CN101662948A - 预防或治疗动物肥胖症的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
公开了可用于预防或治疗动物肥胖症的组合物。该组合物包含有效预防或治疗动物肥胖症的量的辣椒总碱,优选辣椒碱或其活性代谢物。还公开了预防或治疗动物肥胖症的方法,包括施用本发明的组合物。
Description
发明领域
本发明涉及预防和/或治疗动物肥胖症的组合物和方法。
发明背景
不幸的事实是,许多动物,特别是伴侣动物(例如狗和猫)比其理想体重重。由于有过量脂肪组织,这些动物可能在临床上被诊断为例如“胖”、“超重”或“肥胖”,因此更可能患上相关的身体失调症,如关节炎、心脏病、呼吸道疾病、糖尿病、膀胱癌、甲状腺机能减退、关节病和/或胰腺炎。
预防或减少伴侣动物的过量脂肪组织量的尝试通常包括饮食控制和锻炼。实际上,已经开发出供超重伴侣动物用的许多热量“低”或“降低的”食品并可购得以用于控制热量摄取、防止体重增加或促进体重减轻。尽管这类宠物食品配方可得,但是,仍然需要开发包含用于预防或治疗伴侣动物肥胖症的创新成分和营养素的其它配方。
使用犬科动物细胞培养染色体组检验法,我们已经确定可体外改变各种犬科动物基因的表达的物质。根据这些数据以及近期的表明在小鼠在能量(热量)限制过程中可能改变某些基因的表达的发现(Higami,Y等人,J.Nutr.2006 Feb;136(2):343-52),我们已经确定可用于预防或治疗伴侣动物肥胖症的物质的名单。具体而言且如下所述,从摄食研究中收集的体内数据表明,包含辣椒碱的组合物特别有效地预防或治疗动物肥胖症。
辣椒碱——公知为红辣椒(chili pepper)中的“热”或辛辣源的生物碱,已经以许多方式使用,包括例如,作为昆虫和动物驱避剂以及用在医用乳膏和凝胶中。此外,美国专利5,273,754公开了通过口服包含“致热驱风物质(heating carminative substance)”,优选辣椒碱,和“致冷驱风物质(cooling carminative substance)”的食欲抑制剂组合物来降低食欲的方法。但是,此参考文献没有公开不添加致冷驱风剂(例如薄荷、留兰香、薄荷醇)的包含辣椒碱的组合物,也没有公开作为动物饲料的包含辣椒碱的组合物。
发明既述
本发明涉及可用于预防和/或治疗动物肥胖症的组合物。所述组合物包含可改变(例如上调或下调)动物的一种或多种与能量限制相关的基因的表达的物质。因此,在一个方面中,本发明涉及以有效预防或治疗动物肥胖症的量包含辣椒总碱或其活性代谢物的组合物。在一个实施方案中,该辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该组合物可进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、二十碳五烯酸(EPA)或二十二碳六烯酸(DHA)中的任何一种或多种。在一个实施方案中,该组合物是湿宠物食品。在另一实施方案中,该组合物是干宠物食品。在一个实施方案中,要治疗的动物是犬科动物。在另一实施方案中,要治疗的动物是猫科动物。
在另一方面中,本发明涉及通过以有效预防或治疗所述动物的肥胖症的量向所述动物施用包含可改变(例如上调或下调)动物的一种或多种与能量限制相关的基因的表达的物质的组合物来预防和/或治疗动物肥胖症的方法。在一个实施方案中,该组合物包含辣椒总碱或其活性代谢物。在一个实施方案中,该辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该组合物进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。在一个实施方案中,该组合物是湿宠物食品。在另一实施方案中,该组合物是干宠物食品。在一个实施方案中,要治疗的动物是犬科动物。在另一实施方案中,要治疗的动物是猫科动物。
在再一方面中,本发明涉及以有效造成动物的摄食自我调节的量包含辣椒总碱或其活性代谢物的组合物。在一个实施方案中,该辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该组合物进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。在一个实施方案中,该组合物是湿宠物食品。在另一实施方案中,该组合物是干宠物食品。在一个实施方案中,要治疗的动物是犬科动物。在另一实施方案中,要治疗的动物是猫科动物。
