CN101696450A - 辅助鉴别常规棉和杂交棉的方法及其专用试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种辅助鉴别常规棉花和杂交棉花的方法及其专用试剂盒。辅助鉴别常规棉花和杂交棉花的方法，由如下步骤组成：1)提取待鉴别棉花的基因组DNA；2)以所述待鉴别棉花的基因组DNA为模板，分别所述试剂盒中的每一对引物进行PCR扩增，获得每一对引物的PCR扩增产物；3)检测所述每一对引物的PCR扩增产物的图谱。实验证明，本发明的试剂盒、SSR图谱及鉴别方法能够有效、准确、快速的区分待测棉花是常规棉还是杂交棉，待测棉花种子是F1代还是F2代。因此，本发明的试剂盒、SSR图谱及鉴别方法将有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及辅助鉴别常规棉和杂交棉的方法及其专用试剂盒。
背景技术
在棉花品种审定中，棉花区域试验很重要，棉花区域试验的主要目的是在不同区域鉴定棉花品种的丰产性、抗病性、纤维品质及适应性、稳定性，为棉花品种的审定和推广提供科学依据。目前参加试验的棉花品种分常规棉和杂交棉。常规棉指采取常规的育种方法如系统选育、杂交育种、诱变育种等方法，经过多代自交使基因型纯合的棉花品种。杂交棉是相对于常规棉而言，是棉花杂种优势的利用，是运用人工去雄授粉而得到的种子，基因型为杂合型的棉花品种。杂交棉产量较常规棉花高，制种成本高，推广面积较小。目前利用三系制种较为方便，不用人工去雄，只采用人工授粉，制种成本能相应降低，有利于大面积推广。
杂交棉产量高于常规棉，在参试各级棉花区域试验时，因为利益驱动，个别单位用杂交棉代替常规棉参加区试，利用杂交棉的杂种优势与常规棉进行对比试验，造成不公平的竞争；相反，在棉花品种审定后，有的种子公司利用常规棉代替杂交棉出售种子，有的种子公司利用F2代种子替代F1代，来牟取暴利。随着转基因型抗虫棉花品种的推广，品种间遗传基础相对越来越窄，杂交棉的亲本较接近，由于遗传背景的相似程度较高，有的杂交材料F2代分离不明显，较难辨别。目前常规棉与杂交棉、F1代与F2代均不好区别。因此，需要一种快速准确的鉴别常规棉和杂交棉的方法。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种辅助鉴别常规棉和杂交棉的试剂盒或一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的试剂盒。
本发明所提供的辅助鉴别常规棉和杂交棉的试剂盒或一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的试剂盒，由下述引物对1至引物对16所示的16对引物组成：
由下述引物对1a或引物对1b所示的引物对1：
引物对1a：一条引物序列为CTATCACCCTTCTCTAGTTGCGTT，另一条引物序列为ATCGGGCTCACAAACATCA；引物对1b：将所述引物对1a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对1a产生相同SSR图谱的由引物对1a衍生的引物对；
由下述引物对2a或引物对2b所示的引物对2：
引物对2a：一条引物序列为CATGCAAATCCATGCTAGAG，另一条引物序列为GGTTTCTTTGGTGGTGAAAC；引物对2b：将所述引物对2a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对2a产生相同SSR图谱的由引物对2a衍生的引物对；
由下述引物对3a或引物对3b所示的引物对3：
引物对3a：一条引物序列为ACCAACAATGGTGACCTCTT，另一条引物序列为CCCTCCATAACCAAAAGTTG；引物对3b：将所述引物对3a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对3a产生相同SSR图谱的由引物对3a衍生的引物对；
由下述引物对4a或引物对4b所示的引物对4：
引物对4a：一条引物序列为AGTCGCCCCTTCTCTAATTT，另一条引物序列为TGTAAACCGAACTCGTTGTG；引物对4b：将所述引物对4a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对4a产生相同SSR图谱的由引物对4a衍生的引物对；
由下述引物对5a或引物对5b所示的引物5：
引物对5a：一条引物序列为ATCTCTCTGTCTCCCCCTTC，另一条引物序列为GCATATCTGGCGGGTATAAT；引物对5b：将所述引物对5a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对5a产生相同SSR图谱的由引物对5a衍生的引物对；
由下述引物对6a或引物对6b所示的引物对6：
引物对6a：一条引物序列为GGAGCCAGAAGTTGAGAAAA，另一条引物序列为TTCGGCTTCTGCTTTTACTT；引物对6b：将所述引物对6a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对6a产生相同SSR图谱的由引物对6a衍生的引物对；
由下述引物对7a或引物对7b所示的引物对7：
引物对7a：一条引物序列为AATGGTCCTGCTCCAGATT，另一条引物序列为AATCGTCGTCGTCGAATTAT；引物对7b：将所述引物对7a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对7a产生相同SSR图谱的由引物对7a衍生的引物对；
由下述引物对8a或引物对8b所示的引物对8：
引物对8a：一条引物序列为AACAAGAGCCAAGGTTCATC，另一条引物序列为GGATGCTGTATAGGGCTCAT；引物对8b：将所述引物对8a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对8a产生相同SSR图谱的由引物对8a衍生的引物对；
由下述引物对9a或引物对9b所示的引物对9：
引物对9a：一条引物序列为CATGCAAATCCATGCTAGAG，另一条引物序列为GGTTTCTTTGGTGGTGAAAC；引物对9b：将所述引物对9a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对9a产生相同SSR图谱的由引物对9a衍生的引物对；
由下述引物对10a或引物对10b所示的引物对10：
引物对10a：一条引物序列为TACCTGAAACCCAAAATGGT，另一条引物序列为ACGCTGTTATAGGGCTCATC；引物对10b：将所述引物对10a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对10a产生相同SSR图谱的由引物对10a衍生的引物对；
由下述引物对11a或引物对11b所示的引物对11：
引物对11a：一条引物序列为TGGCAGAGATGAATGTAAGC，另一条引物序列为GGTAACGGATGGAAAATCAC；引物对11b：将所述引物对11a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对11a产生相同SSR图谱的由引物对11a衍生的引物对；
由下述引物对12a或引物对12b所示的引物对12：
引物对12a：一条引物序列为CAACCAACATATTCCAAACA，另一条引物序列为TTATTTCGGCCTTGTTTTTC；引物对12b：将所述引物对12a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对12a产生相同SSR图谱的由引物对12a衍生的引物对；
由下述引物对13a或引物对13b所示的引物对13：
引物对13a：一条引物序列为AAAGGAAGCAGGAGAGACAA，另一条引物序列为CTTCTTCATTCATGGCCTTC；引物对13b：将所述引物对13a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对13a产生相同SSR图谱的由引物对13a衍生的引物对；
由下述引物对14a或引物对14b所示的引物对14：
引物对14a：一条引物序列为TCCTCGGATTATCAAAACCT，另一条引物序列为TGAAGAGGACATTGATGACG；引物对14b：将所述引物对14a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对14a产生相同SSR图谱的由引物对14a衍生的引物对；
由下述引物对15a或引物对15b所示的引物对15：
引物对15a：一条引物序列为GAACTAGCCACATGATGCAC，另一条引物序列为TTGTTGAGGCATTAGTTTGC；引物对15b：将所述引物对15a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对15a产生相同SSR图谱的由引物对15a衍生的引物对；
由下述引物对16a或引物对16b所示的引物对16：
引物对16a：一条引物序列为GCTTTGCTTTGGAATGAGAT，另一条引物序列为TACTGCAACCCCTCACACT；引物对16b：将所述引物对16a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对16a产生相同SSR图谱的由引物对16a衍生的引物对。
