CN101638654A - 癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件cpd及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属生物技术，涉及基因表达调控，具体地说，涉及一种特异性针对癌胚抗原阳性肿瘤细胞的靶向性基因表达元件CPD的设计、制备及其在癌胚抗原阳性的肿瘤细胞内特异表达、其产物可以有效地阻断肿瘤细胞内的DNA复制，使细胞周期因DNA复制受阻而无法进行下去，从而达到抑制细胞增殖的作用。本发明可用于制备靶向性肿瘤基因治疗药物。本发明具有抑制肿瘤效果好、适应性广、安全性好的优点。

Description

癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD及其应用

技术领域

本发明属生物技术，涉及基因表达调控，具体地说，涉及一种特异性针对癌胚抗原阳性肿瘤细胞的靶向性基因表达元件CPD的设计、制备及其在癌胚抗原阳性的肿瘤细胞内特异表达、其产物可以有效地阻断肿瘤细胞内的DNA复制，使细胞周期因DNA复制受阻而无法进行下去，从而达到抑制细胞增殖的作用。本发明可用于制备靶向性肿瘤基因治疗药物。

背景技术

恶性肿瘤是目前人类主要“杀手”之一，近年来随着人们生活方式及环境的改变，其发病率呈上升趋势，在许多城市已成为第一位死亡原因，在农村位列第二位。肺癌、胃肠道肿瘤、乳癌等在我国是最常见的危害极大的恶性肿瘤，虽然目前可以通过手术和化疗等常规方式进行治疗，对较早期发现的上述肿瘤能收到一定的甚至较好的疗效，但对于较晚期的上述肿瘤的疗效和预后均不理想。

被称为肿瘤治疗新模式的生物治疗目前正显示出越来越良好的应用前景。在各种肿瘤生物治疗手段中，基因治疗始终是一个主要方向，我国研制的世界上第一个正式进入临床使用的基因药物、针对许多肿瘤细胞中发生突变的抑癌基因p53的、可表达野生型p53的腺病毒注射液“今又生”即是其代表。随着医学分子生物学技术和知识的飞速发展，各种先进的分子生物学手段都运用到肿瘤的基因治疗研究中。但是由于肿瘤的发生发展涉及众多基因，而目前的研究大都仅针对个别靶基因，因此，这些研究虽然都显示出较好的细胞水平的体外抑瘤效果甚至荷瘤动物模型的体内抑瘤效应，但实际效果并不理想。因此，探索、尝试新的肿瘤基因治疗手段具有十分重要的意义。

正常细胞在各种致癌因素的作用下逐渐发生变化直至最后发生癌变，有相当多的基因表现出过度表达的现象，尤其是一些促进细胞生长、侵袭等恶性表型的基因的过量表达。针对肿瘤中异常表达的基因，人们设计了许多靶向性基因治疗的方法，其中以封闭促进肿瘤生长、侵袭等相关基因的表达的研究是一个相当热门的领域。在以往大量的研究中，人们利用反义RNA(antisense RNA)对肿瘤细胞高表达基因进行封闭，但由于反义RNA本身存在的限制，这类研究在抑制肿瘤细胞生长、控制细胞侵袭迁移等方面虽然取得了较大的成绩，其封闭基因表达的效果仍不理想。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抑制肿瘤效果好、适应性广、安全性好的癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD。

本发明还涉及癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD而改造的用于构建其他的靶向性基因表达元件

本发明还涉及癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备靶向性肿瘤基因治疗药物中的应用。

本发明还涉及癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备肠癌药物中的应用。

本发明还涉及癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备胃癌药物中的应用。

本发明还涉及癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备乳癌药物中的应用。

本发明还涉及癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备肺癌药物中的应用。

本发明提供的CEA阳性肿瘤细胞靶向性基因表达元件CPD为一种DNA分子，具有如SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。其中第7位至第375位为人CEA基因翻译起始点(定为+1)上游第-407位至第-39位，该区域含有CEA的基本启动子和第一外显子5’非翻译区部分序列，为CEA阳性细胞表达调控序列；第376位至第1599位为3个3种串联连接的针对人DNA聚合酶δ催化亚基p125基因的人工设计的microRNA；第1600位至第1948位为牛生长激素基因多聚腺苷酸信号区，为基因表达提供转录终止信号。