在另一方面中,本发明涉及造成动物的摄食自我调节的方法,包括以有效造成所述摄食自我调节的量向所述动物施用包含辣椒总碱或其活性代谢物的组合物。在一个实施方案中,该辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该组合物进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。在一个实施方案中,该组合物是湿宠物食品。在另一实施方案中,该组合物是干宠物食品。在一个实施方案中,要治疗的动物是犬科动物。在另一实施方案中,要治疗的动物是猫科动物。
在再一方面中,本发明涉及辣椒总碱或其活性代谢物在预防或治疗动物肥胖症的组合物的制造中的用途。在特别的实施方案中,该辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该组合物可进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。在一个实施方案中,该组合物是湿宠物食品。在另一实施方案中,该组合物是干宠物食品。在一个实施方案中,要治疗的动物是犬科动物。在另一实施方案中,要治疗的动物是猫科动物。
在再一方面中,本发明涉及辣椒总碱或其活性代谢物在造成动物的摄食自我调节的组合物的制造中的用途。在特别的实施方案中,该辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该组合物可进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。在一个实施方案中,该组合物是湿宠物食品。在另一实施方案中,该组合物是干宠物食品。在一个实施方案中,要治疗的动物是犬科动物。在另一实施方案中,要治疗的动物是猫科动物。
在进一步方面中,本发明涉及本发明的组合物在如本文详述的预防或治疗动物肥胖症的方法和造成动物的摄食自我调节的方法中的用途。
在再一方面中,本发明涉及包含本发明的组合物的套件。
参照下列实例的详述理解本发明的其它特征和优点。
发明详述
本文所述的本发明预计不限于所述的特别方法、规程和试剂,因为这些可变。还要理解的是,本文所用的术语仅用于描述特别实施方案,而不是要以任何方式限制本发明的范围。
除非另行指明,本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员一般理解的相同含义。本文引用或提到的所有专利、专利申请、出版物和其它参考文献出于各种目的经此引用并入本文。
除非文中清楚地另行指明,本文和所附权利要求中所用的单数形式“一”和“该”包括复数对象。
本文所用的术语“超重”、“胖”、“肥胖”、“肥胖症”和类似术语是指大于其理想体重的动物体重状况。例如,用于动物的术语“胖”可指使用动物护理专业人员和本领域其它技术人员已知的技术和方法确定为具有过量体脂肪组织的任何动物或易产生过量体脂肪组织的动物。例如,如果(1)动物具有25或更大(在表征动物状况的一些方法中被视为包括“超重”和“肥胖”动物的数值)的体重指数(BMI),(2)动物体重比由动物护理专业人员定义的或本领域技术人员已知的其“理想”体重高15%或更多,(3)通过DEXA测得的动物体脂肪百分比为27%或更大,或(4)动物具有由本领域技术人员使用“SmallAnimal Clinical Nutrition”,第4版,第13章(ISBN 0-945837-05-4)或其使用其它BCS法的对等物中公开的方法确定的在1至5的标度中大于3的体况分数(BCS),则该动物被视为“胖”。在一些情况下,比理想体重高20%或更多的动物被视为肥胖。关于本发明的方法和组合物,本文所用的术语“肥胖症”包括会被本领域技术人员视为大于该动物理想体重的任何体重状况。
本发明涉及任何动物,优选哺乳动物,更优选伴侣动物。术语“伴侣动物”是指与人亲密生活在一起的任何动物,并包括,但不限于,任何品种的犬科动物和猫科动物。例如,本文中设想,该术语也可以包括饮食可受人控制并且可获益于喂饲本文公开的配方的任何动物。这些动物可以包括,例如驯养农畜(例如,牛、马、猪等)以及圈养在例如动物园等中的非驯养动物和类似物。
