CN101668531A - 用于治疗免疫病症的联合治疗 - Google Patents

Abstract

提供了用于治疗免疫病症，例如自身免疫性疾病或癌症的方法和组合物，其包括利用抑制Th17细胞发育或维持的药剂的联合治疗。提供了治疗方案，其中给药促炎细胞因子的拮抗剂足以缓解自身免疫性疾病或癌症急性期突发的征状和症状的时间，并持续利用IL－23的拮抗剂的治疗更长的时间以防止急性事件的复发。还公开了PGE2和CD61的拮抗剂用于治疗自身免疫性、炎性和增殖性病症。

Description

用于治疗免疫病症的联合治疗

发明领域

[0001]本发明涉及用于治疗免疫病症如自身免疫性病症的组合物和方法。具体地，本发明涉及利用抑制Th17细胞发育或维持的药剂的联合治疗。

发明背景

[0002]免疫系统发挥功能以保护个体抵抗传染物例如细菌、多细胞生物体和病毒以及抵抗癌症。该系统包括几种类型淋巴和骨髓细胞如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、嗜酸性粒细胞、T细胞、B细胞和嗜中性粒细胞。这些淋巴和骨髓细胞常常产生被称为细胞因子的信号传递蛋白质。免疫响应包括炎症，即免疫细胞全身地或在身体的特定位置聚集。响应于传染物或外来物，免疫细胞分泌细胞因子，而细胞因子又调节免疫细胞增殖、产生、分化或迁移。免疫响应可以产生病理学后果例如当它包括过多的炎症时，如在自身免疫性病症中。参见例如Abbas等人.(eds.)(2000)Cellular and Molecular Immunology，W.B.Saunders Co.，Philadelphia，PA；Oppenheim和Feldmann(eds.)(2001)Cytokine Reference，Academic Press，San Diego，CA；von Andrian和Mackay(2000)New Engl.J.Med.343：1020-1034；Davidson和Diamond(2001)New Engl.J.Med.345：340-350)。

[0003]许多细胞因子已经和涉及异常炎性响应的疾病有牵连。

[0004]IL-17，其最初被命名为细胞毒性淋巴细胞相关抗原8(CTLA8)，是一种同型二聚体细胞因子，其结合IL-17RA(也被称作IL17R)和IL-17RC。IL-17的功能性受体被认为是多聚体受体复合物，其包含IL-17RA和IL-17RC之一或二者(例如IL-17RA同型二聚体、IL-17RC同型二聚体或IL-17RA/IL-17RC杂二聚体(heterodimer))，并且可能还含有其他还未知的蛋白质(Toy等人.(2006)J.Immunol.177(1)：36-39；未发表的数据)。

[0005]IL-17活性(在Kolls等人.(2004)Immunity 21：467-476中综述)包括促进嗜中性白细胞在限定区域中的聚集和嗜中性白细胞的激活。IL-17能诱导或促进任何下列促炎症和嗜中性细胞-动员细胞因子的产生，这取决于细胞类型：IL-6、MCP-1、CXCL8(IL-8)、CXCL1、CXCL6、TNFα、IL-1β、G-CSF、GM-CSF、MMP-1和MMP-13。

[0006]白介素-12(IL-12)是一种杂二聚体分子，其由p35和p40亚基构成。研究显示IL-12在幼稚(naive)T细胞分化成分泌IFN的I型T辅助CD4⁺淋巴细胞中发挥了重要作用。还已经显示IL-12对于体内T细胞依赖性免疫和炎症响应是关键的。参见例如Cua等人.(2003)Nature421：744-748。IL-12受体是一种IL-12Rβ1和IL-12Rβ2亚基的复合物。参见Presky等人.(1996)Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 93：14002。

[0007]白介素-23(IL-23)是一种由2种亚基构成的杂二聚体细胞因子，其中p19是IL-23独有的，而p40是与IL-12共有的。p19亚基结构上与IL-6、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和IL-12的p35亚基相关。IL-23通过结合到杂二聚体受体介导信号传递，其中该杂二聚体受体由IL-23R和IL-12R  1构成，其中IL-23R是IL-23受体独有的，而IL-12R 1是与IL-12受体共有的。参见Parham等人.(2000)J.Immunol.168：5699。

[0008]IL-23活性包括诱导记忆T细胞、PHA母细胞(PHA blast)、CD45RO T细胞的增殖；以及增强PHA母细胞或CD45RO T细胞产生干扰素-(IFN)。与IL-12不同，IL-23在人与小鼠中，优先刺激记忆细胞，而不是幼稚T细胞群。IL-23激活许多胞内细胞信号传递分子例如Jak2、Tyk2、Stat1、Stat2、Stat3和Stat4。IL-12激活相同的分子组，但是Stat4对IL-23的响应相对弱，而Stat4对IL-12的响应则是强的。Oppmann等人.(2000)Immunity 13：715-725；Parham等人.(2002)J.Immunol.168：5699-5708。IL-23还与产生IL-17的细胞(也被称作Th17细胞)的维持和增殖有牵连。参见Cua和Kastelein(2006)NatureImmunology 7：557-559。

[0009]IL-12和IL-23天然作用的比较暗示，与抑制IL-12或抑制IL-23和IL-12二者相比，靶向IL-23以抑制，将会造成较少的副作用。Bowman等人.(2006)Curr.Opin.Infect.Dis.19：245。尽管IL-12对于构建全身性Th1介导的免疫响应是关键的，但IL-23(连同IL-1β、IL-6和TNF-α)被认为负责促进和维持Th-17细胞。这些Th17细胞被认为参与响应灾难性损伤，例如破坏肺部或肠道的粘膜屏障，以及所造成的暴露于致命性病原体肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)和啮齿类柠檬酸菌(C.rodentium)。当然，这些灾难性损伤几乎必然需要介导大量嗜中性粒细胞涌入形式的免疫响应。参见Cua和Kastelein(2006)NatureImmunology 7：557。因为这些灾难性损伤和感染在现代社会中相对少见，因此如果它们的确出现的话也可以用抗体治疗，这种Th17“核选项(nuclear option)”对于存活可能不是关键的，因为它出现于人进化的早期。这暗示破坏IL-23/IL-23受体信号传递可能具有相对较少的副作用特征，因为其天然活性在现代社会中不太重要。参见McKenzie等人.(2006)Trends Immunol.27：17。

[0010]IL-12受体和IL-23受体不同的亚基组成使得能够设计仅靶向IL-23受体而不是IL-12受体的治疗。结合并抑制IL-23p19或IL-23R活性的化合物(可以他们各自杂二聚体复合物组分分别进行)，将会抑制IL-23而不抑制IL-12。还可以存在能够结合IL-12p40(存在于IL-23中，而不存在于IL-12中)的化合物，或者抑制IL-12Rβ1(存在于IL-23中，而不存在于IL-12中)的化合物。这些特异性结合药剂还能抑制IL-23活性而不抑制IL-12活性。IL-23/IL-23R特异性药剂将被认为是比还能够抑制IL-12的药剂更安全的(即具有较低的副作用特征)。

[0011]早期关于抑制IL-12的大部分工作涉及抑制IL-12p40。之后已经意识到这些实验不仅涉及抑制IL-12，而且还涉及抑制IL-23，实际上这些实验的一些中的效果也是抑制IL-23的结果。许多病症曾经被认为是致病性Th1响应所造成的病症(可以通过抑制IL-12而缓解)，已经显示是由于Th17响应所造成的，这可以通过抑制IL-23而缓解。Yen等人.(2006)J.Clin.Invest.116：1310；Iwakura和Ishingame(2006)J.Clin.Invest.116：1218。

[0012]IL-23R已经牵涉作为炎性肠病、克罗恩氏病(Crohn’sdisease)和溃疡性结肠炎中的关键遗传因素。Duerr等人.(2006)Sciencexpress 26-October-2006：1。全基因组关联分析发现IL-23R的基因与克罗恩氏病相关，其中不常见的编码变体(Arg381Gln)为疾病提供了强烈保护。这种基因相关确认了先前的生物学发现(Yen等人.(2006)J.Clin.Investigation 116：1218)暗示IL-23及其受体是治疗IBD的新型治疗方法的有前途的靶。

[0013]最近的发现已经证明IL-23在促进一类T细胞(被称作Th17细胞)的生存和增殖中是重要的。最近的论文报道IL-23促进特征在于产生IL-17、IL-17F、TNF、IL-6和其他因子的T细胞群(被称作“Th17细胞”)(Langrish等人.(2005)J.Exp.Med.201：233-240)。IL-6和TGF-β促进这类Th17细胞的产生。参见例如Veldhoen等人.(2006)Immunity 24：179-189；Dong(2006)Nat.Rev.Immunol.6(4)：329-333。IL-22还被提议为重要的Th17细胞因子。参见例如美国专利申请公开No.2008/0031882A1。根据目前的理解，IL-23负责这类新型辅助T细胞的维持和增殖，尽管对于起始Th17细胞的起始形成而言，这不是必要的。

[0014]已知一些自身免疫性疾病包括征状和症状的急性“突发”期，之后是相对无症状的延长期。这些疾病有时被称作“复发缓解型”疾病。典型的复发缓解型是多发性硬化症(MS)，其中85％的个体遭受该疾病的复发缓解形式，这与该疾病的递增(progressive)形式不同。复发缓解型MS的特征在于明确确定的急性发作，随后是完全恢复的时期，或者具有某些缺陷的稳定化时期。MS的主要症状包括疲劳(也被MS疲倦以将其与由于其他原因造成的疲劳进行区分)、行走困难、肠和/或膀胱紊乱、视觉问题、认知功能改变(包括记忆、注意力和问题解决能力的问题)、感觉异常(例如“麻木或发麻(pins and needles)”)、性功能改变、疼痛、抑郁和/或情绪突变，以及不太频繁的颤抖、协调不能、言语和吞咽问题以及受损的听觉。目前的药剂干涉包括干扰素β1a(IFN-β1a)、干扰素β1b(IFN-β1b)以及人源化抗整联蛋白-α4抗体那他珠单抗(natalizumab)。

[0015]复发缓解型自身免疫性疾病还包括自体炎性病症例如各种遗传性周期性发热综合症、克罗恩氏病、布劳(Blau)综合症、贝谢氏疾病(Bechet’s disease)和系统性红斑狼疮。Church等人.(2006)SpringerSemin.Immun.27：494。用于治疗遗传性周期性发热的生物药剂包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)的拮抗剂例如英夫单抗(infliximab)、依那西普(etanercept)和阿达木单抗(adalimumab)，以及白介素1β(IL-1β)的拮抗剂例如IL-1受体拮抗剂阿那白滞素(anakinra)(IL-1受体拮抗剂)。

[0016]存在对于用于治疗免疫病症如自身免疫性疾病的改进方法和组合物的需要。优选，这些方法和组合物能够治疗疾病的急性症状例如通过缓解病症的征状和症状，同时还能够降低疾病复发的可能性。优选，这些方法和组合物将包括综合的疾病管理规程，其中在治疗方案中给药两种或者更多种治疗药剂，其促进征状和症状的快速解决，同时还促进长期疾病抑制。

发明概述

[0017]本发明满足了本领域中的这些以及更多需求，其通过提供了治疗免疫病症如自身免疫性疾病的组合物，所述组合物包括IL-23的拮抗剂以及一种或者多种促炎细胞因子例如IL-17A、IL-17F、IL-1β和TNF-α的拮抗剂。本文所使用的，IL-17A、IL-17F、IL-1β和TNF-α被统称为“急性期细胞因子”，这些细胞因子的拮抗剂被统称为“急性期治疗药剂”。在一个实施方案中，在使用本发明的方法和组合物进行治疗的开始，所述个体正经历免疫疾病症状的突发(flare-up)。

[0018]在一个方面中，本发明涉及治疗患有免疫疾病例如自身免疫性疾病的个体的方法，其包括为所述个体给药有效量的IL-23的拮抗剂以及选自IL-17A、IL-17F、IL-1β和TNF-α的促炎细胞因子的拮抗剂。这种给药两种或者更多种拮抗剂在本文中被称作联合治疗。

[0019]在一个实施方案中，一种或者多种拮抗剂结合细胞因子自身(例如IL-23、IL-17A、IL-17F、IL-1β或TNF-α)，而不是其受体。在另一个实施方案中，一种或者多种拮抗剂结合细胞因子受体。

[0020]在一个实施方案中，免疫病症是Th17响应的调节障碍，引起了IL-12介导的Th1肿瘤监视(surveillance)的抑制。在这些实施方案中，本发明的方法和组合物用于治疗患有癌症或肿瘤的个体。

[0021]在一个实施方案中，一种或者多种本发明的拮抗剂是抗体或其抗原结合片段。在各种实施方案中，抗体是嵌合、人源化或完全人抗体，抗原结合片段是嵌合、人源化或完全人抗体的片段。在各种实施方案中，片段选自Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)₂和双体(diabody).在一个实施方案中抗体或其抗原结合片段被PEG化。

[0022]在各种实施方案中，IL-23拮抗剂是拮抗抗体或其抗原结合片段，其结合IL-23p19或IL-23R。

[0023]在一个实施方案中，急性期治疗药剂是特异性结合选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子的抗体。在另一个实施方案中，急性期治疗药剂是特异性结合选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子的受体的抗体。

[0024]在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体或其抗原结合片段。在各种实施方案中，双特异性抗体结合并拮抗IL-23(例如IL-23p19)或IL-23受体(例如IL-23R)，并且还结合并拮抗急性期细胞因子或急性期细胞因子的受体。

[0025]在一个实施方案中，本发明涉及双特异性抗体或其抗原结合片段，其结合IL-23R和CD161。其他实施方案包括针对CD161和CD4、CD45RO、CCR4、CCR6、整联蛋白-β7、EP2、EP4、IL-1R1或TNF-α至少一种的双特异性试剂。在各种实施方案中，双特异性抗体还包括IgG1恒定结构域和/或毒性负载物(toxic payload)例如放射性核素或其他毒素。

[0026]在一个实施方案中，本发明涉及使用包括第一多肽和第二多肽的双特异性试剂的联合治疗，其中所述第一多肽包括IL-1ra或可溶性TNF-α受体片段，所述第二多肽包括结合IL-23、IL-23R、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC的抗体的抗原结合片段。在一个实施方案中，第一和第二多肽的每一种都融合到抗体Fc结构域。

[0027]在另一个实施方案中，本发明涉及选自IL-23、IL-1β和PGE2或单独PGE2或其激动剂的联合用于体外产生致病性哺乳动物Th17细胞，例如哺乳动物如小鼠或人。在某些实施方案中，在存在两种或者更多种选自IL-23、IL-1β和PGE2的两种或者多种药剂(例如PGE2加IL-23或IL-1β)或者仅存在PGE2时，培养T细胞(例如幼稚(naive)CD4⁺T细胞)。在进一步的实施方案中，本发明涉及筛选用于治疗由Th17介导的病症的化合物的方法，其中所述方法包括通过在存在选自IL-23、IL-1β和PGE2的两种或者更多种药剂时培养T细胞(例如幼稚CD4⁺T细胞)体外产生致病性Th17细胞，将所述细胞暴露于一种或者多种潜在的治疗性化合物，以及评估这些化合物对所述Th17细胞的影响。在一个实施方案中，所述评估是通过测量选自IL-17A、IL-17F、IL-10、IL-22和IFN-γ的两种或者更多种细胞因子的表达水平。抑制Th17细胞的产生或维持(例如通过降低IL-17A或IL-17F的表达)的化合物，将被认为是可能的治疗药剂。

