CN105748861B - 抗应激反应的中药组合物，其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种降低动物应激反应的中药组合物及其制备方法及应用。本发明提供的降低动物应激反应的中药组合物，含有活性成分，所述活性成分由知母、蒲黄、滑石粉、大黄、龙胆草、板蓝根、橄榄根、丁香制成。本发明药物发挥中兽药整体观念和辩证施治理论，疗效好，见效快，标本兼治，可有效用于抗动物应激反应，增强动物抗应激能力，减少动物在运输等过程中由于应激出现的死亡情况。

Description

抗应激反应的中药组合物，其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种抗应激反应的中药组合物，其制备方法以及应用，属于中兽药领域。

背景技术

应激反应是应激原和机体反应的综合结果，其中往往是机体的内在因素占主导作用。所以，调节机体内在因素在应激的防治中起着非常重要的作用。以前，在生产和实践中对机体内在因素注意不够，只是想在防治和控制应激带来危害时，靠单纯的一种防治方法能够起到最佳防治效果，但是并不尽然。目前发现，可利用中药调节性强，作用范围广等一系列特点对应激反应进行防治。应激反应可导致机体免疫力低下，进而引发多种疾病。研究和寻找有效的抗应激、抗疲劳药物具有非常重要的意义。

目前，越来越多的中药被广泛应用于抗应激反应、降低疲劳指数等研究。中药具有活性成分多、毒性反应小等特点，作为抗应激反应药物的研究和开发具有了非常广扩前景，使动物机体能够减少长途运输过程中出现的应激反应。

发明内容

本发明的目的在于提供一种降低动物应激反应的中药组合物及其制备方法。

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：

本发明提供了一种降低动物应激反应的中药组合物，含有活性成分，所述活性成分由知母、蒲黄、滑石粉、大黄、龙胆草、板蓝根、橄榄根、丁香制成。

进一步地，按重量份计，所述活性成分由知母8-18份、蒲黄10-15份、滑石粉5-20份、大黄14-22份、龙胆草7-15份、板蓝根10-24份、橄榄根5-14份、丁香7-15份制成。

进一步地，按重量份计，所述活性成分由知母10-16份、蒲黄11-14份、滑石粉12-18份、大黄16-20份、龙胆草9-13份、板蓝根15-20份、橄榄根8-12份、丁香9-13份制成。

更进一步，按重量份计，所述活性成分由知母14份、蒲黄12份、滑石粉15份、大黄18份、龙胆草11份、板蓝根17份、橄榄根10份、丁香12份制成。

本发明还提供了所述降低动物应激反应的中药组合物的制备方法，其包括如下步骤：

（1）按重量份称取各药物原料；

（2）将称得的各药物原料粉碎、过筛后经水煎煮三次，第一次1.5h-2h，第二次和第三次分别提取1h-1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，加入适量蔗糖、苯甲酸、尼泊金乙酯，加水搅拌、静置、过滤，制备成相当于中药1g/ml的口服液。

本发明药物的鉴定方法如下：

（1）取本品2mL，加乙醇20ml，加热回流40分钟，取上清液10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时后浓缩至约5ml ，加水10ml，用苯20ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加苯制成每1ml 含5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国兽药典》2010版2部附录32页）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以苯－丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8％香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液的混合液（0.5:5），在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（2）取本品2mL，加乙醚10mL，振摇数分钟，滤过，滤液置50~60℃水浴蒸干，残渣加乙醚2mL使溶解，作为供试品溶液。另取丁香酚对照品，加乙醚制成每1mL含10μl的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国兽药典》2010版2部附录32页）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（3）取本品2mL，加甲醇20ml，放置1h，时时振摇，滤过，取滤液10mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，置水浴上加热30min，立即冷切，用乙醚提取2次，每次10mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（《中国兽药典》2010版2部附录32页）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（30~60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

