CN101715445B - 制备糖苷配基的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明旨在提供一种有效的、低成本的、不使用酸催化或有机溶剂的从配糖体制备糖苷配基的方法。该制备糖苷配基的方法特征在于将配糖体与高温高压水接触。高温高压水的温度一般为100-374℃，优选地140-320℃，更优选地200-300℃。高温高压水的压力不低于该温度下的饱和水蒸气压，即，该压力下维持液体状态的压力。

Description

制备糖苷配基的方法
背景技术
发明领域
本发明涉及一种制备糖苷配基的方法，其中将糖残基从配糖体中移除，尤其是一种低成本的、有效的、不使用酸催化剂和有机溶剂的从配糖体制备糖苷配基的方法。
有关技术
许多生理学活性物质常常具有糖残基天然结合于非糖部分基团(non-sugarmoiety)组成的基质化合物(以下称为糖苷配基)的结构。糖残基的存在是为了稳定性、亲水性、和解毒作用的目的。因此，配糖体的生理活性例如医疗作用、抗氧化、和抗癌作用通常存在于糖苷配基区域。
当口腔投与时，一般的水溶性配糖体(glycoside)的糖残基通过肠细菌和消化酶被移除，并被转换成易于肠道吸收的糖苷配基(aglycone)。如果从开始就投与糖苷配基，肠吸收率和血液中浓度的增加是可以期待的。
作为天然配糖体提取糖苷配基的方法，传统公知的方法是使用糖苷酶的酶反应(专利文献1和2)和酸水解法(专利文献3)。此外，专利文献4描述了一种将通过上述酶反应和酸水解法分离的糖苷配基提取到亚临界状态或超临界状态液体中的方法。专利文献1：日本特许公开2006-081440专利文献2：日本特许公开2005-224162专利文献3：日本特许公开H09-104693专利文献4：日本特许公开S63-33341
发明概述
当上述通过糖苷酶的酶反应在工业上实践时，存在有设备和制造成本高、需要一定的反应时间和产程、例如提取，pH调解，和酶的去除，以及糖苷配基回收率低的问题。就回收率而言，异黄酮配糖体到异黄酮糖苷配基的转换率最高达94％，因此不能根据专利文献2获得纯糖苷配基。此外，当生产用作食品时，上述酶反应具有质地劣化、臭味产生和其它问题。
同时，用于酸水解法的例如盐酸和硫酸的强酸会引起设备的腐蚀。此外，因为配糖体和糖苷配基是疏水的，水解反应在水存在时进展不佳，所以酸水解法需要在有机溶剂中进行。然而，当所得的糖苷配基加工成食品时，例如强酸和有机溶剂的化学试剂的使用对于消费者来讲不是合宜的。制备过程中产生的废气和废物对于环境同样不是合宜的。此外，酸水解法不是有效率的，因此它很容易产生副产物。
因此，本发明的一个目的是提供一种制备糖苷配基的方法，其不使用上述强酸和有机溶剂，对于人类和环境都是友好的。另一个目的是提供一种低成本的、有效的从配糖体形式制备糖苷配基的方法。
在上述目的的深层考虑上，发明者发现，高温高压水的使用可以不使用酸和有机溶剂而高效地制备糖苷配基，这与传统方法是不同的。
本发明的特征在于通过将配糖体与高温高压水接触。在本说明书中，高温高压水指的是具有不高于水的临界点(374℃，22.1MPa)的温度，以及不低于在该温度下的饱和蒸汽压的压力的水。
根据本发明，高温高压水具有以下特征：(1)由于较低的水介电常数而具有类似于有机溶剂的特性，和溶解配糖体和糖苷配基，和(2)水增加的离子积，以及在高温下等同于进一步活化的酸催化剂的功能。利用这些特性，只有配糖体的糖残基会被水解成游离的糖苷配基。虽然上述专利文献4描述使用一种亚临界状态的液体，但是它只能用于提取游离的糖苷配基。因此，在制备糖苷配基的方法上，专利文献4与本发明是不同的。