[0028]在另一个实施方案中，本发明涉及选自IL-23、IL-1β和PGE2的拮抗剂的两种或者更多种药剂用于治疗自身免疫性或增殖性病症的应用，其中所述拮抗剂包括任何它们各自受体或受体亚基的拮抗剂。在一个实施方案中，所述两种或者更多种药剂是作为一种试剂出现的，例如双功能试剂(例如蛋白质)或者双特异性抗体(或其抗原结合片段)。在某些实施方案中，自身免疫性或增殖性疾病是由致病性Th17细胞造成的。在某些实施方案中，在发炎的位置(或附近)局部给药这些药剂，而在其他实施方案中，则系统性给药这些药剂，例如口服或肠胃外。

[0029]在另一个实施方案中，本发明涉及组合物用于治疗自身免疫性病症或增殖病症的应用，其中所述组合物包括两种或者更多种选自IL-23、IL-1β和PGE2的拮抗剂的药剂的联合，包括任何它们各自的受体或受体亚基的拮抗剂。在某些实施方案中，PGE2的拮抗剂是环加氧酶(COX)抑制剂。在其他实施方案中，PGE2的拮抗剂是PGE2合成酶的特异性抑制剂。在某些实施方案中，组合物包括双功能试剂(例如蛋白质)或双特异性抗体(或其抗原结合片段)。

[0030]在另一个实施方案中，本发明涉及治疗自身免疫性疾病或增殖性病症的方法，其包括下列步骤：(任选地)检测个体中(例如在体液或组织样品中)致病性Th17细胞的水平，为所述个体给药本发明的组合物，以及(任选地)监控在给药所述组合物的过程中或者之后所述致病性Th17细胞的水平以确定治疗是否有效。在一个实施方案中，本发明的组合物包括两种或者更多种选自IL-23、IL-1β和PGE2的拮抗剂的药剂的联合，包括它们任何各自的受体或受体亚基的拮抗剂，其中这些拮抗剂任选地包括双功能试剂(例如蛋白质)、或双功能抗体(或其抗原结合片段)。在一个实施方案中，所述监控是通过测量选自IL-17A、IL-17F、IL-10、IL-22和IFN-γ的一种、两种、三种或更多种细胞因子的表达水平。在一个实施方案中，如果所述监控显示Th17细胞因子例如IL-17A或IL-17F的表达降低，则治疗被认为有效。

[0031]在一个实施方案中，本发明的方法进一步包括给药免疫抑制或抗炎剂，例如类固醇(或泼尼松(predinisone))和非类固醇抗炎剂。

[0032]在各种实施方案中，经由第一时间间隔，以一系列一种或多种剂量持续利用IL-23拮抗剂的治疗，以及经由第二时间间隔，以一系列一种或多种剂量持续利用急性期治疗药剂的治疗。在各种实施方案中，第一时间间隔基本上与第二时间间隔同时开始，有时在第二时间间隔过程中的后期，或者在第二时间间隔结束之后。在一个实施方案中，第一时间间隔延长超过第二时间间隔结束之后，即IL-23拮抗剂治疗持续到利用急性期治疗药剂治疗停止之后。在各种实施方案中，第二时间间隔在解决自身免疫性疾病突发的至少一种、两种或更多种症状之后结束。

[0033]在各种实施方案中，第一和第二时间间隔选自0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、18、24、36、48、60或更多个月。

[0034]在各种实施方案中，利用本发明的方法或组合物治疗的个体患有选自癌症、关节炎、类风湿性关节炎(RA)、牛皮癣、炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、I型糖尿病。

[0035]在另一个方面中，本发明涉及药物组合物，其包括IL-23的拮抗剂和急性期细胞因子例如IL-1β、TNF-α、IL-17A或IL-17的拮抗剂。在一个实施方案中，药物组合物进一步包括可药用的载体或稀释剂。在另一个实施方案中，本发明的药物组合物进一步包括免疫抑制剂或抗炎剂例如类固醇(例如泼尼松)和非类固醇抗炎剂。

[0036]在另一个方面中，本发明涉及IL-23的拮抗剂和急性期细胞因子的拮抗剂在制备药物中的应用，其中所述药物用于治疗免疫病症例如癌症、关节炎、RA、牛皮癣、炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、MS、SLE、I型糖尿病。

附图简述

[0037]图1A显示在来自正常人个体和来自克罗恩氏病患者的固有层单核细胞(LPMC)中CD161⁺CD4⁺CD45RO⁺T细胞的数目。图1B显示在荧光激活细胞分选术

纯化的来自正常人个体和来自克罗恩氏病患者的CD161⁺和CD161^-CD4⁺CD45RO⁺T细胞在与抗-CD2、抗-CD3、抗-CD28激活珠培养三天后，根据酶联免疫吸附测定(ELISA)测量的IL-17A表达。图1C显示在从克罗恩氏病直肠分离的CD4⁺CD45RO⁺记忆T细胞(Th_mem)中被分选为CD161⁺和CD161^-细胞的单核细胞中，通过定量实时反转录酶聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定的IL-23R、IL-17A、IL-22和IFN-γ相对mRNA表达水平。通过

流式细胞仪根据CD161表达对细胞进行分选。

[0038]图2A和2B分别显示在CD4⁺CD25^-CD45RA^-记忆T细胞中作为来自健康人供体外周血单核细胞(PBMC)CD161表达函数的基因表达和细胞因子产生。通过

流式细胞仪根据CD161对细胞进行分选。通过qRT-PCR测量在来自4名供体的样品中的基因表达。在与抗-CD2、抗-CD3、抗-CD28激活珠培养3天后，通过ELISA测量在来自至少3名供体的样品中细胞因子产生。

[0039]图3A和3B分别显示与IL-2、IL-12、IL-23、PGE2、IL-1β或(IL-1β+PGE2)培养的人外周血单核CD4⁺T淋巴细胞的IL-17A和IFN-γ的表达。

[0040]图4A和4B代表在利用T细胞激活珠激活幼稚人CD4⁺T细胞并在存在或不存在PGE2或特异性EP受体拮抗剂激动剂时培养的实验中获得的结果。图4A显示基于5次独立实验(平均值+标准误差.，***P＜0.001)，根据通过在再刺激48小时的T细胞中流式细胞仪定量IL-23R测量的，作为PGE2函数的IL-23R⁺细胞百分比。图4B显示基于两次独立实验的结果(平均值+标准误差.)，利用PGE2或特异性EP受体激动剂丁环前列素(EP2选择性激动剂)、米索前列醇(EP4，EP3＞EP1＞EP2非选择性激动剂)和磺前列酮(EP1/EP3选择性激动剂)处理的细胞的结果。

[0041]图5A、5B和5C表示在利用T细胞激活珠激活并在存在或不存在IL-23和IL-1β具有或没有PGE2或EP受体激动剂丁环前列素、米索前列醇和磺前列酮时培养的幼稚人CD4⁺T细胞中所获得的结果。图5A-5C中的数据分别反映在再刺激48小时的T细胞无细胞上清液中IL-17A、IFN-γ和IL-10的产生。每幅图中的结果都代表两次独立的实验。

[0042]图6A、6B和6C表示参考图5A-5C所描述而进行培养的人幼稚CD4⁺T细胞所获得的结果。图6A显示在再刺激48小时的T细胞中CCR6⁺的流式细胞仪定量。***P，0.001。结果表示9次独立实验的平均值+标准误差.。对于图6B和6C中所提供的数据，在存在IL-1β、IL-23和PGE2时，培养幼稚T细胞。在再激活后，将CD4⁺CCR6⁺和CD4⁺CCR6^-T细胞进行分选并在存在IL-2时培养7天。图6B显示在再刺激24小时的T细胞的无细胞上清液中IL-17A，IL-17F，IL-22和CCL20的产生。图6C显示在再刺激24小时的T细胞中ROR-γt，ROR-α和IL-23R表达的实时RT-PCR分析。图6B和6C每一幅图中的结果反映4次独立实验的结果。

[0043]图7A和7B表示利用激活的并在存在IL-23，IL-1β，和/或PGE2时培养3天的人记忆CD4⁺T细胞获得的结果。图7A显示如所描述的在无细胞上清液中IL-17A，IFN-γ和IL-10的产生。显示了来自9名独立供体的结果。图7B显示ROR-γt和T-bet基因表达的实时RT-PCR结果。显示了来自4名不同供体的结果。水平线代表中值(median)。

发明详述

[0044]所有本文的参考文献都通过参照并入本文，达到各个出版物、数据库条目(database entry)(例如Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利都被具体地且独立地指定通过参考并入本文的程度。在本文中引用这些参考文献并不是为了承认前述文献是相关的现有技术，而且这也并能够作为对这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。

I.定义

[0045]本文(包括所附的权利要求)所使用的单词的单数形式例如“一个”、“一种”和“该”都包括它们相应的复数形式，除非上下文以其他形式明确指出。

[0046]“成熟”蛋白或蛋白质的“成熟形式”是指从氨基末端除去信号肽序列后的序列。本文中所提供的蛋白质序列(例如参考基因数据库索取号(accession number))将通常是前蛋白(proproteins)或前体蛋白序列，其包含大约20个氨基酸的N-末端信号肽序列，该信号肽序列并没有出现在蛋白质的成熟形式中。

[0047]除非以其他方式说明，本文所使用的IL-17是指IL-17A。

[0048]除非以其他方式说明，本文所提到的蛋白质例如细胞因子是人的蛋白质形式。

[0049]“增殖活性”包括促进例如正常细胞分裂以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移和血管形成的活性，对于例如正常细胞分裂以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移和血管形成必要的活性，或者与例如正常细胞分裂以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移和血管形成特异性相关的活性。

[0050]“给药”和“治疗”当其用于动物、人、实验个体、细胞、组织、器官或生物液时，是指将外部药剂、治疗剂、诊断剂或组合物接触动物、人、个体、细胞、组织、器官或生物液。“给药”和“治疗”可以指例如治疗性、药物动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括将试剂与细胞接触，以及将试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。“给药”和“治疗”还意味着体外和离体(ex vivo)处理例如细胞，通过试剂、诊断、结合组合物或其他细胞。“治疗”当其用于人、兽医或研究个体时，是指治疗性处理、预防性或防止性措施，用于研究和诊断应用。“治疗”当其用于人、兽医或研究个体或细胞、组织或器官时，包括将药剂与动物个体、细胞、组织、生理区室或生理流体接触。“细胞的处理”还包括药剂接触靶例如IL-23受体的情况，例如在流体相或胶体相中，以及激动剂或拮抗剂不接触细胞或受体的情况。

[0051]“治疗”或“治疗”还可以指将治疗性药剂例如本文所描述的组合物内部或外部为需要此治疗性药剂的患者给药。典型地，将药剂以有效防止或缓解一种或者多种疾病症状、或者一种或者多种利用不同治疗药剂治疗的副作用的量给药，可以通过临床上可测量程度地防止产生、诱导衰退、或抑制这些症状或副作用的发展。有效缓解任何特定疾病症状或副作用的治疗药剂的量(也被称作“治疗有效量”)可以根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，治疗药剂在患者中引发期望响应的能力，患者的全面健康，给药的方法、路线和剂量，副作用的严重性。参见例如美国专利No.5,888,530。

[0052]可以通过医生或其他熟练的提供健康照护者所典型使用的任何临床措施测定是否疾病病症或副作用已经得到缓解，以测定症状或副作用的严重性或进展状态。在将治疗药剂为患有活跃性疾病的患者给药时，治疗有效量典型地导致所测量症状降低至少5％，通常降低至少10％，更通常降低至少20％，最通常降低至少30％，优选至少40％，更优选至少50％，最优选至少60％，理想地至少70％，更理想至少80％，最理想至少90％。参见例如Maynard等人.(1996)A Handbook of SOPs forGood Clinical Practice，Interpharm Press，Boca Raton，FL；Dent(2001)Good Laboratory and Good Clinical Practice，Urch Publ.，London，UK。

[0053]尽管本发明的实施方案(例如治疗方法或制品)可能不能够有效防止或缓解每个患者中的目标疾病症状或副作用，但其应该能够在以通过任何本领域已知的任何统计试验方法(例如学生t-检验(Student’s t-test)，χ²-检验(chi²-test)，根据Mann和Whitney的U-检验，克鲁斯卡尔-沃利斯(Kruskal-Wallis)检验(H-test)，Jonckheere-Terpstra-检验和威尔科克森(Wilcoxon)-检验)测定的统计学显著的患者数目中缓解这些症状或副作用。

[0054]本文所使用的“拮抗剂”是指任何降低靶分子活性的药剂。具体的细胞因子(例如IL-23、IL-17A、IL-17F、TNF-α或IL-1β)的拮抗剂是降低细胞因子生物活性的药剂，例如通过阻断细胞因子与其受体的结合，或者以其他方式降低其活性(例如根据在生物检验中测量的)。同样，细胞因子的拮抗剂包括任何降低细胞因子信号传递的药剂，因此可以包括结合细胞因子本身的药剂，以及结合其受体的药剂。拮抗剂还包括降低细胞因子或其受体表达的药剂，包括但不限于基于核酸的拮抗剂例如反义核酸和siRNA。参见例如Arenz和Schepers(2003)Naturwissenschaften 90：345-359；Sazani和Kole(2003)J.Clin.Invest.112：481-486；Pirollo等人.(2003)Pharmacol.Therapeutics 99：55-77；Wang等人.(2003)Antisense Nucl.Acid Drug Devel.13：169-189。

[0055]任选地作为一种细胞因子(例如IL-23)拮抗剂的药剂可以作为另一种细胞因子的拮抗剂，例如在双特异性抗体中。因此，涉及“联合治疗”的方法以及用于这类联合治疗的组合物不需要包含多种治疗药剂。

[0056]细胞因子拮抗剂包括但不限于以干扰细胞因子信号传递和下游活性的模式结合细胞因子(或其任何亚基)或其功能受体(或其任何亚基)的拮抗抗体、肽、肽模拟物(peptide-mimetics)、多肽和小分子。肽和多肽拮抗剂的例子包括细胞因子受体的截短版本或片段(例如可溶性胞外结构域)，其以降低能够结合其功能性受体的细胞因子的量的方式或者以其他方式防止细胞因子结合其功能性受体的模式结合细胞因子。

[0057]可以通过常规技术测量拮抗剂的抑制效果。例如，为了检验对细胞因子诱导的活性的抑制效果，利用细胞因子对表达细胞因子功能性受体的人细胞进行处理，并在存在或者不存在可能的拮抗剂时测量已知被细胞因子激活或抑制的基因的表达。与适当的对照相比，可以用于本发明的拮抗剂抑制靶活性至少25％，优选至少50％，更优选至少75％，最优选至少90％。

[0058]“结合化合物”是指能够结合靶的分子、小分子、大分子、多肽、抗体或其片段或类似物。“结合化合物”还可以指能够结合靶的分子的复合物例如非共价复合物，可以指离子化分子，以及可以指共价或非共价修饰的分子例如通过磷酸化、酰基化、交联、环化或有限切割修饰。在关于抗体使用时，术语“结合化合物”指抗体何其抗原结合片段二者。“结合”是指结合组合物与靶的缔合，其中缔合导致结合组合物正常布朗运动的降低，假设其中结合组合物可以溶解或悬浮在溶液中。“结合组合物”是指结合化合物联合稳定剂、赋形剂、盐、缓冲液、溶剂或添加剂。

[0059]“小分子”定义为分子量小于10kDa的分子，典型地小于2kDa和优选小于1kDa。小分子包括但不限于无机分子、有机分子、包含无机组分的有机分子、包括放射性原子的分子、合成分子肽模拟物和抗体模拟物。作为治疗剂，与大分子相比，小分子对细胞可能是更可透的，不太易于分解，以及不太倾向于引起免疫反应。描述了小分子如抗体和细胞因子的肽模拟物，以及小分子毒素。参见例如，Casset等人.(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307：198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74：277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.18：1251-1256；Apostolopoulos等人.(2002)Curr.Med.Chem.9：411-420；Monfardini等人.(2002)Curr.Pharm.Des.8：2185-2199；Domingues等人.(1999)Nat.Struct.Biol.6：652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.371：603-608；美国专利No.6,326,482。