（4）取本品2mL，加稀乙醇20mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加稀乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液，另取精氨酸对照品，加稀乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国兽药典》2010版2部附录32页）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（15:7:7）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（5）取本品2mL，加甲醇5ml，充分振摇浸渍4～5小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国兽药典》2010版2部附录32页）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254 薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水(20:2:1)为展开剂，二次展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明药物的优点和有益效果在于：

1）本发明药物发挥中兽药整体观念和辩证施治理论，疗效好，见效快，标本兼治，可有效用于抗动物应激反应，增强动物抗应激能力，减少动物在运输等过程中由于应激出现的死亡情况，在保育阶段添抗应激综合征药物能够降低生产成本，提高猪群生长性能，从而提高经济效益的。

2）本发明药物可以有效解决动物因应激反应造成的各种不适应情况，为动物的长途运输提供了有力办法。

3）本发明药物为纯中药制剂，安全、环保，无耐药性和休药期，对动物性食品不构成安全威胁，保证了人类的健康。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1 本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量份的原料：

知母8份、蒲黄10份、滑石粉5份、大黄14份、龙胆草7份、板蓝根10份、橄榄根5份、丁香7份。

（2）将称得的各药物原料粉碎、过筛后经水煎煮三次，第一次2h，第二次和第三次每次分别1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，加入适量蔗糖、苯甲酸、尼泊金乙酯，加水搅拌、静置、过滤，制备成相当于中药1g/ml的口服液。

（3）本发明药物使用方法：用于降低动物应激反应，混饮，家禽每1L水添加本发明药物2-4ml，连用2-5日；家畜每1L水添加本发明药物1-2 ml，连用2-5日。

实施例2 本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量份的原料：

知母18份、蒲黄15份、滑石粉20份、大黄22份、龙胆草15份、板蓝根24份、橄榄根14份、丁香15份。

（2）将称得的各药物原料粉碎、过筛后经水煎煮三次，第一次2h，第二次和第三次每次分别1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，加入适量蔗糖、苯甲酸、尼泊金乙酯，加水搅拌、静置、过滤，制备成相当于中药1g/ml的口服液。

（3）本发明药物使用方法：用于降低动物应激反应，混饮，家禽每1L水添加本发明药物2-4ml，连用2-5日；家畜每1L水添加本发明药物1-2 ml，连用2-5日。

实施例3 本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量份的原料：

知母10份、蒲黄11份、滑石粉12份、大黄16-份、龙胆草9份、板蓝根15份、橄榄根8份、丁香9份。

（2）将称得的各药物原料粉碎、过筛后经水煎煮三次，第一次2h，第二次和第三次每次分别1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，加入适量蔗糖、苯甲酸、尼泊金乙酯，加水搅拌、静置、过滤，制备成相当于中药1g/ml的口服液。

（3）本发明药物使用方法：用于降低动物应激反应，混饮，家禽每1L水添加本发明药物2-4ml，连用2-5日；家畜每1L水添加本发明药物1-2 ml，连用2-5日。

实施例4 本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量份的原料：

知母16份、蒲黄14份、滑石粉18份、大黄20份、龙胆草13份、板蓝根20份、橄榄根12份、丁香13份。

（2）将称得的各药物原料粉碎、过筛后经水煎煮三次，第一次2h，第二次和第三次每次分别1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，加入适量蔗糖、苯甲酸、尼泊金乙酯，加水搅拌、静置、过滤，制备成相当于中药1g/ml的口服液。

（3）本发明药物使用方法：用于降低动物应激反应，混饮，家禽每1L水添加本发明药物2-4ml，连用2-5日；家畜每1L水添加本发明药物1-2 ml，连用2-5日。

实施例5 本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量份的原料：

知母14份、蒲黄12份、滑石粉15份、大黄18份、龙胆草11份、板蓝根17份、橄榄根10份、丁香12份。

（2）将称得的各药物原料粉碎、过筛后经水煎煮三次，第一次2h，第二次和第三次每次分别1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，加入适量蔗糖、苯甲酸、尼泊金乙酯，加水搅拌、静置、过滤，制备成相当于中药1g/ml的口服液。

