CN101669583A - 新型复合酶饲料添加剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种采用微生物工程技术，利用农作物秸秆、壳皮、饼等副产物，以多株菌生产高蛋白饲料和动物促长剂，使废物得到了有效的利用，变废为宝，原料来源取之不尽，用之不竭，提高了饲料投入产出比，具有显著的经济效益和社会效益。该技术由于含有大量的活性酶和促长因子，提高了动物新陈代谢功能，使之产生对动物机体互相协同及综合平衡作用，使营养物质在动物肠道中快速降解，促进动物对饲料营养成份的吸收和转化，以达到促进动物增长和节约饲料的目的。该技术主要应用于猪、鸡、牛、羊等动物饲料促长剂和生物高蛋白饲料。本发明生产方法及工艺易掌握，投资小，成本低，适宜个体、中小企业和乡镇投资建厂。
Description
技术领域
本发明涉及一种采用微生物工程技术，利用农作物秸秆、壳皮、饼等副产物，以多株菌生产高蛋白饲料和畜禽饲料添加剂，使废物得到了有效的利用，变废为宝，原料来源取之不尽，用之不竭，提高了饲料投入产出比，具有显著的经济效益和社会效益。该技术由于含有大量的活性酶和促长因子，提高了动物新陈代谢功能，使之产生对动物机体互相协同及综合平衡作用，使营养物质在动物肠道中快速降解，促进动物对饲料营养成份的吸收和转化，以达到促进动物增长和节约饲料的目的。该技术主要应用于猪、鸡、牛、羊等动物饲料促长剂和生物高蛋白饲料。本发明生产方法及工艺易掌握，投资小，成本低，适宜个体、中小企业和乡镇投资建厂。
技术背景
新型微生物饲料添加剂是一种具有促进动物消化吸收、提高饲料利用率、减少动物疾病的饲料添加剂，是应用现代生物工程技术生产的一种具有生物活性的特殊蛋白质。是国家″八五″科技攻关和863支持的项目，同时也是农业部重点支持的科技项目。
我国是世界上第一生猪饲养大国，拥有世界上单胃动物最大生产量，使用酶制剂潜力很大。在生产中添加酶制剂辅助和促进饲料的消化吸收时，特别对仔猪生长发育显得十分重要。因为仔猪体内酶的活性和消化吸收能力不如成年猪；另外，早期断奶后，摄取营养的形式由易消化的母乳转为较复杂的以谷物为主的日粮，在短时间内仔猪消化道难以完全适应这种变化，易引起消化不良和腹泻。如在日粮中添加配制剂，是提高断奶仔猪饲料利用率的一个新途径。
预计未来10年内，随着科技水平不断提高，生产成本的下降，新型微生物饲料添加剂的产销量必然大幅度提高。饲用酶制剂在生产中的普遍应用虽然还面临着许多问题，但随着生物技术特别是基因工程技术和生产技术的提高，都将逐一解决。随着人们生活水平的提高及环境意识的增强，饲用酶制剂以其不产生残留、无抗药性、不污染环境等优势将会进一步被推广应用。
现有技术中有多篇专利文件公开了种种高效生物蛋白酶复合动物促长剂系列产品，其中最接近的对比文献为：
公开号CN1338511A公开了利用硫色曲霉等制作微生物饲料添加剂，其缺点是：一是菌种未列入农业部公布的饲料添加剂目录中；二是工艺设计过于简单。
公开号CN1175361A公开了利用生物酶制作微生物饲料添加剂，其缺点是：工艺制作公开不完全，在生产和制造中很难实现。
公开号1435114A公开了利用多种生物酶制作微生物饲料添加剂，其缺点是：一是生物菌种的名称和编号以及工艺没有完全公开，无法制作生物菌剂；二是实例不具体。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术工艺设计和配方不足，提供一种采用制作微生物复合酶与微量元素、维生素、矿物质、氨基酸等以及载体复配生产畜禽饲料添加剂的方法，采用制作多菌生物复合酶与合理的微量元素、维生素、矿物质、氨基酸等复配，使之产生对动物机体互相协同及综合平衡作用，通过生物多菌复合酶与其它物质的作用，充分利用饲料的利用率，提高动物对饲料的吸收及其转化，以达到促进动物增长和节约饲料的目的。
本技术发明中应用了以下几个生物菌种和有机物、微量元素，其中，生物菌种是从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心购进并经复活、诱变、分离、纯化后，选取高活性菌株做为生产菌种；无机原料以及微量元素，需从市场购买；有机物农作物副产物需从有关部门收取或收购，经发酵和烘干处理。
本技术发明的微生物高蛋白复合动物促长剂系列产品及其生产方法，包括以下几个步骤：
1.菌种及菌剂的制作：
1)黑曲酶AS3. 316果胶酶的制作与培养：
(1)斜面菌种制作：