本文所用的“有效预防或治疗肥胖症的量”、“有效量”和类似术语是指可有效实现特定生物学结果的本文所述的化合物、材料或组合物的量。这类结果可以包括,但不限于,肥胖症的治疗和/或预防。可以例如通过向需要其的动物施用本发明的组合物来实现这种有效活性。
本文所用的任何命名的物质不仅包括该物质,还包括其任何化学对等物、活性代谢物或盐,这视情况而定。例如,本文提供的术语“维生素”意在包括本领域技术人员易确定的可适合配制在本发明的组合物中的这些化合物的任何和所有化学形式或对等物。
本文所用的“辣椒总碱”是指对通常与辣椒属植物的果实,例如红辣椒联系在一起的“热”或辛辣感负责的化合物。这类化合物包括,辣椒碱(即,8-甲基-N-香草基-6-壬烯酰胺)、二氢辣椒碱、降二氢辣椒碱、高辣椒碱和高二氢辣椒碱,它们的结构和化学式是本领域技术人员熟悉的。本文所用的该术语包括天然生成的辣椒总碱(例如,分离自红辣椒或辣椒粉)以及它们的任何和所有合成形式,和它们的任何盐或代谢物。辣椒总碱的性质可以是作为粉末、油、树脂或适合与本文公开的组合物配制的其它形式。市售形式包括,例如,Capsicum frutescens L.或Capsicum annuum L.的干果实,例如可作为“oleoresin capsicum,Africantype”(在下列实施例中简称为“辣椒”)(KALSEC,Kalamazoo,MI)购得。如本文所设想,本发明的组合物可包含一种或多种辣椒总碱。
本文所用的“可溶纤维”是指在消化过程中吸水并减缓营养素吸收速率且通常存在于例如燕麦麸、种子、豆和某些水果和蔬菜,如甜菜浆、瓜尔胶、菊苣根、车前草、果胶、蓝莓、蔓越橘、南瓜、苹果、燕麦、豆、柑橘、大麦或豌豆中的膳食纤维。本文所用的该术语包含本领域技术人员显而易见的适用于本文公开的组合物的任何来源的可溶纤维。
本文所用的术语“改变动物的一种或多种与能量限制相关的基因的表达”是指基因的mRNA水平的上调或下调以致可相应地改变这些基因编码的蛋白质的水平,从而对动物体重产生有益作用。不受任何特定理论限制,表达的改变可归因于mRNA转录产物的稳定性的改变和/或实际转录水平的改变。
“动物的与能量限制相关的基因”是指受到能量或热量限制的动物体内被改变的那些基因。不受任何特定理论限制,这类基因的实例包括Higami,Y等人J.Nutr.2006 Feb;136(2):343-52中论述的那些并被认为包括与发炎、细胞骨架、细胞外基质和血管生成相关的基因。下文中公开的表1A列出一些相应的犬科动物基因,其表达在各种化合物存在下体外改变;本文公开的辣椒碱可以体外改变这些基因中的几种(用“*”标示)。
表1A
小鼠的与能量限制相关的基因(Higami等人),在犬科动物细胞中也由于体外暴露在化合物中而改变 补体、它们的调节子和它们的受体
补体C1q A链
补体组分4*
CD59抗原
富含组氨酸的糖蛋白
干扰素调节转录因子和干扰素诱导蛋白
Fragilis/大鼠干扰素可诱导的蛋白的同系物*
人类干扰素诱发的35-kDa蛋白的同系物*
急性时相蛋白
结合珠蛋白
血清淀粉状蛋白A3蛋白
MHC及其调节子
含调节因子X-相关的锚蛋白的蛋白
蛋白质降解
组织蛋白酶S
组织蛋白酶Z
细胞类型特异性的
溶酶体相关的多跨膜(multitransmembrane)蛋白
CD81抗原
天然抗性相关的巨噬细胞蛋白1
α细胞色素b558/细胞色素b-245*
CD68抗原
含EGF-样的模块,粘蛋白-样的激素受体1;EMR1
TYRO蛋白质酪氨酸激酶结合蛋白;TYROBP
Fyn原癌基因
发炎,其它
膜联蛋白A1
MD-1/淋巴细胞抗原86
微管蛋白
α微管蛋白,1*
α微管蛋白,6
微管蛋白,β2
微管蛋白,β3
微管蛋白,β5
其它细胞骨架
γ肌动蛋白,细胞质的
血影蛋白,β,脑
肌动蛋白-调节的
ε含Tcp1亚单位的伴侣素(Chaperonin)
肌动蛋白相关蛋白2/3复合体,亚单位2,34kDa
L-网素(Plastin)/淋巴细胞胞质蛋白1*
氯苄乙胺(Septin)9
胸腺素,β10
胶原
α前胶原,I型,1
α前胶原,V型,1
胶原调节的
赖氨酰氧化酶;Lox
其它细胞外基质
巢蛋白2;NID2/骨巢蛋白
Fibulin 2
细胞粘合
δSarcoglycan,
DNA结合抑制剂1
α缺氧诱导因子1,亚单位
细胞外基质