几乎所有的有机化合物在使用超临界水的热水反应中都会被分解。然而，根据本发明的制备方法，通过适当调节高温高压水的条件，只有糖残基会被有效地除去，从而按此可以获得糖苷配基。
本发明还提供了一种通过上述制备方法获得的糖苷配基，并且糖苷配基的纯度为95-100％。在这里，“糖苷配基的纯度”意思是糖苷配基与游离的糖苷配基和未反应的配糖体的总重量的重量比。
根据本发明的制备方法，反应的元素只有样品和水，这里不需要使用有机溶剂、酸催化剂、酶、以及其它物质，这与传统方法是不同的。因此，不需要清洗和除去残留的催化剂和残留的酶，也不需要pH调解酸催化剂。此外，本发明的制备方法还具有比酶反应更高的糖苷配基转化率的优点。此外，根据本发明的制备方法，当高温高压水在处理后回复到普通水时，很容易将糖苷配基从水中分离，这是因为不溶于水的糖苷配基会沉淀在水层中。因此，根据本发明的制备方法，与传统方法相比，糖苷配基和糖残基的分离变得非常简单。
由于根据本发明的制备方法的糖苷配基的转化率很高，因此相比传统方法获得的糖苷配基，糖苷配基的纯度得到了提高。换句话说，根据本发明的制备方法，提供了高纯度的糖苷配基。
附图简要说明
附图1是显示根据本发明制备糖苷配基的连续反应系统的概略图示。附图2是显示实施根据本发明制备糖苷配基的方法的分批式反应装置的概略图示。附图3是用于实施例1至6中的大豆皂角苷配糖体的色谱图。在这里，X轴表示洗脱时间(分钟)，Y轴表示吸光度(相对值)。附图4是用于实施例1至6的大豆皂角苷糖苷配基的色谱图。在这里，X轴表示洗脱时间(分钟)，Y轴表示吸光度(相对值)。附图5是用于实施例7至13的大豆异黄酮配糖体的色谱图。在这里，X轴表示表示吸光度(相对值)，Y轴洗脱时间(分钟)。附图6是用于实施例7至13的大豆异黄酮糖苷配基的色谱图。在这里，X轴表示表示吸光度(相对值)，Y轴洗脱时间(分钟)。附图7显示了根据本发明的制备方法制备的大豆皂角苷糖苷配基和大豆异黄酮糖苷配基的回收率。附图8显示了根据本发明的制备方法制备的大豆皂角苷糖苷配基和大豆异黄酮糖苷配基在所得产物中的浓度。附图9显示了根据本发明的制备方法制备的大豆皂角苷糖苷配基和大豆异黄酮糖苷配基相比配糖体的浓度比率(以一定的制备时间)。
优选的具体实施方式的说明
在下文中，本发明的一种制备糖苷配基的方法将通过一个具体实施方式进行说明。首先，适用于本发明的配糖体包括所有通过糖残基中半缩醛羟基或半缩酮羟基和乙醇、苯酚、羧酸等等中的反应基团之间的脱水缩合而成的配糖体化合物。虽然配糖体主要是天然二次代谢产物，但是它也包括具有相同结构的化学合成物。
根据原子结合糖残基的类型，上述配糖体分为O-配糖体，S-配糖体，N-配糖体，和C-配糖体。本发明的制备方法不取决于原子结合的形式，其适用于所有的糖配体。
上述配糖体的糖苷配基形式的例子包括黄酮类，包括异黄酮，黄烷酮，黄酮，黄烷，查耳酮，二羟基查耳酮，儿茶素，黄烷醇，新黄酮类，黄酮醇，2-苯甲川基苯呋喃酮，花色素苷，和无色花色苷；萜类化合物，包括saponigen；类固醇，包括地谷新配基，洋地黄毒苷配基，乌沙甙元，毒毛旋花苷配基，羟基洋地黄毒苷配基，乙酰毒毛旋花子甙元，和乌巴配基；苯醌；和木酚素
另一方面，存在于配糖体中的糖残基的特殊例子包括单糖，包括葡萄糖，甘露糖，半乳糖，岩藻糖，鼠李糖，阿拉伯糖，木糖，果糖，和洋地黄毒素糖；二糖，包括麦芽糖，蔗糖，和乳糖；与上述糖的3到8个部位结合的低聚糖。
天然存在的O-配糖体类型的配糖体的特殊例子包括异黄酮，皂角甙，橄榄苦苷，花色素苷，芸香苷，芹菜甙，橙皮苷，柚苷，柠檬苷，三(羟甲基)甲基甘氨酸，番泻苷，蟾毒素，洋地黄毒苷，毛花苷C，去乙酰毛花甙丙，地高辛，甲基地高辛，乌本箭毒苷，哇巴因，扁桃苷，甜菊苷，甘草甜，獐牙菜苦苷，和龙胆苦甙。
