CN101654486A - 一种硒化黄芪多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种硒化黄芪多糖的制备方法，将黄芪多糖II加入到脱水吡啶中，然后添加含硒试剂－SeOCl2，再用无水乙醇洗涤，沉淀离心，真空冷冻干燥，最终获得浅粉色粉末状硒化黄芪多糖。本发明方法可增加硒化黄芪多糖中有机硒的含量，制备的硒化黄芪多糖生物利用率高，缩短生产时间，提高生产效率，并经济安全。
Description
技术领域
本发明属于合成工艺技术领域，涉及硒化黄芪多糖的制备方法。
背景技术
黄芪是一味常用中药，现代研究证明，黄芪可以调节机体免疫，研究发现黄芪不仅是一味免疫增强剂，具有杀菌抗病毒效果的良药，而且是一味具有促生长，提高生长效率的畜禽饲料添加剂，而在这其中起主要作用的成分就是黄芪多糖，其具有一下作用：
1、具有明显促进畜禽生长，提高饲料利用率的作用
2、参加免疫调节，提高免疫功能；
3、具有替代抗生素的作用，减少抗生素在畜禽体内的残留
4、属于生物添加剂，属于安全环保的产品。
研究表明，仔猪日粮中添加1％黄芪多糖具有明显提高日增重，降低料肉比的作用。显著降低仔猪腹泻率，进一步研究发现仔猪日粮中添加黄芪多糖可以改善仔猪倡导结构形态，提高微绒毛的高度，促进营养物质的吸收。卢升云研究了在断奶仔猪应激模式下添加黄芪多糖对仔猪腹泻的影响，结果发现添加黄芪多糖组仔猪腹泻明显低于对照组，生长速度明显高于对照组。谢麟等报道，黄芪多糖能使动物体诱生内源性干扰素，作用于细胞产生抗病毒蛋白而抑制病毒蛋白合成，从而产生抗病毒感染的作用，用于治疗鸡传染性法氏囊病和流感等病毒性传染病。李丽娅等就黄芪多糖抗流感病毒的作用进行了研究，结果表明，黄芪多糖溶液100g/L，每次滴鼻0.05mL，每天2次的剂量对小鼠流感病毒性肺炎有显著的治疗作用。100和200g/L浓度组能抑制流感病毒增殖，且200g/L浓度组能延长感染流感病毒小鼠的生存时间。
硒是人体必需的微量元素，可以延缓衰老，防治癌症和心血管疾病，防治克山病以及大骨病，防治溶血性贫血，提高视力及防治肝坏死。
将硒和黄芪多糖结合将具有双重功效，将能提高黄芪多糖的功效，并能互补相互的缺陷，最大力度的提高利用率。
但是实际生产中制备的硒化黄芪多糖利用率和含硒量较低，如何提高硒化黄芪多糖的生产效率并同时提高其生物利用率是当前的黄芪多糖生产中的一大难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种硒化黄芪多糖的制备方法，以此方法制备的硒化黄芪多糖含硒量高，生物利用率高，并经济安全，通过以下技术方案实现：
(1)将黄芪多糖II加入到脱水吡啶中，使用磁力搅拌器搅拌，搅拌20min，尽量使其在吡啶中分布均匀，然后分三次滴入含硒试剂-SeOCl2，每次滴入含硒试剂-SeOCl2后，充分搅拌20min，在常温下反应1h，按照这个程序重复三次；(2)然后用无水乙醇沉淀，5000rpm离心，去掉上清液，用无水乙醇洗涤沉淀3次，5000rpm离心去上清液，用少量的水溶解沉淀后透析；(3)再用无水乙醇，沉淀离心，真空冷冻干燥，最终获得浅粉色粉末状硒化黄芪多糖。
原料比为：
黄芪多糖II∶吡啶∶含硒试剂-SeOCl2＝10Kg∶100L∶(10-30)L
所用的含硒试剂-SeOCl委托荣大医药化工完成，其中含硒4％。
本发明提供的方法，不仅提高硒化黄芪多糖的含硒率，降低其生产成本，提高其生产效率，而且能提高黄芪多糖单位质量的活性。具体体现在：
(1)选用生物活性高的黄芪多糖II，提高单位质量黄芪多糖的活性；
(2)通过试验得知，当样品重量和硒化剂(具有酰氯结构的含硒试剂-SeOCl2)比例为1∶3时，将获得含硒量最高的硒化黄芪多糖，节约成本。
(3)试验得知，反应48h获得的产品含硒量最高，与以往的72h以上的硒化时间相比较，本方法节约了生产时间，大大提高了生产效率。