①培养基制作
培养基：蔗糖30.0g，硝酸钠3.0g，硫酸镁0.5g，氯化钾0.5g，硫酸亚铁0.01g，磷酸氢二钾1.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL。放置电炉上溶解，待琼脂溶解后，装入试管，每管装量一般为管的五分之一处。装管后管口塞上棉塞，用报纸包好，放入灭菌锅中，121℃灭菌30min。灭菌后，拔掉电源，待压力回到0时将放气阀直立，打开灭菌锅，将培养基拿出摆成斜面，斜面长度为管的1/3处，等斜面凝固后开始接种。
②接种：
第一，将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行接种。
第二，用右手小指、无名指和手掌拔下棉塞并夹紧，棉塞下部应露在手外，勿放桌上，以免污染；
第三，将试管口迅速在火焰上微烧一周，使试管口上可能沾染的少量杂菌或带菌尘埃得以烧死；
第四，将灼烧过的接种环伸入菌种管内，先将接种环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体。然后用接种环轻轻挑取黑曲霉孢子数环接入盛有10mL无菌水及玻璃珠的三角瓶中，振荡，使孢子充分散开。
第五，在酒精灯火焰旁迅速打开一空白斜面，用微量移液器将孢子悬液均匀接种到固体斜面上。
第六，灼烧试管口，并在火旁将棉塞塞上，塞棉塞时，不要将试管去迎棉塞，以免试管在移动时污染杂菌；
③培养：
将接种好的试管斜面放入恒温培养箱内培养。培养温度为30℃左右，培养时间为48～72左右，待培养基表面长出并布满黄褐色孢子为正常，其它颜色为感染杂菌则应淘汰。
(2)二级菌种培养
①培养基制作
豆饼粉15g，麦麸55g，果渣29g，硫酸铵0.7g，磷酸氢二钾0.3g，pH值6-6.5，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜(料水比为：1∶1左右)，装入罐头瓶，121℃灭菌30min。
②接种
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行操作。接种时先将手和接种工具用酒精消毒，将灼烧过的接种环伸入菌种管内，先将接种环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体。用接种环轻轻挑取黑曲霉孢子数环接入盛有10mL无菌水及玻璃珠的三角瓶中，振荡，使孢子充分散开。然后将孢子悬液接种到罐头瓶固体培养基中。
③培养
将接种好的罐头瓶放入恒温培养箱中培养，培养温度为30℃左右，培养时间为48小时左右，待培养基中长出并布满黄褐色孢子为正常，其它颜色为感染杂菌则应淘汰。
(3)三级菌酶发酵
①培养基制作
豆饼粉15g，麦麸55g，果渣29g，硫酸铵0.7g，磷酸氢二钾0.3g，pH值6-6.5，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜(料水比为：1∶1左右)，装入灭菌袋，121℃灭菌30min。
②接种
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行操作。接种时先将手和接种工具用酒精消毒，把二级菌种倒入培养料中搅拌均匀，接种量湿菌种为3％，干菌种为1.5％；
③菌酶发酵
把接好的三级菌剂放入恒温培养箱或发酵机或浅层在25℃～30℃的无菌室内培养，培养时间为24-36小时左右，直到培养料长出并布满白色菌丝为成品，如长出有其它颜色为杂菌。
④成品处理
将发酵成品平铺，置于鼓风干燥箱中30℃低温干燥，干燥后粉碎，装入密封袋，放入3-5度空间保藏。
2)黑曲酶AS3. 350蛋白酶的制作与培养：
(1)斜面菌种培养
①培养基
蔗糖30.0g，硝酸钠3.0g，硫酸镁0.5g，氯化钾0.5g，硫酸亚铁0.01g，磷酸氢二钾1.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL。放置电炉上溶解，待琼脂溶解后，装入试管，每管装量一般为管的五分之一处。装管后管口塞上棉塞，用报纸包好，放入灭菌锅中，121℃灭菌30min。灭菌后，拔掉电源，待压力回到0时将放气阀直立，打开灭菌锅，将培养基拿出摆成斜面，斜面长度为管的1/3处，等斜面凝固后开始接种。
②接种
第一，将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行接种。