上述异黄酮是黄酮类配糖体的一种类型，其较多的包含于蔷薇科，鸢尾科，桑科，和苋科，以及例如大豆，豌豆，鹰嘴豆，苜蓿，荆豆，和野葛的豆科植物中。就大豆异黄酮而言，例如黄豆苷，黄豆黄苷，和金雀异黄苷的配糖体是被确认的。
大豆糖甙及其糖苷配基大豆黄素的化学结构示在下面显示。(糖残基)
Figure G2008800208604D00071
(大豆糖甙)                       (大豆黄素)[其中R1，R2，R3，R’1，和R’2代表氢原子]
上述皂角甙是一种无定型配糖体，其大量存在于大豆、红豆、橄榄和其它物体中。根据糖苷配基的类型存在两种类型的皂角甙：三萜皂甙和甾族皂甙。三萜皂甙的糖苷配基是齐墩果烷或达玛烷。另一方面，甾族皂甙的糖苷配基是螺旋甾烷、呋喃甾烷、或C27-类固醇生物碱。
作为三萜皂甙一种类型的大豆皂角甙B配糖体及其糖苷配基大豆皂醇B的化学结构式在下面显示。(糖残基)
Figure G2008800208604D00081
(大豆皂角甙B)                     (大豆皂醇)[其中R1代表CH2OH或氢原子，R2代表β-D-Glc，α-L-Rha或氢原子。]
上述橄榄苦苷主要通过水和/或有机溶剂从橄榄的果实、种子、果皮、种皮、叶、茎、和芽或这些的干燥、粉碎或脱脂的物体中提取获得。化学结构式在下面显示(其中“Glucose”表示葡萄糖。)
此外，芦丁是一种包含于荞麦和茶叶中的黄酮苷。洋地黄毒甙是一种包含于洋地黄中的无色的白色结晶性粉末。洋花甙丙可以用碱水解而获得去乙酰毛花甙丙。乙酰毛花甙丙通过酶反应除去葡萄糖从而获得地高辛。毒毛旋花苷是一种包含于夹竹桃科植物中的配糖体。甘草甜和glycyrrhizard是包含于甘草中的一种无色晶体。扁桃苷大多包含于苦扁桃和果实核中。熊果苷存在于杜鹃属植物中，植物例如越桔和熊果。
自然中存在的S-配糖体型的配糖体的例子是黑芥子苷。黑芥子苷存在于十字花科植物的植物叶、种子和根中，例如黑芥，辣根，芥菜，萝卜，和豆瓣菜。
自然中存在的C-配糖体型的配糖体的例子是芦荟素，芒果素，和芦荟苦素。芦荟素存在于芦荟植物的叶中。
上述糖苷配基经受高温高压水的处理成为均匀的水溶液或悬浮液。在这里，固体糖苷配基可以被粉碎，然后在水中溶解或悬浮。
用作原料的糖苷配基的浓度可以处于溶解于水或保持流动性的悬浮状态。通常地，浓度为1-50％(w/w)，优选地5-20％(w/w)。
高温高压水的温度为100-374℃，优选地140-320℃，更优选地200-300℃。它的压力可以不低于上述温度相应的饱和水蒸气压，换句话话说，就是维持液体状态的压力。优选地，压力比上述温度相应的饱和水蒸气压高0-22MPa。更优选地，压力是上述温度相应的饱和水蒸气压。当处理温度和压力低于上述范围，配糖体的水解反应将不会进行，因而糖苷配基的回收率也不会增加。相反地，当它们高于上述范围时，热解反应发生，因而糖苷配基的回收率就下降。此外，还产生了反应设备变得易腐蚀和需要更高的压力耐受性的问题。
由于高温高压水的合适条件根据配糖体的特性而不同，因此它们需要相应地进行调整。例如，大豆皂角甙处理的高温高压水的温度优选为饱和水蒸气压下240-320℃，更优选地240-280℃。大豆异黄酮处理的高温温高压水的温度优选为200-320℃，更优选地240-280℃。
配糖体和高温高压水的接触时间通常可以为0.1-120分钟，优选地0.5-20分钟，更优选地1-5分钟，进一步更优选地1-3分钟。对于过于短的接触时间，水解反应不会进行，并且配糖体将留在产物中。相反地，对于过于长的接触时间，配糖体水解和热解一起进行，从而糖苷配基的回收率降低。
接触时间的细节需要根据处理的配糖体的特性、温度和压力进行合适的调整。例如，对于大豆异黄酮和大豆皂角甙的配糖体，当反应在240-280℃以及该温度下的饱和水蒸气压下发生1-5分钟时，只分解和去除糖残基而留下了糖苷配基是可能的。