(4)制备硒化黄芪多糖过程中采用透析法，可将吸附于黄芪多糖样品中的小分子硒化物透析出去，从而增加硒化黄芪多糖中有机硒的含量。
(5)分三次滴入含硒试剂-SeOCl2，提高硒化率，使其充分反应，与传统的一次滴入相比较，能够得到更高含硒量的硒化黄芪多糖。
附图说明
图1为硒化黄芪多糖制备的合成工艺路线。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
实施例一
一黄芪多糖的硒化
(一)实验材料
(1)具有酰氯结构的含硒试剂-SeOCl2(含硒量为4％，委托荣大医药化工制备)；
(2)黄芪多糖II；
(3)磁力搅拌器；
(4)离心机；
(5)脱水吡啶；
(6)脱水装置；
(7)无水乙醇；
(8)材料透析袋(Vising产品)；
(二)试验方法
(1)合成一种具有酰氯结构的含硒试剂-SeOCl2(委托杭州荣大医药有限公司完成，含硒4％)；
(2)黄芪多糖硒化：参见图1，将黄芪多糖II加入到脱水吡啶中，使用磁力搅拌器搅拌，搅拌20min，尽量使其在吡啶中分布均匀，然后分三次滴入含硒试剂-SeOCl2，每次滴入含硒试剂-SeOCl2后，充分搅拌20min，在常温下反应1h，按照这个程序重复三次，然后用无水乙醇沉淀，5000rpm离心，去掉上清液，用无水乙醇洗涤沉淀3次，5000rpm离心去上清液，用少量的水溶解沉淀后透析，再用无水乙醇，沉淀离心，真空冷冻干燥，最终获得浅粉色粉末状硒化黄芪多糖。
原料比例如下：
黄芪多糖II∶吡啶∶含硒试剂-SeOCl2＝10Kg∶100L∶10L
二荧光法测定硒化黄芪多糖含硒量。
(一)实验材料
(1)标准硒溶液
(2)盐酸
(3)DNN
(4)硝酸
(5)高氯酸
(6)双氧水
(7)EDTA-2Na
(8)盐酸羟胺
(9)日本岛津RF-540荧光分光光度计
(二)方法
(1)样品消化：称取硒化黄芪多糖II0.02g，放入250ml锥形瓶中，加入混合酸(硝酸∶高氯酸＝2∶1)15ml，室温下放置25min，转移到加热板上加热消化，待少量高氯酸白烟逸出，取出，冷却，加入双氧水1ml，出现白烟，加入浓盐酸1ml。用少量水冲洗凝结在壁上的物质。
(2)在上述消化液中加入5ml的0.2M的EDTA，5ml的1％盐酸羟胺溶液，混匀，加2滴甲酚红指示剂，用1∶1氯水调解pH1.5左右，移至暗室，加入1％DAN的盐酸溶液4ml，加盖，沸水浴中加热5min，冷却，加入5ml环己烷，摇匀，转移到分页漏斗中，分层收集有机相，离心，测定其荧光强度。
(3)测定硒的标准溶液，制作标准曲线，从而获得样品中硒的含量为：15950ug/g。
实施例二
一黄芪多糖的硒化
(一)实验材料
(1)具有酰氯结构的含硒试剂-SeOCl2(含硒量为4％，委托荣大医药化工制备)；
(2)黄芪多糖II；
(3)磁力搅拌器；
(4)离心机；
(5)脱水吡啶；
(6)脱水装置；
(7)无水乙醇；
(8)材料透析袋(Vising产品)；
(二)试验方法
(1)合成一种具有酰氯结构的含硒试剂-SeOCl2(委托杭州荣大医药有限公司完成，含硒4％)；
(2)黄芪多糖硒化：参见图1，将黄芪多糖II加入到脱水吡啶中，使用磁力搅拌器搅拌，搅拌20min，尽量使其在吡啶中分布均匀，然后分三次滴入含硒试剂-SeOCl2，每次滴入含硒试剂-SeOCl2后，充分搅拌20min，在常温下反应1h，按照这个程序重复三次，然后用无水乙醇沉淀，5000rpm离心，去掉上清液，用无水乙醇洗涤沉淀3次，5000rpm离心去上清液，用少量的水溶解沉淀后透析，再用无水乙醇，沉淀离心，真空冷冻干燥，最终获得浅粉色粉末状硒化黄芪多糖。
原料比例如下：
黄芪多糖II∶吡啶∶含硒试剂-SeOCl2＝10Kg∶100L∶20L
二荧光法测定硒化黄芪多糖含硒量。
(一)实验材料
(1)标准硒溶液
(2)盐酸