第二，用右手小指、无名指和手掌拔下棉塞并夹紧，棉塞下部应露在手外，勿放桌上，
以免污染；
第三，将试管口迅速在火焰上微烧一周，使试管口上可能沾染的少量杂菌或带菌尘埃得以烧死；
第四，将灼烧过的接种环伸入菌种管内，先将接种环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体。然后用接种环轻轻挑取泡盛曲霉孢子数环接入盛有10mL无菌水及玻璃珠的三角瓶中，振荡，使孢子充分散开。
第五，在酒精灯火焰旁迅速打开一空白斜面，用微量移液器将孢子悬液均匀接种到固体斜面上。
第六，灼烧试管口，并在火旁将棉塞塞上，塞棉塞时，不要将试管去迎棉塞，以免试管在移动时污染杂菌；
③培养
将接种好的试管斜面放入恒温培养箱内培养。培养温度为30℃左右，培养时间为48-72小时左右，待培养基表面长出并布满黄褐色孢子为正常，其它颜色为感染杂菌则应淘汰。
(2)二级菌种培养
①培养基制作
豆饼粉15g，麦麸55g，蛋白粉或玉米粉29g，硫酸铵0.7g，磷酸氢二钾0.3g，pH值6-6.5，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜(料水比为：1∶1左右)，装入罐头瓶，121℃灭菌30min。
②接种
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行操作。接种时先将手和接种工具用酒精消毒，将灼烧过的接种环伸入菌种管内，先将接种环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体。用接种环轻轻挑取黑曲霉孢子数环接入盛有10mL无菌水及玻璃珠的三角瓶中，振荡，使孢子充分散开。然后将孢子悬液接种到罐头瓶固体培养基中。
③培养
将接种好的罐头瓶放入恒温培养箱中培养，培养温度为30℃左右，培养时间为48小时左右，待培养基中长出并布满褐色孢子为正常，其它颜色为感染杂菌则应淘汰。
(3)三级菌酶发酵
①培养基制作
豆饼粉15g，麦麸55g，玉米粉29g，硫酸铵0.7g，磷酸氢二钾0.3g，pH值6-6.5，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜(料水比为：1∶1左右)，装入灭菌袋，121℃灭菌30min。
②接种
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行操作。接种时先将手和接种工具用酒精消毒，把二级菌中倒入培养料中搅拌均匀，接种量湿菌种为3％，干菌种为1.5％；
③菌酶发酵
把接好的三级菌剂放入恒温培养箱或发酵机或浅层在25℃～30℃的无菌室内培养，培养时间为24-36小时左右，直到培养料长出并布满白色菌丝为成品，如长出有其它颜色为杂菌。
④成品处理
将发酵成品平铺，置于鼓风干燥箱中30℃低温干燥，干燥后粉碎，装入密封袋，放入3-5度空间保藏。
3)黑曲霉ACCC30785(植酸酶)制作
(1)斜面菌种培养
①培养基制作
5°Be度麦芽汁30mL，葡萄糖1g，碳酸钠0.1g，硫酸镁0.02g，氯化钾0.03g，硫酸铁0.001g，磷酸氢二钾0.1g，琼脂2g，蒸馏水100mL，pH值5-6，放置电炉上溶解，待琼脂溶解后，分别装入试管，每管装量一般为管的五分之一处。装管后管口塞上棉塞，用报纸包好，放入灭菌锅中，121℃灭菌30min。灭菌后，拔掉电源，待压力回到0时将放气阀直立，打开灭菌锅，将培养基拿出摆成斜面，斜面长度为管的1/3处，等斜面凝固后开始接种；
②接种
第一，将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行接种。
第二，用右手小指、无名指和手掌拔下棉塞并夹紧，棉塞下部应露在手外，勿放桌上，以免污染；
第三，将试管口迅速在火焰上微烧一周，使试管口上可能沾染的少量杂菌或带菌尘埃得以烧死；
第四，将灼烧过的接种环伸入菌种管内，先将接种环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体。然后用接种环轻轻挑取黑曲霉孢子数环接入盛有10mL无菌水及玻璃珠的三角瓶中，振荡，使孢子充分散开。
第五，在酒精灯火焰旁迅速打开一空白斜面，用微量移液器将孢子悬液均匀接种到固体斜面上。
第六，灼烧试管口，并在火旁将棉塞塞上，塞棉塞时，不要将试管去迎棉塞，以免试管在移动时污染杂菌；
③培养
