CN101699997B - 埋植缓释激素诱导圆斑星鲽亲鱼性腺成熟排卵方法 - Google Patents

Abstract

一种埋植缓释激素诱导圆斑星鲽亲鱼性腺成熟排卵方法，包括亲鱼优选培育、温光调节亲鱼性腺发育和缓释激素埋植促进亲鱼卵母细胞最终成熟排卵两方面。本发明的缓释激素为鲑鱼促性腺激素释放激素类似物(sGnRHa)，由安全高效的多聚物缓释传递系统(95％胆固醇+5％纤维素)包被)、利用活体取样法或者光桌法选取性腺发育至四期中的雌性亲鱼，使用专用的埋植枪，背部肌肉埋植，缓释激素的效应时间为14-18天，该方法可使圆斑星鲽亲鱼卵母细胞达到最终成熟排卵，对亲鱼生殖胁迫低，亲鱼成活和性腺成熟率高，受精率达到72％，孵化率达56.2％，可获得批量优质受精卵。本发明是一套完整的控制技术方法，可稳定调控圆斑星鰈性腺发育成熟排卵，获得优质受精卵。

Description

埋植缓释激素诱导圆斑星鲽亲鱼性腺成熟排卵方法

技术领域：

本发明属于圆斑星鲽亲鱼繁育技术，是一种人工埋植缓释激素，促进圆斑星鲽亲鱼卵母细胞最终成熟排卵，获得批量优质受精卵的方法。

技术背景：

圆斑星鲽(Verasper variegates T.&S.)主要分布于我国黄海、渤海、东海以及日本，朝鲜等海域，产量不多，为一种冷温型大型底栖鱼类，多生活在近岸水域或海湾内，不做远距离洄游，是资源增殖和人工养殖的优良品种。星鲽外观漂亮、形体较大，肉质细嫩鲜美，鳍边胶质厚而有弹性，富含多种维生素、微量元素，营养丰富，易于烹饪，深受消费者喜爱，市场开发潜力巨大。目前，我国星鲽的自然资源极其稀少，已形不成渔获，因此，星鲽人工繁育和养殖技术研究已引起广大渔业工作者的普遍重视。在人工温光调控措施下，圆斑星鲽亲鱼性腺可以发育，但卵母细胞尚不能达到完全的成熟和排卵。这种情况下，人工采集卵子数量少，采卵量平均在200ml/尾以下，卵子质量差，受精率仅为30-50％，孵化率低于30％，直接影响了苗种培育的顺利进行。

日本对圆斑星鲽的促熟产卵技术研究较多，在人工养殖条件下使用绒毛膜促性腺激素(HCG)(日本，Kinki University。Bull.Fish.Lab.KinkiUniv.，2000，7。Egg striping and egg incubation temperature incultivation of spotted halibut，Verasper variegatus)、黄体素促性腺激素(LHRHa)(日本，千叶县水产试验场。Bull.Chiba Pref.Fish.Res.Cen.。2002，1。Effect of LH-RHa cholesterol pellet on gonadalmaturation in spotted halibut.)诱导亲鱼产卵成功，但亲鱼产卵效率不高，各批次卵质差异较大，因此苗种产量一直未能获得较大突破。近年来，我国科研工作者使用HCG与LHRH联合背部肌肉注射方式诱导圆斑星鲽产卵(大连天正实业有限公司，孟雪松等，2007)，但亲鱼死亡率达到20-30％，且成功排卵亲鱼的比率较低，各批次卵质差异较大，受精率低。张全启等(中国海洋大学，2004)建立了缓释激素诱导星鲽产卵的方法，主要是采用腹腔注射液体缓释激素的方法，可促进亲鱼性腺发育成熟良好，但未提及亲鱼卵子成熟、亲体成活情况和具体的产卵效果，且腹腔注射危险系数较高。