[0060]如本文中使用的，术语“抗体”是指显示期望生物活性的任何形式的抗体。因此、它以广义使用，并具体地覆盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性(multispecific)抗体(例如双特异性抗体)、嵌合抗体、人源化抗体、完全人抗体等等，只要它们显示期望的生物活性。拮抗抗体的生物活性包括抑制细胞因子结合到它的受体，或抑制细胞因子诱导通过受体的信号传递。

[0061]在本发明中使用的抗体通常以至少大约10^-3M的K_d，更通常至少10^-6M，典型地至少10^-7M，更典型地至少10^-8M，优选至少大约10^-9M，更优选至少10^-10M，最优选至少10^-11M的K_d结合。参见例如Presta等人.(2001)Thromb.Haemost.85：379-389；Yang等人.(2001)Crit.Rev.Oncol.Hematol.38：17-23；Carnahan等人.(2003)Clin.Cancer Res.(Suppl.)9：3982s-3990s。

[0062]“特异性”或“选择性”结合，当关于配体/受体、抗体/抗原或其它结合对时，表示决定在蛋白质及其他生物制剂的异源群体中存在蛋白质的结合反应。因此，在指定的条件下，特定的配体结合到特定的受体并且不会以显著的量结合到样品中存在的其它蛋白质。如本文中使用的，如果抗体结合包括IL-23p19序列的多肽，但是不结合缺乏IL-23p19序列的多肽，则该抗体被认为特异性结合包含给定序列的多肽(例如IL-23p19)。例如，特异性结合包括IL-23p19的多肽，抗体可能结合

-标签形式的IL-23p19，但不会结合其他

-标签蛋白质。

[0063]除非另有陈述，IL-23的拮抗剂是指IL-23特异性拮抗剂。尽管存在它们共有的细胞因子和受体亚基，但IL-23特异性拮抗剂不会拮抗IL-12。IL-23特异性拮抗剂包括结合IL-23和/或IL-23受体的药剂，包括但不限于结合IL-23p19和IL-23R的药剂。拮抗IL-23和IL-12二者的药剂在本文中被称作“IL-12/IL-23拮抗剂”。这类IL-12/IL-23拮抗剂包括但不限于结合作为共有亚基的IL-12p40和IL-12Rβ1的药剂。

[0064]所设计方法的抗体或从抗体的抗原结合位点衍生的结合组合物会结合其抗原，其亲和力是与无关抗原亲和力的至少两倍、优选至少10倍、更优选至少20倍、最优选至少100倍。在优选实施方案中，例如根据斯卡查德分析(Scatchard analysis)测定的，抗体将具有高于大约10⁹升/摩尔的亲和力。Munsen等人.(1980)Analyt.Biochem.107：220-239。

[0065]本文所使用的术语“单克隆抗体”是指从一群基本上均一的抗体获得的抗体，即各个抗体包含除了可能天然存在的突变(可以以少量存在)外一致的群体。单克隆抗体是高度特异性的，其针对单一抗原表位。相反，传统的(多克隆)抗体制剂典型地包括大量针对(或对其特异性)不同表位的抗体。修饰词“单克隆”表示抗体是从基本均一的抗体群获得的抗体特征，而不应认为需要通过任何特定的方法生产该抗体。例如，在本发明中所使用的单克隆抗体可以通过首先由Kohler等人.(1975)Nature 256：495描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过重组DNA方法制备(参见例如美国专利No.4,816,567)。“单克隆抗体”也可以从噬菌体抗体文库分离，例如使用在Clackson等人.(1991)Nature352：624-628和Marks等人.(1991)J.Mol.Biol.222：581-597中描述的技术。

[0066]本文的单克隆抗体具体地包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类型或亚类的抗体中的相应序列一致或同源，而链的其余部分与来自其他物种或属于其他抗体类型或亚类的抗体中的相应序列以及这些抗体的片段一致或同源，只要它们表现出期望的生物学活性。美国专利No.4,816,567；Morrison等人.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855。

[0067]本文所使用的术语“人源化抗体”是指含有非人(如鼠科)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。这些抗体含有最少的来自非人免疫球蛋白的序列。通常，人源化抗体将基本上包含至少一个，典型地两个可变结构域，其中高变环的全部或基本上全部对应非人免疫球蛋白的那些，全部或基本上全部FR区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体任选地还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，典型地是人免疫球蛋白的恒定区。人源化形式的啮齿目动物抗体通常包含与亲本抗体相同的CDR序列，尽管可以包括某些氨基酸置换以提高人源化抗体的稳定性，或者为了其他原因。

[0068]术语“抗体”还包括“完全人”抗体，即仅仅包括人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。完全人抗体可以含有鼠科糖链，如果在小鼠、小鼠细胞、或者在衍生自小鼠细胞的杂交瘤中产生的话。类似的，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”是指分别仅仅包括小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。完全人抗体可以在人、具有人免疫球蛋白生殖系序列的转基因动物中产生，通过噬菌体展示或其他分子生物学方法产生。同样，也可以在转基因小鼠中制备重组免疫球蛋白。参见Mendez等人.(1997)Nature Genetics 15：146-156。还可参见Abgenix and Medarextechnologies。

[0069]本发明的抗体还可以包括具有被修饰(或阻断)的Fc区以提供改变的效应子功能的抗体。参见美国专利No.5,624,821；WO 2003/086310；WO 2005/120571；WO 2006/0057702；Presta(2006)Adv.Drug Delivery Rev.58：640-656。这些修饰可以用于增强或者抑制免疫系统的各种反应，在诊断和治疗中有可能的有益效果。Fc区的改变包括氨基酸变化(置换、缺失和插入)、糖基化或去糖基化以及增加多个Fc。Fc的改变还能够改变治疗性抗体中抗体的半衰期，较长的半衰期会达到给药不必太频繁，同时提高了便利和减少了材料的使用。参见Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116：731 at 734-35。

[0070]本发明的抗体还包括具有完整Fc区的抗体，其提供完整的效应子功能例如同工型IgG1的抗体，其诱导在靶细胞中补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

[0071]抗体还可以被缀合(例如共价连接)到在存储过程中提高抗体稳定性或提高体内抗体半衰期的分子。提高半衰期的分子的例子是白蛋白(例如人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。可以使用本领域中公知的方法制备白蛋白连接和PEG化的抗体衍生物。参见，例如Chapman(2002)Adv.Drug Deliv.Rev.54：531-545；Anderson和Tomasi(1988)J.Immunol.Methods 109：37-42；Suzuki等人.(1984)Biochim.Biophys.Acta 788：248-255；和Brekke和Sandlie(2003)Nature Rev.2：52-62。

[0072]本文所使用的，术语“结合片段”或“抗原结合片段”包括抗体的片段或衍生物，其仍基本上保持其生物学活性，例如抑制通过细胞因子受体的细胞因子信号传递。术语“抗体片段”是指全长抗体的一部分，通常是其抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)₂和Fv片段；双体(diabodies)；线性抗体(linear antibodies)；单链抗体分子例如sc-Fv；和从抗体片段形成的多特异性抗体。典型地，结合片段或衍生物保持其抑制活性的至少10％。优选，结合片段或衍生物保持其抑制活性的至少25％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％(或更多)，尽管任何具有充分亲和力以提供期望生物学效果的结合片段都可以使用。还提出抗体结合片段可以包括具有基本上改变其生物学活性的保守氨基酸置换的变体。

[0073]“Fab片段”是由一条轻链和一条重链的C_H1和可变区构成的。Fab分子的重链不能够与另一条重链分子形成二硫键。

[0074]“Fc”区含有两个重链片段，其包括抗体的C_H1和C_H2结构域。这两个重链片段被两个或者更多个二硫键以及C_H3结构域的疏水相互作用连在一起。

[0075]“Fab′片段”含有一条轻链和一条重链含有V_H结构域和C_H1结构域的部分以及还有C_H1和C_H2结构域之间的区，以便在两个Fab′片段之间可以形成链间二硫键以形成F(ab′)₂分子。

[0076]“F(ab′)₂片段”含有两条轻链和两条重链其含有C_H1和C_H2之间的恒定区部分，以便在两条重链之间形成链间二硫键。因此，F(ab′)₂片段是由通过两条重链之间的二硫键连接在一起的两个Fab′片段构成的。

[0077]“Fv区”包括来自重链和轻链二者的可变区，但缺少恒定区。

[0078]“单链Fv抗体”(或″scFv抗体”)是指包含抗体的V_H和V_L结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单条多肽链中。通常，Fv多肽还包括在V_H和V_L结构域之间的多肽接头，这使得scFv能够形成期望的结构用于抗原结合。关于scFv的综述，参见Pluckthun(1994)THEPHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES，vol.113，Rosenburg和Moore eds.Springer-Verlag，New York，pp.269-315。还可见WO 88/01649和美国专利No.4,946,778和5,260,203。这些scFv多肽可以任选地与Fc区连接已形成scFv-Fc构建体。参见例如Powers等人.(2001)J.Immunol.Methods 251：123。

[0079]“二体”是一种小抗体片段，具有两个抗原结合位点，这些片段包含以相同的多肽链(V_H-V_L或V_L-V_H)连接到轻链可变结构域(V_L)的重链可变结构域(V_H)。通过利用太短而不会使得相同链上的两个结构域之间形成配对的接头，这些结构域被迫与另一条链的互补结构域配对，并且形成两个抗原结合位点。二体被更充分地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；和Holliger等人.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448。关于工程抗体变体的综述通常参见Holliger和Hudson(2005)Nat.Biotechnol.23：1126-1136。

[0080]“结构域抗体片段”是免疫学功能性免疫球蛋白片段，其仅含有重链的可变区或者轻链的可变区。在某些情况中，两个或者更多个V_H区与肽接头共价连接以形成双价结构域抗体片段。双价结构域抗体片段的两个V_H区可以靶向相同或不同的抗原。

[0081]“双价抗体”包括两个抗原结合位点。在某些情况中，这两个结合位点具有相同的抗原特异性。然而，双价抗体可以是双特异性的(见下)。

[0082]本文的单克隆抗体还包括骆驼化单结构域抗体(camelizedsingle domain antibodies)。参见Muyldermans等人.(2001)TrendsBiochem.Sci.26：230；Reichmann等人.(1999)J.Immunol.Methods 231：25；WO 94/04678；WO 94/25591；美国专利No.6,005,079)。在一个实施方案中，本发明提供了单结构域抗体，其包括两个具有修饰的VH结构域，以便形成单结构域抗体。

[0083]双特异性抗体也可以用于本发明的方法和组合物。本文所使用的术语“双特异性抗体”是指一种抗体，典型地是单克隆抗体，其具有对于至少两种不同抗原表位的结合特异性。在一个实施方案中，表位来自相同的抗原。在另一个实施方案中，表位来自两种不同的抗原。制备双特异性抗体的方法是本领域中已知的。例如，可以使用共表达两种免疫球蛋白重链/轻链对重组产生双特异性抗体。参见例如Milstein等人.(1983)Nature 305：537-39。可替换的，可以使用化学键制备双特异性抗体。参见例如Brennan等人.(1985)Science 229：81。双特异性抗体包括双特异性抗体片段。参见例如Holliger等人.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6444-48，Gruber等人.(1994)J.Immunol.152：5368。可能的双特异性抗体片段包括二体、Bis-scFv、双价结构域抗体片段、Fab₂、甚至Fab₃片段(其可能是三特异性)(参见Holliger和Hudson(2005)Nat.Biotechnol.23：1126)和Bis-scFv-Fc。双特异性抗体还包括双可变结构域免疫球蛋白例如在美国专利申请公开No.2005/0071675中所公开的那些。

[0084]本发明的抗体还包括缀合到细胞毒性有效载荷(payloads)例如细胞毒性剂或放射性核素的抗体或其片段。这些抗体缀合物可以用于免疫治疗以选择性靶向并杀死在他们表面表达靶(该抗体的抗原)的细胞。示范性的细胞毒性剂包括蓖麻毒、长春花生物碱、甲氨蝶呤、假单胞菌属(Psuedomonas)外毒素、皂草素、白喉毒素、顺铂、多柔比星、相思豆毒蛋白毒素、白树毒素(gelonin)和商陆属(pokeweed)抗病毒蛋白。用于利用本发明抗体的免疫治疗的示范性放射性核素包括¹²⁵I、¹³¹I、⁹⁰Y、⁶⁷Cu、²¹¹At、¹⁷⁷Lu、¹⁴³pr和²¹³Bi。参见例如美国专利申请公开No.2006/0014225。

[0085]“免疫症状”或“免疫病症”包括例如炎性病症和自身免疫性病症或疾病。“免疫症状”还指感染、持续感染和增殖性症状例如癌症、肿瘤和血管生成抵抗免疫系统除去的感染、肿瘤和癌症。“癌症病症”包括例如癌症、癌细胞、肿瘤、血管生成和癌症前期症状例如发育异常。

[0086]“炎性病症”的意思是一种病症或病理症状，其全部或部分由于例如免疫系统细胞的数目变化、迁移速度变化或激活的变化。免疫系统的细胞包括例如T细胞、B细胞、单核细胞或巨噬细胞、抗原呈递细胞(APC)、树突细胞、小胶质细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞或任何其他与免疫学特异性相关的细胞，例如产生细胞因子的内皮细胞或上皮细胞。

[0087]“产生IL-17的细胞”的意思是一种T细胞，即不是典型的TH1型T细胞也不是典型的TH2型T细胞，而是指Th17细胞。Th17细胞被更详细地讨论于Cua和Kastelein(2006)Nat.Immunol.7：557-559；Tato和O’Shea(2006)Nature 441：166-168；Iwakura和Ishigame(2006)J.Clin.Invest.116：1218-1222。“产生IL-17的细胞”还包括表达美国专利申请公开No.2004/0219150表10B的基因或多肽的T细胞(例如丝裂原响应P蛋白；趋化因子配体2；白介素-17(IL-17)；转录因子RAR相关；和/或细胞因子信号传递3的抑制剂)；其中利用IL-23激动剂处理的表达大于利用IL-12激动剂的处理，其中“大于”是如下所定义的。利用IL-23激动剂的表达通常是利用IL-12处理的至少5倍、典型地至少10倍、更典型地至少15倍、最典型地至少20倍、优选至少25被一击最优选至少30倍。可以测量表达，例如利用一群基本上纯的产生IL-17的细胞的处理。Th17响应是一种免疫响应，其中Th17细胞的活性和/或增殖被增强，典型地与被抑制的Th1响应相关。

[0088]此外，“产生IL-17的细胞”包括在细胞产生或细胞分化中执行分化成上述产生IL-17的细胞的祖细胞或前体细胞。产生IL-17的细胞的祖细胞或前体细胞可以发现于引流淋巴结(DLN)。另外，“产生IL-17的细胞”包括上述产生IL-17的细胞，其已经被例如激活(通过例如佛波酯、离子载体和/或致癌物)、进一步分化、存储、冷冻、制粉、灭活、部分降解例如通过细胞凋亡、蛋白质水解或脂类氧化、或者修饰(例如通过重组技术)。

[0089]本文所使用的术语“分离的核酸分子”是指从从至少一种污染核酸分子鉴定和分开的核酸分子，其中所述污染核酸分子通常与抗体核酸的天然来源相关。分离的核酸分子以不同于其在自然界中发现的形式或环境。因此，分离的核酸分子不同于其在自然细胞中存在时的核酸分子。然而，分离的核酸分子包括在通常表达抗体的细胞中所包含的核酸分子，其中在所述细胞中核酸分子是在与自然细胞不同的染色体位置。