本发明的另一个目的是提供一种辅助鉴别常规棉和杂交棉的组合SSR图谱或一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的组合SSR图谱。
本发明所提供的辅助鉴别常规棉和杂交棉的组合SSR图谱或一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的组合SSR图谱，是将用上述试剂盒中所述引物对分别PCR扩增棉花品种得到的SSR图谱组合在一起得到的。
本发明所提供的辅助鉴别常规棉和杂交棉的组合SSR图谱或一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的组合SSR图谱，具体由下述16组48个SSR图谱组成：
1)所述试剂盒中引物对1a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为375bp-385bp和205bp-215bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为395bp-405bp和225bp-235bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为395bp-405bp、375bp-385bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
2)所述试剂盒中引物对2a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为325bp-335bp、235bp-245bp和215bp-225bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为375bp-385bp、255bp-265bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为375bp-385bp、325bp-335bp、255bp-265bp、235bp-245bp和215bp-225bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
3)所述试剂盒中引物对3a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为225bp-215bp、195bp-205bp、167bp-173bp和157bp-163bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为295bp-305bp、245bp-255bp、177bp-183bp和167bp-173bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为295bp-305bp、245bp-255bp、225bp-215bp、195bp-205bp、177bp-183bp和167bp-173bp和157bp-163bp的7条DNA条带组成的SSR图谱；
4)所述试剂盒中引物对4a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为295bp-305bp、255bp-265bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为425bp-435bp、275bp-285bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为425bp-435bp、295bp-305bp、275bp-285bp、255bp-265bp和235bp-245bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
5)所述试剂盒中引物对5a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为485bp-495bp、355bp-365bp、217bp-223bp和207bp-213bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为515bp-525bp、485bp-495bp、235bp-245bp和207bp-213bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为515bp-525bp、485bp-495bp、355bp-365bp、235bp-245bp、217bp-223bp和207bp-213bp的6条DNA条带组成的SSR图谱；
6)所述试剂盒中引物对6a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为285bp-295bp、195bp-205bp和175bp-185bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为325bp-335bp、195bp-205bp和175bp-185bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为325bp-335bp、285bp-295bp、195bp-205bp和175bp-185bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
7)所述试剂盒中引物对7a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为325bp-335bp、235bp-245bp、178bp-182bp和168bp-172bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、173bp-177bp和168bp-172bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、325bp-335bp、235bp-245bp、178bp-182bp、173bp-177bp和168bp-172bp的7条DNA条带组成的SSR图谱；
8)所述试剂盒中引物对8a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为375bp-385bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为395bp-405bp和175bp-185bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为395bp-405bp、375bp-3855bp、175bp-185bp和155bp-165bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
9)所述试剂盒中引物对9a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为345bp-355bp、237bp-243bp和215bp-225bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为365bp-375bp、247bp-253bp和237bp-243bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、247bp-253bp、237bp-243bp和215bp-225bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
10)所述试剂盒中引物对10a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为305bp-315bp、155bp-165bp和135bp-145bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为325bp-335bp、167bp-173bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为325bp-335bp、305bp-315bp、167bp-173bp、155bp-165bp和135bp-145bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
11)所述试剂盒中引物对11a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为405bp-415bp、315bp-325bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为435bp-445bp、375bp-385bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为435bp-445bp、405bp-415bp、375bp-385bp、315bp-325bp和235bp-245bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
12)所述试剂盒中引物对12a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为455bp-465bp、345bp-355bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为475bp-485bp、395bp-405bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为475bp-485bp、455bp-465bp、395bp-405bp、345bp-355bp、225bp-235bp和205bp-215bp的6条DNA条带组成的SSR图谱；