发明内容：

本发明的目的：提供一种利用缓释激素调控圆斑星鲽雌性亲鱼性腺卵母细胞最终成熟、排卵的技术方法。使亲鱼成活和性腺成熟率高，产卵效果好，以获得批量优质受精卵。

本发明按以下技术方案实现：主要内容包括亲鱼优选培育、温光调节亲鱼性腺发育和缓释激素埋植促进亲鱼性腺卵母细胞最终成熟产卵两方面：

一、亲鱼的优选培育和温光调节性腺发育：包括亲鱼的优选、培育条件、饲料饲喂及性腺发育的温光调控：

1、亲鱼优选及培育条件：

选择形态、体色正常、个体大、健康无伤的3龄以上的雌鱼亲鱼，全长达40-55厘米，体重1300-3000克；雄鱼达2龄以上，全长20-35厘米，体重达400-750克。亲鱼置于专用温光调控培育池(30m²)内进行强化培育，亲鱼入池的性比为♀∶♂＝1∶1～1.5，饲养密度3～4kg/m²。培育水温8～20℃，连续充气、流水培育，换水率400-600％，定时清池换水。水质条件：溶解氧＞6.0mg/L，PH 7.6-8.2，盐度29-33。

2、亲鱼的饲料及饲喂：

亲鱼的饲料：饵料以小黄花鱼、杂虾为主。

亲鱼的饲喂：日投喂2次，日投喂量为鱼体体重的2％-3％，在繁殖季节前在饵料中添加卵磷脂(每kg饵料按照1.5％添加)，保持高换水率(300-500％)，促进亲鱼性腺的发育，整个繁殖季节保持高投喂率(为鱼体体重的3％)。投喂过程中及时清除残饵、排污。

3、水温、光照调控性腺发育：

将优选的亲鱼分批放入亲鱼培育池内。年周期培育期间人为控制培育水温8-20℃。繁殖水温调控：先调节水温由16℃下降至7-8℃再上升至11-12℃。亲鱼培育池以黑色幕布遮光，普通白炽灯提供照明，调节水面光照强度150-280lux和光照节律(光照时间从8h延长至16h)。经70-80天的强化培育，亲鱼性腺发育至四期至五期，外观可观察到雌鱼腹部膨胀饱满。

二、缓释激素埋植促进亲鱼最终成熟排卵

利用活体取样法或者光桌法选取性腺发育至四期中的雌性亲鱼，背部肌肉埋植鲑鱼促性腺激素释放激素类似物，缓释激素为子弹样颗粒，主要成分为sGnRHa，由安全高效的多聚物缓释传递系统(95％胆固醇+5％纤维素)包被。激素埋植使用专用的埋植枪，进行背部肌肉埋植，埋植部位在靠头部侧线上方3cm处，埋植剂量为75ug/1-2kg，只需埋植1次。缓释激素的效应时间为14-18天，在14-18天后，可人工挤压亲鱼腹部获得成熟的卵子，人工受精后可获得优质受精卵。

本发明与已有技术对比其特点：

本发明根据圆斑星鲽亲鱼性腺发育规律，经前期的强化培育，采用温度和光照调控法，促使亲鱼性腺发育至四期，通过埋植缓释激素诱导亲鱼最终成熟排卵。

本发明采用缓释激素调控圆斑星鲽雌性亲鱼卵母细胞最终成熟、排卵。缓释激素埋植后可向机体缓慢释放促性腺激素释放激素，通过作用于垂体，促进促黄体素的释放，能在较长时间内维持血液中的性类固醇激素水平，有效促进亲鱼卵母细胞的持续发育至最终成熟。

本发明采用活体取样观察法或者光桌检查法，准确选取亲鱼性腺发育至四期中的亲鱼用于埋植缓释激素，亲鱼死亡率低，成熟率高，排卵效果良好。此期亲鱼的缓释激素效应时间为14-18天。

本发明采用背部肌肉埋植法，埋植部位在靠头部侧线上方3cm处，使用专用埋植枪，减少对亲鱼的损伤。

本发明通过在人工亲鱼背部肌肉埋植缓释激素颗粒可促进圆斑星鲽亲鱼性腺发育至最终成熟并排卵，人工采卵受精可获得大批量的优质受精卵，亲鱼成熟率高达70％，受精率达到72％，孵化率达到56.2％。

