CN101664389A - 伊维菌素小单室脂质体的制备方法 - Google Patents

伊维菌素小单室脂质体的制备方法 Download PDF

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佘永新
巴桑旺堆
董禄德
何书海
拉巴次旦
杨德全
色珠
陈裕祥
赵好信
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Abstract

伊维菌素小单室脂质体的制备方法，它涉及一种伊维菌素脂质体的制备方法。本发明解决了现有伊维菌素制剂有效期短、需要重复给药，伊维菌素缓释巨丸毒性大的问题。本发明方法如下：向大豆卵磷脂和胆固醇的有机溶液中加入伊维菌素原粉，然后将得到的混悬液减压旋转蒸发至反应器内壁形成一层薄膜，再将薄膜溶解于PBS溶液后，放入玻璃珠，回旋式震荡器内，震摇洗膜1h后静止1h，再超声震荡，即得伊维菌素小单室脂质体。本发明方法所得的脂质体结构类似于生物膜，在机体内能生物降解，没有有毒物质产生，作为储存形式包埋的药物能缓慢、持续释放，因此能延长药物有效的水平周期，减少给药频率，伊维菌素小单室脂质体包封率为89.5％。

Description

伊维菌素小单室脂质体的制备方法
技术领域
本发明涉及一种伊维菌素脂质体的制备方法。
背景技术
伊维菌素(Ivermectin，IVM)是一种新型的由阿维链霉菌发酵产生的半合成大内酯抗生素类驱虫药，对多种寄生虫均具有驱杀作用，目前关于兽用伊维菌素的制剂常见有片剂、糊剂、注射液、乳剂、喷剂、预混剂、粉剂等，这些剂型药效有效期短，需要重复给药，不仅增加了劳动成本和对动物的应激，同时也容易产生耐药性，甚至导致中毒，长期使用在动物组织中产生的蓄积性残留对生态平衡有着不容忽视的影响，对人类的身体健康亦不利，因而有必要开发长效缓释和控释制剂，而现有的伊维菌素缓释巨丸，虽然在整个放牧季节只需给药一次，但是该缓释巨丸的辅料为不可降解的聚氯乙烯，所以该剂型要比其它常规给药体系毒性更大。伊维菌素浇泼剂虽然可以单次给药，药效持续时间较长，但该方法给药量大，药物相对生物利用度一般不超过15％。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了解决现有伊维菌素制剂有效期短、需要重复给药，伊维菌素缓释巨丸毒性大的问题，提供了一种伊维菌素小单室脂质体的制备方法。
本发明伊维菌素小单室脂质体的制备方法如下：一、将大豆卵磷脂与胆固醇溶解于有机溶剂中，然后加入伊维菌素原粉，得到混悬液；二、将混悬液置于反应器中在35℃、气压为200hpa(百帕)、转速为70r/min的条件下减压旋转蒸发至反应器内壁形成一层薄膜，停止旋转蒸发，然后通氮气10min；三、将步骤二得到的薄膜溶解于pH值为7.0的PBS溶液中后静置1h，得到混合溶液，放入4～5枚玻璃珠，然后将含有玻璃珠的混合溶液置于回旋式震荡器内，在洗膜震速为120r/min、水浴温度为30℃的条件下震摇洗膜1h后静止1h，得到牛奶状多室脂质体混悬液；四、将牛奶状多室脂质体混悬液在超声强度为100Hz的台式双频数控超声清洗器中超声震荡10min，即得伊维菌素小单室脂质体；其中步骤一中的大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为1∶0.2；步骤一中大豆卵磷脂和胆固醇的总质量与伊维菌素原粉的质量比为10∶1；步骤一中的有机溶剂由甲醇和氯仿按照1∶1的体积比组成；步骤三中PBS溶液中含有质量浓度为0.3％的维生素E；步骤三所述玻璃珠粒径为2mm～5mm。
采用本发明方法所得的伊维菌素小单室脂质体结构类似于生物膜，在机体内能生物降解，没有有毒物质产生，作为药物载体，具有选择性高，靶向性强的特点，能够使包裹的药物选择性地到达病变部位、组织和细胞，从而增加药物疗效，减少药物的治疗剂量，降低药物毒性；本发明方法所得的伊维菌素小单室脂质体作为储存形式包埋的药物能缓慢、持续释放，因此能延长药物有效的水平周期，增加持续作用时间，减少给药频率，节省劳动成本，减少对动物的应激；本发明所得伊维菌素小单室脂质体，分布均匀、大小较一致、其形态为形态规则的类球形囊泡，粒径在180nm～300nm之间，没有团聚发生，有利于减少药物的渗漏量，同时能增加伊维菌素脂质体的稳定性，本发明方法所得的伊维菌素小单室脂质体在4℃的条件下保存3个月后脂质体的渗漏率均小于6％，本发明方法所得的伊维菌素小单室脂质体包封率为89.5％。
附图说明
图1是具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体的电镜显微照片；图2是具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体的在40×10倍显微镜下的照片；图3是具体实施方式五中不同条件下伊维菌素小单室脂质体的渗透率曲线图，
Figure A20091030784500041
表示4℃的条件下伊维菌素小单室脂质体的渗透率曲线，
Figure A20091030784500042
表示室温下伊维菌素小单室脂质体的渗透率曲线。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式中伊维菌素小单室脂质体的制备方法如下：一、将大豆卵磷脂与胆固醇溶解于有机溶剂中，然后加入伊维菌素原粉，得到混悬液；二、将混悬液置于反应器中在35℃、气压为200hpa、转速为70r/min的条件下减压旋转蒸发至反应器内壁形成一层薄膜，停止旋转蒸发，然后通氮气10min；三、将步骤二得到的薄膜溶解于pH值为7.0的PBS溶液中后静置1h，得到混合溶液，放入4～5枚玻璃珠，然后将含有玻璃珠的混合溶液置于回旋式震荡器内，在洗膜震速为120r/min、水浴温度为30℃的条件下震摇洗膜1h后静止1h，得到牛奶状多室脂质体混悬液；四、将牛奶状多室脂质体混悬液在超声强度为100Hz的台式双频数控超声清洗器中超声震荡10min，即得伊维菌素小单室脂质体；其中步骤一中的大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为1∶0.2；步骤一中大豆卵磷脂和胆固醇的总质量与伊维菌素原粉的质量比为10∶1；步骤一中的有机溶剂由甲醇和氯仿按照1∶1的体积比组成；步骤三中PBS溶液中含有质量浓度为0.3％的维生素E。
本实施方式步骤三中所用的回旋式震荡器是日本生产的型号为NTS-4000BH的回旋式震荡器；步骤四中所用的台式双频数控超声清洗器是江苏省昆山超声波仪器公司生产KH-200SP台式双频数控超声清洗器。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤三所述玻璃珠粒径为2mm～5mm。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式测试具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体包封率的方法如下：一、将4mL具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体置于离心超滤管(截留相对分子量为10KD)的内管中，以3000r/min的速度离心30min，然后取超滤液1.0mL，用流动相定容至10mL，然后用0.22μm滤膜过滤；二、量取10μL步骤一所得的滤液，采用美国Waters公司生产的型号为2695的高效液相色谱仪对滤液平行测定3次，取平均值，得游离的伊维菌素含量，即W游离；三、量取具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体1.0mL，然后加入质量浓度为5％的Triton-X100乙醇溶液2mL超声10min破乳，然后用流动相定容至10mL，以15000r/min的速度离心10min，再将上清液用0.22μm滤膜过滤；四、量取10μL步骤三所得滤液，采用美国Waters公司生产的型号为2695的高效液相色谱仪对滤液平行测定3次，取平均值，得伊维菌素脂质体总药量，即W总；五、按照以下公式计算脂质体的包封率(EE％)：
EE％＝(C总-C游离)×100％/C总，得到具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体包封率为89.5％(RSD＝2.3)。
本实施方式步骤一或步骤三中所用流动相由乙腈、甲醇和水组成，其中乙腈∶甲醇∶水的体积比为60∶32∶8。
具体实施方式四：本实施方式将0.1uL～0.3uL具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体夹于双层铜片之间，然后将夹有伊维菌素小单室脂质体的双层铜片浸入液态丙烷冷冻、切片电子显微镜观察。
从图1可以看出具体实施方式一所得伊维菌素小单室脂质体，其形态为形态规则的类球形囊泡，粒径在180nm～300nm之间，没有发生团聚，有利于减少药物的渗漏量，同时能增加伊维菌素脂质体的稳定性。由图2可知其脂质体分布均匀、大小一致、外观如球形、椭圆形的粒子。
具体实施方式五：本实施方式中对具体实施方式一所得的伊维菌素小单室脂质体的稳定性进行测试，测试方法如下：
将6份等量的具体实施方式一所得的伊维菌素小单室脂质体放置于4℃的冰箱中密封保存，再将6份等量的具体实施方式一所得的伊维菌素小单室脂质体在室温中保存，然后在放置时间为1天、7天、20天、30天、60天、90天、120天的条件下分别测定伊维菌素小单室脂质体的渗漏率，每组实验重复三次，求其平均值，脂质体渗漏率的计算公式如下：
渗漏率＝(W包-W贮)×100％/W包，其中W包、W贮分别为制备时的包封量和贮存一定时间后的包封量。
由图3可知，4℃冰箱保存3个月后脂质体的渗漏率均小于6％，而室温条件下保存脂质体的渗漏率较大。由于脂质体的膜材成分磷脂中不饱和基团容易发生氧化，随着温度的升高，氧化反应速率加快，所以室温条件下保存脂质体的渗漏率较大。