13)所述试剂盒中引物对13a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为385bp-395bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为415bp-425bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为415bp-425bp、385bp-395bp、175bp-185bp和155bp-165bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
14)所述试剂盒中引物对14a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为167bp-173bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为177bp-183bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为177bp-183bp、167bp-173bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
15)所述试剂盒中引物对15a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为205bp-215bp和125bp-135bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为225bp-235bp和145bp-155bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为225bp-235bp、205bp-215bp、145bp-155bp和125bp-135bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
16)所述试剂盒中引物对16a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为347bp-353bp、257bp-263bp和247bp-253bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为367bp-373bp、357bp-363bp、267bp-273bp和247bp-253bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为367bp-373bp、357bp-363bp、347bp-353bp、267bp-273bp、257bp-263bp和247bp-253bp的6条DNA条带组成的SSR图谱。
本发明的另一个目的是提供一种辅助鉴别常规棉和杂交棉的方法。
本发明所提供的辅助鉴别常规棉和杂交棉的方法，由如下步骤组成：
1)提取待鉴别棉花的基因组DNA；
2)以所述待鉴别棉花的基因组DNA为模板，分别用所述试剂盒中的每一对引物进行PCR扩增，获得每一对引物的PCR扩增产物；
3)检测所述每一对引物的PCR扩增产物的图谱，若每一对引物的PCR扩增产物的图谱均与上述组合SSR图谱中相同引物对对应的I型图谱或II型图谱一致，则所述待鉴别棉花为常规棉；
若所述每一对引物的PCR扩增产物中，至少有一对引物的PCR扩增产物的图谱与上述组合SSR图谱中相同引物对对应的III型图谱一致，则所述待鉴别棉花为杂交棉。
上述方法中，所述检测每一对引物的PCR扩增产物的图谱的方法具体可为将所述PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。
SSR分子标记是以孟德尔方式遗传，呈共显性。上述所提供的I型图谱和II型图谱实际上是纯合品种的图谱，也可以说是某一杂交品种的两个亲本的不同图谱。以I型图谱和II型图谱的品种为亲本，杂交后的图谱就是III型图谱，即共显型图谱，所以用此法可以判别常规棉品种和杂交棉品种。
上述鉴别方法中，在引物的扩增下，不是所有的杂交棉均能显示杂合带型。原因是一对引物仅结合一个或几个位点，对某些品种而言，某些引物的结合位点在两个亲本中是一致的，该引物扩增两个亲本得到的带型完全相同，则杂交种也显示亲本的纯合带型，这样就鉴别不出杂交棉；只有用另一不同的引物(该引物在两亲本中的结合位点不一致)，扩增两个亲本得到的DNA片段不一致，用这对引物扩增杂交棉时才会显示两亲本的杂合带型，才能鉴别出杂交棉。所以鉴别杂交棉时，并不是所有引物对都有III型图谱，会出现某些引物对只有一种I型图谱或II型图谱的情况；但是只要有一对引物表现出III型图谱，就可判定待鉴别棉花种子为杂交棉。
本发明的最后一个目的是提供一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的方法。
本发明所提供的辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的方法，由如下步骤组成：
1)从待鉴别棉花种子中随机抽取种子，作为检测种子；
2)提取基因组DNA；此步骤既可以提取种子的基因组DNA也可以提取种子播种后得到的子叶或植株真叶的基因组DNA。
3)用所述试剂盒中的引物对，对各基因组DNA进行PCR扩增，得到各检测种子的PCR扩增产物；
4)检测所述各检测种子的PCR扩增产物的图谱，
若各所述引物对所对应的各检测种子的PCR扩增产物的图谱如下：与上述组合SSR图谱中所述的相同引物对对应的I型图谱一致，或与上述组合SSR图谱中所述的相同引物对对应的II型图谱一致，或与上述组合SSR图谱中所述的相同引物对对应的III型图谱一致，则所述各检测种子均为F1代棉花种子，判定所述待鉴别棉花种子为F1代棉花种子；
若至少一对引物所对应的各检测种子的PCR扩增产物的图谱如下：所述检测种子中一部分种子的PCR扩增产物的图谱均与上述组合SSR图谱中相同引物对对应的I型图谱一致，所述检测种子中另一部分种子的PCR扩增产物的图谱均与上述组合SSR图谱中相同引物对对应的II型图谱一致，和所述检测种子中其余种子的PCR扩增产物的图谱均与上述组合SSR图谱中相同引物对对应的III型图谱一致，则所述各检测种子为F2代棉花种子，判定所述待鉴别棉花种子为F2代棉花种子。
上述方法中，所述检测所述各检测种子的PCR扩增产物的图谱的方法具体可为将所述PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。
上述方法中，所述步骤1)中随机抽取种子的数目为至少20颗。
实验证明，本发明的试剂盒、SSR图谱及鉴别方法能够有效、准确、快速的区分待测棉花是常规棉还是杂交棉，待测棉花种子是F1代还是F2代。本发明的试剂盒、SSR图谱及鉴别方法可以应用于各级棉花区域试验中，为棉花区域试验创造一个公平竞争的平台，能使棉花种子市场得到净化，有利于诚信企业的发展；还可以应用于种子公司的纯度鉴定，考核制种单位的种子质量；还可以应用于种子质量检查部门，能做到科学打假。因此，本发明的试剂盒、SSR图谱及鉴别方法将有广阔的应用前景。
附图说明
图1为引物DPL0431的检测结果；I表示邯109，II表示中棉所49，III表示长杂4138、ZY09-1；
图2为引物NAU1042的检测结果；I表示中植棉2号，II表示中棉所49，III表示中棉所48；
图3为引物NAU1071的检测结果；I表示中棉所49，II表示邯109，III表示豫杂35；
图4为引物NAU1085的检测结果；I表示中棉所64，II表示中植棉2号，III表示中棉所48；
图5为引物NAU1102的检测结果；I表示SGK3，II表示鲁棉研17，III表示中棉所48；
图6为引物NAU1103的检测结果；I表示鲁棉研28，II表示中棉所50，III表示鄂杂棉10号；
图7为引物NAU1186的检测结果；I表示SGK3，II表示中棉所64，III表示鄂杂棉10号；
图8为引物NAU1187的检测结果；I表示鲁棉研28，II表示中棉所49，III表示豫杂35；
图9为引物NAU1255的检测结果；I表示鲁棉研29，II表示中棉所49，III表示中棉所48；
图10为引物NAU1269的检测结果；I表示中棉所64，II表示中棉所49，III表示鄂杂棉10号；
图11为引物NAU1369的检测结果；I表示鲁棉研28，II表示鲁棉研17，III表示德998；
图12为引物NAU2190的检测结果；I表示邯郸109，II表示SGK3，III表示鄂杂棉10号；
图13为引物NAU2272的检测结果；I表示中植棉2号，II表示鲁棉研29，III表示中棉所51；
图14为引物NAU2274的检测结果；I表示中MB8620，II表示中棉所50，III表示瑞杂816；
图15为引物NAU2277的检测结果；I表示SGK3，II表示中棉所64，III表示鄂杂棉10号；
图16为引物NAU2343的检测结果；I表示SGK3，II表示中棉所50，III表示中棉所48；
图17为用引物NAU1269鉴定常规棉石抗126自交后代种子及鲁棉研15F2的结果。
图18为用引物NAU1085鉴定杂交棉锦科杂1号F2代种子的结果。