将接种好的试管斜面放入恒温箱内培养。培养温度为30℃左右，培养时间为48-72小时左右，待培养基表面长出并布满黑色孢子为正常，其它颜色为感染杂菌则应淘汰。
(2)二级菌种培养
①培养基制作
豆饼粉15g，麦麸55g，蛋白粉或玉米粉29g，硫酸铵0.7g，磷酸氢二钾0.3g，pH值6-6.5，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜(料水比为：1∶1左右)，装入罐头瓶，121℃灭菌30min。
②接种
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行操作。接种时先将手和接种工具用酒精消毒，将灼烧过的接种环伸入菌种管内，先将接种环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体。用接种环轻轻挑取黑曲霉孢子数环接入盛有10mL无菌水及玻璃珠的三角瓶中，振荡，使孢子充分散开。然后将孢子悬液接种到罐头瓶固体培养基中。
③培养
将接种好的罐头瓶放入恒温培养箱中培养，培养温度为30℃左右，培养时间为48小时左右，待培养基表面长出并布满黑色孢子为正常，其它颜色为感染杂菌则应淘汰。
(3)三级菌酶发酵
①培养基制作
豆饼粉15g，麦麸55g，玉米粉29g，硫酸铵0.7g，磷酸氢二钾0.3g，pH值6-6.5，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜(料水比为：1∶1左右)，装入灭菌袋，121℃灭菌30min。
②接种
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30min，关掉灭菌灯5～10min后再进行操作。接种时先将手和接种工具用酒精消毒，把二级菌中倒入培养料中搅拌均匀，接种量湿菌种为3％，干菌种为1.5％；
③菌酶发酵
把接好的三级菌剂放入恒温培养箱或发酵机或浅层在25℃～30℃的无菌室内培养，培养时间为24-36小时左右，直到培养料长出并布满白色菌丝为成品，如长出有其它颜色为杂菌。
④成品处理
将发酵成品平铺，置于鼓风干燥箱中30℃低温干燥，干燥后粉碎，装入密封袋，放入3-5度空间保藏。
2.酶制剂配比为：
果胶酶∶蛋白酶∶植酸酶比为1∶3∶3
3.生物高蛋白发酵饲料制作：
1)发酵剂配方(质量份)：
(1)蛋白酶20(2)果胶酶20，(3)高活性酵母25，4.发酵粉20，(5)红糖13.5，(6)光合细菌1，微量元素0.5，以上原料混合后作为发酵剂。
2)微量元素配方(质量份)
①二氧化锰8，②氯化钴7，③硫酸亚铁10，④硫酸锌13，⑤碘化钾20，⑥五氧化二钒5，⑦硼酸5，⑧氯化镁10，⑨磷酸二氢钾10，⑩磷酸氢二钾10
3)光合细菌制作与培养：
培养基配方为：磷酸氢二钾0.6克，磷酸二氢钾0.5克，硫酸镁0.2克，氯化钠2.0克，酵母膏0.1克，碳酸氢钠5.0克、70％的酒精1-2毫升，用900毫升水溶解，用磷酸调ph值7左右，在加入100毫升菌液摇晃均匀。放入透明度比较好的瓶内，用40瓦电灯进行对称照射，距离为10-20厘米，温度控制在30℃，经三天培养即可成功。
4)高活性酵母曲培养
(1)曲种可选用市售酵母
(2)酵母曲培养
①培养基(质量份)
麸皮80，玉米粉4.5，草粉15，氯化钠0.5，以上原料加水按1∶0.8-1.2的比例搅拌均匀，以手抓成团松手自然散开为宜。尔后，把培养料装入塑料袋或罐头瓶中放置高压锅1.5kg/cm2灭菌30分钟，在灭菌的同时，应取0.5％的盐水同时灭菌称无菌盐水，备用。灭菌完毕将物料取出，凉至40℃左右时开始接种。
②接种与培养
首先把曲种用2％红糖水(40度左右)活化3小时，尔后接入培养料中混合均匀，放入三角瓶中或盘子或架子上发酵，培养时间控制在36小时左右，长出棕白色菌丝或结饼即为成品。
5)高蛋白饲料发酵物配方(质量份)：
(1)草粉92(最好是花生藤、红薯秧、槐树叶、玉米秸上部，粉碎过20-30目)，(2)玉米面1-2，(3)麸皮1-3.5，(4)尿素或硫酸铵0.2-0.5，(5)氯化钠0.1-0.3，(6)光合菌0.5-1，(7)发酵剂0.5-1；
6)制作步骤：
①首先把发酵剂按量(发酵物的1％)放入0.5％红糖水中(水应为无菌水或沸水)，发酵剂与红糖水的比为1∶6，搅拌均匀后在30℃左右室温下进行活化2个小时，而后加入发酵物中充分搅拌均匀，PH值约6-7。
②发酵方法：