凝血栓蛋白1
蛋白质转换
中胚层特异性转录产物
丝氨酸蛋白酶抑制剂,进化枝B,成员6
本发明基于令人惊讶的发现,即在体外,某些物质可以改变(例如上调或下调)许多犬科动物基因的表达,这些基因在小鼠中在能量限制过程中也改变,本文公开的体内数据特别表明包含辣椒总碱,例如辣椒碱的组合物可用于治疗或预防动物肥胖症。具体而言,不受本发明的任何特定理论或作用模式限制,数据表明,在食品组合物中加入辣椒碱可造成伴侣动物摄食的自动减少。因此,在一个具体方面中,本发明涉及可用于预防和/或治疗动物肥胖症的组合物,该组合物以有效治疗或预防动物肥胖症的量包含辣椒总碱,优选辣椒碱。在另一方面中,本发明涉及预防和/或治疗动物肥胖症的方法,包括以有效治疗或预防动物肥胖症的量向该动物施用包含辣椒总碱,优选辣椒碱的组合物。
本文所用的“动物的摄食自我调节”是指动物摄取一定量的食物直至饱食(saited)且不再摄取超出该量的更多食物(这会造成肥胖)的倾向。例如,这种倾向可以表现为该动物(例如犬科动物)离开仍含食物的食碗,与喂饲其它食品组合物时相比,该动物在摄取较少量的本发明的组合物后获得饱足感。对猫科动物(其通常只是将食物留在碗中以便此后随时回来再吃)而言,本文中认为本发明的组合物可造成该猫科动物在每次光顾其食碗时实际摄取的总食物量的总体减少。
本文所用的“成分”是指组合物的任何组分。“营养素”是指提供营养的物质。在一些情况下,一成分可包含超过一种“营养素”,例如,组合物可包含鱼油作为成分,该油本身包含重要的营养素,如EPA和DHA。这些术语的区别是本领域技术人员熟悉的。
如本文设想的那样,本发明的组合物意在包括营养上完全和平衡的动物饲料组合物,其另外包含辣椒总碱,优选辣椒碱。在另一些方面中,本发明的组合物可进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。
营养上完全和平衡的宠物食品组合物是本领域技术人员熟悉的。例如,适用于营养上完全和平衡的动物饲料组合物的物质,如营养素和成分及其推荐量可见于例如the Official Publication of the Association ofAmerican Feed Control 0fficials,Inc.(AAFCO),Atlanta,GA 2005或theNational Research Council’s Nutrient Requirements of Dogs and Cats,TheNational Academy Press,Washington,D.C.,2006。
例如,本发明的营养上完全和平衡的狗粮组合物可包含:
按重量计大约0至大约90%,优选大约5%至大约45%的碳水化合物;
按重量计大约5%至大约70%,优选大约10%至大约60%的蛋白质;
按重量计大约2%至大约50%,优选大约5%至大约40%的脂肪;
按重量计大约0.1%至大约20%,优选大约1%至大约11%的总膳食纤维;
按重量计大约0至大约15%,优选大约2%至大约8%的维生素和矿物质、抗氧化剂和支持动物营养需求的其它营养素;和
大约25ppm至大约200ppm,优选大约50ppm至大约125ppm的辣椒碱。
例如,本发明的营养上完全和平衡的猫粮组合物可包含:
按重量计大约0至大约90%,优选大约5%至大约45%的碳水化合物;
按重量计大约5%至大约70%,优选大约20%至大约60%的蛋白质;
按重量计大约2%至大约50%,优选大约5%至大约40%的脂肪;
按重量计大约0.1%至大约20%,优选大约1%至大约11%的总膳食纤维;
按重量计大约0至大约15%,优选大约2%至大约8%的维生素和矿物质、抗氧化剂和支持动物营养需求的其它营养素;和
大约25ppm至大约200ppm,优选大约50ppm至大约125ppm的辣椒碱。
如上所述,本发明的组合物可另外包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。本领域技术人员无需过度实验就可以容易地确定各自的合适量,例如通过根据用于配制宠物食品组合物的传统方法进行生物利用率、热稳定性和/或效力研究。例如,量可以为大约0.3%至大约7%可溶纤维、大约0.50%至大约1.50%蛋氨酸、大约0.10%至大约0.60%EPA和大约0.10%至大约0.50%DHA。