（3）本发明药物使用方法：用于降低动物应激反应，混饮，家禽每1L水添加本发明药物2-4ml，连用2-5日；家畜每1L水添加本发明药物1-2 ml，连用2-5日。

为表明本发明药物可以降低动物的应激反应，对本发明药物进行临床疗效观察试验，以下通过试验例来进一步阐述本发明药物的有益效果。

试验例1

为了说明本发明药物的有益效果，选择70只昆明系小鼠做小鼠游泳抗应激试验。用本发明药物饲喂小鼠1周，一周后做小鼠游泳抗应激试验，其它条件一致的情况下，用小鼠游泳时间来衡量本发明药物的有益效果。

1材料与方法

1.1药品与试剂

本发明药物，由大北农集团动物保健技术研究中心研制，采用本发明药物实施例1-实施例5制备。

1.2试验动物与试验分组处理方法

18-22g的昆明系小鼠70只，平均分为7组，每组10只，雌雄各半，试验1组到试验5组饲喂本发明药物7天，试验6组作为药物对照组，试验7组作为空白对照组，第8天做小鼠游泳抗应激试验，具体方法是取一个玻璃缸，向玻璃缸内加水，水深20cm，水温保持20±0.5℃，取小鼠，称重，在其尾部1/3-2/3处束一重物，重量为小鼠自身重量的10%，将小鼠放入玻璃缸内游泳，并开始计时，当小鼠头部沉入水中10秒钟不能浮出水面者即为体力耗尽，停止计时。在其他条件一致的情况下，用小鼠游泳时间来衡量本发明药物的有益效果。

1.3观察指标

试验过程中观察各组小鼠的临床症状，试验结束后观察记录小鼠的游泳时间。

1.4数据的分析和处理

采用PASW Statistics18.0软件对数据的显著性检验，对每组小鼠游泳时间进行各组间X2检验。

2结果表明，使用本发明药物后小鼠游泳时间与空白对照组相比有所延长，表明本发明药物对小鼠的抗疲劳时间延长，说明小鼠抗应激反应能力提高了。试验结果如表1，现将结果报告如下：

表1小鼠负重游泳试验结果

组别	动物只数（只）	平均体重(g)	平均游泳时间(min)
				试验1组	10	33.3	12.34
试验2组	10	33.7	11.48
				试验3组	10	32.8	11.55
试验4组	10	33.1	12.22
				试验5组	10	33.6	13.30
试验6组	10	33.8	11.23
				试验7组	10	33.5	8.25

从表1可以看出，饲喂本发明药物的小鼠游泳时间和饲喂对照药物组的游泳时间明显比空白对照组要长，且饲喂本发明药物的小鼠游泳时间长于对照药物组，且试验5组小鼠游泳时间最长，表明在其他条件基本一致的情况下，小鼠负重游泳时间越长，抗疲劳时间也越长，相应的抗应激反应能力也就越强，表明本发明药物能够降低小鼠的应激反应。

试验例2

为了进一步表明本发明药物的有益效果，用小鼠做抗寒冷应激反应的试验。为了说明本发明药物的有益效果，选择70只昆明系小鼠做小鼠抗寒冷应激试验。用本发明药物饲喂小鼠1周，一周后做小鼠抗抗寒冷应激试验，观察小鼠死亡率。

1材料与方法

1.1药品与试剂

本发明药物，由大北农集团动物保健技术研究中心研制，采用本发明药物实施例1-实施例5制备。

1.2试验动物与试验分组处理方法

18-22g的昆明系小鼠70只，平均分为7组，每组10只，雌雄各半，试验1组到试验5组饲喂本发明药物7天，分别按实施例1到实施例5制备，试验6组用热益舒作为药物对照组，试验7组作为空白对照组，第7天做小鼠抗寒冷应激试验，具体方法是，第7天给药30min后，将每组小鼠隔离放入-15℃±1℃冰箱内，立即计时，1h后取出，统计各组小鼠的死亡数，计算死亡百分率。