该表达元件在导入CEA阳性的肿瘤细胞后，可以在细胞中表达针对DNA聚合酶δ催化亚基p125的人工microRNA，并有效抑制细胞内DNA聚合酶δ催化亚基p125的表达，进而影响到DNA复制，最终阻断细胞周期的进行，抑制细胞增殖。

本发明提供该表达元件可用于构建的靶向性基因治疗载体，进而制备基因治疗药物，用于CEA阳性的肿瘤的靶向基因治疗。该表达元件中针对人DNA聚合酶δ催化亚基p125的人工microRNA序列可以用于其它表达载体达到抑制相应细胞中DNA聚合酶δ催化亚基p125的表达目的。

小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)的发现为人为干预细胞中基因的表达提供了一个有力的工具。利用化学合成的双链形式的siRNA，或是由III型启动子带动转录的结构类似的小发卡样RNA(small hairpin RNA，shRNA)，可以通过序列特异性匹配原则降解靶基因，从而对靶基因的表达进行有效的抑制，因此也被尝试应用于基因治疗。但是由于化学合成的siRNA代价太高，而shRNA的表达又不利于调控，这些因素大大地限制了这一技术的应用。

微小RNA(microRNA)是细胞内天然存在的一种小分子RNA，是在基因转录后水平进行表达调控的一种重要方式，能在序列完全匹配的情况下降解靶基因mRNA，也可以在序列非完全匹配的情况下抑制靶基因的翻译，是目前生命科学领域中的一个研究热点，在肿瘤相关microRNA方面也有大量研究，而且大都集中在正常细胞和肿瘤细胞之间表达有差异的各种天然microRNA的发现以及功能鉴定。

由于天然microRNA是由II型启动子带动转录，因此如果人工设计类似的microRNA分子，也应该可以由II型启动子引导转录，而II型启动子的特点是其转录启动功能可以调控，所以其下游的人工miRNA的表达应该可以受到人为控制，而microRNA的作用方式最近的一些文献报道已证实这一设想。

在本发明中我们选择细胞周期中的DNA复制过程为作用点，设计人工microRNA的序列，抑制DNA复制中必需的DNA聚合酶δ的催化亚基p125表达。由于DNA的复制是一个复杂而又精密调控的过程，主要由DNA聚合酶α、δ和ε等酶催化、以原有的DNA链为模板进行的半保留复制，因此对DNA聚合酶δ催化亚基p125表达的抑制将有效阻断细胞的DNA复制，从而使细胞周期因DNA无法复制而停止，进而抑制细胞的增殖。

为了达到对肿瘤细胞的靶向性作用，针对我国高发的肺癌、胃肠道肿瘤、乳癌等恶性肿瘤，利用在胚胎细胞中表达而在正常成人细胞中不表达、但在上述肿瘤细胞中又常会重新表达胚胎性抗原——癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)的特点，重组了CEA基因上游的表达调控序列，用来调控人工设计的microRNA的表达。这一基因表达元件在导入正常细胞后不会有任何表达，而在导入CEA阳性的肿瘤细胞后，可以表达出相应的microRNA并有效地阻断肿瘤细胞的DNA复制，从而达到靶向性抑制肝癌细胞的生长。

基于本发明的思路，还可以DNA聚合酶δ催化亚基p125基因的其它位点做为靶序列进行人工microRNA的设计，或是以DNA复制过程中其它重要基因作为靶基因来进行DNA复制的阻断，从而抑制细胞增殖。

本发明同现有技术相比具有以下优点及效果：

利用本发明提供的表达元件可以制备的基因治疗药物，其特点在于以多种肿瘤细胞均重新表达的胚胎性抗原——癌胚抗原为肿瘤细胞特异性表达调控手段、以肿瘤细胞快速生长分裂所需的DNA聚合酶δ催化亚基p125为作用靶点进行表达抑制，有效地引起细胞周期阻断，特异性地抑制CEA阳性的肿瘤细胞的增殖。