本发明的组合物可另外以无损本发明实现的目的和作用的量含有本领域中通常已知的添加剂,例如稳定剂和加工助剂。可以添加稳定剂以通过补充或增强用于提高贮存寿命的物理方法的效果来提高该组合物的贮存寿命。稳定剂的实例是防腐剂、抗氧化剂、增效剂和螯合剂、包装气体、乳化剂、增稠剂、胶凝剂和润湿剂。乳化剂和增稠剂的实例包括,但不限于,明胶、纤维素醚、淀粉、淀粉酯、淀粉醚和改性淀粉。本领域已知的其它添加剂可用于营养和适口性目的,其合适的量可以由本领域普通技术人员容易地确定。例如,可以使用最多大约5重量%的这类添加剂。添加剂还可以包括,但不限于,氧化铁、氯化钠、柠檬酸钾、氯化钾和其它可食用盐、调味品、维生素、矿物质和着色剂。
尽管设想了任何稠度或含湿量的食品,但本发明的组合物优选可以例如是湿或干的动物食品组合物。“湿”食品是指在罐头或箔袋中出售并具有大约70至大约90%含湿量的食品。“干”食品是指具有大约5至大约15%含湿量的组合物,并通常以小碎粒或粗粒形式制造。如美国专利6,517,877中所述,本文中还设想了可能包含各种稠度的组分以及可能具有超过一种稠度的组分的组合物,例如,软的耐嚼的肉状粒子以及具有外部谷类组分和内部奶油组分的粗粒。
本文中认为可采用本领域技术人员熟悉的传统制造方法制造本发明的组合物。可以在制造过程中的任何时刻加入辣椒总碱,但是,考虑到这些化合物的挥发性质,应特别小心避免通过热处理制造过程中的活性或“热”的任何可能的损失(例如,在Scoville装置中测得)以及在制造过程中与辣椒总碱的任何不必要接触。
如本文所设想,本发明的组合物可以以从大约25ppm至大约200ppm,优选从大约50ppm,更优选从大约125ppm的活性成分量包含辣椒总碱。明显地,辣椒总碱的量不会高到对摄食后的动物造成不利的、不合意的或有害的身体影响。如下文提供的实施例中所公开,本发明的组合物包含有效预防或治疗动物肥胖症但既不会阻止动物摄食也不会对该动物造成任何身体上有害的影响的量的辣椒总碱。
如上所述,本发明的另一具体方面涉及通过向动物施用有效量的包含一种或多种辣椒总碱的组合物来治疗或预防动物肥胖症的方法。该辣椒总碱优选是辣椒碱。本发明的组合物和方法可以是总体减重程序的一部分,例如,该组合物和方法可以与定期锻炼和限制获取零食、餐桌余食或其它宠物小吃联合施用。此外,由于本发明的组合物使该动物自我调节摄食量,认为本文公开的组合物也特别可用于不是特别留意其宠物的身体状况或健康状况的宠物主人,例如可能有过量喂饲其宠物的倾向和/或较不倾向于花时间锻炼其宠物的宠物主人。
此外,本发明涉及辣椒总碱或其活性代谢物在预防或治疗动物肥胖症的组合物的制造中以及造成动物的摄食自我调节的组合物的制造中的用途。对任一用途而言,在特别的实施方案中,该辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。在另一实施方案中,该组合物可进一步包含可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA中的任何一种或多种。在一个实施方案中,该组合物是湿宠物食品。在另一实施方案中,该组合物是干宠物食品。在一个实施方案中,要治疗的动物是犬科动物。在另一实施方案中,要治疗的动物是猫科动物。
本发明还包括本文公开的任何组合物在预防或治疗动物肥胖症的方法中的用途,包括以有效预防或治疗所述动物的肥胖症的量向所述动物施用本发明的组合物。类似地,本发明还包括本文公开的任何组合物在造成动物的摄食自我调节的方法中的用途,包括以有效造成该动物的摄食自我调节的量向所述动物施用所述组合物。
本文中也设想,本发明包括包含本发明的组合物的套件。除含有本发明的组合物外,该套件可进一步包括,例如关于伴侣动物中的肥胖症问题的信息和供有意改善其伴侣动物的总体身体状况的宠物主人使用的包括喂饲本发明的组合物的指示。该套件可进一步包含供宠物主人监测其伴侣动物的身体状况用的指示和工具,记录宠物体重减轻的材料和指示,例如但不限于,用于记录动物的体重减轻的传统笔记本或日志以及适用于电子汇编这类数据的电子装置或其它装置,如计算机软件。该套件可进一步包含适合宠物和宠物主人的锻炼设备,如球、飞盘、飞碟、带有计步器的皮带或类似装置,或可用作总减重套件的一部分的其它物品。此外,该套件可包括喂饲本发明的组合物的伴侣动物用的低热量小吃或零食。该套件可以是适合在例如杂货店、宠物店或折扣店以及在兽医诊所中商业出售或零售的任何形式。可以使用传统的制造和包装如本文所述套件的方法,并且是本领域技术人员熟悉的。