1.3观察指标

试验过程中观察各组小鼠的临床症状，试验结束后观察记录小鼠的死亡数、死亡率。

2结果表明，使用本发明药物后小鼠抗寒冷应激试验的死亡率与空白对照组相比有所降低，表明本发明药物对小鼠的抗寒冷应激能力增强，说明小鼠抗寒冷应激反应能力提高了。试验结果如表2，现将结果报告如下：

表2小鼠抗寒冷应激试验结果

组别	动物只数(只)	生存（只)	死亡数（只)	死亡率%
					试验1组	10	7	3	30.00
试验2组	10	8	2	20.00
					试验3组	10	8	2	20.00
试验4组	10	9	1	10.00
					试验5组	10	10	0	0.00
试验6组	10	5	5	50.00
					试验7组	10	4	6	60.00

从表2可以看出，本发明药物试验组和对照药材组同空白对照组相比存活数高，死亡率低，可以提高小鼠的耐寒能力，且本发明药物有益效果要好于对照药材组，且试验5组效果最显著。说明本发明药物可以降低小鼠寒冷的应激反应，提高小鼠抗寒冷的能力。

试验例3

为表明本发明药物的有益效果，选择180只日龄、体重、遗传背景相近的艾维茵肉鸡，随机分为6组，每组30只，分别作为试验1组到试验6组，试验6组作为对照组饲喂正常饲料，不给药，试验1组到试验5组分别饲喂正常饲料，饮水添加了实施例1到实施例5制备所得的药物，按每1L水添加3ml本发明药物，试验期为45天，试验结束当天称重，并选择90只体重接近的肉鸡模拟运输应激处理6h，研究不同正常饲料处理对肉鸡生产性能以及在运输应激状态下对肉鸡失重率、酮体性状、肉品质和抗氧化能力的影响。结果表明，添加本发明药物的试验1组到试验5组与对照组试验6组相比显著提高了平均日增重，降低了料肉比。在运输应激状态下，各处理试验组处死前体重无差异。与对照组相比，试验组可以显著降低48h的滴水损失率。本试验表明，在正常饲料中添加本发明药物可以改善和缓解运输应激造成的氧化损伤和肉质下降等情况。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种降低动物应激反应的中药组合物，其含有活性成分，其特征在于，所述活性成分由知母、蒲黄、滑石粉、大黄、龙胆草、板蓝根、橄榄根、丁香制成，按重量份计，所述活性成分由知母8-18份、蒲黄10-15份、滑石粉5-20份、大黄14-22份、龙胆草7-15份、板蓝根10-24份、橄榄根5-14份、丁香7-15份制成；所述的降低动物应激反应的中药组合物的制备方法，其包括如下步骤：

（1）按重量份称取各药物原料；

（2）将称得的各药物原料粉碎、过筛后经水煎煮三次，第一次1.5h-2h，第二次和第三次分别提取1h-1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，加入适量蔗糖、苯甲酸、尼泊金乙酯，加水搅拌、静置、过滤，制备成相当于原生药材1g/ml的口服液。

2.根据权利要求1所述的降低动物应激反应的中药组合物，其特征在于，按重量份计，所述活性成分由知母10-16份、蒲黄11-14份、滑石粉12-18份、大黄16-20份、龙胆草9-13份、板蓝根15-20份、橄榄根8-12份、丁香9-13份制成。

3.根据权利要求2所述的降低动物应激反应的中药组合物，其特征在于，所述活性成分由知母14份、蒲黄12份、滑石粉15份、大黄18份、龙胆草11份、板蓝根17份、橄榄根10份、丁香12份制成。