Claims (2)

1.伊维菌素小单室脂质体的制备方法，其特征在于伊维菌素小单室脂质体如下：一、将大豆卵磷脂与胆固醇溶解于有机溶剂中，然后加入伊维菌素原粉，得到混悬液；二、将混悬液置于反应器中在35℃、气压为200hpa、转速为70r/min的条件下减压旋转蒸发至反应器内壁形成一层薄膜，停止旋转蒸发，然后通氮气10min；三、将步骤二得到的薄膜溶解于pH值为7.0的PBS溶液中后静置1h，得到混合溶液，放入4～5枚玻璃珠，然后将含有玻璃珠的混合溶液置于回旋式震荡器内，在洗膜震速为120r/min、水浴温度为30℃的条件下震摇洗膜1h后静止1h，得到牛奶状多室脂质体混悬液；四、将牛奶状多室脂质体混悬液在超声强度为100Hz的台式双频数控超声清洗器中超声震荡10min，即得伊维菌素小单室脂质体；其中步骤一中的大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为1∶0.2；步骤一中大豆卵磷脂和胆固醇的总质量与伊维菌素原粉的质量比为10∶1；步骤一中的有机溶剂由甲醇和氯仿按照1∶1的体积比组成；步骤三中PBS溶液中含有质量浓度为0.3％的维生素E。
2.根据权利要求1所述的伊维菌素小单室脂质体的制备方法，其特征在于步骤三所述玻璃珠粒径为2mm～5mm。
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