根据本发明的制备方法，当配糖体用高温高压水处理时，将会获得分离的具有一个水相和一个固体相的物体。糖苷配基包含于固体相中，之前与配糖体结合的糖包含于水相中。
固体相中的糖苷配基变成凝胶状态或者沉淀，这取决于高温高压水的条件。优选地，采用获得沉淀的高温高压水的条件。这包括自然沉淀、离心分离、和过滤。离心分离是优选。对于硬质凝胶状态，其需要进行脱水和干燥，随后清洗以除去水溶性的成分。
根据本发明的制备方法，通过调整条件，配糖体到糖苷配基的转化率(糖苷配基回收率)达到70-100％，优选地95-100％，更优选地99-100％。因此，本发明还提供了就通过上述制备方法得到的糖苷配基的纯度通常为70-100％，优选地95-100％，进一步更优选地99-100％的糖苷配基。
对于回收的糖苷配基包含杂质的，可以根据常规方法进行精制。例如，包括熔剂分馏，柱色谱法，蒸馏，和膜分离。
此外，包含于高温高压水处理后的上述水相中的糖可以根据常规方法分离和精制。特别地，包括离子交换，吸附，蒸馏，蒸发，盐析，膜分离和提取。
本发明制备方法中使用的高温高压水处理装置不被特殊限定。例如，可以使用熟知的分批型和连续型高温高压水处理装置。
附图1显示了使用连续型高温高压水处理装置制备糖苷配基的反应系统。在使用水泵12将压力升到预定压力以后，使用加热器13加热水箱11中的水以获得具有预定温度的热水。原料配糖体用水混合，形成溶液或浆液状态，随后将其喂到原料桶14中。然后，原料使用泥浆泵15升压，用热水将原料浆液混合，并且将其通过高温高压水反应热/压力耐受管16。随后，通过冷却器17将其冷却到室温，通过过滤器18将未溶解的固体部分除去，并且通过背压阀19将处理过的水收集到一个容器中。因为当返回到常规压力时糖苷配基变成水不溶的，所以其大部分在容器中沉淀。在该情况下，将沉淀物作为糖苷配基回收。
一种制备糖苷配基的分批型装置包括：例如附图2中所示的，一个压力/热耐受管21，它是能开能合的，由例如不锈钢的抗腐蚀材料制成；一个例如盐浴22的在高温高压水的温度下的恒温装置；和均质化反应容器内容物的装置，例如搅拌器24和反应管振荡装置。反应管含有配糖体和水，并且是封闭的，并且被加热到预定的温度。当反应管内的温度和压力变得很高时，反应管内的水变成了高温高压水，同时糖苷配基通过水解反应游离。
实施例
在下文中，虽然将通过给出的实施例对本发明作更详细的说明，但是这不是对它的限定。[实施例1-6和对照实施例1-2]从大豆皂角甙制备大豆皂角甙糖苷配体[反应管的准备]附图2中所示的分批型反应装置20用于高温高压水处理。该反应装置20具有可移除的、匹配不锈钢管21(外径：10mm，内径：8.2mm，长：150mm，容量：8.2cm3)两头的盖子(产品名：SS-600-C，SWAGELOK制造)
[盐浴的准备]盐浴22(产品名：Thermometer Inspecting Bath CELSIUS600H，m ThomasKagaku Co.，Ltd.制造)用于保持高温高压水处理期间反应管21高温的恒定。对于盐浴中的热介质，使用硝酸钾和亚硝酸钠以1∶1混合的混合盐(熔点：140℃)。该反应装置20还具有用于保持反应管的篮(高：7cm，宽：20cm，深：3cm)和通过垂直摇动篮搅拌反应管中样品的搅拌器24。
[各处理温度下的温度和水准备量的计算]假定反应管中的压力等于水的饱和蒸汽压。管内各相占管内容积的比率通过以下公式表达：V＝Vs+V1+V2(1)[其中V表示反应管容积(cm3)，Vs表示(干燥的)配糖体体积(cm3)，V1表示水相(液体相)体积(cm3)，V2表示气体相体积(cm3).]