将混合好的发酵物置入大缸或塑料袋或水泥池中压死封闭14天左右或室温30℃左右7天。
③按发酵物与水的比例为1∶1.2混合均匀、加入发酵物中搅拌均匀，水份含量以手抓成团不滴水为宜。将混合好的发酵物置入大缸或塑料袋或水泥池中压死封闭7天左右或室温30℃左右5天。
4.动物生物酶复合促长剂配方(质量份)：
(1)复合多维素(克) 4----18
(2)硫酸亚铁(克) 1----16
(3)硫酸锰(克) 0.5--8
(4)硫酸铜(克) 4-----18
(5)硫酸锌(克) 2----13
(6)碘化钾(毫克) 5----20
(7)氯化钴(毫克) 10---80
(8)亚硒酸钠(毫克) 5-----20
(9)磷酸氢钙(克) 50----300
(10)腐植酸钠(克) 10----40
(11)硼酸(克) 0.1---4
(12)生物复合酶(克) 500--800
(13)轻质碳酸钙(克) 100--300
(14)钼(克) 0.1----2
(15)蛋氨酸(克) 30-120
(16)赖氨酸(克) 30--120
(17)氯化胆碱(克) 30---160
(18)贝壳粉(克) 50---200
5.生物发酵高蛋白饲料配方(质量份)：
(1)生物蛋白饲料 15---45
(2)玉米 20---35
(3)高粱 10---25
(4)大麦 10---15
(5)麸皮 10---16
(6)豆饼 10---16
(7)鱼粉 1---4
(8)水解羽毛粉或皮革粉 1---6
(9)棉子饼 2---6
(10)骨粉 0.3---3
(11)贝壳粉 1---2
(12)食盐 0.1---0.6
(13)微量元素添加剂 0.3---1.4
(14)土霉素 0.01---0.06
6.具体实施例：
实例1.中猪饲料添加剂配方(1000质量份)饲料中按1％加入
(1)复合多维素(克) 16
(2)硫酸亚铁(克) 8
(3)硫酸锰(克) 2
(4)硫酸铜(克) 12
(5)硫酸锌(克) 8
(6)碘化钾(毫克) 25
(7)氯化钴(毫克) 100
(8)亚硒酸钠(毫克) 20
(9)磷酸氢钙(克) 350
(10)硼酸(克) 1
(11)生物复合酶(克) 300
(12)轻质碳酸钙(克) 47
(13)钼(克) 3
(14)赖氨酸(克) 50
(15)贝壳粉(克) 203
实例2.肉中鸡饲料添加剂配方(1000质量份)饲料中按1％加入
(1)复合多维素(克) 14
(2)硫酸亚铁(克) 14
(3)硫酸锰(克) 10
(4)硫酸铜(克) 4
(5)硫酸锌(克) 12
(6)碘化钾(毫克) 78
(7)亚硒酸钠(毫克) 31
(8)碳酸氢钙(克) 248
(9)腐植酸钠(克) 2
(10)生物复合酶(克) 400
(11)钼(克) 3
(12)蛋氨酸(克) 100
(13)氯化胆碱(克) 100
(14)氯化钠(克) 3
(15)贝壳粉(克) 加到1000克
实例3.育肥牛饲料添加剂配方(1000质量份)饲料中按1％加入
(1)复合多维素(克) 4
(2)硫酸亚铁(克) 10
(3)硫酸锰(克) 5
(4)硫酸铜(克) 3
(5)硫酸锌(克) 9
(6)碘化钾(毫克) 62
(7)氯化钴(毫克) 105
(8)亚硒酸钠(毫克) 54
(9)磷酸氢钙(克) 320
(10)生物复合酶(克) 450
(11)氢质碳酸钙(克) 加到1000克
实例4.育肥羊添加剂配方(1000质量份)饲料中按1％加入
(1)复合多维素(克) 2
(2)硫酸亚铁(克) 10
(3)硫酸锰(克) 5
(4)硫酸铜(克) 2
(5)硫酸锌(克) 12
(6)碘化钾(毫克) 62
(7)氯化钴(毫克) 105
(8)亚硒酸钠(毫克) 54
(9)磷酸氢钙(克) 310
(10)生物复合酶(克) 400
(11)氢质碳酸钙(克) 加到1000克
实例5.生物发酵高蛋白饲料配方(100质量份)：
(1)生物蛋白饲料 32
(2)玉米 36
(5)麸皮 10
(6)豆饼 15
(7)鱼粉 1.7
(8)水解羽毛粉或皮革粉 2
(10)骨粉 1
(11)贝壳粉 1
(12)食盐 0.3
(13)微量元素添加剂 1
7.操作工艺与步骤：
1)原料的预处理：
(1)硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、硫酸锌因含水份在加工中会有很大的困难，因此须先进行处理，主要以干燥处理为主，可采用强制干燥，在条件及设备较差的情况下，可用日光晾晒，粉碎过100目；