附图说明：

图1：莱州基地缓释激素诱导圆斑星鲽产卵期内产卵量。

图2：莱州基地缓释激素诱导圆斑星鲽产卵期内受精率。

图3：莱州基地缓释激素诱导圆斑星鲽产卵期内孵化率。

具体实施方式：

下面通过具体两个具体实施例结合附图叙述本发明的技术内容：

本发明技术内容包括：亲鱼优选培育、温光调节亲鱼性腺发育和缓释激素埋植促进亲鱼性腺卵母细胞最终成熟排卵两方面：

实施例一：

本研究于2006-2007年在莱州基地进行，具体实施过程如下：

1、亲鱼选择、强化培育及温光促熟：

实验选用圆斑星鲽3龄以上亲鱼91尾(49♀:42♂)，雌鱼平均体重2118克，雄鱼平均体重459克。亲鱼体形、体色正常，健康无损伤。亲鱼放入长方形抹角培育池(30m²，水深1.5米)进行培育。培育用水为砂滤自然海水，水质条件为：DO＞6.0mg/L，pH＝7.6-8.2，盐度29-33。

亲鱼的饵料以冰鲜小黄花鱼和杂虾为主。日投喂2次，日投喂量为鱼体体重的2％-3％，在繁殖季节前饵料中添加卵磷脂(每kg饵料按照1.5％添加)，保持高的换水率(300-500％)，促进亲鱼性腺的发育，整个繁殖季节保持高投喂率(鱼体体重的3％)。投喂过程中及时清除残饵、排污。

水温调控开始前，调节亲鱼培育水温16℃，调节水温先下降至7-8℃再逐步升温至11-12℃。将亲鱼培育池以黑色幕布遮光，白炽灯提供照明，调节光照强度150-280lux和光照节律(光照时间从8h延长至16h)。

经70-80天的强化培育，亲鱼性腺发育成熟，外观可观察到雌鱼腹部膨胀饱满。采用活体组织取样法或者光桌法准确选择性腺发育至四期中的亲鱼进行缓释激素埋植，这时亲鱼成熟率高，卵子质量佳。选取雌性亲鱼20尾进行背部肌肉埋植缓释激素(sGnRHa)。亲鱼先以MS222麻醉后，使用缓释激素埋植枪快速背部肌肉埋植，埋植部位在靠头部侧线上方3cm处，缓释激素为子弹样颗粒，要成分为sGnRHa，由安全高效的多聚物缓释传递系统(95％胆固醇+5％纤维素)包被，埋植剂量为75ug/1-2kg，只需埋植1次。后将亲鱼放入专用产卵池，产卵池条件同亲鱼培育池。期间观察亲鱼的游泳行为及有无死亡，亲鱼的缓释激素效应时间14-18天，激素植入鱼体后，可在较长时间内释放促性腺激素释放激素，从而促进垂体释放促黄体素，维持血液中性类固醇激素在较高水平，刺激性腺卵母细胞最终达到成熟排卵。14-18天后，对亲鱼进行人工采卵，可获得透明优质卵子。

2、实验结果：

本次实验在缓释激素埋植14-18天后，亲鱼性腺经历卵母细胞的最终成熟，亲鱼成熟率达75％，可人工采卵获得优质卵子的亲鱼比率为80％，可采卵期共持续63天，共产卵47批次，共获得优质受精卵19900ml(见图1)，受精率为72％(见图2)，孵化率为56.2％(见图3)。

实施例二：

本研究在于2007-2008年在青岛忠海水产有限公司进行，具体实施过程如下：

1、.亲鱼选择、强化培育及温光促熟：

实验选用圆斑星鲽3龄以上亲鱼135尾(49♀:42♂)，雌鱼平均体重2309克，雄鱼平均体重488克。亲鱼体形、体色正常，健康无损伤。亲鱼放入长方形抹角培育池(25m²，水深1.0米)进行培育。培育用水为砂滤自然海水，水质条件为：DO＞6.0mg/L，pH＝7.8-8.2，盐度29-33。