此外，(干燥的)配糖体准备量(g)和水准备量之间的关系通过以下公式表达：mw+m×w＝V1/v1+V2/(v2×ρ)(2)[其中V，Vs，V1和V2与上述含义相同。mw代表水准备量(g)，m代表(干燥的)配糖体的重量(g)，w代表水份含量比率，v1代表水相中特定容水量(cm3/g)，v2代表气相中特定容水量(cm3/g)，ρ代表水的密度(g/cm3).]
对于配糖体为0的情况，允许喂入反应管的水准备量V为：V1＝V＝8.2g
因此，高温高压水处理温度下反应管容积中的水量为8.2/v1(g)。最大的水相量占其80％，以允许有部分的气相。表1显示了实验中使用的高温高压处理的温度下饱和蒸汽压和水的比容积，以及水蒸气比容积。
[表1]
Figure G2008800208604D00131
[样品喂入]配糖体样品溶液通过将19重量份的水加入到1重量份的大豆皂角甙浓缩物(80％的配糖体浓度)制备，豆皂角甙浓缩物根据日本特许公开2006-124324中描述的溶剂提取法从大豆胚轴中提取。大豆皂角甙配糖体的色谱图显示于附图3中。大豆皂角甙配糖体的分析条件在下面说明。柱：ODS柱(SHISEIDO CAPCELL PAK C18 AG-120 尺寸4.6×250nm)移动相：A液体：水∶TFA＝100∶0.05(v/v)B液体：乙腈∶TFA＝100∶0.05(v/v)流速：0.7mL/分钟柱温：40℃检出：205nm(UV分光光度检测器)注入量：10μL洗脱条件：执行线性梯度：0分钟：13％的B液体比率，0-10分钟：13-30％的B液体比率，10-20分钟：30-50％的B液体比率，20-25分钟：50-50％的B液体比率，25-35分钟：50-100％的B液体比率B，35-55分钟：100-100％的B液体比率B，55-57分钟：100-13％的B液体比率B，和57-65分钟：13-13％的B液体比率。
对于大豆皂角甙A配糖体，大豆皂角甙A1(洗脱时间：18.771分钟)被检出，对于大豆皂角甙B配糖体，大豆皂角甙I(洗脱时间：29.331分钟)和大豆皂角甙V(洗脱时间：28.613分钟)被检出。
将大约3.46g该样品溶液分离并且装入上述反应管21中，将反应管盖上盖。
[高温高压水处理]将配糖体装入反应管21，和将水放入篮23后，在下面表2所示的温度下将具有篮23的反应管21作为一个整体沉入到盐浴22。
在高温高压水处理期间(1或者5分钟)，用上述搅拌器24以35次/分钟的间隔垂直摇摆反应管21。随后，将上述反应管21从盐浴22中取出，并且在水中冷却。
[水相和沉淀物的回收]将水冷却的反应管21充分摇晃以均匀内容物。打开反应管21的盖，用Viton制造的带有铲的压棒将管内全部内容物转移到试管。给试管添加水以达到约10ml的容量。随后通过离心处理(4000rpm×15分钟)使其旋转沉淀。旋转沉淀以后，状态观察的结果在表2中说明。
[沉淀物的乙醇处理]试管中全部的旋转内容物经过滗析、过滤和清洗。将水相排出。另一方面，用乙醇将滤纸上的固体溶解，将获得的乙醇溶液再次过滤。最终留在滤纸上的固体是不溶性的物质。
将过滤的乙醇溶液转移到试管。乙醇溶液的状态观察结果显示于表2中。乙醇溶液的内容物用高效液相色谱进行鉴定(Shimadzu公司制造)。大豆皂角甙糖苷配基的分析条件在下面说明。柱：ODS柱(SHISEIDO CAPCELL PAK C18 AG-120尺寸4.6×250nm)移动相：乙腈∶水∶1-丙醇∶0.01％的醋酸＝80∶13.9∶6∶0.1(V/V/V/V)流速：0.9mL/min柱温：40℃检出：205nm(UV分光光度检测器)注入量：20μL