(3)DNN
(4)硝酸
(5)高氯酸
(6)双氧水
(7)EDTA-2Na
(8)盐酸羟胺
(9)日本岛津RF-540荧光分光光度计
(二)方法
(1)样品消化：称取硒化黄芪多糖II0.02g，放入250ml锥形瓶中，加入混合酸(硝酸∶高氯酸＝2∶1)15ml，室温下放置25min，转移到加热板上加热消化，待少量高氯酸白烟逸出，取出，冷却，加入双氧水1ml，出现白烟，加入浓盐酸1ml。用少量水冲洗凝结在壁上的物质。
(2)在上述消化液中加入5ml的0.2M的EDTA，5ml的1％盐酸羟胺溶液，混匀，加2滴甲酚红指示剂，用1∶1氯水调解pH1.5左右，移至暗室，加入1％DAN的盐酸溶液4ml，加盖，沸水浴中加热5min，冷却，加入5ml环己烷，摇匀，转移到分页漏斗中，分层收集有机相，离心，测定其荧光强度。
(3)测定硒的标准溶液，制作标准曲线，从而获得样品中硒的含量为：16670ug/g。
实施例三
一黄芪多糖的硒化
(一)实验材料
(1)具有酰氯结构的含硒试剂-SeOCl2(含硒量为4％，委托荣大医药化工制备)；
(2)黄芪多糖II；
(3)磁力搅拌器；
(4)离心机；
(5)脱水吡啶；
(6)脱水装置；
(7)无水乙醇；
(8)材料透析袋(Vising产品)；
(二)试验方法
(1)合成一种具有酰氯结构的含硒试剂-SeOCl2(委托杭州荣大医药有限公司完成，含硒4％)；
(2)黄芪多糖硒化：参见图1，将黄芪多糖II加入到脱水吡啶中，使用磁力搅拌器搅拌，搅拌20min，尽量使其在吡啶中分布均匀，然后分三次滴入含硒试剂-SeOCl2，每次滴入含硒试剂-SeOCl2后，充分搅拌20min，在常温下反应1h，按照这个程序重复三次，然后用无水乙醇沉淀，5000rpm离心，去掉上清液，用无水乙醇洗涤沉淀3次，5000rpm离心去上清液，用少量的水溶解沉淀后透析，再用无水乙醇，沉淀离心，真空冷冻干燥，最终获得浅粉色粉末状硒化黄芪多糖。
原料比例如下：
黄芪多糖II∶吡啶∶含硒试剂-SeOCl2＝10Kg∶100L∶30L
二荧光法测定硒化黄芪多糖含硒量。
(一)实验材料
(1)标准硒溶液
(2)盐酸
(3)DNN
(4)硝酸
(5)高氯酸
(6)双氧水
(7)EDTA-2Na
(8)盐酸羟胺
(9)日本岛津RF-540荧光分光光度计
(二)方法
(1)样品消化：称取硒化黄芪多糖II0.02g，放入250ml锥形瓶中，加入混合酸(硝酸∶高氯酸＝2∶1)15ml，室温下放置25min，转移到加热板上加热消化，待少量高氯酸白烟逸出，取出，冷却，加入双氧水1ml，出现白烟，加入浓盐酸1ml。用少量水冲洗凝结在壁上的物质。
(2)在上述消化液中加入5ml的0.2M的EDTA，5ml的1％盐酸羟胺溶液，混匀，加2滴甲酚红指示剂，用1∶1氯水调解pH1.5左右，移至暗室，加入1％DAN的盐酸溶液4ml，加盖，沸水浴中加热5min，冷却，加入5ml环己烷，摇匀，转移到分页漏斗中，分层收集有机相，离心，测定其荧光强度。
(3)测定硒的标准溶液，制作标准曲线，从而获得样品中硒的含量为：16820ug/g。
三动物实验
(一)
实验动物：21日龄断奶仔猪120头。
实验方法：120头仔猪随即分为四组，每组30头，对断奶仔猪进行10天连续饲喂，分组情况如下：
第一组：对照组，只饲喂全价营养饲料，不给药；
第二组：添加黄芪多糖组，饲喂添加0.25％黄芪多糖的全价营养饲料；
第三组：添加亚硒酸钠组，饲喂添加1ppm亚硒酸钠的全价营养饲料；
第四组：添加硒化黄芪多糖组，饲喂添加0.25％硒化黄芪多糖的全价营养饲料。
试验结束后，称取体重，抽取血液做血清分析，结果参见表1：
表1
| 组别 | 添加量 | 腹泻率％ | 料肉比 | 日增重(Kg) | lgA(g/L) | lgG(g/L) | lgM(g/L) |
| 对照组 | —— | 57.50 | 4.93 | 0.0218 | 0.77 | 7.99 | 0.89 |