亲鱼饵料、投喂方法、日常管理和温光调控措施同实施例一。

采用活体组织取样法或者光桌法选取性腺发育至四期中的雌性亲鱼26尾进行背部肌肉埋植缓释激素--sGnRHa。亲鱼先以MS222麻醉后，使用缓释激素埋植枪快速埋植激素后将亲鱼放入专用产卵池，产卵池条件同亲鱼培育池。期间观察亲鱼的游泳行为及有无死亡，14-18天后，对亲鱼进行人工采卵，可获得透明的优质卵子。

2、实验结果：

亲鱼培育成熟率约65％，激素埋植后亲鱼可采卵的比率达到90％以上。整个采卵期间为2007年2月-3月和2007年5月，共进行了人工采卵52批次，获得优质卵33.5公斤，其中过熟卵或未成熟卵16.6公斤，优质卵子16.9公斤，好卵率约50.4％。人工干法受精获得受精卵11.8公斤，平均受精率69.8％，最高受精率88.5％；共孵化出初孵仔鱼196.6万尾，平均孵化率为55.4％，最高孵化率72.3％。

连续两年的研究结果表明，本发明提供的缓释激素埋植技术效果优良，可用于获得批量优质受精卵，保障规模化苗种繁育的顺利进行。

Claims (2)

1.一种埋植缓释激素诱导圆斑星鲽亲鱼性腺成熟排卵方法，其特征在于它的方法内容包括：亲鱼优选培育、温光调节亲鱼性腺发育和缓释激素埋植促进亲鱼性腺卵母细胞最终成熟排卵两方面：

(1)、亲鱼的优选培育和温光调节性腺发育：包括亲鱼的优选、培育条件、饲料饲喂及性腺发育的温光调控：

A、亲鱼优选及培育条件：

选择形态、体色正常、个体大、健康无伤的3龄以上的雌鱼亲鱼，全长达40-55厘米，体重1300-3000克；雄鱼达2龄以上，全长20-35厘米，体重达400-750克；亲鱼置于专用温光调控培育池30m²内进行强化培育，亲鱼入池的性比为♀∶♂＝1∶1～1.5，饲养密度3～4kg/m²；培育水温8～20℃，连续充气、流水培育，换水率400-600％，定时清池换水；水质条件：溶解氧＞6.0mg/L，PH 7.6-8.2，盐度29-33；

B、亲鱼的饲料及饲喂：

亲鱼的饲料：饵料以小黄花鱼、杂虾为主；

亲鱼的饲喂：日投喂2次，日投喂量为鱼体体重的2％-3％，在繁殖季节前，在饵料中添加卵磷脂，为饵料重量的1.5％，保持高换水率300-500％，整个繁殖季节保持高投喂率，为鱼体体重的3％；投喂过程中及时清除残饵、排污；

C、水温、光照调控性腺发育：

将优选的亲鱼分批放入亲鱼培育池内；温度调控开始前，先调节水温至15℃，然后逐渐下降至7-8℃，再逐渐上升至11-12℃；亲鱼培育池以黑色幕布遮光，普通白炽灯提供照明，调节水面光照强度150-280lux和光照节律，光照时间从8h延长至16h；经70-80天的强化培育，亲鱼性腺发育至四期至五期；

(2)、缓释激素埋植促进亲鱼最终成熟排卵；

利用活体取样法或者光桌法选取性腺发育至四期中的雌性亲鱼，背部肌肉埋植鲑鱼促性腺激素释放激素类似物sGnRHa，释放激素类似物为子弹样颗粒，主要成分为鲑鱼促性腺激素释放激素类似物sGnRHa，由95％胆固醇+5％纤维素多聚物缓释传递系统包被，在释放激素埋植14-18天后，可人工挤压亲鱼腹部获得成熟的卵子，人工受精后可获得优质受精卵。

2.根据权利要求1所述的一种埋植缓释激素诱导圆斑星鲽亲鱼性腺成熟排卵方法，其特征在于所述的激素埋植，是采用专用的埋植枪，在鱼的背部肌肉进行埋植，注射部位以靠头部侧线上方3cm处；只需进行一次埋植，埋植剂量为75ug/1-2kg。

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