由于大豆甾醇A(洗脱时间：8.697分钟)和大豆甾醇B(洗脱时间：17.146分钟)在附图4的色谱图中检出，因而证实含有大量的大豆皂角甙糖苷配基。
[表2]
温度(℃)   接触时间(分钟) 离心沉淀处理的状态   乙醇溶液的视觉观察状态
实施例1 240 1   黄色上清液+凝胶沉淀状态 -
实施例2 240 5   橙色上清液+粉末状沉淀物 黑褐色液体
实施例3 280 1   橙色上清液+粉末状沉淀物 黑褐色液体
实施例4 280 5   橙色上清液+粉末状沉淀物 黑褐色液体
实施例5 320 1   橙色上清液+粉末状沉淀物 黑褐色液体
实施例6 360 1   橙色上清液+粉末状沉淀物 黑褐色液体
  对照实施例1 200 1 完全的白色凝胶 -
  对照实施例2 200 5 完全的褐色凝胶 -
[糖苷配基的回收率、浓度和浓缩率]将实施例1的凝胶蒸发并且干燥，然后按重量计测定其回收量。此外，通过高效液相色谱(Shimadzu公司制造)确定糖回收的苷配基的量。将实施例2-6的产物通过混合乙醇溶液和沉淀的溶出物质混合蒸馏掉，随后按重量计测定回收量。此外，通过高效液相色谱(Shimadzu公司制造)确定糖回收的苷配基的量。在对照实施例1和2中，按实施例1将凝胶蒸发和干燥，并且按重量计进行测定。然而，不能获得大豆皂角甙糖苷配基。
表3显示了回收的糖苷配基量，糖苷配基回收率，糖苷配基浓度，和浓缩率。实施例2(240℃×5分钟)和实施例3(280℃×1分钟)的糖苷配基回收率达到率接近100％。回收的糖苷配基的摩尔数比上原料配糖体的摩尔数接近100％。因此，我们估计，配糖体到糖苷配基的转化率也接近100％。
就糖苷配基浓度和浓缩率来说，在实施例1(240℃×1分钟)、实施例2(240℃×5分钟)和实施例3(280℃×1分钟)的条件下，该浓度高于样品溶液中的配糖体浓度(67.5％)。此外，实施例2和3条件下的配糖体浓度是最大化的(附图8和9)。
[表3]
配糖体准备量(g)   回收的糖苷配基量(g)   糖苷配基回收率1)(％)   回收的糖苷配基浓度2)(％) 浓缩率3)(倍)
 实施例1   0.1229   0.0339   73.5   79.8   1.18
 实施例2   0.1208   0.0539   100   82.9   1.23
 实施例3   0.1208   0.0550   100   83.4   1.24
 实施例4   0.1208   0.0031   42.4   29.6   0.44
 实施例5   0.1229   0.0434   78.8   58.6   0.87
 实施例6   0.3809   0.0900   52.8   52.8   0.52
 对照实施例1 0.1225 0 0 0 -
 对照实施例2 0.1486 0 0 0 -
1)糖苷配基回收率＝回收的糖苷配基量/准备的配糖体中的糖苷配基量2)回收的糖苷配基浓度＝回收的糖苷配基量/回收的总量3)浓缩率＝回收的糖苷配基浓度/样品溶液中的配糖体浓度
[实施例7-13]大豆异黄酮糖苷配基的制备[样品喂入]样品溶液通过将18重量份的水加入到1重量份的大豆异黄酮浓缩物(80％的配糖体浓度)制备，大豆异黄酮浓缩物从大豆胚轴中提取(甘氨酸最大)。大豆异黄酮配糖体的色谱图显示于附图5中。大豆异黄酮配糖体的分析条件在下面说明。柱：ODS柱(YMC-pack ODS-AM-303尺寸4.6×250nm)移动相：A液体：乙腈∶水∶醋酸＝15∶85∶0.1(v/v)B液体：乙腈∶水∶醋酸＝35∶65∶0.1(v/v)流速：1.0mL/分钟柱温：40℃检出：254nm(UV分光光度检测器)注入量：10μL洗脱条件：执行线性梯度：0分钟：0％的B液体比率，0-50分钟：0-100％的B液体比率，50-55分钟：100-0％的B液体比率，和55-60分钟：0-0％的B液体比率。