| 黄芪多糖 | 0.25％ | 40.00 | 4.56 | 0.0239 | 0.79 | 9.78 | 1.01 |
| 亚硒酸钠 | 1ppm | 54.20 | 4.89 | 0.0228 | 0.76 | 8.56 | 0.92 |
| 硒化黄芪多糖 | 0.25％ | 26.70 | 4.24 | 0.0264 | 0.82 | 10.76 | 1.18 |
与对照组相比，仔猪腹泻率降低30.8％，料肉比提高16.0％，日增重提高21.1％，免疫球蛋白A(lgA)、免疫球蛋白G(lgG)、免疫球蛋白M(lgM)分别提高6.5％，34.7％，32.6％，远远高于黄芪多糖组和黄芪多糖组，由此可见饲料中添加硒化黄芪多糖可以显著降低仔猪的腹泻率和料肉比，明显增加日增重、lgA、lgG、lgM，从而提高机体自身免疫能力。
(二)
实验动物：选自1日龄雌雄混群的Avian鸡300羽。
实验方法：300羽仔鸡随即分为四组，每组75羽，对仔鸡进行42天连续饲喂，采用四层笼上饲养，全期自由采食自由饮水，全日24h光照，分组情况如下：
第一组：对照组，只饲喂全价营养饲料；
第二组：添加黄芪多糖组，饲喂添加0.5％黄芪多糖的全价营养饲料；
第三组：添加亚硒酸钠组，饲喂添加1ppm亚硒酸钠的全价营养饲料；
第四组：添加硒化黄芪多糖组，饲喂添加0.5％硒化黄芪多糖的全价营养饲料。
试验结束后，称取体重，抽取血液做血清分析，结果参见表2：
表2
| 组别 | 添加量 | T-SODU/ml | MDAg/l | 胸腺g | 法氏囊g | 脾脏g | lgA(g/L) | lgG(g/L) | lgM(g/L) |
| 对照组 | —— | 55.58 | 3.51 | 2.93 | 2.48 | 0.58 | 0.05 | 0.14 | 0.173 |
| 黄芪多糖 | 0.5％ | 63.32 | 3.15 | 2.98 | 2.49 | 0.60 | 0.06 | 0.17 | 0.178 |
| 亚硒酸钠 | 1ppm | 59.78 | 3.58 | 2.94 | 2.46 | 0.59 | 0.05 | 0.15 | 0.174 |
| 硒化黄芪多糖 | 0.5％ | 71.90 | 2.89 | 3.05 | 2.47 | 0.73 | 0.07 | 0.19 | 0.180 |
与对照组相比，MDA(丙二醛)降低了17.66％，仔鸡的T-SOD、胸腺、法氏囊、脾脏、lgA、lgM、lgG分别提高了29.36％、4.10％、-0.40％、25.86％、40.00％、35.71％、4.05％。由此可见饲料中添加硒化黄芪多糖可以显著降低仔鸡血液中的MDA，明显增加lgA、lgG、lgM、T-SOD(总抗氧化能力)、胸腺质量、法氏囊质量，从而提高机体自身免疫能力、降低自己的发病率，提高成活率。
Claims (2)
1.一种硒化黄芪多糖的制备方法，其特征在于，通过以下技术方案实现：
(1)将黄芪多糖II加入到脱水吡啶中，用磁力搅拌器搅拌，搅拌20分钟，然后分三次滴入含硒试剂-SeOCl2，每次滴入含硒试剂-SeOCl2后，充分搅拌，在常温下反应1小时，重复三次；(2)然后用无水乙醇沉淀，5000rpm离心，去掉上清液，用无水乙醇洗涤沉淀3次，5000rpm离心去上清液，用少量的水溶解沉淀后透析；(3)再用无水乙醇洗涤，沉淀离心，真空冷冻干燥，最终获得浅粉色粉末状硒化黄芪多糖，原料比为：黄芪多糖II∶脱水吡啶∶含硒试剂-SeOCl2＝10Kg∶100L∶10-30L。
2.根据权利要求1所述的一种硒化黄芪多糖的制备方法，其特征在于，所述含硒试剂-SeOCl中含硒4％。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20100224 |