下列实施例进一步例证本发明且不是要限制本发明。
实施例
实施例1
可体外改变犬科动物基因的表达的物质的数据库生成
我们已经汇编了已知根据下文提供和上文描述的下列方法体外改变犬科动物细胞中的各种犬科动物基因的表达的物质的数据库(参见,例如U.S.2006-0200320A1)。
使用下列犬科动物细胞系以两种浓度检验试验物质:CCL34(肾)、CRL1430(胸腺)、CCL183(骨)(都获自the American Tissue CultureCollection)和CTAC(甲状腺)(参见,Measurement of NK Activity inEffector Cells Purified from Canine Peripheral Lymphocytes,VeterinaryImmunology and Immunopathology,35(1993)239-251)。简言之,在OptiCell室中根据传统方法培养细胞,第二天用试验物质处理。以两种浓度中的较高浓度使用的溶剂用作对照物。第二天,获取细胞进行染色体组检验。
使用市售方法,例如RNAeasy Mini Kit(Qiagen,Valencia,CA)根据制造商指示和传统方法从犬科动物培养物中分离RNA。使用RNA6000 Nano Assay和Agilent 2100 Bioanalyzer分析分离出的RNA的品质。根据在试剂盒指南(Reagent Kit Guide)中提供的制造商指示(参见2003年11月的版本,Agilent Technologies)在下列修改下进行该程序:在凝胶制备过程中,不是将过滤凝胶分离成各65微升的等分试样,而是将储备过滤凝胶保存在原始微离心管中,并按需要将该65微升等分;在加载RNA 6000 Nano Marker的同时,向不含样品的各样品孔中加入1微升不含RNase-的水(代替RNA 6000 Nano Marker)。在加载RNA 6000Ladder和样品时,热在71℃下使样品和RNA 6000 Ladder变性另外30秒(总共2.5分钟);关于“Starting the Chip Run”,从检验目录中选择“Eukaryote Total RNA Nano”选项。
使用Affymetrix犬科动物基因芯片Canine-1和Canine-2根据制造商的指示测量处理细胞系和对照物的基因表达。针对任何给定处理,基因表达数据被确定为“上调”或“下调”。基因是“上调”还是“下调”的决定基于倍数变化,其作为各独立探针的处理强度/对照物强度来计算。如果其值<1/1.5(对横跨所有4个细胞系的分析而言)或<1/2(对细胞系内的分析而言),该倍数变化被视为下调,如果其>1.5(对横跨所有4个细胞系的分析而言)或>2(对细胞系内的分析而言),被视为上调。此外,如果根据所用软件其在所比较的状况(处理物或对照物)的仅一个中被称作“存在”并在另一个中被称作“不存在”或“微小(marginal)”且倍数变化显著,则探针被视为显著以便进一步研究。从进一步分析中排除在这两个处理中表现为反向调节的探针。使用GeneSpring 7.0版(GS)软件(Agilent Corporation)分析原始数据并使用R-Bioconductor(RB)免费软件证实。这两个软件包都用于由Affymetrix仪器生成的CEL文件计算探针强度。每探针的存在/不存在/微小(Present/Absent/Marginal)结论和P-值单独使用R-Bioconductor和GeneSpring软件计算。
数据分析使用两个方案。第一:“跨细胞系”和“在独立的细胞系内”。在第一方案中,选择计分用的基因,条件是它们被认为显著并且是所有细胞系共有的。“跨细胞系”产生具有最小干扰的最高置信数据,并且可以提供关于各成分影响哪些基因的最可能的线索。在第二方案中,仅将在独立的细胞系内根据这两个软件包在两个处理中表现出显著倍数变化的那些基因计分。
上文提供的表1A是其表达在各种化合物存在下体外改变的犬科动物基因的名单。具体而言,被辣椒碱改变的那些基因用星号(*)标示。
实施例2
体内犬科动物摄食研究
基于实施例1中的体外数据,如下所述进行测试包含辣椒碱的食品的体内犬科动物摄食研究。