[0090]本文所使用的术语“免疫调控剂”是指天然的或合成的药剂，其抑制或调控免疫响应。免疫相应可以是体液响应或细胞响应。免疫调控剂包括免疫抑制剂或抗炎剂。

[0091]本文所使用的“免疫抑制剂”“免疫抑制剂”或“免疫抑制物(immunosuppressant)”是在免疫抑制治疗中用于抑制或防止免疫系统活性的治疗剂。临床上，它们用于防止移植器官和组织(例如骨髓、心脏、肾、肝)的排异，和/或治疗自身免疫性疾病或者很有可能是自身免疫性原因的疾病(例如类风湿性关节炎、重症肌无力、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、多发性硬化症)。免疫抑制剂可以被分类成四组：糖皮质激素细胞抑制剂；抗体(包括生物响应调节剂或DMARDs)；对亲免素(immunophilin)作用的药剂；其他药剂包括用于治疗增殖性病症的已知化学治疗剂。特别的，对于多发性硬化症，本发明的抗体可以结合一类新的髓磷脂结合蛋白类治疗剂(称作克帕松(copaxones))结合给药。

[0092]“抗炎剂”或“抗炎药”被用于表示类固醇和非类固醇治疗剂。类固醇也被称作皮质甾类，其实紧密类似皮质醇(一种肾上腺自然产生的激素)的药剂。类固醇主要用作某些炎性症状的治疗，例如系统性血管炎(血管的发炎)；和肌炎(肌肉的发炎)。类固醇也可以选择性地用于治疗炎性症状例如：类风湿性关节炎(在身体两侧的关节上发生的慢性炎性关节炎)；系统性红斑狼疮(由于异常免疫系统功能造成的普遍疾病)；斯耶格伦氏综合征(

syndrome)(造成干眼和口腔干燥的慢性病症)。

[0093]非类固醇抗炎剂通常缩写成NSAID是具有止痛、退热和抗炎的效果，它们减少疼痛、发热和发炎。术语“非类固醇”用于将这些药剂区别于类固醇，其(在宽范围的其他效果中)具有类似的类二十烷酸抑制、抗炎作用。NSAID通常指下列病症的症状缓解：类风湿性关节炎；骨关节炎；炎性关节病(例如强直性脊柱炎、牛皮癣关节炎、赖特尔氏综合征)；急性痛风；痛经；转移性骨痛(metastatic bone pain)；头痛和偏头痛；术后疼痛；由于发炎和组织损伤的轻微至中度疼痛；发热；和肾绞痛。NSAID包括水杨酸盐、芳基烷酸类(arlyalknoic acids)、2-芳基丙酸(普鲁芬(profens))、N-芳基邻氨基苯甲酸(灭酸)、昔康(oxicams)、昔布(coxibs)和磺苯胺。

[0094]除非以其他方式说明，“白介素-17”(或“IL-17，”或“IL-17A”)的意思是由一条或两条肽链构成的蛋白质，其中每条链基本上由人IL-17A成熟形式的序列构成，其中所述人IL-17A成熟形式如在任何NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_002181，AAH67505，AAH67503，AAH67504，AAH66251，AAH66252中所描述的或者其自然存在的变体。“白介素-17F”(or“IL-17F”)的意思是一条或两条多肽链构成的蛋白质，其中每条链基本上由在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_443104.1所描述的人IL-17F成熟形式的序列构成。

[0095]“IL-17R”或“IL-17RA”的意思是单条多肽链，其基本上由在WO 96/29408或任何NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_055154，Q96F46，CAJ86450或者其自然存在的变体所描述的人IL-17R成熟形式的序列构成。

[0096]“IL-17RC”的意思是单条多肽链，其基本上由在WO02/38764或任何NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_703191，NP_703190和NP_116121或者其自然存在的变体所描述的人IL-17RC成熟形式的序列构成。

[0097]“IL-17受体”的意思是IL-17RA，IL-17RC或其他IL-17受体亚基或者两个这些受体亚基(同型二聚体或异二聚体)的二聚体。

[0098]“白介素-23(或“IL-23”)的意思是由两个多肽亚基p19和p40构成的蛋白质。在任何NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_057668，AAH67511，AAH66267，AAH66268，AAH66269，AAH667512，AAH67513或自然存在的这些序列的变体中提供了p19亚基(也被称作IL-23p19，IL23A)的序列。在任何NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_002178，P29460，AAG32620，AAH74723，AAH67502，AAH67499，AAH67498，AAH67501或自然存在的这些序列的变体中提供了p40亚基(也被称作IL-12p40，IL12B)的序列。

[0099]“白介素-23R”或″IL-23R”的意思是单条多肽链，其基本上由在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_653302(IL23R，Gene ID：149233)或其自然存在的变体中所描述的成熟形式的人IL-23R的序列构成。其余IL-23R序列变体公开在中WO 01/23556和WO 02/29060。

[00100]“白介素-12Rβ1”或“IL-12Rβ1”的意思是单条多肽链，其基本上由在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_714912，NP_005526(IL12RB1，Gene ID：35p4)或其自然存在的变体中所描述的成熟形式的人IL-12Rβ1的序列构成。

[00101]“TNF-α”的意思是单条多肽链，其基本上由在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_000585(TNF，Gene ID：7124)或其自然存在的变体的成熟形式的人TNF-α的序列构成。

[00102]“TNF-α受体”是指在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_001056)中描述的成熟形式的肿瘤坏死因子受体1前体(TNFRSF1A，Gene ID：7132)，或者在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_001057)中描述的肿瘤坏死因子受体2前体(TNFRSF1B，Gene IDNo：7133)，或其自然存在的变体。

[00103]“白介素-1β”或″IL-1β”的意思是单条多肽链，其基本上由在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_000567(IL1B，Gene ID：3553)或其自然存在的变体中描述的成熟形式的人IL-1β的序列构成。

[00104]“白介素-1β受体”的意思是单条多肽链，其基本上由在NCBI蛋白质序列数据库索取号NP_000868(IL1R1，Gene ID：3554)或其自然存在的变体中描述的成熟形式的人IL-1β受体I型前体的序列构成。

[00105]“CD161”是指在美国专利No.5,965,401中公开的NK细胞表面抗原。该蛋白质也被称作例如KLRB1和NKRP1A。参见GeneID 3820。CD161的氨基酸序列可得于GenBank(NCBI)索取号NP_002249。

[00106]“PGE2”是指前列腺素E2。“PGE2拮抗剂”是指任何通过任何机制(例如阻断PGE2合成或抑制PGE2结合到其受体)而抑制PGE2活性的药剂。

[00107]短语“基本上由...构成”或其变型如“基本上由...组成”或“由....构成”在整篇说明书和权利要求书中使用时，表示包括所有提到的元素或元素的组，以及任何包括其他元素(性质与所提到的元素类似或不同)，其不会实质性地改变所限定的给药方案、方法或组合物的基础或新型的性质。作为非限制性例子，基本上由所提到氨基酸序列构成的结合化合物还可以包括一个或者多个氨基酸，包括一个或者多个氨基酸残基的指环，其不会实质性地影响结合化合物的性质。

II.免疫病症的联合治疗

[00108]本发明提供了组合物和方法用于治疗患有免疫病症例如自身免疫性疾病的个体，其包括与IL-23的拮抗剂以及至少一种其他促炎细胞因子例如IL-17A、IL-17F、TNF-α和IL-1β得拮抗剂的联合治疗。

[00109]许多细胞因子都在神经病症的病理学或修复中发挥作用。IL-6、IL-17、干扰素-γ(IFNγ、IFN-γ)和粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)已经与多发性硬化症相关。Matusevicius等人.(1999)Multiple Sclerosis5：101-104；Lock等人.(2002)Nature Med.8：500-508。IL-1α、IL-1β和转化生长因子-β1(TGF-β1)在ALS、帕金森病和阿尔茨海默病中发挥作用。Hoozemans等人.(2001)Exp.Gerontol.36：559-570；Griffin和Mrak(2002)J.Leukocyte Biol.72：233-238；Ilzecka等人.(2002)Cytokine 20：239-243。TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-8，IFN-γ和IL-17似乎会调控对脑部缺血的响应。参见例如Kostulas等人.(1999)Stroke 30：2174-2179；Li等人.(2001)J.Neuroimmunol.116：5-14.Vascular endothelial cellgrowth factor(VEGF)is associated with ALS.Cleveland和Rothstein(2001)Nature 2：806-819。

[00110]炎性肠病例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻和肠易激综合征是由免疫系统的细胞以及由细胞因子调节的。例如克罗恩氏病与提高的IL-12和IFN相关，而溃疡性结肠炎与提高的IL-5，IL-13和TGF-β相关。IL-17表达也可以在克罗恩氏病和溃疡性结肠炎中提高。参见例如Podolsky(2002)New Engl.J.Med.347：417-429；Bouma和Strober(2003)Nat.Rev.Immunol.3：521-533；Bhan等人.(1999)Immunol.Rev.169：195-207；Hanauer(1996)New Engl.J.Med.334：841-848；Green(2003)The Lancet 362：383-391；McManus(2003)New Engl.J.Med.348：2573-2574；Horwitz和Fisher(2001)New Engl.J.Med.344：1846-1850；Andoh等人.(2002)Int.J.Mol.Med.10：631-634；Nielsen等人.(2003)Scand.J.Gastroenterol.38：180-185；Fujino等人.(2003)Gut52：65-70。

[00111]皮肤、关节、CNS的炎性疾病以及增殖性病症引起类似的响应，因此IL-23/IL-23R阻断应该证明可以用于治疗许多免疫介导的炎性病症例如炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、牛皮癣、特应性皮炎、多发性硬化症、I型糖尿病和SLE。IL-23/IL-23R抑制剂还会在治疗增殖性病症中发现用途，例如癌症和肿瘤。IL-23在各种病症中的描述可见于下列公开的PCT申请：WO04/081190；WO 04/071517；WO 00/53631；和WO 01/18051。IL-23/IL-23R抑制剂还可以在治疗感染中发现用途包括慢性感染例如细菌、分支杆菌、病毒和真菌感染。

[00112]IL-23在Th17细胞的产生中发挥了重要作用，其目前已经涉及许多自身免疫性疾病的发病机理。Th17细胞在许多自身免疫性病症的发病机理的作用暗示，IL-23是各种促炎效应细胞因子例如IL-17，TNF-α和IL-1β的“上游”。IL-23被称作是“上游”，在于其主要参与引起疾病的免疫响应开始的早期事件，而不是后续的响应的效应(急性)期。参见例如Thakker等人.(2007)J.Immunol.178：2589。这些后面的急性期细胞因子产生了局部炎症，这引起了与疾病复发相关的征状和症状。相反，IL-23似乎对于Th17细胞的存活和增殖更重要。对于在本发明的方法和组合物的某些实施方案中所研究的异常炎性响应中的各种细胞因子，存在生物学作用的差异。

[00113]在某些实施方案中，本发明的方法和组合物在治疗的早期为患有免疫病症如自身免疫性疾病的个体给药急性期细胞因子(例如IL-17A、IL-17F、TNF-α和IL-1β)的拮抗剂，以快速减少疾病的征状和症状。急性期细胞因子的拮抗剂在本文中为方便被称作“急性期治疗剂”。在一个实施方案中，使用多种急性期治疗剂。典型地，在开始利用急性期治疗剂治疗时，个体将正经历复发。这种起始治疗与给药IL-23的拮抗剂结合，其任选地在利用急性期治疗进行治疗的同时或者过程中开始，并持续到给药急性期治疗剂已经中止之后。然而，急性期治疗剂是为了提供相对快速缓解征状和症状，IL-23拮抗剂主要是为了减少在将来复发时征状和症状再现的可能性。尽管，在解决了疾病的一种、两种或者全部症状之后，可以不再需要急性期治疗剂，但即使在无症状的患者中也可以需要IL-23拮抗剂的治疗以防止旧病复发。治疗剂和它们给药的各自时机的具体组合提供了用于自身免疫性疾病特别是具有复发缓解特征的那些的复杂的疾病管理方案。

[00114]可以用于本发明的拮抗剂包括可溶性的手提，其包括IL-17A，IL-17F，TNF-α，IL-1β或IL-23功能受体的胞外结构域。可以根据标准方法制备和使用可溶性受体。参见例如Jones等人.(2002)Biochim.Biophys.Acta 1592：251-263；Prudhomme等人.(2001)ExpertOpinion Biol.Ther.1：359-373；Fernandez-Botran(1999)Crit.Rev.Clin.Lab Sci.36：165-224。

[00115]优选的IL-23拮抗剂是抗体其结合并抑制任何IL-23、IL-23p19、IL-12p40、IL-23R、IL-12Rβ1和IL-23R/IL-12Rβ1复合物的活性。另一种优选的IL-23拮抗剂是IL-23结合多肽，其基本上由IL-23R的胞外区构成，例如GenBankAAM44229的氨基酸1-353或其片段。

[00116]本发明的IL-23拮抗剂例如抑制性IL-23p19和IL-23R-特异性抗体，其能够以任何模式抑制IL-23的生物学活性，包括但不限于通过可能的巨噬细胞减少IL-1和TNF-α的产生，以及通过Th17细胞减少IL-17的产生。参见Langrish等人.(2004)Immunol.Rev.202：96-105。IL-23拮抗剂还能够抑制IL-17A，IL-17F，CCL7，CCL17，CCL20，CCL22，CCR1和GM-CSF的基因表达。参见Langrish等人.(2005)J.Exp.Med.201：233-240。IL-23拮抗剂还能够阻断IL-23增强Th17细胞增殖或存活的能力。Cua和Kastelein(2006)Nat.Immunol.7：557-559。IL-23拮抗剂的抑制活性将可以用于用于治疗炎症、自身免疫性和增殖性病症。这些病症的例子描述于PCT专利申请公开WO 04/081190；WO 04/071517；WO 00/53631；和WO 01/18051。在后面的实施例2和3中提供了用于测定IL-23活性的示范性检验。针对IL-23p19的示范性抗体公开与PCT专利申请公开WO 2007/024846，美国专利申请公开Nos.2007/0009526和2007/0048315以及共同转让的未决的美国专利申请Nos.60/891,413和60/891,409中。IL-23的拮抗剂还包括适体(aptamer)，如在美国专利申请No.2006/0193821中所公开的。IL-23的其他核酸抑制剂包括反义多核苷酸和siRNA分子，例如在美国专利申请公开No.2005/0261219中所公开的。其他抗-IL-23抗体公开于美国专利申请公开No.2006/0067936。减少IL-23产生的化合物公开于美国专利申请公开No.2006/0135518。

[00117]用于本发明的优选IL-17拮抗剂是特异性结合并抑制任何IL-17、IL-17RA、IL-17RC和包括IL-17RA和IL-17RC的杂聚复合物活性的抗体。更优选，IL-17拮抗剂的靶是IL-17或IL-17RA。特别优选的IL-17拮抗剂特异性地结合并抑制IL-17的活性。IL-17A的示范性抗体公开于WO 2006/013107和WO 2008/021156。

[00118]用于本发明的优选TNF-α拮抗剂是特异性结合并抑制TNF-α或其受体活性的抗体。示范性的抗-TNF-α抗体可以作为英夫单抗(infliximab)、依那西普(etanercept)和阿达木单抗(adalimumab)而获得。

[00119]用于本发明的优选IL-1β是特异性结合并抑制IL-1β或其受体活性的抗体。示范性的IL-1β抗体包括CDP 484(PEG化抗-IL-1β片段)以及公开于美国专利申请公开No.2003/0124617的抗体。IL-1β拮抗剂还包括IL-1受体拮抗剂阿那白滞素(

IL-1受体拮抗剂)。这些药剂已经被发现可以用于治疗类风湿性关节炎。Gabay和Arend(1998)SpringerSemin.Immunopathol.20：229。