在大豆异黄酮配糖体中，大豆黄酮甙(洗脱时间：9.998分钟)，黄豆黄苷(洗脱时间：10.780分钟)和金雀异黄苷(洗脱时间：16.822分钟)被检出。
按实施例1分离约3.46g样品溶液分开并装入反应管21中。
[高温高压水处理]将配糖体装入反应管21，和将水放入篮23后，在下面表所示的温度下将具有篮23的反应管21作为一个整体沉入到盐浴22。在高温高压水处理期间(1或者5分钟)，用上述搅拌器24以35次/分钟的间隔垂直摇摆反应管21。随后，将上述反应管21从盐浴22中取出，并且在水中冷却。
[水相和沉淀物的回收]将水冷却的反应管21充分摇晃以均匀内容物。打开反应管21的盖，用Viton制造的带有铲的压棒将管内全部内容物转移到试管。给试管添加水以达到约10ml的容量。随后通过离心处理(4000rpm×15分钟)使其旋转沉淀。旋转沉淀以后，状态观察的结果在表4中说明。
[沉淀物的乙醇处理]试管中全部的旋转内容物经过滗析、过滤和清洗。在顶部空间用氩取代后，将水相冷却并且保存。另一方面，用乙醇将滤纸上的固体溶解，将获得的乙醇溶液再次过滤。最终留在滤纸上的固体是不溶性的物质。
将过滤的乙醇溶液转移到试管。乙醇溶液的状态观察结果显示于表4中。乙醇溶液的内容物用高效液相色谱进行鉴定。大豆异黄酮糖苷配基的分析条件在下面说明。柱：ODS柱(YMC-pack ODS-AM-303尺寸4.6×250nm)移动相：A液体：乙腈∶水∶醋酸＝15∶85∶0.1(v/v)B液体：乙腈∶水∶醋酸＝35∶65∶0.1(v/v)流速：1.0mL/min柱温：40℃检出：254nm(UV分光光度检测器)注入量：10μL洗脱条件：执行线性梯度：0分钟：0％的B液体比率，0-50分钟：0-100％的B液体比率，50-55分钟：100-0％的B液体比率，和55-60分钟：0-0％的B液体比率。
由于在附图6的色谱图中，大豆黄素(洗脱时间：30.128分钟)，黄豆黄素(洗脱时间：32.358分钟)和金雀异黄素(洗脱时间：42.846分钟)作为大豆异黄酮糖苷配基被检出，因而证实含有大量的大豆异黄酮糖苷配基。
[表4]
温度(℃)   接触时间(分钟) 产物状态   沉淀的乙醇溶液状态
实施例7 200 1   无色上清液+粉末状沉淀 淡紫色液体
实施例8 200 5   无色上清液+粉末状沉淀 淡褐色液体
实施例9 240 1   无色上清液+粉末状沉淀   接近无色的液体
实施例10 240 5   黄色上清液+粉末状沉淀 黄褐色液体
实施例11 280 1   黄色上清液+粉末状沉淀 黄褐色液体
实施例12 280 5   黄色上清液+粉末状沉淀 褐色液体
实施例13 320 1   黄色上清液+粉末状沉淀 褐色液体
[糖苷配基的回收率、浓度和浓缩率的导出]在实施例7-13的产物中，将乙醇溶液和沉淀溶解性物质用溶剂蒸馏，按重量计测定回收量。此外，通过高效液相色谱(Shimadzu公司制造)确定回收的糖苷配基的量。糖苷配基的回收率、浓度、和浓缩率的结果一起显示于表5中。
[表5]
配糖体的准备量(g)   回收的糖苷配基量(g) 糖苷配基回收率(％)   回收的糖苷配基浓度(％) 浓缩率(倍)
  实施例7   0.1558   0.0092   2.5   2.0   0.02
  实施例8   0.1566   0.1402   38.5   32.2   0.40