附图说明

图1为CEA阳性细胞表达调控序列PCR产物电泳图。

图2为针对人DNA聚合酶δ催化亚基p125的三种人工microRNA构建PCR产物电泳图。

图3为Western blot法检测CPD对GAPDH表达的抑制的比较图。

图4为MTT法检测结果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。

实施例1：

人CEA阳性细胞表达调控序列的克隆：

首先从GenBank检索得到包含人CEA基因5’侧翼及第一个外显子的基因组DNA序列(GenBank登录号：Z21818)，然后参考Nyati MK等人的文献(Cancer Research 62，2337-2342，2002)，设计并合成引物1和引物2，利用聚合酶链反应技术(Polymerase Chain Reaction，PCR)扩增CEA翻译起始点(定为+1)上游包含基本启动子和部分第一外显子的5’非翻译区在内的-407至-39位序列。引物1序列为：5’-AGA TCT CCC GGG ACC CTG CTG GGT TTC-3’、引物2序列为：5’-GGA TCC AGC TTG AGT TCC AGG AAC G-3’，以人肠癌细胞SW620基因组DNA为模板，用上述引物进行核酸扩增，获得381bp的扩增产物。

将上述扩增产物以T-A克隆的方式分别克隆至pGEM T-easy载体(Promega公司，美国)，参见图1，其中泳道1为1Kb Plus DNA分子量标记，泳道2为pGEM T-easy/CEA经EcoR I酶切，如克隆成功，则会出现两个条带，大的一个条带为约3.0kb的载体pGEM T-easy，小的一个条带为约0.4kb的插入片段CEA阳性细胞表达调控序列，如果未克隆成功，则仅有一个条带，即约3.0kb的载体pGEM T-easy，从图中可以看出PCR产物克隆成功，条带大小与预期完全相符。经DNA序列测定并与基因组DNA序列(GenBank登录号：Z21818)核对验证其正确性。测序结果如下，其中下划线部分分别为两端加的Bgl II和BamH I位点，加框部分为人CEA基因翻译起始点上游第-407位至第-39位序列。