[00120]用于本发明的另一种优选IL-23拮抗剂是双特异性抗体或其双特异性抗体片段，其还会拮抗选自IL-17A，IL-17F，TNF-α和IL-1β的细胞因子的活性。这些双特异性拮抗剂特异性结合并抑制下列组合：IL-17和IL-23；IL-17和IL-23p19；IL-17和IL-12p40；IL-17和IL-23R/IL-12RB1复合物；IL-17和IL-23R；IL-17和IL-12RB1；IL-17RA和IL-23；IL-17RA和IL-23p19；IL-17RA和IL-12p40；IL-17RA和IL-23R/IL-12RB1复合物；IL-17RA和IL-23R；IL-17RA和IL-12RB1；IL-17RC和IL-23；IL-17RC和IL-23p19；IL-17RC和IL-12p40；IL-17RC和IL-23R/IL-12RB1复合物；IL-17RC和IL-23R；IL-17RC和IL-12RB1；IL-17RA/IL-17RC复合物和IL-23；IL-17RA/IL-17RC复合物和IL-23p19；IL-17RA/IL-17RC复合物和IL-12p40；IL-17RA/IL-17RC复合物和IL-23R/IL-12RB1复合物；IL-17RA/IL-17RC复合物和IL-23R；和IL-17RA/IL-17RC复合物和IL-12RB1。用于本发明的双特异性抗体靶向的优选组合是：IL-17和IL-23，例如IL-17和IL-23p19；；IL-17RA和IL-23例如IL-17RA和IL-23p19。特别优选的双特异性抗体特异性结合并抑制IL-17和IL-23p19每一种的活性。

[00121]可以通过任何本领域已知的技术生产拮抗IL-17和IL-23二者的双特异性抗体。例如，双特异性抗体可以使用共表达两个免疫球蛋白重链/轻链对而重组产生。参见例如Milstein等人.(1983)Nature 305：537-39。可替换的，可以使用化学键制备双特异性抗体。参见例如Brennan等人.(1985)Science 229：81。还可以通过二硫键交换，产生杂交-杂交瘤(四源杂交瘤)，通过转录和翻译产生实现双特异性抗体的单条多肽链，或者转录和翻译产生多条能够共价结合以产生双特异性抗体的多条肽链，而制备这些双功能抗体。还可以完全通过化学合成制备所提出的双特异性抗体。双特异性抗体可以包括两个不同的可变区，两个不同的恒定区，可变区和恒定区，或其他变化。

[00122]尽管在前面两段中列出的IL-23拮抗剂双特异性抗体的具体例子涉及IL-17的拮抗机制，而不涉及TNF-α和IL-1β的拮抗，但拮抗TNF-α和IL-1β的类似双特异性抗体也在本发明的范围内。IL-23-拮抗双特异性抗体可以结合TNF-α或IL-1β或任何它们各自的受体或受体亚基。

[00123]双特异性抗体也可以在本发明的方法和组合物中发现用途。在一个实施方案中，本发明涉及联合治疗，其使用结合选自下列的两个靶的双特异性药剂：IL-23(例如p19和/或p40)、IL-23R(例如IL-23R和/或IL-12Rβ1)、IL-17A、IL-17F、IL-17受体(例如IL-17RA和/或IL-17RC)、TNF-α、IL-1β、TNF-α受体(和其可溶片段)和IL-1受体(和其可溶片段)。在某些实施方案中，双特异性药剂包括来自抗体的抗原结合位点的第一多肽，以及包括可溶受体片段的第二多肽。在某些实施方案中，第一和第二多肽是融合蛋白，其包含抗体Fc结构域，例如人重链IgG1或IgG2a。在其他实施方案中，使用“突起进入孔洞(knobs intoholes)”方法修饰Fc结构域以促进两条多肽链有效的异二聚体结合以形成双特异性药剂，而不是可能以其他方式来源于均二聚体形成的单特异性(二价)形式。参见Zhu等人.(1997)Protein Sci.6：781。

[00124]用于本发明的抗体拮抗剂可以通过任何制备抗体领域中已知的方法制备。单克隆、多克隆和人源化抗体的制备描述于Sheperd和Dean(eds.)(2000)Monoclonal Antibodies，Oxford Univ.Press，NewYork，NY；Kontermann和Dubel(eds.)(2001)Antibody Engineering，Springer-Verlag，New York；Harlow和Lane(1988)Antibodies ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY，pp.139-243；Carpenter等人.(2000)J.Immunol.165：6205；He等人.(1998)J.Immunol.160：1029；Tang等人.(1999)J.Biol.Chem.274：27371-27378；Baca等人.(1997)J.Biol.Chem.272：10678-10684；Chothia等人.(1989)Nature 342：877-883；Foote和Winter(1992)J.Mol.Biol.224：487-499；和授予Vasquez等人的美国专利No.6,329,511。

[00125]期望靶的任何抗原形式都可以用于产生抗体，其可以被筛选获得具有期望拮抗活性的那些。诱发性抗原可以是含有单个表位或多个表位的肽，或者其可以仅仅是整个蛋白质或联合本领域中已知的增强免疫原性的药剂。为了提高抗原肽的免疫原性，肽可以与载体蛋白缀合。抗原还可以是分离的全长蛋白质，细胞表面蛋白质(例如利用被至少一部分抗原转染的细胞进行免疫)或者可溶蛋白(例如利用仅蛋白质的胞外结构域部分免疫)。通过基因修饰的细胞可以表达抗原，在所述细胞中编码抗原的DNA是基因组或非基因组的(例如在质粒上)。

[00126]基本上由预测为高抗原性的区域构成的肽可以用于产生抗体。例如正如通过使用VectorSuite(Informax，Inc，Bethesda，MD)的Parker plot的分析所测定的，人p19的高抗原性区域出现在GenBank AAQ89442(gi：37183284)的氨基酸16-28；57-87；110-114；136-154；和182-186，人IL-23R的高抗原性区域出现在GenBankAAM44229(gi：21239252)的氨基酸22-33；57-63；68-74；101-112；117-133；164-177；244-264；294-302；315-326；347-354；444-473；510-530；和554-558。

[00127]任何适于免疫接种的方法都可以被使用。这些方法可以包括使用佐剂、其他免疫刺激剂、重复加强免疫法(booster immunization)以及使用一种或者多种免疫途径。也可以通过DNA载体免疫进行免疫。Wang等人.(1997)Virology 228：278-284。可替换的，可以使用携带感兴趣抗原的细胞对动物进行免疫，这可以提供比利用纯化的抗原的免疫优越的抗体产生。Kaithamana等人.(1999)J.Immunol.163：5157-5164。

[00128]优选的抗体拮抗剂是单克隆抗体，其可以通过各种本领域技术人员熟悉的技术获得。用于产生单克隆抗体的方法整体上描述于Stites等人.(eds.)(1982)B_ASIC AND C_LINICAL I_MMUNOLOGY(4th ed.)Lange Medical Publications，Los Altos，CA，和其中引用的参考文献；Harlow和Lane(1988)A_NTIBODIES：A L_ABORATORY M_ANUAL CSH Press；Goding(1986)M_ONOCLONAL A_NTIBODIES：P_{RINCIPLES AND} P_RACTICE(2ded.)Academic Press，New York，NY。典型地，将来自经免疫的哺乳动物宿主分离的脾细胞永生化，通常通过与骨髓瘤细胞溶液以产生杂交瘤。参见Kohler和Milstein(1976)Eur.J.Immunol.6：511-519；Meyaard等人.(1997)Immunity 7：283-290；Wright等人.(2000)Immunity 13：233-242；Preston等人.(1997)Eur.J.Immunol.27：1911-1918。永生化的可替换方法包括用EB病毒(Epstein Barr Virus)、癌基因或反转录病毒或其他本领域中已知的方法进行转化。参见例如Doyle等人.(eds.1994及其 定期补充)C_ELL AND T_ISSUE C_ULTURE：L_ABORATORYP_ROCEDURES，John Wiley和Sons，New York，NY。对来自单个永生化细胞的集落筛选以产生具有期望特异性、亲和力和抑制活性的抗体，其使用适当的结合和生物学检验。例如，可以测量抗体与靶的结合性质，例如通过表面等离子体共振(Karlsson等人.(1991)J.Immunol.Methods 145：229-240；Neri等人.(1997)Nat.Biotechnol.15：1271-1275；Jonsson等人.(1991)Biotechniques 11：620-627)或者通过竞争ELISA(Friguet等人.(1985)J.Immunol.Methods 77：305-319；Hubble(1997)Immunol.Today 18：305-306)。

[00129]可替换的，人们可以通过从人B细胞筛选DNA文库而分离DNA序列，其编码单克隆抗体或其结合片段。参见例如Huse等人.(1989)Science 246：1275-1281。其他适合的技术包括筛选噬菌体抗体展示文库。Huse等人.(1989)Science 246：1275-1281；Ward等人.(1989)Nature341：544-546；Clackson等人.(1991)Nature 352：624-628；Marks等人.(1991)J.Mol.Biol.222：581-597；Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116：731。

[00130]用于本发明的优选单克隆抗体包括“嵌合抗体”(免疫球蛋白)，其中可变结构域来自在实验哺乳动物例如大鼠和小鼠中产生的亲本抗体，恒定结构域则从人抗体获得，以便所得到的嵌合抗体与亲本哺乳动物抗体相比不太能够引起不利的免疫响应。更优选，用于本发明的单克隆抗体是“人源化”抗体，其中全部或者基本上全部可变结构域中的高变环(例如互补性决定区或CDR)对应非人免疫球蛋白的那些，可变结构域中的全部或者基本上全部框架(FR)区是人免疫球蛋白序列的那些。用于本发明的特别优选的单克隆抗体是“完全人抗体”例如仅仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。完全人抗体可以含有来自其所产生的细胞物种的糖链，例如如果在小鼠、小鼠细胞、或在来自小鼠细胞的杂交瘤中产生时，完全人抗体将典型地含有鼠科糖链。

[00131]本发明的双特异性药剂在一种药剂(例如抗体)同时结合两种不同抗原提供附加的特异性和/或毒性例如细胞表面抗原的情况中是特别有用的。例如，双特异性药剂如双特异性抗体也可以利用结合与致病T细胞亚组如致病性Th17细胞相关的细胞表面蛋白质产生。在一个实施例中，这些细胞表面蛋白质是IL-23R和CD161(也被称作NK细胞表面抗原、KLRB1(GeneID 3820)和NKRP1A)。还可见美国专利Nos.5,965,401和5,770,387。可在GenBank(NCBI)数据库以索取号NP_002249获得CD161的氨基酸序列。正如本文中所证明的(参见实施例4和图1、2)，在记忆T细胞(CD4⁺/CD45RO⁺/CD45RA^-)的表面存在CD161与IL-17产生和致病性相关。致病性Th17细胞已知会表达IL-23R。预计结合CD161和IL-23R二者的双特异性药剂仅仅对于最致病的T细胞是高度选择性地。这些特异性药剂将在诊断和监控个体中可以发现用途，包括经历处理的那些个体，其作用测量高度致病性Th17细胞的存在和定位的工具。这些药剂还可以在治疗应用中发现用途，其中它们可以特异性地促进致病性靶细胞的杀死，即表达CD161和IL-23R二者的那些细胞。药剂例如包含人IgG1恒定结构域的抗体可以促进ADCC(抗原依赖性细胞毒性)依赖性的致病性杀死Th17细胞。这些药剂还可以用于为这些致病性Th17细胞递送毒性负载物例如放射性核苷或其他毒素。

[00132]可以在治疗由致病性Th17细胞所造成的疾病中发现用途的其他双特异性药剂包括针对在这些细胞上发现的两种或者更多种细胞表面分子的药剂，其中药剂对所述两种或者更多种细胞表面分子的组合的特异性提供了对于致病性细胞更高特异性的药剂。这类增强的特异性可以有助于减少由于对表达这些细胞表面分子任一种的非靶细胞的不期望作用而造成的副作用。例如，双特异性药剂可以针对CD161以及任何其他与致病性Th17细胞相关的细胞表面标记物包括但不限于CD4、CD45RO、CCR4、CCR6、整联蛋白-β7、EP2、EP4、IL-1R1或TNF-α。可替换的，双特异性药剂可以针对下列细胞表面蛋白质的任意两种：CD161、CD4、CD45RO、CCR4、CCR6、整联蛋白-β7、EP2、EP4、IL-1R1和TNF-α。

PGE2、IL-23和IL-1β在产生致病性人Th17细胞中的作用

[00133]最近涉及在小鼠中研究的出版物已经证明IL-6和TGF-β对于产生Th17细胞是必要和充分的，以及IL-23在促进这些细胞的维持和存活中是重要的。Veldhoen等人.(2006)Immunity 24：179-189；Dong(2006)Nat.Rev.Immunol.6(4)：329-333。然而，这些结果还没有在人系统中得到重复，留下了关于IL-6和TGF-β在Th17产生中进而在人自身免疫性疾病和增殖性疾病中重要性的问题。

[00134]申请人已经发现这些IL-6/TGF-β-驱动的小鼠Th17细胞不仅分泌IL-17A，还分泌非常高水平的免疫抑制细胞因子IL-10。尽管IL-23-驱动的Th17细胞能够在小鼠中被动转移模型中诱导实验自身免疫性脑脊髓炎(EAE)(Langrish等人.(2005)J.Exp.Med.201：233)，IL-6/TGF-β-驱动的小鼠是非致病性的。目前申请人进一步在小鼠中的实验证明前列腺素E2(PGE2)结合IL-1β驱动新型小鼠CD4⁺Th17群的产生，其分泌高水平的IL-17A而不是IL-10。这些影响与观察到(通过定量PCR)CD4+T细胞表达IL-1β和PGE2受体亚基IL-1R1、IL-1Racp、EP2和EP4一致。这些相同的鼠科IL-1β/PGE2-驱动的Th17细胞表现出提高的转录因子FOXP3的表达。

[00135]这些在小鼠中的结果引导申请人在人中寻求类似的致病性Th17谱系。尽管在存在IL-6和TGF-β时的培养不会促进人Th17细胞的产生，但申请人已经发现PGE2与IL-1β协同发挥作用促进人Th17细胞致病性亚类的形成。这些致病性Th17细胞产生高水平的IL-17A，以及非常低水平的IFN-γ，代表高程度的朝向Th17(产生IL-17)表型而远离Th1(产生IFN-γ)表型的极化。数据提供在图3A-3B。还参见实施例5。这些细胞还表达高水平IL-17F，并且可能参与人自身免疫性疾病的发病例如多发性硬化症(MS)、克罗恩氏病(CD)和类风湿性关节炎(RA)。进一步的数据(图4-6)支持PGE2在Th17生物学中发挥作用的结论。

[00136]前列腺素，特别是前列腺素E2(PGE2)在炎症响应的调节中发挥了重要作用。PGE2是发热、痛觉过敏和动脉扩张的重要介导剂，提高向发炎组织的血流以及连同增强的微血管渗透性，导致水肿。前列腺素合成抑制剂例如环加氧酶抑制剂临床上用作有效的抗炎剂。然而，PGE2还可以表现出抗炎性质，并且是嗜中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞功能特别是Th1细胞的关键负面调节剂。Harris等人.(2002)Trends Immunol.23：144。这种明显的矛盾已经困扰了许多研究者几十年。PGE2，IL-23和IL-1β生物学之间的相互作用目前可以揭示对该矛盾的解决方案。该文献证明IL-23和IL-23依赖性T辅助细胞的Th17群在慢性炎症和自身免疫中发挥了重要作用。Chen等人.(2007)ArthritisRheum.56：2936；Cua等人.(2003)Nature 421：744；Langrish等人.(2005)J.Exp.Med.201：233；Murphy等人.(2003)J.Exp.Med.198：1951；Wilson等人.(2007)Nature Immunol.8：950。使用无树突细胞的培养系统，这里本文所公开的结果显示PGE2在存在IL-1β和IL-23时会促进Th17细胞的分化和促炎功能。PGE2直接作用于幼稚人T细胞并通过前列腺素EP2和EP4介导的信号传递而上调IL-23受体表达。此外，PGE2与IL-1β和IL-23协同作用以驱动ROR-γt，IL-17和CCR6表达，这与所报道的Th17表型一致。在增强Th17细胞因子表达的同时，PGE2抑制IL-10产生。因此，炎性细胞因子和非细胞因子免疫调节剂的联合例如在分化过程中存在的PGE2，决定了Th17细胞的最终表型。这些发现强调了炎症微环境作为Th17细胞产生和调节关键因子的作用。