图19为用引物NAU1085鉴定常规棉鲁棉研21号自交后代种子的结果。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、试剂盒的组成及SSR图谱的组成
一、辅助鉴别常规棉和杂交棉或辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的试剂盒由如下16对引物组成：
表1、16对引物序列
| 序号 | 引物名称 | 正向引物序列 | 反向引物序列 |
| 1 | DPL0431 | CTATCACCCTTCTCTAGTTGCGTT(序列1) | ATCGGGCTCACAAACATCA(序列2) |
| 2 | NAU1042 | CATGCAAATCCATGCTAGAG | GGTTTCTTTGGTGGTGAAAC |
| 3 | NAU1071 | ACCAACAATGGTGACCTCTT | CCCTCCATAACCAAAAGTTG |
| 4 | NAU1085 | AGTCGCCCCTTCTCTAATTT | TGTAAACCGAACTCGTTGTG |
| 5 | NAU1102 | ATCTCTCTGTCTCCCCCTTC | GCATATCTGGCGGGTATAAT |
| 6 | NAU1103 | GGAGCCAGAAGTTGAGAAAA | TTCGGCTTCTGCTTTTACTT |
| 序号 | 引物名称 | 正向引物序列 | 反向引物序列 |
| 7 | NAU1186 | AATGGTCCTGCTCCAGATT | AATCGTCGTCGTCGAATTAT |
| 8 | NAU1187 | AACAAGAGCCAAGGTTCATC | GGATGCTGTATAGGGCTCAT |
| 9 | NAU1255 | CATGCAAATCCATGCTAGAG | GGTTTCTTTGGTGGTGAAAC |
| 10 | NAU1269 | TACCTGAAACCCAAAATGGT | ACGCTGTTATAGGGCTCATC |
| 11 | NAU1369 | TGGCAGAGATGAATGTAAGC | GGTAACGGATGGAAAATCAC |
| 12 | NAU2190 | CAACCAACATATTCCAAACA | TTATTTCGGCCTTGTTTTTC |
| 13 | NAU2272 | AAAGGAAGCAGGAGAGACAA | CTTCTTCATTCATGGCCTTC |
| 14 | NAU2274 | TCCTCGGATTATCAAAACCT | TGAAGAGGACATTGATGACG |
| 15 | NAU2277 | GAACTAGCCACATGATGCAC | TTGTTGAGGCATTAGTTTGC |
| 16 | NAU2343 | GCTTTGCTTTGGAATGAGAT | TACTGCAACCCCTCACACT |
二、辅助鉴别常规棉和杂交棉或辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的SSR图谱的组成
16对引物各对应的3种图谱具体如下：其中，I型图谱或II型图谱是引物扩增纯合常规棉得到的，III型图谱是引物扩增杂交棉得到的。
1)表1中引物对1PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为375bp-385bp和205bp-215bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为395bp-405bp和225bp-235bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为395bp-405bp、375bp-385bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
2)表1中引物对2PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为325bp-335bp、235bp-245bp和215bp-225bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为375bp-385bp、255bp-265bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为375bp-385bp、325bp-335bp、255bp-265bp、235bp-245bp和215bp-225bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
3)表1中引物对3PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为225bp-215bp、195bp-205bp、167bp-173bp和157bp-163bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为295bp-305bp、245bp-255bp、177bp-183bp和167bp-173bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为295bp-305bp、245bp-255bp、225bp-215bp、195bp-205bp、177bp-183bp和167bp-173bp和157bp-163bp的7条DNA条带组成的SSR图谱；
4)表1中引物对4PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为295bp-305bp、255bp-265bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为425bp-435bp、275bp-285bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为425bp-435bp、295bp-305bp、275bp-285bp、255bp-265bp和235bp-245bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
5)表1中引物对5PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为485bp-495bp、355bp-365bp、217bp-223bp和207bp-213bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为515bp-525bp、485bp-495bp、235bp-245bp和207bp-213bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为515bp-525bp、485bp-495bp、355bp-365bp、235bp-245bp、217bp-223bp和207bp-213bp的6条DNA条带组成的SSR图谱；
6)表1中引物对6PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为285bp-295bp、195bp-205bp和175bp-185bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为325bp-335bp、195bp-205bp和175bp-185bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为325bp-335bp、285bp-295bp、195bp-205bp和175bp-185bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
7)表1中引物对7PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为325bp-335bp、235bp-245bp、178bp-182bp和168bp-172bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、173bp-177bp和168bp-172bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、325bp-335bp、235bp-245bp、178bp-182bp、173bp-177bp和168bp-172bp的7条DNA条带组成的SSR图谱；
8)表1中引物对8PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为375bp-385bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为395bp-405bp和175bp-185bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为395bp-405bp、375bp-3855bp、175bp-185bp和155bp-165bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