(2)碘化钾、氯化钴的预处理：
采用吸收剂平衡法，将碘化钾和氯化钴原料分别准确的称量，然后各以1∶15-1∶20的比例溶解于水中，再分别按照1∶100的比例喷在石粉等吸收剂上进行混合，而后进行干燥、粉碎过200目；
(3)亚硒酸钠的预处理：
一般采用将含50％以上的亚硒酸钠加入81℃的热水中，经过5min溶解后制成10kg水溶液(即1kg原料溶解于10kg水中然后再喷洒在搅拌机内的糠粉上，糠粉过200目以1∶100的比例喷在糠粉上，混合烘干后过200目)，混合均匀制成稀释剂，再与其它原料混合成为硒的预混合料；
2)载体和稀释剂的选择：
载体一般选择石粉、氢质碳酸钙、沸石粉、淀粉、麦麸、玉米粉等，以3-8％的比例逐级扩大；
3)原料的粒度：
微量元素一般要求通过80-400目，即粒度在0.17-0.05mm以下，铁、锌、锰、铜、镁等微量元素的粉碎粒度应全部通过80目(0.3mm)钴、碘、硒等级微量成分粉碎至200目(0.076mm)以下，为了达到很细的粒度，需要使用特别磨进行细磨，如碘、钾、硒用球磨机细磨才能达到所需求的粒度，氯化钴、铜、铁、锰、锌要使用微米极磨细至几个微米才能保证适宜的粒度，达到最佳的混合均匀度；
4)操作：
(1)一次扩大稀释：
①先将碘化钾、氯化钴、亚硒酸钠用磷酸氢钙或碳酸氢钙为载体以3倍的比例扩大稀释，先加入1％载体量的油脂，混合5分钟然后加入以上微量元素，混合搅拌20分钟后取出，再进行二次稀释；
②将铁、锌、铜、锰等微量元素用磷酸氢钙或碳酸钙或玉米粉为载体以3倍的比例扩大稀释，先将载体加入混合机中，加入载体量1％的油脂，混合5分钟然后加入以上微量元素，混合20分钟后取出，再进行二次稀释；
③将其它生长剂、多维素等用碳酸钙或玉米粉为载体以3倍左右的比例混合稀释，先将载体加入混合机中，加入载体量1％的油脂，混合5分钟，然后加入生长剂等混合20分钟取出，再进行二次扩大稀释；
(2)二次扩大稀释：
将以上一次预混剂用麦麸、玉米面为载体以3倍左右的比例进行稀释扩大，复合酶也采取二次稀释扩大。
(3)三次扩大稀释与混合：
将全部二次混合的预混剂合并称重，载体以麦麸、玉米面或鱼粉加入足量，然后加入1％的油脂，混合5分钟，然后将全部二次稀释剂加入混合剂搅拌混合20分钟，即为动物促长剂。
5)高蛋白发酵饲料制作：
①首先把发酵剂按量(发酵物的1％)放入0.5％红糖水中(水应为无菌水或沸水)，发酵剂与红糖水的比为1∶6，搅拌均匀后在30℃左右室温下进行活化2个小时，而后加入发酵物中充分搅拌均匀。PH值约6-7；
②发酵方法：
按发酵物与水的比例为1∶1.2混合均匀、加入发酵物中搅拌均匀，水份含量以手抓成团不滴水为宜，将混合好的发酵物置入大缸或塑料袋或水泥池中压死封闭7天左右或室温30℃左右5天：
Claims (7)
1.一种新型复合酶饲料添加剂的制备方法，包括生物菌酶和发酵菌种及菌剂的发酵制作、畜禽添加剂的配方、生物高蛋白发酵饲料制作和配方：
其中，微生物菌种菌号为：
1)黑曲酶AS3.316
2)黑曲酶AS3.350
3)黑曲霉ACCC30785(植酸酶)。
2.根据权利要求1所述的一种新型复合酶饲料添加剂的制备方法，其特征在于畜禽添加剂的配方：
(1)复合多维素(克) 4----18
(2)硫酸亚铁(克) 1----16
(3)硫酸锰(克) 0.5--8
(4)硫酸铜(克) 4----18
(5)硫酸锌(克) 2----13
(6)碘化钾(毫克) 5----20
(7)氯化钴(毫克) 10---80
(8)亚硒酸钠(毫克) 5-----20
(9)磷酸氢钙(克) 50----300
(10)腐植酸钠(克) 10----40
(11)硼酸(克) 0.1---4
(12)生物复合酶(克) 500--800
(13)轻质碳酸钙(克) 100--300
(14)钼(克) 0.1----2
(15)蛋氨酸(克) 30-120
(16)赖氨酸(克) 30--120
(17)氯化胆碱(克) 30---160
(18)贝壳粉(克) 50---200。
3.根据权利要求1所述的其特征在于生物发酵高蛋白饲料的配方：
(1)生物蛋白饲料 15---45
(2)玉米 20---35
(3)高粱 10---25
(4)大麦 10---15
(5)麸皮 10---16
(6)豆饼 10---16
(7)鱼粉 1---4
(8)水解羽毛粉或皮革粉 1---6
(9)棉子饼 2---6
(10)骨粉 0.3---3
(11)贝壳粉 1---2