[00137]如上所述，PGE2暴露会提高转录因子FOXP3在小鼠中的表达，而且在CD4+T细胞中已经报道了类似的结果。Baratelli等人.(2005)J.Immunol.175：1483；Mahic等人.(2006)J.Immunol.177：246。不受限于理论，PGE2可能在人的Th17细胞产生中发挥了与TGF-β在小鼠中所发挥的相似的作用。与作用机制无关，PGE2似乎对于致病性Th17细胞的产生是必要的。

[00138]PGE2之前已经显示会诱导从不成熟骨髓产生的树突细胞产生IL-23和IL-1β，这暗示PGE2的促炎作用以及在自身免疫性疾病如类风湿性关节炎中的潜在作用。Sheibanie等人.(2004)FASEB J.18：1318。PGE2已经显示在炎性肠病和类风湿性关节炎(胶原诱导的关节炎)的鼠科模型中有效果，其通过对IL-23/IL-17通路的作用。Sheibanie等人.(2007)J.Immunol.178：8138；Sheibanie等人.(2007)Arthritis Rheum.56：2608.See also Jefford等人.(2003)Blood 102：1753。这些效果已经有助于PGE2对固有细胞的作用，因为PGE2增强IL-23和IL-1β在巨噬细胞和树突细胞中的产生，而下调IL-12的产生。Sheibanie等人.(2004)FASEB J.18：1318。然而，本文所提供的结果显示PGE2直接参与Th17产生。

[00139]可以通过PGE2和IL-1β，或PGE2和IL-23处理CD4+T细胞而体外形成致病性人Th17细胞的事实提供了体外产生致病性Th17细胞的改进的方法，其中该细胞可以用于基础的生化研究和药物筛选。可以对可能的治疗化合物筛选它们体外防止这些致病性人Th17细胞产生、维持或阻断致病作用的能力。

[00140]根据PGE2、IL-1β和IL-23在致病性Th 17细胞的形成和维持中所发挥的重要作用，还有可能针对这些分子的两种或更多种的联合治疗可以用于治疗自身免疫性或增殖性病症。PGE2，IL-1β和IL-23的拮抗剂包括包括阻断这些分子在促进Th17产生和维持中的生物活性的药剂，进而包括结合到这些分子自身或结合到它们受体(或其亚基)的拮抗剂。拮抗剂还包括降低任何这些分子活性的药剂，例如小分子抑制剂。拮抗剂还包括降低IL-1β或IL-23或参与PGE2合成的蛋白质(例如酶)的表达的药剂。拮抗剂可以包括抗体或其抗原结合片段、核酸抑制剂(例如siRNA或反义寡核苷酸)、可溶受体片段、小分子等。

[00141]用于防止在人中形成致病性Th17细胞的联合治疗的示范性方法包括使用PGE2的拮抗剂，联合IL-1β的拮抗剂或IL-23的拮抗剂。示范性的PGE2的拮抗剂包括环加氧酶(COX)和其他参与PGE2合成的酶的拮抗剂。示范性的COX抑制剂包括阿司匹林、吲哚美辛、双氯芬酸、布洛芬、萘普生、二氟尼柳、依托度酸、非诺洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、酮咯酸、甲芬那酸、美洛昔康、萘丁美酮、奥沙普秦、吡罗昔康、双水杨酯、舒林酸和托美丁，还包括COX-2-特异性抑制剂塞来考昔、伐地考昔、罗美昔布和罗非考昔。COX-2抑制剂已经被建议用于治疗在大鼠中实验自身免疫性神经炎(EAN)和实验自身免疫性前葡萄膜炎(EAAU)，以及用于治疗实验自身免疫性脑脊髓炎(EAE)，用于MS的动物模型。分别参见Miyamoto等人.(2002)Muscle Nerve 25：280；Bora等人.(2005)Ocul.Immunol.Inflamm.13：183；和Ni等人.(2007)J.Neuroimmunol.186：94。塞来考昔已经被建议用于治疗多发性硬化症，这基于在小鼠EAE模型中所获得数据。Miyamoto等人.(2006)Brain129：1984。

[00142]PGE2的拮抗剂还包括任何特异性参与PGE2合成的酶包括PGE2合成酶(PGES)例如PGES-2(Per-Johan Jakobsson等人.(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)96：7220)和PGES-1(美国专利No.7,169,580)的拮抗剂。这些PGE2-特异性合成酶的特异性抑制被预期具有改变PGE2水平地有点，而不会影响其他前列腺素的水平，同时伴随着不期望副作用的减少。这些特异性抑制剂包括小分子、拮抗抗体或其抗原结合片段，或核酸拮抗剂例如siRNA或反义核酸。

[00143]PGE2的拮抗剂还包括在CD4+T细胞表面上表达的相关受体即EP2和EP4的拮抗剂。这两种抗体在本文中统称为EP2/4。EP2/4已经被提议为治疗类风湿性关节炎的治疗性药剂。Akaogi等人.(2006)Endocr.Metab.Immune Disord.Drug Targets 6：383。EP2和EP4的示范性拮抗剂包括拮抗抗体或其抗原结合片段，以及AH6809和AH23848。参见例如Mahic等人.(2006)J.Immunol.177：246。EP2和EP4的示范性拮抗剂还包括核酸拮抗剂例如siRNA或反义核酸。示范性EP4拮抗剂公开于WO 2000/016760。EP2被进一步描述于NCBI Gene数据库中的GeneID PTGER2，并且该蛋白质序列可以以GenBank Ref.NP_000947.2获得。EP4进一步描述于GeneID PTGER4，并且该蛋白质序列可以以GenBank Ref.NP_000949.1获得。

[00144]IL-1β的拮抗剂包括IL-1β的拮抗剂，还有IL-1受体的拮抗剂(IL-1Ra，阿那白滞素)和受体亚基IL-1R1和IL-1Racp的拮抗剂。在经敲除的小鼠中IL-1R的除去已经显示会终止Th17细胞的诱导，还可以显著降低在野生型小鼠中EAE的发生率，这暗示了IL-1功能在Th17细胞形成以及自身免疫性疾病中的作用。Sutton等人.(2006)J.Exp.Med.203：1685。

[00145]IL-23的拮抗剂包括IL-23的拮抗剂，例如p19和p40亚基的拮抗剂，以及受体亚基IL-23R和IL-12Rβ1的拮抗剂。在优选实施方案中，拮抗剂是IL-23特异性，其中它们针对IL-23特异性亚基p19和IL-23R。示范性的针对IL-23p19的工程抗体公开于共同转让的美国临时申请Nos.60/891,409和60/891,413(均提交于2007年2月23日)，公开于美国专利申请公开Nos.2007/0009526和2007/0048315，以及公开于国际专利公开Nos.WO 2007/076524，WO 2007/024846和WO 2007/147019。IL-23p40的特异性抗体公开于美国专利No.7,247,711。

[00146]示范性的联合治疗方案包括但不限于PGE2和IL-1β的拮抗剂，EP2/4和IL-1R1的拮抗剂，或EP2/4和IL-23R的拮抗剂。在某些情况中，可以优选在相同的细胞中同时靶向两个靶，例如通过双特异性药剂。这类联合治疗可以有效地阻断致病性Th17细胞的产生和分化，进而抑制人自身免疫性病症和增殖性病症。在优选实施方案中，这两种或更多种拮抗剂是不同机制通路的拮抗剂，而不是相同通路不同部分的拮抗剂。在其他实施方案中，至少一种以直接结合细胞表面受体而不是可溶性配体。在某些实施方案中，这两种或更多种拮抗剂包括双功能药剂，例如双特异性抗体或其抗原结合片段，其结合至少一种细胞表面受体。在某些实施方案中，本发明双功能药剂的两种靶都是细胞表面受体例如EP2/4和IL-23R或IL-1R1。

III.药物制剂、剂量和给药

[00147]IL-17拮抗剂和IL-23拮抗剂典型地作为药物组合物为患者给药，其中拮抗剂与可药用的载体或赋形剂混合，参见例如Remington′sPharmaceutical Sciences和U.S.Pharmacopeia：National Formulary，MackPublishing Company，Easton，PA(1984)。可以以任何适于期望给药路线的方式配制药物组合物。药物制剂的例子包括冻干粉、糖浆剂、含水溶液、悬浮液和持续释放制剂(参见例如Hardman等人.(2001)Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，McGraw-Hill，New York，NY；Gennaro(2000)Remington：The Scienceand Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams，和Wilkins，New York，NY；Avis等人.(eds.)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms：ParenteralMedications，Marcel Dekker，NY；Lieberman等人.(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets，Marcel Dekker，NY；Lieberman等人.(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Disperse Systems，Marcel Dekker，NY；Weiner和Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity andSafety，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY)。

[00148]给药路线将依赖于在药物组合物中使用的拮抗剂或其他治疗性药剂的性质。适于给药的路线可以例如包括口腔、吸入、直肠、局部、皮肤、穿粘膜或肠给药；肠胃外递送包括肌内的、皮下的、动脉内或静脉注射、髓内的注射以及鞘内的、直接心室内的、静脉内、腹内的、鼻内或眼球内注射。

[00149]可替换的，人们可以以局部而不是系统模式给药抗体，例如通过直接注射抗体到特征在于免疫学的关节炎关节或病原体诱导的损伤，通常以贮库制剂(depot)或持续释放制剂。脂质体将靶向患病组织并选择性被其吸收。美国专利申请公开No.2008/0019975描述了诱导和维持治疗方案，其包括诱导方案包括通过高侵入性和/或局部路线给药较低剂量的治疗药剂，随后是维持方案包括低侵入性和/或局部路线通过给药较高剂量的治疗剂，例如系统性。

[00150]已经描述了注射基因转移载体至中枢神经系统中。参见例如Cua等人.(2001)J.Immunol.166：602-608；Sidman等人.(1983)Biopolymers 22：547-556；Langer等人.(1981)J.Biomed.Mater.Res.15：167-277；Langer(1982)Chem.Tech.12：98-105；Epstein等人.(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688-3692；Hwang等人.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030-4034；美国专利Nos.6,350466和6,316,024。这些载体可以用于本发明中使用反义核酸或siRNA作为细胞因子拮抗剂的实施方案中，具体的用于治疗CNS的免疫炎性病症例如MS。

[00151]可以根据任何缓解或防止免疫病症一种或者多种症状的治疗方案，给药本发明的药物组合物。选择治疗方案将依赖于许多组合物依赖性和患者依赖性因素包括但不限于拮抗剂的寿命、患者症状的严重性和所有负面作用的类型和长度。优选，给药方案使得为患者递送的治疗药剂的量最大化，这与可以接受的副作用水平一致。可以得到治疗性抗体和小分子适当剂量的指导。参见例如Wawrzynczak(1996)Antibody Therapy，Bios Scientific Pub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(ed.)(1991)Monoclonal Antibodies，Cytokines and Arthritis，Marcel Dekker，New York，NY；Bach(ed.)(1993)Monoclonal Antibodies and PeptideTherapy in Autoimmune Diseases，Marcel Dekker，New York，NY；Baert等人.(2003)New Engl.J.Med.348：601-608；Milgrom等人.(1999)NewEngl.J.Med.341：1966-1973；Slamon等人.(2001)New Engl.J.Med.344：783-792；Beniaminovitz等人.(2000)New Engl.J.Med.342：613-619；Ghosh等人.(2003)New Engl.J.Med.348：24-32；Lipsky等人.(2000)New Engl.J.Med.343：1594-1602。

[00152]可以通过标准制药程序在细胞培养物或实验动物中测定单独给药或结合免疫抑制剂给药的抗体组合物的毒性和治疗效率，例如测定LD₅₀(50％群体的致死剂量)和ED₅₀(在50％群体中治疗有效的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比例是治疗指数，并可以表达为LD₅₀/ED₅₀。优选表现出高治疗指数的抗体。从这些细胞培养物检验和动物研究获得的数据可以用于配制一定范围的用于人的剂量。这些化合物的剂量优选存在于包括具有很少毒性或没有毒性的ED₅₀的循环浓度范围。剂量可以再该范围内变化，这依赖于所采用的剂型和给药路线。

[00153]可以通过连续灌输，或者通过间隔给药例如每天一次、每周一次或每周2～7次，每隔一周一次，或每月一次而提供生物学拮抗剂例如抗体。每周的总剂量通常为至少0.05μg/kg体重、0.2μg/kg体重、0.5μg/kg体重、1μg/kg体重、10μg/kg体重、100μg/kg体重、0.2mg/kg体重、1.0mg/kg体重、2.0mg/kg体重、10mg/kg体重、25mg/kg体重、50mg/kg体重或更多。参见例如Yang等人.(2003)New Engl.J.Med.349：427-434；Herold等人.(2002)New Engl.J.Med.346：1692-1698；Liu等人.(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67：451-456；Portielji等人.(20003)Cancer Immunol.Immunother.52：133-144。小分子治疗剂例如肽模拟物、天然产物或有机化学剂的期望剂量与抗体或多肽在摩尔/kg的基础上大概相同。

[00154]适当剂量的确定由医生进行例如使用本领域中已知或怀疑会影响治疗或预测会影响治疗的参数或因素。通常，剂量从低于最佳剂量一些的剂量开始，并且之后少量提高，直到相对于所有副作用达到期望或最佳的效果。重要的诊断措施包括例如炎症和所产生的自身免疫性疾病水平的症状的那些。优选，所使用的生物剂基本上来自于与靶向治疗的动物相同的物种(例如人源化抗体用于治疗人个体)，进而最小化所有对药剂的免疫响应。

[00155]使用IL-17或其他急性期细胞因子的拮抗剂连同IL-23拮抗剂的治疗方案通常由治疗医生决定，并考虑患者的年龄、医疗史、疾病症状和对不同类型给药的忍耐性和剂量方案。通常，治疗方案被设计为抑制过分激发的免疫系统，允许身体重新自我调节，结果通常是在患者已经接受系统性治疗以抑制不适当的免疫响应有限时间长度之后(例如1年)，接着可以减少治疗或停止而没有自身免疫性攻击的复发。有时，发生了攻击的重新开始，在这种情况中，患者必须被重新治疗。

[00156]因此，在某些情况中，医生可以为患者处方一定数目剂量的拮抗剂以服用经过处方的时间段，之后，中断利用拮抗剂的治疗。优选，在一种或者多种疾病的急性症状消失的起始治疗期间之后，医生会继续拮抗剂治疗某些时间段，在此时间段中，在停止治疗之前，逐步降低所给药拮抗剂的量和/或频率。