9)表1中引物对9PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为345bp-355bp、237bp-243bp和215bp-225bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为365bp-375bp、247bp-253bp和237bp-243bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、247bp-253bp、237bp-243bp和215bp-225bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
10)表1中引物对10PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为305bp-315bp、155bp-165bp和135bp-145bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为325bp-335bp、167bp-173bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为325bp-335bp、305bp-315bp、167bp-173bp、155bp-165bp和135bp-145bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
11)表1中引物对11PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为405bp-415bp、315bp-325bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为435bp-445bp、375bp-385bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为435bp-445bp、405bp-415bp、375bp-385bp、315bp-325bp和235bp-245bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
12)表1中引物对12PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为455bp-465bp、345bp-355bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为475bp-485bp、395bp-405bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为475bp-485bp、455bp-465bp、395bp-405bp、345bp-355bp、225bp-235bp和205bp-215bp的6条DNA条带组成的SSR图谱；
13)表1中引物对13PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为385bp-395bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为415bp-425bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为415bp-425bp、385bp-395bp、175bp-185bp和155bp-165bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
14)表1中引物对14PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为167bp-173bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为177bp-183bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为177bp-183bp、167bp-173bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
15)表1中引物对15PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为205bp-215bp和125bp-135bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为225bp-235bp和145bp-155bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为225bp-235bp、205bp-215bp、145bp-155bp和125bp-135bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
16)表1中引物对16PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为347bp-353bp、257bp-263bp和247bp-253bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；II型图谱：为由大小为367bp-373bp、357bp-363bp、267bp-273bp和247bp-253bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；III型图谱：为由大小为367bp-373bp、357bp-363bp、347bp-353bp、267bp-273bp、257bp-263bp和247bp-253bp的6条DNA条带组成的SSR图谱。
下述实施例2和实施例3中，提取DNA的方法、PCR扩增方法、聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法均如下所述：
1、DAN提取的步骤如下：采用CTAB法提取棉花DNA，
1)从田间取棉花幼嫩叶片2-3片，直接装于2ml的离心管中，保存于-70℃低温冰箱中备用。
2)提取时用MM301混合型研磨仪进行冷冻研磨。
3)研磨后迅速加入提取液700ul，摇匀，水浴40分钟，中间每10分钟缓慢颠倒离心管。(提取液的组成：0.1MTris-HCL、0.025MEDTA钠盐、2％CTAB、2％pvp、1.5MNaCL、2％巯基乙醇；提取液用于裂解细胞膜及分离棉酚)；
4)取出离心管加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)，盖上盖子后，缓慢颠倒30-50下，离心15分钟。
5)取上清液于1.5ml的离心管中，加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)，重提一次。
6)重取上清液，加入0.6倍的冰冷酒精，缓慢颠倒离心管，直至有絮状沉淀集结，静止10分钟，用移液器枪头把絮状物挑到离心管中。
7)用70％的酒精洗两次，100％酒精洗一次，倒干酒精，风干。
8)用500ul灭菌超纯水溶解DNA，保存于-20℃冰箱中备用。
2、PCR扩增体系如下：模板DNA 1μL，ddH2O 6.5μL，Buffer(含Mgcl2)1μL，dNTP(10mM)0.3μL，正引物(10μM)0.5μL，反引物(10μM)0.5μL，Taq酶(2.5U/μL)0.2μL，合计10.0μL。
3、聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法如下：
电泳：将组装好的玻璃板装在电泳槽上，将配好的胶倒入玻璃板内，待胶完全凝固后加入1XTBE电泳液到电泳槽内，每个孔点样品1.8μL，180v电压1h。
固定：用固定液固定10分钟。渗透：用渗透液渗透12分钟。蒸馏水快速洗两遍。显色：用显色液显色5分钟。蒸馏水洗两遍。终止：倒入终止液，终止反应。照相并记录结果。
电泳中用到的试剂的组成如下：
8％聚丙烯酰胺凝胶的组成：dd H2O 21.2ml，5×TBE 8ml，PAGE母液10.8ml，10％AP(10％过硫酸铵)720μL，TEMED(四甲基乙二胺)28.2μL，总量40ml。
PAGE母液的组成：丙烯酰胺∶甲叉双丙烯酰胺＝29∶1，每30克加超纯水至100ml。
固定液：95％乙醇40ml+100％乙酸2ml+358mldH2O，共400ml。
渗透液：0.6克AgNO3+300mlH2O。
显色液：6克NaOH+5ml甲醛+2.5ml0.2％Na2S2O3(最后加)+400mldH2O(共400ml)。
终止液：3克Na2CO3+400mldH2O。
实施例2、用实施例1中试剂盒及SSR图谱鉴别常规棉和杂交棉
一、鉴别方法如下：
1)取一个待鉴别棉花品种，随机取10粒种子室内发芽，得到10株待鉴别棉花；
2)分别提取10株待鉴别棉花子叶的基因组DNA；
3)以每株棉花的基因组DNA为模板，用16对引物分别进行PCR扩增，得到每株棉花对应16对引物的PCR扩增产物；
4)将每株棉花对应16对引物的PCR扩增产物(即所有PCR扩增产物)进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；
5)检测每株棉花对应每一对引物的PCR扩增产物的图谱，若每株棉花对应16对引物的PCR扩增产物中，每一对引物的PCR扩增产物的图谱均与实施例1中相同引物对对应的I型图谱或II型图谱一致，则所述待鉴别棉花为常规棉；
若每株棉花对应16对引物的PCR扩增产物中，至少有一对引物的PCR扩增产物的图谱与实施例1中相同引物对对应的III型图谱一致，则所述待鉴别棉花为杂交棉。