(12)食盐 0.1---0.6
(13)微量元素添加剂 0.3---1.4
(14)土霉素 0.01---0.06。
4.根据权利要求1所述的一种新型复合酶饲料添加剂的制备方法，其特征在于生物发酵高蛋白饲料的工艺：
1)首先把发酵剂按量(发酵物的1％)放入0.5％红糖水中(水应为无菌水)，发酵剂与红糖水的比为1∶6，搅拌均匀后在30℃左右室温下进行活化2个小时，而后加入发酵物中充分搅拌均匀，PH值约6-7；
2)发酵方法：
将混合好的发酵物置入大缸或塑料袋或水泥池中压死封闭14天左右或室温30℃左右7天；
3)按发酵物与水的比例为1∶1.2混合均匀、加入发酵物中搅拌均匀，水份含量以手抓成团不滴水为宜，将混合好的发酵物置入大缸或塑料袋或水泥池中压死封闭7天左右或室温30℃左右5天。
5.根据权利要求1所述的一种新型复合酶饲料添加剂的制备方法，其特征在于生物复合酶的制作：
1)斜面菌种制作：
(1)斜面菌种培养基制作：
斜面菌种培养基5°Be度麦芽汁或马铃薯去皮去芽，称20克切细放入100ml水中，用微火煮开后15分钟即可用双层纱布过滤，取汁为100ml，如水分不足再加些开水补足，另外称葡萄糖1g，琼脂2g，纤维素0.5g(纤维素为将草粉过100目)或蛋白胨1g，牛肉膏0.3g，Nacl0.5g，琼脂2g，蒸馏水100ml，测PH值为5～6左右，加入琼脂2g，放置电炉上溶解，待琼脂溶解后，分别装入试管，每管装量一般为管的四分之一处，装管后管口塞上棉塞，每10支一捆用防水纸包好，放入高压锅1.05kg/cm2灭菌30分钟，灭菌后，拔掉电源，待压力回到0时将放气阀和安全阀直立打开灭菌锅，将培养基拿出摆成斜面，斜面长度为管的1/3处，等斜面凝固后开始接种；
(2)接种：
接种前，要将接种用具及接种室用紫外线灯灭菌20～30分钟，关掉灭菌灯后过5～10分钟左右在酒精灯下按无菌要求进行操作，操作步骤如下：
第一，用右手小指、无名指和手掌拔下棉塞并夹紧，棉塞下部应露在手外，勿放桌上，以免污染；
第二，将试管口迅速在火焰上微烧一周，使试管口上可能沾染的少量杂菌或带菌尘埃得以烧死；
第三，将灼烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体，然后用环轻轻取菌少许，并将接种环慢慢从试管中抽出；
第四，在火旁迅速将接种环伸进另一空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上，划线时由底部划起，划成较密的波浪线状，注意勿将培养基划破，也不要使菌体沾污管壁；
第五，灼烧试管口，并在火旁将棉塞塞上，塞棉塞时，不要将试管去迎棉塞，以免试管在移动时污染杂菌；
第六，接种完毕，接种环上的余菌必须彻底烧死后才能进行下一个试管接种：
(3)培养：
接种完毕将试管菌种包扎好放入恒温箱内培养，温度为28℃～32℃左右，培养时间为48-72小时左右，待培养基长出黄色或黑褐色或绿色为正常，其它颜色为感染杂菌：
2)二级菌剂培养
(1)培养基制作：
称豆饼粉60，麦麸35，玉米面5，NH4CI0.5，CaCI0.3，Na2HPO40.2，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜，然后装入塑料袋或罐头瓶中放置高压锅1.05kg/cm2灭菌30分钟，在灭菌的同时，应取0.5％的盐水同时灭菌称无菌盐水，备用，灭菌完毕将物料取出，晾凉至40℃左右时开始接种；
(2)接种：
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30分钟，关掉灭菌灯5～10分钟后再进行操作，接种时先将手和接种工具用酒精消毒，然后取出无菌盐水倒入试管内半管，用大拇指堵住试管口摇晃几下，使菌液充分混合，倒入培养料中搅拌均匀，接种量为1支斜面菌种可接250克左右；
(3)培养：
把接好的二级菌种放入恒温箱培养28℃～32℃或室温在20℃～30℃之间的无菌室内培养，培养时间为48-72小时左右，直到培养料表面长出长出黄色或黑褐色或绿色为正常，其它颜色为感染杂菌：
3)三级菌酶培养制作：
(1)培养基制作：
豆饼粉60，麦麸34，玉米面5，NH4CI 0.5，CaCI 0.3，Na2HPO4 0.2，加水至用手紧握指缝有水而不滴下来为宜，然后装入塑料袋或罐头瓶中放置高压锅1.05kg/cm2灭菌30分钟，在灭菌的同时，应取0.5％的盐水同时灭菌称无菌盐水，备用，灭菌完毕将物料取出，晾凉至40℃左右时开始接种，接种量湿菌种为3％，干菌种为1.5％；