AGATCTCCCG GGACCCTGCT GGGTTTCTCT GTCACAAAGG AAAATAATCC CCCTGGTGTG 60

ACAGACCCAA GGACAGAACA CAGCAGAGGT CAGCACTGGG GAAGACAGGT TGTCCTCCCA 120

GGGGATGGGG GTCCATCCAC CTTGCCGAAA AGATTTGTCT GAGGAACTGA AAATAGAAGG 180

GAAAAAAGAG GAGGGACAAA AGAGGCAGAA ATGAGAGGGG AGGGGACAGA GGACACCTGA 240

ATAAAGACCA CACCCATGAC CCACGTGATG CTGAGAAGTA CTCCTGCCCT AGGAAGAGAC 300

TCAGGGCAGA GGGAGGAAGG ACAGCAGACC AGACAGTCAC AGCAGCCTTG ACAAAACGTT 360

CCTGGAACTC AAGCTGGATC C 381

针对人DNA聚合酶δ催化亚基p125基因的人工microRNA的克隆：

从GenBank检索得到人DNA聚合酶δ催化亚基p125基因的mRNA序列(GenBank登录号：NM_002691.1)，利用网上软件分析该mRNA序列上合适的位点，确定3个人工microRNA的作用靶点，设计合成引物D1-1S：5’-TGC TGT TGA CAG TGA GCG CCG GCT TCG CTC CCT ACT TCTATA GTG AAG CCA CAG ATG TA-3’、D1-1R：5’-TCC GAG GCA GTA GGC AAC GGC TTC GCTCCC TAC TTC TAT ACA TCT GTG GCT TCA CTA TA-3’、D1-2S：5’-TGC TGT TGA CAG TGA GCGACG GGA CCA GGG AGA ATT AAT ATA GTG AAG CCA CAG ATG TA-3’、D1-2R：5’-TCC GAG GCAGTA GGC AGC GGG ACC AGG GAG AAT TAA TAT ACA TCT GTG GCT TCA CTA TA-3’、D1-3S：5’-TGCTGT TGA CAG TGA GCG AGG AGT CTG AGC TGT ATC AGA ATA GTG AAG CCA CAG ATG TA-3’、D1-3R：5’-TCC GAG GCA GTA GGC AGG GAG TCT GAG CTG TAT CAG AAT ACA TCT GTG GCT TCACTA TT-3’、PS：5’-AGA TCT GAT CCA AGA AGG TAT ATT GCT GTT GAC AGT GAG CG-3’和PR：5’-GGA TCC ATC GTA GCC CTT GAA GTC CGA GGC AGT AGG CA-3’。先分别将引物D1-1S和引物D1-1R、引物D1-2S和引物D1-2R、引物D1-3S和引物D1-3R配对进行重叠延伸PCR，均分别得到97bp的扩增产物D1-1p、D1-2p和D1-3p，再分别以这些扩增产物为模板，用引物PS和引物PR进行PCR扩增，再分别得到142bp的扩增产物D1-1f、D1-2f和D1-3f，参见图2，其中泳道1、2、4分别为三种不同人工microRNA的PCR产物，均显示出142bp的PCR产物条带，泳道3为DL2000分子量标记，说明按照设计进行的人工microRNA的PCR合成成功。

上述142bp的扩增产物以T-A克隆的方式分别克隆至pGEM T-easy载体，经DNA测序验证其正确性。这些即为针对人DNA聚合酶δ催化亚基p125基因3个不同靶点的人工microRNA序列。为了加强其作用效果，每一种人工microRNA分别用限制性内切酶BamH I和Bgl II双酶切后回收该人工microRNA序列并重新插入同一载体的BamH I位点，获得各有3个串联连接的人工microRNA序列，再将它们串联连接在一起成为完整的针对人DNA聚合酶δ催化亚基p125基因的人工microRNA序列。

肿瘤靶向性基因表达元件CPD的构建及腺病毒载体的制备：

首先构建pDC312-BGHpA载体：将腺病毒穿梭质粒pDC312载体(Microbix公司，美国)用限制性内切酶Xba I单酶切开，用Klenow酶补平，再用限制性内切酶HindIII单酶切，去掉Xba I到HindIII之间的部分(从HindIII、Sac I、Ecl136II、Acc I、Sal I到Xba I)，回收部分一端为平端，另一端为HindIII粘性末端。pcDNA3.1(+)载体(Invitrogen公司，美国)用限制性内切酶PvuII和HindIII双酶切，回收包括HindIII、Asp718、Kpn I、BamH I、Bst XI、EcoR I、EcoR V、Bst XI、Not I、Xho I、Xba I、Dra II、Apa I和Pme I多克隆位点和牛生长因子基因多聚腺苷酸信号(BGHpA)的片段，一端为HindIII粘性末端，另一端为PvuII的平端。将上述两个片段连接起来，即成pDC312-BGHpA载体，可在多克隆位点上插入启动子和目的基因编码区。

再将前面所述的CEA阳性细胞表达调控序列从载体上用限制性内切酶BamH I和Bgl II双酶切后回收，并插入pDC312-BGHpA的BamH I位点，得到带有CEA阳性细胞表达调控序列和BGHpA的腺病毒穿梭质粒。最后将串联连接的完整的针对人DNA聚合酶δ催化亚基p125基因的人工microRNA序列从载体上用限制性内切酶BamH I和Bgl II双酶切后回收，插入此穿梭质粒的BamH I位点，得到带有完整肿瘤靶向性表达元件CPD的腺病毒穿梭质粒，酶切鉴定结果与预期完全相符。

将上述带有完整肿瘤靶向性表达元件CPD的腺病毒穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pBHGlox(delta)E1，3cre(Microbix公司，美国)共转染腺病毒包装细胞293细胞，得到带有表达元件CPD的腺病毒载体。也就是完成了癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD的制备。