实验设3次重复。
二、实验中所用材料如表2所示。
表2中各棉花品种的种子来源如下：中棉系列品种均购自中国农业科学院棉花研究所，鲁棉系列均购自山东棉花研究中心，中植棉2号购自河南科林种业有限公司，SGK3购自国欣农研会，邯郸109购自邯郸市农业科学院，瑞杂816购自德州市银瑞棉花研究所，鄂杂棉10号购自湖北惠民农业科技有限公司，豫杂35购自河南省农科院棉油所。各品种都已经国家级或省级审定。
三、实验结果
结果表明，每次实验中受试的同一品种的10个植株的结果相同，具体结果如表2、表3和图1-16所示。
表3、16个棉花品种的I、II、III型图谱的引物比例表
(I、II型图谱为亲本带型图谱，III型图谱为共显型图谱)
| 品种名称 | 类型 | 检测总引物对 | 产生亲本带型图谱的引物对 | 产生共显型图谱的引物对 | 产生亲本带型图谱的引物比例％ | 产生共显型图谱的引物比例％ |
| 中植棉2号 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 鲁棉研28 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 中棉所45 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 中棉所41 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| SGK3 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 中棉所49 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 中棉所50 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 中棉所64 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 鲁棉研17 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 鲁棉研29 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 邯郸109 | 常规棉 | 16 | 16 | 0 | 100 | 0 |
| 中棉所51 | 杂交棉 | 16 | 13 | 3 | 81.2 | 18.8 |
| 品种名称 | 类型 | 检测总引物对 | 产生亲本带型图谱的引物对 | 产生共显型图谱的引物对 | 产生亲本带型图谱的引物比例％ | 产生共显型图谱的引物比例％ |
| 瑞杂816 | 杂交棉 | 16 | 14 | 2 | 87.5 | 12.5 |
| 鄂杂棉10号 | 杂交棉 | 16 | 6 | 10 | 37.5 | 62.5 |
| 中棉所48 | 杂交棉 | 16 | 8 | 8 | 50.0 | 50.0 |
| 豫杂35 | 杂交棉 | 16 | 7 | 9 | 43.7 | 56.3 |
表2、16对引物对应每一棉花品种的图谱检测结果
(I表示I型图谱，II表示II型图谱，III表示III型图谱)
实验结果表明，本发明方法对常规棉和杂交棉的鉴定准确度可达100％。
实施例3、用实施例1中试剂盒及SSR图谱鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子
1)从待鉴别棉花种子中随机抽取24粒种子，作为检测种子；
2)将24粒检测种子室内发芽，得到24株棉花，分别提取24株棉花子叶的基因组DNA；
3)用实施例1中的部分引物，对各株棉花的基因组DNA进行PCR扩增，得到各检测种子的PCR扩增产物；
4)对各检测种子的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，以检测各检测种子的PCR扩增产物的图谱；
若各所述引物对所对应的各检测种子的PCR扩增产物的图谱如下：与实施例1中所述的相同引物对对应的I型图谱一致，或与实施例1中所述的相同引物对对应的II型图谱一致，或与实施例1中所述的相同引物对对应的III型图谱一致，则所述各检测种子均为F1代棉花种子，判定所述待鉴别棉花种子为F1代棉花种子；
若至少一对引物所对应的各检测种子的PCR扩增产物的图谱如下：所述检测种子中，一部分种子的PCR扩增产物的图谱均与实施例1中相同引物对对应的I型图谱一致，另一部分种子的PCR扩增产物的图谱均与实施例1中相同引物对对应的II型图谱一致，和其余种子的PCR扩增产物的图谱均与实施例1中相同引物对对应的III型图谱一致，则所述各检测种子为F2代棉花种子，判定所述待鉴别棉花种子为F2代棉花种子。
实验材料为常规棉石抗126自交种子、杂交棉锦科杂1号F2代种子、杂交棉鲁棉研15号F2代种子、常规棉鲁棉研21号自交种子。石抗126购自河北省石家庄市农科院，锦科杂1号购自新乡市锦科棉花研究所，鲁棉研15、鲁棉研21号均购自山东棉花研究中心。
实验设3次重复，各重复间结果一致，具体结果如图17-19所示。
图17为用引物NAU1269的鉴定结果。A框为常规棉石抗126自交后代图谱，为与引物NAU1269对应的II型图谱，没有分离，纯度好。B框为杂交棉鲁棉研15号F2代图谱，一部分为为与引物NAU1269对应的I型图谱，一部分为为与引物NAU1269对应的II型图谱，其余部分为为与引物NAU1269对应的III型图谱。
图18为用引物NAU1085的鉴定结果。框内为杂交棉锦科杂1号F2代图谱，图谱带型分离，一部分为I型图谱，一部分为II型图谱，其余部分为III型图谱。
图19为用引物NAU1085的鉴定结果。框内为常规棉鲁棉研21号自交后代图谱，为II型图谱，没有分离，纯度好。
实验结果表明，本发明方法对F1代棉花种子和F2代棉花种子的鉴定准确度可达100％。
序列表
<110>中国农业科学院棉花研究所
<120>辅助鉴别常规棉和杂交棉的方法及其专用试剂盒
<160>2
<210>1
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<400>1
ctatcaccct tctctagttg cgtt 24
<210>2
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<400>2
atcgggctca caaacatca 19
Claims (8)
1.一种辅助鉴别常规棉和杂交棉的试剂盒或一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的试剂盒，由下述引物对1至引物对16所示的16对引物组成：
由下述引物对1a或引物对1b所示的引物对1：
引物对1a：一条引物序列为CTATCACCCTTCTCTAGTTGCGTT，另一条引物序列为ATCGGGCTCACAAACATCA；
引物对1b：将所述引物对1a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对1a产生相同SSR图谱的由引物对1a衍生的引物对；
由下述引物对2a或引物对2b所示的引物对2：
引物对2a：一条引物序列为CATGCAAATCCATGCTAGAG，另一条引物序列为GGTTTCTTTGGTGGTGAAAC；
引物对2b：将所述引物对2a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对2a产生相同SSR图谱的由引物对2a衍生的引物对；
由下述引物对3a或引物对3b所示的引物对3：
引物对3a：一条引物序列为ACCAACAATGGTGACCTCTT，另一条引物序列为CCCTCCATAACCAAAAGTTG；
引物对3b：将所述引物对3a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对3a产生相同SSR图谱的由引物对3a衍生的引物对；
由下述引物对4a或引物对4b所示的引物对4：
引物对4a：一条引物序列为AGTCGCCCCTTCTCTAATTT，另一条引物序列为TGTAAACCGAACTCGTTGTG；
引物对4b：将所述引物对4a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对4a产生相同SSR图谱的由引物对4a衍生的引物对；
由下述引物对5a或引物对5b所示的引物5：
引物对5a：一条引物序列为ATCTCTCTGTCTCCCCCTTC，另一条引物序列为GCATATCTGGCGGGTATAAT；
引物对5b：将所述引物对5a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对5a产生相同SSR图谱的由引物对5a衍生的引物对；
由下述引物对6a或引物对6b所示的引物对6：
引物对6a：一条引物序列为GGAGCCAGAAGTTGAGAAAA，另一条引物序列为TTCGGCTTCTGCTTTTACTT；
引物对6b：将所述引物对6a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对6a产生相同SSR图谱的由引物对6a衍生的引物对；
由下述引物对7a或引物对7b所示的引物对7：
引物对7a：一条引物序列为AATGGTCCTGCTCCAGATT，另一条引物序列为AATCGTCGTCGTCGAATTAT；
引物对7b：将所述引物对7a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对7a产生相同SSR图谱的由引物对7a衍生的引物对；