(2)接种：
首先将接种室及接种工具用紫外线灭菌20～30分钟，关掉灭菌灯5～10分钟后再进行操作，接种时先将手和接种工具用酒精消毒，把二级菌剂倒入培养料中搅拌均匀，接种量湿菌种为3％，干菌种为1.5％；
(3)培养：
把接好的三级菌剂放入恒温箱或发酵机或浅层在20℃～30℃之间的无菌室内培养，培养时间为48小时左右，培养料表面长出白色菌并有黄色或黑褐色或绿色孢子结饼为成品，其它颜色为感染杂菌。
6.根据权利要求1所述的一种新型复合酶饲料添加剂的制备方法，其特征在于生物高蛋白发酵饲料制作：
1)发酵剂配方(质量份)：
(1)纤维素酶30，(2)果胶酶和丹宁酶20，(3)高活性酵母15，4.发酵粉20，(5)红糖14.5，(6)微量元素0.5，以上原料混合后作为发酵剂：
2)高蛋白饲料发酵物配方(质量份)：
(1)草粉92(最好是花生藤、红薯秧、槐树叶、玉米秸上部，粉碎过20-30目)，(2)玉米面2，(3)麸皮3.5，(4)尿素或硫酸铵0.5，(5)氯化钠0.3，(6)光合菌1，(7)发酵剂1：
3)制作步骤：
①首先把发酵剂按量(发酵物的1％)放入0.5％红糖水中(水应为无菌水或沸水)，发酵剂与红糖水的比为1∶6，搅拌均匀后在30℃左右室温下进行活化2个小时，而后加入发酵物中充分搅拌均匀，PH值约6-7；
②发酵方法：
按发酵物与水的比例为1∶1.2混合均匀、加入发酵物中搅拌均匀，水份含量以手抓成团不滴水为宜，将混合好的发酵物置入大缸或塑料袋或水泥池中压死封闭7天左右或室温30℃左右5天。
7.根据权利要求1所述的一种新型复合酶饲料添加剂的制备方法，其特征在于操作工艺与步骤：
1)原料的预处理：
(1)硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、硫酸锌因含水份在加工中会有很大的困难，因此须先进行处理，主要以干燥处理为主，可采用强制干燥，在条件及设备较差的情况下，可用日光晾晒，粉碎过100目；
(2)碘化钾、氯化钴的预处理：
采用吸收剂平衡法，将碘化钾和氯化钴原料分别准确的称量，然后各以1∶15-1∶20的比例溶解于水中，再分别按照1∶100的比例喷在石粉等吸收剂上进行混合，而后进行干燥、粉碎过200目；
(3)亚硒酸钠的预处理：
一般采用将含50％以上的亚硒酸钠加入81℃的热水中，经过5min溶解后制成10kg水溶液(即1kg原料溶解于10kg水中然后再喷洒在搅拌机内的糠粉上，糠粉过200目以1∶100的比例喷在糠粉上，混合烘干后过200目)，混合均匀制成稀释剂，再与其它原料混合成为硒的预混合料：
2)载体和稀释剂的选择：
载体一般选择石粉、氢质碳酸钙、沸石粉、淀粉、麦麸、玉米粉等，以3-8％的比例逐级扩大；
3)原料的粒度：
微量元素一般要求通过80-400目，即粒度在0.17-0.05mm以下，铁、锌、锰、铜、镁等微量元素的粉碎粒度应全部通过80目(0.3mm)钴、碘、硒等级微量成分粉碎至200目(0.076mm)以下，为了达到很细的粒度，需要使用特别磨进行细磨，如碘、钾、硒用球磨机细磨才能达到所需求的粒度，氯化钴、铜、铁、锰、锌要使用微米极磨细至几个微米才能保证适宜的粒度，达到最佳的混合均匀度；
4)操作：
(1)一次扩大稀释：
①先将碘化钾、氯化钴、亚硒酸钠用磷酸氢钙或碳酸氢钙为载体以3倍的比例扩大稀释，先加入1％载体量的油脂，混合5分钟然后加入以上微量元素，混合搅拌20分钟后取出，再进行二次稀释；
②将铁、锌、铜、锰等微量元素用磷酸氢钙或碳酸钙或玉米粉为载体以3倍的比例扩大稀释，先将载体加入混合机中，加入载体量1％的油脂，混合5分钟然后加入以上微量元素，混合20分钟后取出，再进行二次稀释；
③将其它生长剂、多维素等用碳酸钙或玉米粉为载体以3倍左右的比例混合稀释，先将载体加入混合机中，加入载体量1％的油脂，混合5分钟，然后加入生长剂等混合20分钟取出，再进行二次扩大稀释：
(2)二次扩大稀释：
将以上一次预混剂用麦麸、玉米面为载体以3倍左右的比例进行稀释扩大，复合酶也采取二次稀释扩大：
(3)三次扩大稀释与混合：
将全部二次混合的预混剂合并称重，载体以麦麸、玉米面或鱼粉加入足量，然后加入1％的油脂，混合5分钟，然后将全部二次稀释剂加入混合剂搅拌混合20分钟，即为动物促长剂。
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