[00157]本发明还涉及了治疗方案，其中IL-17拮抗剂或其他急性期细胞因子拮抗剂与IL-23拮抗剂联合使用。(尽管后面的讨论仅仅涉及IL-17，但本发明涉及(细节上作必要的修改)其他的急性期细胞因子例如TNF-α和IL-1β)。这些方案特别地可以用于治疗免疫病症的急性期，其中IL-17拮抗剂抑制所存在Th17细胞的活性，而IL-23拮抗剂防止新Th17细胞的产生。这种联合治疗可以使用低剂量IL-17拮抗剂和/或短时间给药IL-17拮抗剂而提供对免疫病症的有效治疗。在症状缓解时，利用IL-17拮抗剂的治疗优选中断，而继续给药IL-23拮抗剂以防止新的自体反应IL-17细胞(其会导致疾病的复发)的产生。可以在单种组合物中同时给药这两种拮抗剂，或者在分别的组合物中。可替换的，可以以分别的间隔给药这两种拮抗剂。还可以使用不同剂量的拮抗剂。类似的，在急性期可以给药双特异性拮抗剂，并且逐步撤回，随后利用IL-23拮抗剂治疗以维持疾病的抑制。

[00158]治疗方案还可以包括使用其他治疗剂以缓解一种或者多种免疫病症的症状，或者以防止或缓解拮抗剂治疗所产生的副作用。利用第二治疗药剂如细胞因子、抗体、类固醇、化疗药剂、抗生素或辐射进行共给药或治疗的方法是本领域公知的，参见例如Hardman等人.(eds.)(2001)Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis ofTherapeutics，10^th ed.，McGraw-Hill，New York，NY；Poole和Peterson(eds.)(2001)Pharmacotherapeutics for Advanced Practice：A PracticalApproach，Lippincott，Williams & Wilkins，Phila.，PA；Chabner和Longo(eds.)(2001)Cancer Chemotherapy and Biotherapy，Lippincott，Williams& Wilkins，Phila.，PA。本发明的药物组合物还可以含有其他免疫抑制剂或免疫调节剂。可以采用适当的免疫抑制剂，包括但不限于抗炎剂、皮质类固醇、地塞米松、氟甲松龙(flurometholone)和泼尼松龙、环孢菌素、他克莫司(即FK-506)、西罗莫司、干扰素、可溶细胞因子受体(例如sTNRF和sIL-1R)、麦考酚酸吗乙酯(mycophenolate mofetil)、15-脱氧精胍菌素、沙利度胺、格拉默(glatiramer)、硫唑嘌呤、来氟米特、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、非类固醇抗炎药剂如吲哚美辛、阿司匹林、氟苯布洛芬(flubiprofen)和双氯芬酸、抗代谢物(例如甲氨蝶呤、硫唑嘌呤)等。该药物组合物还可以与其它治疗的样式如光照疗法和辐射使用。

[00159]在本文所描述的使用两种或者更多种不同治疗物质(例如IL-17拮抗剂和IL-23拮抗剂，IL-17拮抗剂和不会拮抗IL-17或IL-23活性的治疗药剂)的任何治疗中，能够理解相互结合给药不同的治疗物质，即它们可以在相同的药物组合物中同时给药，作为分开的组合物给药，或者可以在分开的时间以不同的顺序给药这些物质。

IV.用途

[00160]本发明提供了方法和组合物用于治疗免疫病症，具体而言是遵循模式的自身免疫性病症。示范性的疾病包括MS、类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、牛皮癣、特应性皮炎、炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和I类型糖尿病。表位扩展(Eptitope spreading)可能是许多炎性自身免疫性疾病复发缓解性质的原因，其中新表位驱动新型抗原特异性致病性Th17细胞的形成。干扰IL-23信号传递将通过防止新致病性Th17细胞的产生而停止该过程。

[00161]各种的其它自身免疫性病症可以包括″迁移的″Th17细胞，其在不同于Th17细胞最初出现的组织的组织中引起疾病。这样的疾病包括但不限于牛皮癣关节炎、眼色素层炎、少年发作关节炎和多发性硬化症。IL-23指导治疗还将预计可用于治疗这样的疾病。致病性Th17细胞可以被靶向用于通过系统性治疗破坏，虽然在从它们的起源组织的运输中。

[00162]可以根据他们有特色的血清生物标记物特征的表达而鉴定Th17细胞，其包括IL-23、IL-17、IL-12p70、IL-12p40、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-22、IFN-γ、IL-22、CCL20(MIP-3α)和CXCL1(GRO)。这些生物标记物任一种或任何组合的测量可以用于检验Th17细胞介导的发病在疾病中的作用，因此可能检验IL-23中和的治疗与治疗的效率。生物标记物还可以用于监控疾病进程，例如在治疗的过程中。

[00163]本发明的方法和组合物还可以用于治疗癌症，例如肿瘤，其中异常的IL-23介导的Th17响应促进在肿瘤附近的炎症，并矛盾地抑制IL-12介导的Th1型肿瘤监视。参见WO 2004/081190。急性炎症响应的暂时抑制以及抗IL-23治疗的长期维持可以促进IL-12介导的Th1肿瘤坚实的回复，并促进除去肿瘤。

[00164]提供了用于治疗例如下列的方法：多发性硬化症(MS)，包括复发缓解MS和原发性进行性MS、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化(也叫做ALS；卢格里克氏病(Lou Gehrig′s disease)、缺血性脑损伤、朊病毒疾病和艾滋病病毒相关痴呆。还提供了用于治疗下列的方法：神经性疼痛、外伤后的神经病、传染性神经元炎(GBS)、末梢多发性神经病和神经再生。

[00165]提供了用于治疗或缓解多发性硬化症或其他炎性病症或神经系统疾病的一种或者多种下列特征、症状、方面、表现或征状：脑损伤、髓磷脂损伤、脱髓鞘、脱髓鞘板、视力障碍、失去平衡或协调、痉挛状态、知觉障碍、失禁、疼痛、虚弱、疲劳、瘫痪、认知损伤、思想迟钝、复视、视神经炎、感觉异常、步态无秩序、疲劳、Uhtoff氏症状、神经痛、失语症、运用不能症、癫痫发作、视觉-野外损失(visual-field loss)、痴呆、锥体束外现象、抑郁、健康感觉或其它情绪的症状、慢性进行性脊髓病和通过磁共振成象(MRI)检测的症状包括钆增强损伤、诱发电位记录或 脑脊髓液的检验。参见例如Kenealy等人.(2003)J.Neuroimmunol.143：7-12；Noseworthy等人.(2000)NewEngl.J.Med.343：938-952；Miller等人.(2003)New Engl.J.Med.348：15-23；Chang等人.(2002)New Engl.J.Med.346：165-173；Bruck和Stadelmann(2003)Neurol.Sci.24 Suppl.5：S265-S267.

[00166]此外，本发明提供了用于治疗和诊断炎性肠病的方法，例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻和炎性肠综合征。提供了用于治疗或缓解炎性肠病症的一种或者多种下列症状、方面、表现或征状的方法：食品吸收障碍、肠运动性改变、感染、发烧、腹痛、腹泻、直肠流血、重量损失、营养不良的征兆、肛周疾病、腹部肿块和产生失败以及肠并发症如狭窄、瘘管、毒性巨结肠、穿孔和癌症，以及包括内窥镜检查的探测如易碎性、口疮和线状溃疡、鹅卵石外观、假息肉和直肠混乱以及另外的抗酵母抗体。参见例如Podolsky，同前；Hanauer，同前；Horwitz和Fisher，同前.

[00167]还提出了治疗炎性病症例如牛皮癣、特应性皮炎、关节炎包括类风湿性关节炎、骨关节炎和牛皮癣关节炎、自身免疫性疾病如SLE和I型糖尿病、自身免疫性心肌炎(Sonderegger等人.(2006)Eur.J.Immunol.36：2844)以及增殖性病症如癌症。参见例如PCT专利申请公开WO 04/081190；WO 04/071517；WO 00/53631；和WO 01/18051。

[00168]参考下面的实施例对本发明的宽范围进行充分的理解，其中这些实施例不是为了将本发明限制为具体实施方案。本文所描述的具体实施方案是仅仅作为例子提供的，而本发明是由所附权利要求连同这些权利要求的等同物的全部范围所限定的。

实施例

实施例1

一般方法

[00169]分子生物学中的标准方法已经被描述。Maniatis等人.(1982)Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY；Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning，3^rd ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY；Wu(1993)Recombinant DNA，Vol.217，Academic Press，San Diego，CA。标准方法还出现于Ausbel等人.(2001)Current Protocolsin Molecular Biology，Vols.1-4，John Wiley和Sons，Inc.New York，NY，其描述了在细菌细胞中的克隆和DNA突变(Vol.1)，在哺乳动物细胞和酵母中的克隆(Vol.2)，糖缀合物和蛋白质表达(Vol.3)以及生物信息学(Vol.4)。

[00170]用于蛋白质纯化的方法包括免疫沉淀、层析、电泳、离心和结晶已经被描述。Coligan等人.(2000)Current Protocols in ProteinScience，Vol.1，John Wiley和Sons，Inc.，New York。化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的产生、蛋白质的糖基化已经被描述。参见例如Coligan等人.(2000)Current Protocols in Protein Science，Vol.2，John Wiley和Sons，Inc.，New York；Ausubel等人.(2001)CurrentProtocols in Molecular Biology，Vol.3，John Wiley和Sons，Inc.，NY，NY，pp.16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich，Co.(2001)Products for LifeScience Research，St.Louis，MO；pp.45-89；Amersham Pharmacia Biotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，pp.384-391。多克隆和单克隆抗体的产生、纯化和片段化已经被描述。Coligan等人.(2001)CurrentProtcols in Immunology，Vol.1，John Wiley和Sons，Inc.，New York；Harlow和Lane(1999)Using Antibodies，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY；Harlow和Lane，同前。可以得到用于表征配体/受体相互作用的技术。参见例如Coligan等人.(2001)CurrentProtcols in Immunology，Vol.4，John Wiley，Inc.，New York。

[00171]可以得到流式细胞仪方法包括应该激活细胞分选检测系统

参见例如Owens等人.(1994)Flow Cytometry Principles forClinical Laboratory Practice，John Wiley和Sons，Hoboken，NJ；Givan(2001)Flow Cytometry，2^nd ed.；Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Shapiro(2003)Practical Flow Cytometry，John Wiley和Sons，Hoboken，NJ.可以得到适于修饰核酸的荧光剂，包括核酸引物和探针、多肽和抗体用作例如诊断药剂。Molecular Probes(2003)Catalogue，Molecular Probes，Inc.，Eugene，OR；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue，St.Louis，MO。

[00172]免疫系统的标准方法和历史已经被描述。参见例如Muller-Harmelink(ed.)(1986)Human Thymus：Histopathology andPathology，Springer Verlag，New York，NY；Hiatt等人.(2000)Color Atlasof Histology，Lippincott，Williams，和Wilkins，Phila，PA；Louis等人.(2002)Basic Histology：Text and Atlas，McGraw-Hill，New York，NY。

[00173]可以得到用于测定抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能性结构域、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库。参见例如GenBank，Vector

Suite(Informax，Inc，Bethesda，MD)；GCGWisconsin Package(Accelrys，Inc.，San Diego，CA)；

(TimeLogic Corp.，Crystal Bay，Nevada)；Menne等人.(2000)Bioinformatics 16：741-742；Menne等人.(2000)BioinformaticsApplications Note 16：741-742；Wren等人.(2002)Comput.MethodsPrograms Biomed.68：177-181；von Heijne(1983)Eur.J.Biochem.133：17-21；von Heijne(1986)Nucleic Acids Res.14：4683-4690。

实施例2

用于测定IL-23拮抗剂的增殖生物测定

[00174]IL-23拮抗剂生物学中和IL-23/IL-23R的能力是通过应用短期增殖生物测定而测定的，其采用表达重组IL-23受体的细胞。转染子Ba/F3-2.2lo细胞响应人IL-23而增殖，并且可以通过IL-23拮抗剂抑制该响应。对选择进行测定的IL-23的浓度被选择为在剂量响应曲线的线性区、近平稳区并在EC50之上。通过使用Alamar Blue的比色措施测量增殖或其缺失，其中Alamar Blue是一种基于检测代谢活性的生长指示剂染料。通过其IC50值，或者拮抗剂诱导IL-23诱导的增殖的一般最大值抑制的浓度测定IL-23拮抗剂中和IL-23/IL-23R的能力。

[00175]基本上如下进行测定。Ba/F3转染子维持在RPMI-1640培养基、10％胎牛血清、50μM 2-巯基乙醇、2mM L-谷氨酰胺、50μg/mL青霉素-链霉素和10ng/mL小鼠IL-3中。在RPMI-1640培养基、10％胎牛血清、50μM 2-巯基乙醇、2mM L-谷氨酰胺和50μg/mL青霉素-链霉素中进行增殖生物测定。

[00176]在96孔平底平板(Falcon 3072或类似的)中以每孔150μL进行测定。IL-23和IL-23拮抗剂都以一系列浓度制备，例如1∶3系列稀释。在加入到细胞之前，将感兴趣的IL-23拮抗剂的滴定液与IL-23进行预温育。加入细胞之后，将生物测定板温育在潮湿的组织培养室(37℃，5％CO₂)中40-48小时。在培养时间最后，以16.5μL/孔加入Alamar Blue(Biosource Cat#DAL1100)，并允许显影5～12小时。接着在570nm和600nm读取吸光值(VERSAmax Microplate Reader，Molecular Probes，Eugene，Oregon，USA)，并且获得OD_570-600。对于每种样品进行两批。使用GraphPad

3.0软件(Graphpad SoftwareInc.，San Diego，California，USA)将吸光值针对细胞因子或抗体浓度进行作图，并使用反曲线剂量-响应的非线性回归(曲线拟合)确定IC50值。

实施例3

基于IL-17产生的IL-23脾细胞测定

[00177]使用与在Aggarwal等人.(2003)J.Biol.Chem.278：1910和Stumhofer等人.(2006)Nature Immunol.7：937中所描述基本上相同的脾细胞测定对本发明IL-23拮抗剂生物学活性进行测定。脾细胞测定测量样品中IL-23的活性，作为鼠科脾细胞IL-17产生的水平。接着通过测定在给定样品中减低IL-23/IL-23R活性50％所必要的浓度(IC50)，而测定IL-23的抑制活性。通过该测定测量的IC50大于或等于方程式解离结合常数(K_d)，即K_d可以等于或低于IC50。一如既往的，较低的IC50和K_d值反应较高的活性的亲和力。

[00178]简言之，从8～12周雌性C57BL/6J小鼠(JacksonLaboratories，Bar Harbor，Maine，USA)获得脾脏。磨碎脾脏，沉淀两次，并过滤通过细胞滤器(70μm尼龙)。在存在人IL-23(10ng/ml)和鼠抗CD3e抗体(1μg/ml)(BD Pharmingen，Franklin Lakes，New Jersey，USA)，具有或不具有待测定的IL-23拮抗剂时，将回收的细胞培养在96孔板(4×10⁵细胞/孔)。以一系列3倍稀释加入IL-23拮抗剂。浆细胞培养72小时，沉淀，并通过夹心式ELISA对上清液测定IL-17水平。

[00179]如下进行IL-17ELISA。将板与捕获抗-IL17抗体(100ng/孔)在4℃下覆盖过夜，清洗和封闭。加入样品和标准并在室温下随着摇晃温育2小时。清洗板，并加入生物素化抗-IL-17检测抗体(100ng/孔)，并在室温下随着摇晃温育1小时。捕获和检测抗体是不同的抗体，其结合小鼠IL-17但不会交叉封闭。清洗板，并使用链霉素-HRP(辣根过氧化酶)和TMB(3，3’，5，5’-四甲基对二氨基联苯)检测结合的检测抗体。接着在450～650nm下对板进行读数，并通过与标准比较而计算样品中IL-17的浓度。