由下述引物对8a或引物对8b所示的引物对8：
引物对8a：一条引物序列为AACAAGAGCCAAGGTTCATC，另一条引物序列为GGATGCTGTATAGGGCTCAT；
引物对8b：将所述引物对8a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对8a产生相同SSR图谱的由引物对8a衍生的引物对；
由下述引物对9a或引物对9b所示的引物对9：
引物对9a：一条引物序列为CATGCAAATCCATGCTAGAG，另一条引物序列为GGTTTCTTTGGTGGTGAAAC；
引物对9b：将所述引物对9a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对9a产生相同SSR图谱的由引物对9a衍生的引物对；
由下述引物对10a或引物对10b所示的引物对10：
引物对10a：一条引物序列为TACCTGAAACCCAAAATGGT，另一条引物序列为ACGCTGTTATAGGGCTCATC；
引物对10b：将所述引物对10a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对10a产生相同SSR图谱的由引物对10a衍生的引物对；
由下述引物对11a或引物对11b所示的引物对11：
引物对11a：一条引物序列为TGGCAGAGATGAATGTAAGC，另一条引物序列为GGTAACGGATGGAAAATCAC；
引物对11b：将所述引物对11a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对11a产生相同SSR图谱的由引物对11a衍生的引物对；
由下述引物对12a或引物对12b所示的引物对12：
引物对12a：一条引物序列为CAACCAACATATTCCAAACA，另一条引物序列为TTATTTCGGCCTTGTTTTTC；
引物对12b：将所述引物对12a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对12a产生相同SSR图谱的由引物对12a衍生的引物对；
由下述引物对13a或引物对13b所示的引物对13：
引物对13a：一条引物序列为AAAGGAAGCAGGAGAGACAA，另一条引物序列为CTTCTTCATTCATGGCCTTC；
引物对13b：将所述引物对13a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对13a产生相同SSR图谱的由引物对13a衍生的引物对；
由下述引物对14a或引物对14b所示的引物对14：
引物对14a：一条引物序列为TCCTCGGATTATCAAAACCT，另一条引物序列为TGAAGAGGACATTGATGACG；
引物对14b：将所述引物对14a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对14a产生相同SSR图谱的由引物对14a衍生的引物对；
由下述引物对15a或引物对15b所示的引物对15：
引物对15a：一条引物序列为GAACTAGCCACATGATGCAC，另一条引物序列为TTGTTGAGGCATTAGTTTGC；
引物对15b：将所述引物对15a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对15a产生相同SSR图谱的由引物对15a衍生的引物对；
由下述引物对16a或引物对16b所示的引物对16：
引物对16a：一条引物序列为GCTTTGCTTTGGAATGAGAT，另一条引物序列为TACTGCAACCCCTCACACT；
引物对16b：将所述引物对16a中的引物序列经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且与引物对16a产生相同SSR图谱的由引物对16a衍生的引物对。
2.一种辅助鉴别常规棉和杂交棉的组合SSR图谱或一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的组合SSR图谱，是将用权利要求1中所述引物对分别PCR扩增棉花品种得到的SSR图谱组合在一起得到的。
3.根据权利要求2所述的组合SSR图谱，其特征在于：所述组合SSR图谱由下述16组SSR图谱组成：
1)所述权利要求1中引物对1a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为375bp-385bp和205bp-215bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为395bp-405bp和225bp-235bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为395bp-405bp、375bp-385bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
2)所述权利要求1中引物对2a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为325bp-335bp、235bp-245bp和215bp-225bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为375bp-385bp、255bp-265bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为375bp-385bp、325bp-335bp、255bp-265bp、235bp-245bp和215bp-225bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
3)所述权利要求1中引物对3a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为225bp-215bp、195bp-205bp、167bp-173bp和157bp-163bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为295bp-305bp、245bp-255bp、177bp-183bp和167bp-173bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为295bp-305bp、245bp-255bp、225bp-215bp、195bp-205bp、177bp-183bp和167bp-173bp和157bp-163bp的7条DNA条带组成的SSR图谱；
4)所述权利要求1中引物对4a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为295bp-305bp、255bp-265bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为425bp-435bp、275bp-285bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为425bp-435bp、295bp-305bp、275bp-285bp、255bp-265bp和235bp-245bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
5)所述权利要求1中引物对5a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为485bp-495bp、355bp-365bp、217bp-223bp和207bp-213bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为515bp-525bp、485bp-495bp、235bp-245bp和207bp-213bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为515bp-525bp、485bp-495bp、355bp-365bp、235bp-245bp、217bp-223bp和207bp-213bp的6条DNA条带组成的SSR图谱；
6)所述权利要求1中引物对6a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为285bp-295bp、195bp-205bp和175bp-185bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为325bp-335bp、195bp-205bp和175bp-185bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为325bp-335bp、285bp-295bp、195bp-205bp和175bp-185bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
7)所述权利要求1中引物对7a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为325bp-335bp、235bp-245bp、178bp-182bp和168bp-172bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、173bp-177bp和168bp-172bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、325bp-335bp、235bp-245bp、178bp-182bp、173bp-177bp和168bp-172bp的7条DNA条带组成的SSR图谱；
