豆胶或黄原胶或羧甲基纤维素钠，混均后加入1.0g抗坏血酸研磨。待混合物变红色(纳米硒为红色物质)后再研磨5分钟。最后向混合物中加入18g灵芝孢子粉混合均匀，真空干燥，即得含硒为10μg/g、含灵芝孢子粉为0.90g/g的产品。

2、准确称量0.018g SeO₂，将其溶解在10ml水中，取1.0ml加入1.0g瓜尔豆胶或黄原胶或羧甲基纤维素钠，混均后加入1.0g抗坏血酸研磨。待混合物变红色(纳米硒为红色物质)后再研磨5分钟。最后向混合物中加入24g灵芝孢子粉混合均匀，真空干燥，即得含硒为50μg/g、含灵芝孢子粉为0.92g/g的产品。

3、准确称量0.027g SeO₂，将其溶解在10ml水中，取2.0ml将10g灵芝孢子粉润湿，混合均匀后，边搅拌边向该粉状物喷洒5ml抗坏血酸(含抗坏血酸1.0g)水溶液。反应完全后加入1.0g黄原胶和26g灵芝孢子粉混合均匀，真空干燥，即得含硒为100μg/g、含灵芝孢子粉为0.95g/g的产品。

4、准确称量0.021g SeO₂，将其溶解在10ml水中，取1.0ml加入1.0g壳寡糖或壳聚糖，混均后加入2.0g抗坏血酸研磨，待混合物变红色(纳米硒为红色物质)后再研磨5分钟。最后向混合物中加入27g灵芝孢子粉混合均匀，真空干燥，即得含硒为50μg/g、含灵芝孢子粉为0.90g/g的产品。

5、准确称量0.021g SeO₂，将其溶解在10ml水中，取2.0ml加入2.0g壳寡糖或壳聚糖，混均后加入2.0g抗坏血酸研磨，待混合物变红色(纳米硒为红色物质)后再研磨5分钟。最后向混合物中加入2.0g瓜尔豆胶或黄原胶或羧甲基纤维素钠和24g灵芝孢子粉混合均匀，真空干燥，即得含硒为100μg/g、含灵芝孢子粉为0.80g/g的产品。

(二)灵芝孢子粉纳米硒复合物免疫调节作用动物试验报告

灵芝孢子粉纳米硒复合物4g/kg和1g/kg灌胃给药，能明显提高小鼠迟发超敏反应强度，提高环磷酰胺所致免疫抑制小鼠胸腺和脾脏重量，提高血清溶血素和凝集素水平，增加环磷酰胺所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力下降，使吞噬指数和吞噬百分率均明显增加，在相同剂量条件下，作用强度比原样品(灵芝孢子粉)好。结论：上述试验结果提示，灵芝孢子粉纳米硒复合物4g/kg和1g/kg灌胃给药，能明显提高正常和环磷酰胺免疫抑制模型小鼠细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能，作用强度比非复合的原样品好。

1试验材料

样一，原样品(灵芝孢子粉)，棕褐色细粉，批号：20090718，临用前用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC)配制成所需浓度供实验用。

样二，灵芝孢子粉纳米硒复合物，黑褐色细粉(含硒50μg/g、含灵芝孢子粉0.90g/g)，批号：20090711，临用前用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC)配制成所需浓度供实验用。

注射用环磷酰胺(CTX)，规格：0.2g/瓶，5瓶/盒，西林瓶包装，批号：20080218，江苏恒瑞制药有限公司生产。临用前用0.9％氯化钠注射液配制成所需浓度备用。

0.9％氯化钠注射液，浙江平湖莎普爱思制药有限公司生产，批号050102-2。

羧甲基纤维素钠(CMC)，LR，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号：F20020306。

2，4-二硝基氯苯：用丙酮配成1％溶液。

绵羊红细胞：脱纤维绵羊血，用生理盐水洗3次，去处上层白细胞和血小板，制成压积红细胞。

补体：即豚鼠血清，5只豚鼠血清混合物。

ICR小鼠，清洁级，雌雄各半，浙江省实验动物中心提供，动物合格证：

SCXK(浙)2008-0033。

1灵芝孢子粉纳米硒复合物对小鼠迟发性超敏反应的影响

ICR小鼠50只，雄性，体重24-27g，按体重搭配分成5组，每组10只，按表1所示剂量灌胃给药，对照组喂0.5％羧甲基纤维素钠(CMC)，灌胃体积均为0.2ml/10g体重，每天1次，连续14天，第15天小鼠腹部剃毛约3cm*3cm，将1％的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液50μl均匀涂抹在脱毛部位皮肤致敏，并继续给药，在致敏后第5天将1％的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳廓两面进行攻击。攻击后24h，颈椎脱臼处死小鼠，用直径8mm打孔器在两耳同样部位取耳片，称重，以左右耳重量之差为肿胀度。并解剖取小鼠胸腺及脾脏称重，分别以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作为脾指数和胸腺指数。