根据用在该研究中的传统方法确定体况分数高于“4”(在可能“5”分的范围内)的10只超重犬。向这10只犬喂饲对照食物(表1和2)2周。每天记录摄食且每周记录体重。在2周喂饲期的最后,根据传统方法采集血样并分析化学筛选(见表3)。在喂饲对照食物两周后,随后向犬喂饲含有“辣椒”(Kalsec,Kalamazoo,MI)的新型治疗食物(根据传统方法制备)两周。每天记录摄食且每周记录体重。在2周喂饲期的最后,采集血样并分析化学筛选(表3)。
结果表明,摄入含辣椒的食物的犬只的摄食减少;因此,喂饲含辣椒的饮食的犬只减轻0.13公斤。有趣地,这些犬只也具有降低的血糖水平、血清尿素氮、丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶(表3-5)。
表1.含辣椒的治疗食物的成分含量
表2.含辣椒的治疗食物的营养素含量
表3.喂饲对照食物两周和喂饲治疗食物两周的犬的化学筛选数据
对照食物vs.治疗食物(p值)
表4.喂饲对照食物两周和喂饲治疗食物两周的犬的体重数据
表5.喂饲对照食物两周和喂饲治疗食物两周的犬的摄食数据
Claims (27)
1.以有效预防或治疗动物肥胖症的量包含辣椒总碱或其活性代谢物的组合物。
2.权利要求1的组合物,其中所述组合物可改变一种或多种与动物的能量限制相关的基因的表达。
3.权利要求1的组合物,其中所述辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。
4.权利要求1的组合物,其中所述辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。
5.权利要求1-4任一项的组合物,其中所述组合物另外包含选自可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA的物质。
6.权利要求1-5任一项的组合物,其中所述组合物是湿宠物食品。
7.权利要求1-5任一项的组合物,其中所述组合物是干宠物食品。
8.权利要求1-7任一项的组合物,其中所述动物是犬科动物。
9.权利要求1-7任一项的组合物,其中所述动物是猫科动物。
10.预防或治疗动物肥胖症的方法,包括以有效预防或治疗所述动物的肥胖症的量向所述动物施用包含辣椒总碱或其活性代谢物的组合物。
11.权利要求10的方法,其中所述组合物可改变一种或多种与动物的能量限制相关的基因的表达。
12.权利要求10的方法,其中所述辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。
13.权利要求10的方法,其中所述辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。
14.权利要求10-13任一项的方法,其中所述组合物另外包含选自可溶纤维、蛋氨酸、EPA和DHA的物质。
15.权利要求10-14任一项的方法,其中所述组合物是湿宠物食品。
16.权利要求10-14任一项的方法,其中所述组合物是干宠物食品。
17.权利要求10-16任一项的方法,其中所述动物是犬科动物。
18.权利要求10-16任一项的方法,其中所述动物是猫科动物。
19.辣椒总碱或其活性代谢物在预防或治疗动物肥胖症的组合物的制造中的用途。
20.辣椒总碱或其活性代谢物在造成动物的摄食自我调节的组合物的制造中的用途。
21.权利要求19-20的用途,其中所述辣椒总碱是辣椒碱或其活性代谢物。
22.权利要求19-20的用途,其中所述辣椒总碱是二氢辣椒碱或其活性代谢物。
23.造成动物的摄食自我调节的方法,包括以有效造成所述摄食自我调节的量向所述动物施用包含辣椒总碱或其活性代谢物的组合物。
24.以造成动物的摄食自我调节的量包含辣椒总碱或其活性代谢物的组合物。
25.前述权利要求任一项的组合物在造成动物的摄食自我调节的方法中的用途,包括以有效造成所述摄食自我调节的量向所述动物施用所述组合物。
26.前述权利要求任一项的组合物在预防或治疗动物肥胖症的方法中的用途,包括以有效预防或治疗所述动物的肥胖症的量向所述动物施用所述组合物。
27.包含前述权利要求任一项的组合物的套件。
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