8)所述权利要求1中引物对8a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为375bp-385bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为395bp-405bp和175bp-185bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为395bp-405bp、375bp-3855bp、175bp-185bp和155bp-165bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
9)所述权利要求1中引物对9a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为345bp-355bp、237bp-243bp和215bp-225bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为365bp-375bp、247bp-253bp和237bp-243bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为365bp-375bp、345bp-355bp、247bp-253bp、237bp-243bp和215bp-225bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
10)所述权利要求1中引物对10a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为305bp-315bp、155bp-165bp和135bp-145bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为325bp-335bp、167bp-173bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为325bp-335bp、305bp-315bp、167bp-173bp、155bp-165bp和135bp-145bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
11)所述权利要求1中引物对11a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为405bp-415bp、315bp-325bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为435bp-445bp、375bp-385bp和235bp-245bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为435bp-445bp、405bp-415bp、375bp-385bp、315bp-325bp和235bp-245bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
12)所述权利要求1中引物对12a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为455bp-465bp、345bp-355bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为475bp-485bp、395bp-405bp、225bp-235bp和205bp-215bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为475bp-485bp、455bp-465bp、395bp-405bp、345bp-355bp、225bp-235bp和205bp-215bp的6条DNA条带组成的SSR图谱；
13)所述权利要求1中引物对13a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为385bp-395bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为415bp-425bp、175bp-185bp和155bp-165bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为415bp-425bp、385bp-395bp、175bp-185bp和155bp-165bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
14)所述权利要求1中引物对14a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为167bp-173bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为177bp-183bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为177bp-183bp、167bp-173bp、157bp-163bp、117bp-123bp和107bp-113bp的5条DNA条带组成的SSR图谱；
15)所述权利要求1中引物对15a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为205bp-215bp和125bp-135bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为225bp-235bp和145bp-155bp的2条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为225bp-235bp、205bp-215bp、145bp-155bp和125bp-135bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
16)所述权利要求1中引物对16a PCR扩增棉花品种得到的如下3种SSR图谱：
I型图谱：为由大小为347bp-353bp、257bp-263bp和247bp-253bp的3条DNA条带组成的SSR图谱；
II型图谱：为由大小为367bp-373bp、357bp-363bp、267bp-273bp和247bp-253bp的4条DNA条带组成的SSR图谱；
III型图谱：为由大小为367bp-373bp、357bp-363bp、347bp-353bp、267bp-273bp、257bp-263bp和247bp-253bp的6条DNA条带组成的SSR图谱。
4.一种辅助鉴别常规棉和杂交棉的方法，由如下步骤组成：
1)提取待鉴别棉花的基因组DNA；
2)以所述待鉴别棉花的基因组DNA为模板，分别用权利要求1所述试剂盒中的每一对引物进行PCR扩增，获得每一对引物的PCR扩增产物；
3)检测所述每一对引物的PCR扩增产物的图谱，若每一对引物的PCR扩增产物的图谱均与权利要求3中相同引物对对应的I型图谱或II型图谱一致，则所述待鉴别棉花为常规棉；
若所述每一对引物的PCR扩增产物中，至少有一对引物的PCR扩增产物的图谱与权利要求3中相同引物对对应的III型图谱一致，则所述待鉴别棉花为杂交棉。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述检测每一对引物的PCR扩增产物的图谱的方法为将所述PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。
6.一种辅助鉴别F1代棉花种子和F2代棉花种子的方法，由如下步骤组成：
1)从待鉴别棉花种子中随机抽取种子，作为检测种子；
2)提取基因组DNA；
3)用权利要求1所述试剂盒中的引物对，对各基因组DNA进行PCR扩增，得到各检测种子的PCR扩增产物；
4)检测所述各检测种子的PCR扩增产物的图谱，
若各所述引物对所对应的各检测种子的PCR扩增产物的图谱如下：与权利要求3中所述的相同引物对对应的I型图谱一致，或与权利要求3中所述的相同引物对对应的II型图谱一致，或与权利要求3中所述的相同引物对对应的III型图谱一致，则所述各检测种子均为F1代棉花种子，判定所述待鉴别棉花种子为F1代棉花种子；
若至少一对引物所对应的各检测种子的PCR扩增产物的图谱如下：所述检测种子中一部分种子的PCR扩增产物的图谱均与权利要求3中相同引物对对应的I型图谱一致，所述检测种子中另一部分种子的PCR扩增产物的图谱均与权利要求3中相同引物对对应的II型图谱一致，和所述检测种子中其余种子的PCR扩增产物的图谱均与权利要求3中相同引物对对应的III型图谱一致，则所述各检测种子为F2代棉花种子，判定所述待鉴别棉花种子为F2代棉花种子。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述检测所述各检测种子的PCR扩增产物的图谱的方法为将所述PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中随机抽取种子的数目为至少20颗。
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