应用实施例1：

基因表达元件CPD对CEA阳性细胞DNA聚合酶δ催化亚基p125基因表达的抑制

取对数生长期的CEA阳性的人肠癌细胞HR8348细胞，按3×105细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24小时使其贴壁并达到80％的汇合度。用培养基稀释上述带有表达元件CPD的腺病毒，以感染复数(multiplicity of infection，MOI)为100pfu/cell感染细胞，48hr后中止作用，提取细胞总蛋白，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(10％分离胶，5％浓缩胶)，然后将蛋白转至PVDF膜，封闭后与1∶1000稀释的抗DNA聚合酶δ催化亚基p125的抗体(SantaCruz Biotechnology，Inc.，美国，DNA polδ2(C-20)：sc-8800，)于4℃结合过夜，用TBST洗膜3次，再与1∶10000稀释HRP标记的二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)结合，室温2小时后，用TBST洗膜3次，然后用化学发光试剂盒(Roche公司，美国)显影，X光片暴光。用带绿荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的腺病毒感染和无腺病毒感染的细胞作对照。从图3中可看到，感染带有表达元件CPD的腺病毒的CEA阳性肠癌细胞HR8348中的DNA聚合酶δ催化亚基p125表达明显受到抑制。图中1为无病毒感染的HR8348肠癌细胞DNA聚合酶δ催化亚基p125基因表达情况，2为带CPD的腺病毒以MOI 100感染HR8348肠癌细胞48小时后DNA聚合酶δ催化亚基p125基因表达情况。

应用实施例2：

基因表达元件CPD对CEA阳性细胞体外细胞生长抑制试验(MTT法)

取对数生长期的肠癌细胞HR8348，按3×10⁵细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24小时使其贴壁。将带CPD的腺病毒以MOI为200pfu/cell、100pfu/cell、10pfu/cell和0pfu/cell感染细胞。在病毒感染48小时后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)200μl，37℃继续培养4hr，中止培养。弃去培养上清液，每孔加入DMSO 2ml，振荡10min，使结晶物充分溶解，取100μl在酶联免疫检测仪上测定各样品570nm波长OD值。每组设立3复孔。从图4可以看出，不同MOI的带CPD的腺病毒对CEA阳性的肠癌细胞HR8348的生长均有不同程度的抑制。

此外，需要说明的是，本说明书中所描述的具体实施例，其零、部件的形状、所取名称等可以不同。凡依本发明专利构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化，均包括于本发明专利的保护范围内。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

虽然本发明已以实施例公开如上，但其并非用以限定本发明的保护范围，任何熟悉该项技术的技术人员，在不脱离本发明的构思和范围内所作的更动与润饰，均应属于本发明的保护范围。

癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD电子序列

<110>杭州安倍生物科技有限公司

<120>癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD及其应用

<160>1

<210>1

<211>1948

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD

<400>1

AGATCTCCCG GGACCCTGCT GGGTTTCTCT GTCACAAAGG AAAATAATCCCCCTGGTGTG 60

ACAGACCCAA GGACAGAACA CAGCAGAGGT CAGCACTGGG GAAGACAGGTTGTCCTCCCA 120

GGGGATGGGG GTCCATCCAC CTTGCCGAAA AGATTTGTCT GAGGAACTGAAAATAGAAGG 180

GAAAAAAGAG GAGGGACAAA AGAGGCAGAA ATGAGAGGGG AGGGGACAGAGGACACCTGA 240

ATAAAGACCA CACCCATGAC CCACGTGATG CTGAGAAGTA CTCCTGCCCTAGGAAGAGAC 300

TCAGGGCAGA GGGAGGAAGG ACAGCAGACC AGACAGTCAC AGCAGCCTTGACAAAACGTT 360

CCTGGAACTC AAGCTGGATC TGATCCAAGA AGGTATATTG CTGTTGACAGTGAGCGCCGG 420

CTTCGCTCCC TACTTCTATA GTGAAGCCAC AGATGTATAG AAGTAGGGAGCGAAGCCGTT 480

GCCTACTGCC TCGGACTTCA AGGGCTACGA TGGATCTGAT CCAAGAAGGTATATTGCTGT 540

TGACAGTGAG CGCCGGCTTC GCTCCCTACT TCTATAGTGA AGCCACAGATGTATAGAAGT 600

AGGGAGCGAA GCCGTTGCCT ACTGCCTCGG ACTTCAAGGG CTACGATGGATCTGATCCAA 660

GAAGGTATAT TGCTGTTGAC AGTGAGCGCC GGCTTCGCTC CCTACTTCTATAGTGAAGCC 720

ACAGATGTAT AGAAGTAGGG AGCGAAGCCG TTGCCTACTG CCTCGGACTTCAAGGGCTAC 780

GATGGATCTG ATCCAAGAAG GTATATTGCT GTTGACAGTG AGCGACGGGACCAGGGAGAA 840

TTAATATAGT GAAGCCACAG ATGTATATTA ATTCTCCCTG GTCCCGCTGCCTACTGCCTC 900

GGACTTCAAG GGCTACGATG GATCTGATCC AAGAAGGTAT ATTGCTGTTGACAGTGAGCG 960

ACGGGACCAG GGAGAATTAA TATAGTGAAG CCACAGATGT ATATTAATTCTCCCTGGTCC 1020

CGCTGCCTAC TGCCTCGGAC TTCAAGGGCT ACGATGGATC TGATCCAAGAAGGTATATTG 1080

CTGTTGACAG TGAGCGACGG GACCAGGGAG AATTAATATA GTGAAGCCACAGATGTATAT 1140

TAATTCTCCC TGGTCCCGCT GCCTACTGCC TCGGACTTCA AGGGCTACGATGGATCTGAT 1200

CCAAGAAGGT ATATTGCTGT TGACAGTGAG CGAGGAGTCT GAGCTGTATCAGAATAGTGA 1260

AGCCACAGAT GTATTCTGAT ACAGCTCAGA CTCCCTGCCT ACTGCCTCGGACTTCAAGGG 1320

CTACGATGGA TCTGATCCAA GAAGGTATAT TGCTGTTGAC AGTGAGCGAGGAGTCTGAGC 1380

TGTATCAGAA TAGTGAAGCC ACAGATGTAT TCTGATACAG CTCAGACTCCCTGCCTACTG 1440

CCTCGGACTT CAAGGGCTAC GATGGATCTG ATCCAAGAAG GTATATTGCTGTTGACAGTG 1500

AGCGAGGAGT CTGAGCTGTA TCAGAATAGT GAAGCCACAG ATGTATTCTGATACAGCTCA 1560

GACTCCCTGC CTACTGCCTC GGACTTCAAG GGCTACGATG GATCCACTAGTCCAGTGTGG 1620

TGGAATTCTG CAGATATCCA GCACAGTGGC GGCCGCTCGA GTCTAGAGGGCCCGTTTAAA 1680

CCCGCTGATC AGCCTCGACT GTGCCTTCTA GTTGCCAGCC ATCTGTTGTTTGCCCCTCCC 1740

CCGTGCCTTC CTTGACCCTG GAAGGTGCCA CTCCCACTGT CCTTTCCTAATAAAATGAGG 1800

AAATTGCATC GCATTGTCTG AGTAGGTGTC ATTCTATTCT GGGGGGTGGGGTGGGGCAGG 1860

ACAGCAAGGG GGAGGATTGG GAAGACAATA GCAGGCATGC TGGGGATGCGGTGGGCTCTA 1920

TGGCTTCTGA GGCGGAAAGA ACCAGCTG 1948

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Claims (7)

1、一种癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD，其特征是：一种DNA分子，具有如SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。

2、一种基于如权利要求1所述的CPD而改造的用于构建其他的靶向性基因表达元件。

3、一种癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备靶向性肿瘤基因治疗药物中的应用。

4、根据权利要求3所述的应用，其特征是：所述的癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备肠癌药物中的应用。

5、根据权利要求3所述的应用，其特征是：所述的癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备胃癌药物中的应用。

6、根据权利要求3所述的应用，其特征是：所述的癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备乳癌药物中的应用。

7、根据权利要求3所述的应用，其特征是：所述的癌胚抗原阳性细胞靶向性基因表达元件CPD在制备肺癌药物中的应用。

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