  实施例9   0.1574   0.1709   46.4   39.8   0.49
实施例10 0.1590 0.2109 56.7 78.6 0.97
  实施例11   0.1558   0.3547   97.3   92.9   1.15
  实施例12   0.1574   0.2538   68.9   63.4   0.79
  实施例13   0.1574   0.2599   70.6   72.1   0.89
在实施例11的条件下(280℃×1分钟)，糖苷配基的回收率达到接近100％。在实施例11的条件下(280℃×1分钟)，糖苷配基的回收率被浓缩超过配糖体中的起始浓度(80.7％)，并且糖苷配基的浓度变的最大化(附图7-9)
[实施14](样品喂入)通过将含有大约35％或更多橄榄苦甙的橄榄提取物以大约5％的浓度分散到水中获得样品溶液。以类似实施例1的方法分离大约3.6g样品溶液并且将其装入反应管21中。
[高温高压水处理]将配糖体装入反应管21，和将水放入篮23后，在下面表所示的温度下将具有篮23的反应管21作为一个整体沉入到盐浴22。在高温高压水处理期间(1分钟，5分钟)，用上述搅拌器24以35次/分钟的间隔垂直摇摆反应管21。随后，将上述反应管21从盐浴中取出，并且在水中冷却。
通过HPLC测定所得样品以计算糖苷配基的转化回收量(表6)。约25％的糖苷配基可以通过200℃×5分钟和240℃×1分钟的处理回收
[表6]
Figure G2008800208604D00221
1)转化回收率＝100×[(已处理的糖苷配基浓度)-(未处理的糖苷配基浓度)]/[未处理的橄榄苦甙-已处理的橄榄苦甙浓度]工业应用
与和糖残基结合的配糖体对比，糖苷配基是高附加值的产物，因为它们提高的吸收性能和生理活性，以及相对糖残基的部分吸收它们提高的摄入量。特别地，皂角甙具有例如降低胆固醇，免疫刺激作用、抗癌活性、和抗诱变活性等生理作用。具有雌性激素类似的作用，大豆异黄酮糖苷配基作为医疗血药物对于女性疾病是有效的，例如骨质疏松，更年期障碍，和乳腺癌。芦丁糖苷配基被期望具有抗病毒作用。糖苷配基，例如洋地黄毒甙，毛花甙丙，去乙酰毛花甙丙，地高辛，甲基地高辛，和乌本箭毒苷作为强心药是有用的。甘草甜糖苷配基也可以用于药物治疗。熊果苷糖苷配基用作利尿剂，并且还能促成美白效果(化妆品)，这是由于其妨碍褐色素形成中的酪氨酸酶的作用。黑芥子苷糖苷配基被期待用于药物治疗。相关符号的说明
10高温高压水反应装置；11水箱；12水泵；13加热器；14原料桶；15浆液泵；16高温高压水反应的热/压力耐受管；17冷却器；18过滤器；19背压阀；20分批型反应装置；21压力/热耐受管；22盐浴；23篮；24搅拌器；和A糖苷配基

Claims (6)

1.一种通过将配糖体与高温高压水接触制备糖苷配基的方法，其特征在于高温高压水具有150-320℃的温度和不低于相应温度下的饱和水蒸气压，在配糖体为大豆皂角甙时所述温度为240-320℃。
2.根据权利要求1的制备糖苷配基的方法，其中配糖体是含有O-配糖体，S-配糖体，N-配糖体，和C-配糖体的组的至少一种类型。
3.根据权利要求1的制备糖苷配基的方法，其中配糖体是含有黄酮苷，萜烯苷，甾类糖苷，苯醌苷，和木酚素苷的组的至少一种类型。
4.根据权利要求1的制备糖苷配基的方法，其中配糖体是大豆皂角甙和或大豆异黄酮。
5.根据权利要求1的制备糖苷配基的方法，其中配糖体是橄榄苦苷。
6.根据权利要求6的制备糖苷配基的方法，其中配糖体和高温高压水接触的时间为0.5-20分钟。
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