表1灵芝孢子粉纳米硒复合物对小鼠迟发超敏反应的影响(

n＝10)

和对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

迟发超敏反应主要由T细胞介导，其强度主要反映机体的细胞免疫水平。本实验结果显示原样品大剂量能明显提高小鼠迟发超敏反应强度，小剂量组的迟发超敏强度也略有增高，但无统计意义，有一定剂量关系。纳米硒灵芝孢子粉大、小剂量均能明显提高小鼠迟发超敏反应强度，且作用强度高于原样品。但原样品和纳米样品对正常小鼠免疫器官脾脏和胸腺的重量均无明显影响。

2灵芝孢子粉纳米硒复合物对体液免疫功能的影响

ICR小鼠60只，雄性，体重20-23g，按体重搭配分成6组，每组10只，按表-2所示剂量灌胃给药，每天1次，第8天除正常对照组外，其余各组在给药后约2小时腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg)，第9天所有各组给药后约2小时腹腔注射20％羊红细胞0.2ml/只免疫动物。免疫后第5天，股动脉放血处死小鼠，分离血清，文献方法测定血清溶血素和血清凝集素水平。并解剖取脾脏和胸腺称重，计算脾指数和胸腺指数。

表-2灵芝孢子粉纳米硒复合物对小鼠免疫脏器、溶血素及凝集素水平的影响(

n＝10)

和模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

表-2结果显示，原样品大剂量组能明显提高环磷酰胺所致免疫抑制小鼠胸腺和脾脏重量，提高血清溶血素和凝集素水平，小剂量组明显提高凝集素水平趋势，对胸腺和脾脏重量及血清溶血素水平也有促进提高的趋势，剂量关系明确。纳米硒样品大、小剂量均能显著提高小鼠胸腺和脾脏重量，提高血清溶血素和凝集素水平，作用强度高于原样品.

3灵芝孢子粉纳米硒复合物对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响

ICR小鼠60只，雄性，体重22-24g，按体重搭配分成6组，每组10只，按表3所示剂量灌胃给药，每天1次，连续10天，最后一次给药后1小时，腹腔注射2.5％的鸡红细胞悬液1.0ml/鼠，轻揉腹部1分钟，3小时后脱颈椎处死小鼠，吸取腹腔内液体0.5ml滴于玻片上，在37℃培养箱内孵育30分钟使巨噬细胞贴壁，自来水冲去未贴壁细胞，凉干，丙酮-甲醇溶液(1∶1)固定5分钟，Giemsa-Wright混合染色，镜下计数100个巨噬细胞，计算巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率。

吞噬百分率＝吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞*100％

吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞*100％

表-3灵芝孢子粉纳米硒复合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响(

n＝10)

和模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

灵芝孢子粉纳米硒复合物明显增加环磷酰胺所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力下降，使吞噬指数和吞噬百分率均明显增加，作用强度比原样品高。

小结：

迟发超敏反应主要由T细胞介导，其强度主要反映机体的细胞免疫水平。血清溶血素和凝集素水平代表机体特异性体液免疫功能，而腹腔巨噬细胞吞噬能力、胸腺和脾脏等棉免疫器官重量则反应机体的非特异免疫功能。上述研究结果显示，灵芝孢子粉纳米硒复合物4g/kg和1g/kg灌胃给药，能明显提高正常和环磷酰胺免疫抑制模型小鼠细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能，剂量关系明确。作用强度比非复合的原样品好。

Claims

1.一种灵芝孢子粉纳米硒复合物，其特许在于：本复合物由破壁灵芝孢子粉与二氧化硒水溶液在抗坏血酸和生物胶或者生物寡糖作用下通过混合、反应、干燥而得到的灵芝孢子粉纳米硒复合物，复合物中破壁灵芝孢子粉含量0.8～0.95g/g，纳米硒10～100μg/g。

2.如权利要求书1所述的灵芝孢子粉纳米硒复合物的制备方法，以破壁灵芝孢子粉和二氧化硒为原料，包括混合、反应和干燥，其特征在于：二氧化硒水溶液与过量的还原剂抗坏血酸以及添加剂生物胶或者生物寡糖混合、研磨反应至混合物呈红色时加入破壁灵芝孢了粉，混合均匀后真空干燥得到灵芝孢子粉纳米硒复合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的生物胶选自瓜尔豆胶、黄原胶或羧甲基纤维素钠。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的生物寡糖选自壳聚糖、壳寡糖或环糊精。