实施例4

在克罗恩氏病中CD161表达于致病性Th17细胞上

[00180]Th17细胞牵涉于神经自身免疫性炎症和增殖性病症的发病。IL-23R是Th17细胞表达的已知细胞表面受体亚基。本文所描述的实验显示C型凝集素CD161(已知表达于人NK和T细胞上)优先表达于致病性Th17细胞上。这些致病性细胞可以被同时结合IL-23R和CD161二者的治疗药剂特异性靶向。另外，IL-23R和CD161二者在这些细胞表面的存在提供了分选细胞用于诊断和研究目的的便利手段。

[00181]从克罗恩氏病患者获得直肠和外周血(PB)。通过分离粘膜的上皮层、胶原酶消化固有层和密度梯度离心而从直肠样品制备固有层单核细胞(LPMC)。通过密度梯度离心和血红细胞裂解而分离外周血单核细胞(PBMC)。

[00182]根据流式细胞仪测定的，来自CD患者的直肠样品所含有的CD161⁺CD4⁺记忆T细胞是来自正常个体的直肠样品的大约20倍。参见图1A。

流式细胞仪纯化的固有层CD161⁺Th_mem细胞被发现在CD和正常样品中所产生的IL-17都是CD161^-T_hmem细胞的4～6倍(根据ELISA测定)。参见图1B。提高的IL-17产生和提高的细胞数目的结合表示CD161⁺Th_mem细胞是CD患者的直肠中IL-17的主要来源。进一步的

流式细胞仪实验证明大约三分之一的CD161⁺Th_mem细胞表达IL-23R，在存在IL-23时培养CD161⁺Th_mem细胞增强了IL-17产生大约3倍。基因表达图谱(图C)证明CD161⁺Th_mem细胞与CD161^-细胞相比，表达更高水平的各种作为Th17表型特征的促炎细胞因子(IL-23R，IL-17和IL-22)，而不是Th1相关的细胞因子IFN-γ。

[00183]利用PBMC的类似实验表明循环的CD161⁺CD4⁺记忆T细胞也会表现出抑制基因表达和细胞因子产生，这与Th17表型一致。图2A显示与CD161^-细胞相比，在CD161⁺细胞中许多已知与Th17细胞相关的基因(IL-23RA，ROR-γT和IL-17A)被显著上调。图2B显示与CD161^-细胞相比，在CD161⁺细胞中已知Th17相关细胞因子IL-17A，IL-22和IL-17F的产生显著地高。

[00184]这种Th17表型在克罗恩氏病中被提高。来自PBMC的

流式细胞仪纯化的CD161⁺Th_mem细胞表达比CD161^-水平显著高的IL-17，但在IFN-γ产生方面没有差别(均通过RT定量PCR测定)。

流式细胞仪证明大约45％来自CD患者的PBMC CD161⁺Th_mem细胞表达IL-23R，而来自正常个体的PBMC CD161⁺Th_mem细胞则为大约30％，并且RT定量PCR表明与CD161^-Th_mem细胞相比，IL-23R表达在CD161⁺Th_mem细胞中有些高。来自CD患者的PBMC CD161⁺Th_mem细胞在与IL-23培养时也表现出提高的IL-17产生。

[00185]综上所述，利用来自CD和正常个体的LPMC和PBMC获得的结果与本文所述的CD161⁺Th_mem细胞的观点一致，其代表相同的致病性Th17细胞之前已经于自身免疫性病症相关。

[00186]还研究了致病性Th17细胞从血液迁移至活跃性炎症区域内的能力。使用来自健康人供体的PBMC的实验证明整联蛋白-β7⁺细胞的百分比和CCR6⁺细胞的百分比在CD161⁺CD4⁺记忆T细胞中是在CD161^-中的大概两倍(数据未显示)。在与整联蛋白-α4的复合物中的整联蛋白-β7结合MAdCAM-1，一种组织特异性内皮细胞粘附分子，其对于淋巴细胞归巢(homing)到内脏是关键的。Briskin等人.(1993)Nature 363：461和Berlin等人.(1993)Cell 74：185。CCR6优先表达于CD4⁺记忆T细胞上，并辅助转运到上皮细胞。Liao等人.(1999)J.Immunol.162：186。其唯一的趋化因子配体CCL20(MIP-3α)在克罗恩氏病炎症中急剧下降。Kwon等人.(2002)Gut 51：818和Kaser等人.(2004)J.Clin.Immunol.24：74。这些结果证明本文所描述的CD161⁺CD4⁺记忆T表现出对于参与内脏炎症的细胞所预期的归巢和趋化因子受体特征。

实施例5

IL-1β、IL-23和PGE2协同地驱动致病性人Th17细胞的产生

[00187]用于该实施例的方法整体上描述于Wilson等人.(2007)Nature Immunology 8：950。更具体地，如下进行细胞培养。如之前所述分离和培养幼稚CD4⁺CD45RO^-T细胞(Wilson等人.(2007)，同前)。使用人记忆T细胞分离试剂盒

Aria instrument(BD Biosciences)根据制造商的说明书，分离记忆CD4⁺CD45RA^-T细胞。在表明时，加入50ng/ml hIL-23、50ng/ml hIL-1β(R&D Systems，Minneapolis，MN)、10μM PGE2(Sigma，St.Louis，MO)、10μM丁环前列素(EP2选择性激动剂)、35μM米索前列醇(EP4，EP3＞EP1＞EP2激动剂)和/或10μM磺前列酮(EP1，EP3激动剂，Cayman Chemical，Ann Arbor，MI)。

[00188]如下进行细胞分选。CD4⁺CCR6⁺和CD4⁺CCR6⁺细胞亚组通过使用抗-CCR6和抗-CD4抗体(BD Biosciences，San Diego，CA)的细胞分选而被纯化。利用

Aria仪器(BD Biosciences)进行细胞分选。

[00189]为了分析细胞表面蛋白，利用抗-CD4，抗-CD3，抗-CD45RA，抗-CCR6(BD Biosciences)，和/或抗-IL-23R (R&D Systems)抗体对细胞进行染色。并在LSR II细胞计数器上获取数据，并用FlowJo software(Tree Star，Ashland，OR)进行分析。

[00190]如之前所述进行ELISA和电化学发光测定(Wilson等人.(2007)，同前)。使用来自R&D Systems的试剂盒进行IL-10ELISA。

[00191]如之前所述进行实时定量PCR(Wilson等人.(2007)，同前)。

[00192]Mann Whitney或One-Way ANOVA(用于多组)测试用于统计分析。0.05或更小的P值被认为是显著的，并且所有的数据都表示为平均值+标准误差(标准误差)。

[00193]进行实验以确定IL-12、IL-23、IL-1β和/或PGE2对细胞因子产生的影响。利用抗-CD2、抗-CD3和抗-CD28涂覆的珠激活幼稚PBMCCD4⁺T淋巴细胞，并在存在IL-2、IL-12、IL-23、PGE2、IL-1β或PGE2和IL-1β的组合时培养10～12天。利用抗-CD2、抗-CD3和抗-CD28涂覆的珠在存在IL-2时再激活培养的T细胞48小时，接着对无细胞上清液测定IL-17A和IFN-γ产生。结果分别表示在图3A和3B。在存在IL-1β和PGE2时培养的细胞表现出提高的IL-17A表达和IFN-γ的低表达。

[00194]进行进一步的实验以确定PGE2或其激动剂对IL-23R在培养物中的幼稚人CD4⁺T细胞中表达的影响。与暴露到EP受体激动剂丁环前列素和米索前列醇而不是磺前列酮相比(图4B)，PGE2暴露使得表达IL-23的CD4⁺细胞加倍(图4A)。丁环前列素(EP2特异性)和米索前列醇(EP4，EP3＞EP1＞EP2)模拟PGE2的下过而EP1/EP3激动剂磺前列酮则不会的事实，暗示PGE2信号传递通过介导其对幼稚人CD4⁺T细胞作用的EP2和/或EP4受体发生。另外，IL-1R1基因表达响应PGE2而被提高(数据未显示)。

[00195]PGE2和EP受体激动剂连同IL-1β和IL-23对在培养物中幼稚人CD4⁺T表达的细胞因子有影响，如图5A～5C所示。。该结果暗示PGE2连同IL-1β和IL-23增强通过EP2和EP4受体的Th17细胞的产生。EP2激动剂丁环前列素诱导IL-17表达的提高稍微大于米索前列醇。抗炎细胞因子IL-10的下调(图5C)与Th17介导的炎症诱导中PGE2的作用一致。还参见Jankovic & Trinchieri(2007)Nature Immunol.8：1281和McGeachy等人.(2007)Nature Immunol.8：1390，其暗示IL-10限制小鼠中Th17细胞的致病性。利用丁环前列素和米索前列醇获得的结果的比较暗示IL-17A的提高主要由EP2介导，而IL-10的降低则主要由EP4介导。

[00196]如图6A所示，CCR6表达与Th17细胞因子产生相关(图6B和6C)也响应PGE2，其显示在将PGE2加入到IL-1β和IL-23时，表达CCR6的幼稚人CD4⁺T细胞的百分比提高。还参见Acosta-Rodriguez等人.(2007)Nature Immunol.8：639和Annunziato等人.(2007)J.Exp.Med.204：1849；Singh等人.(2008)J.Immunol.180：214。CCR6在实验自身免疫性脑病(EAE)、类风湿性关节炎和牛皮癣中参与招募致病性T细胞。Homey等人.(2000)J.Immunol.164：6621；Kohler等人.(2003)J.Immunol.170：6298；Ruth等人.(2003)Lab.Invest.83：579。在图3～6中提供的结果与PGE2在促进致病性效应子Th17细胞的产生中的作用一致。

[00197]图7A(蛋白质表达)和7B(基因表达)中所提供的结果证明PGE2增强激活的记忆T细胞中致病性Th17表型。具体的，PGE2通常促进IL-17A和ROR-γt表达水平的提高，这二者都与致病性Th17细胞相关，但其不会促进高水平的IFN-γ或IL-10，也不会提高T-bet的表达。因为激活的/记忆T细胞代表炎症组织中主要的细胞群体，以及根据前面关于幼稚人T细胞所提供的数据，本文所提供的结果暗示炎症细胞因子和肺细胞因子免疫调节剂的联合都在T细胞分化过程中出现在淋巴结，以及在组织发炎位点的激活，将决定Th17细胞的最终表型。因此，利用治疗药剂例如炎症细胞因子的拮抗剂以及非细胞因子免疫调节剂的感染将预计可能在二者系统性给药时是有利的，以及在炎症的位点(或附近)局部给药时也是有利的。

Claims (38)

1.治疗患有癌症或显示出突发自身免疫性疾病的个体的方法，其包括：

a)经由第一时间间隔，以一系列一种或多种剂量给药IL-23的拮抗剂；和

b)经由第二时间间隔，以一系列一种或多种剂量给药急性期治疗剂，所述治疗剂包括选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子的拮抗剂。

2.权利要求1的方法，其中IL-23的拮抗剂是抗-IL-23p19抗体或其抗原结合片段。

3.权利要求1的方法，其中IL-23的拮抗剂是抗-IL-23R抗体或其抗原结合片段。

4.权利要求1的方法，其中急性期治疗剂是抗体，其特异性地结合选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子。

5.权利要求1的方法，其中急性期治疗剂是特异性结合选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子的受体的抗体。

6.权利要求1的方法，其中所述第二时间间隔在解决自身免疫性疾病突发的至少一种症状之后结束。

7.权利要求6的方法，其中所述第二时间间隔在解决自身免疫性疾病突发的两种或者更多种症状30天内结束。

8.权利要求1的方法，其中：

a)所述第二时间间隔基本上与所述第一时间间隔同时开始；以及

b)所述第二时间间隔在所述第一时间间隔结束之前结束。

9.权利要求1的方法，其中

c)所述第二时间间隔在所述第一时间间隔开始之前开始；以及

d)所述第二时间间隔在所述第一时间间隔结束之前结束。

10.权利要求1的方法，其中所述第二时间间隔在所述第一时间间隔开始之前结束。

11.权利要求8～10任一项的方法，其中所述第二时间间隔小于6个月。

12.权利要求8～10任一项的方法，其中所述第二时间间隔小于2个月。

13.权利要求8～10任一项的方法，其中所述第一时间间隔超过1年。

14.权利要求8～10任一项的方法，其中所述第一时间间隔超过3年。

15.权利要求4或5的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是人源化的或完全人抗体或其抗原结合片段。

16.权利要求4或5的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是选自Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)₂和双体的人源化或完全人抗体。

17.权利要求4或5的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是PEG化的。

18.权利要求4或5的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体或其抗原结合片段。

19.权利要求18的方法，其中所述双特异性抗体结合：

e)IL-23或其受体；和

f)选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子或选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子的受体。

20.权利要求19的方法，其中所述双特异性抗体结合：

g)IL-23；和

h)选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子。

21.药物组合物，其包含：

i)抗-IL-23p19抗体或其抗原结合片段；和

j)抗体或其抗原结合片段，其结合选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子。

22.权利要求21的药物组合物，其包含结合下列的双特异性抗体：

k)IL-23p19；和

l)选自IL-1β、TNF-α、IL-17A和IL-17F的细胞因子。

23.药物组合物，其包含权利要求21或22的药物组合物，其进一步包含可药用的载体或稀释剂。

24.权利要求23的药物组合物，其包含类固醇或非类固醇抗炎剂。

25.权利要求1～20任一项的方法，其中个体患有选自下列的病症：癌症、关节炎、类风湿性关节炎(RA)、牛皮癣、炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、I型糖尿病。

26.权利要求1～20任一项的方法，其进一步包括给药免疫抑制剂或抗炎剂。

27.权利要求26的方法，其中所述免疫抑制剂或抗炎剂是类固醇或非类固醇抗炎剂。

28.治疗患有癌症或表现出突发自身免疫性疾病的个体的方法，其包括给药衍生自抗体的抗原结合位点的结合组合物，其中所述结合组合物结合IL-23R和CD161。

29.治疗患有自身免疫性疾病或增殖性疾病的个体的方法，其包括为所述个体给药包含两种或更多种选自下列的药剂的组合物：IL-23的拮抗剂、IL-1β的拮抗剂和PGE2的拮抗剂。

30.权利要求29的方法，其中所述药剂选自IL-23受体的拮抗剂、IL-1β受体的拮抗剂和PGE2受体的拮抗剂。

31.权利要求29的方法，其中所述组合物包含双特异性抗体或其抗原结合片段。

32.一种用于治疗免疫或增殖性病症的组合物，其包含两种或者更多种选自IL-23的拮抗剂、IL-1β的拮抗剂和PGE2的拮抗剂的药剂。

33.权利要求32的组合物，其中所述药剂选自IL-23受体的拮抗剂、IL-1β受体的拮抗剂和PGE2受体的拮抗剂。

34.权利要求32的组合物，其中所述组合物包含双特异性抗体或其抗原结合片段。

35.一种在体外产生致病性Th17细胞的方法，其包括在存在两种或更多种药剂时，体外培养T细胞，其中所述药剂选自IL-23、IL-1β和PGE2。

36.筛选用于治疗由致病性Th17细胞介导的病症的化合物的方法，其包括：

a)通过权利要求35的方法产生致病性Th17细胞；

b)将所述细胞暴露到一种或者多种可能的治疗性化合物；以及

c)评估这些化合物对所述Th17细胞的影响。

37.治疗患有自身免疫性病症或增殖性病症的个体的方法，其包

a)为所述个体给药包含两种或者更多种药剂的组合物，其中所述药剂选自IL-23的拮抗剂、IL-1β的拮抗剂和PGE2的拮抗剂；和

b)监控在所述给药过程中，或者在所述给药之后，所述致病性Th17细胞的水平或活性。

38.权利要求37的方法，其中所述监控是通过测量选自IL-17A、IL-17F、IL-10、IL-22和IFN-γ的两种或更多种细胞因子的表达水平。

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