CN101575624B - 微生物酶消旋生产dl-丙氨酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,包括以下步骤:配制培养基,用氨水或硫酸调整培养基PH值到8,分装入烧瓶中,将保存在斜面上的微生物用接种环挑取一环接入上述培养基中,使用旋转震荡器,在30℃、110rpm下培养24小时,合并上述细胞培养液,加入到底物溶液中,维持反应温度30度,PH值7,反应过程每小时用旋光仪测量反应体系比旋光度,待比旋光度为零时,继续反应,并升温至,加入活性碳脱色30分钟,抽滤,用旋转薄膜蒸发器真空浓缩结晶,得Dl-丙氨酸精制品。本发明生产方法原料易得,生产过程简单,条件温和,能大幅度降低DL-丙氨酸生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产DL-丙氨酸的方法。
背景技术
目前,国内外DL-氨基丙酸的生产工艺主要有用乙醛与氰氢酸反应,生成氰醇,在与氨反应得到氨基氰,氨基氰在碱性条件下水解,生成氨基酸钠,在经离子交换制得氨基丙酸粗品,用水或乙醇重结晶得到成品。也有用乙醚、氯化铵、氰化钠等原料合成氨基丙酸。但这些合成方法都用到氰化物,有剧毒,条件困难,三废问题严重,且合成路线长,收率低。另外还可以用氯化法生产氨基丙酸,该法是利用丙酸氯化制得氯代丙酸,在氨化后得到氨基酸产品,但此法原料价格昂贵,成本高,且有氯化反应,对设备腐蚀严重,分离副产物氯化铵难,产品质量,同时存在难处理的“三废”问题。具体情况如下:
1、Strecker法
该法以氨或氯化铵与乙醛反应,经氰化,酸解,离子交换提取后得氨基丙酸,收率52-56%。
该法缺点:使用剧度化工原料氰化物,合成路线长,反应混合液含有大量氨离子、氯离子,分离精致困难,产品生产成本高,污染严重,设备条件要求高。
2、Buchere法
该法为的改进,以氰化钠和碳酸氨与乙醛反应,得中间体己内酰脲,经碱分解、离子交换提取,收率70%
该法缺点:使用剧度化工原料氰化物,合成路线长,反应混合液含有大量氨离子、钠离子,分离精致困难,产品生产成本高,产品生产成本高,污染严重,设备条件要求高。
3、a-卤代羧酸氨化法
采用丙酸在三氯化磷催化剂存在下,在105通氯气反应制得a-氯丙酸。以a-氯代丙酸原料,经氨化制得DL-氨基丙酸。目前我国均采用此法。
该法缺点:使用危险品氯气,生产过程有副产品盐酸,产物含大量氯化铵,需用离子交换方法去处,产品质量不稳定生产,生产成本高,污染严重。
发明内容
本发明的目的是提供一种原料易得,生产过程简单,条件温和,能大幅度降低DL-丙氨酸生产成本的生产DL-丙氨酸方法。
本发明是通过以下技术方案实现的:
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,包括以下步骤:配制培养基,作为微生物培养基的碳源是L-乳酸、甘油、或L-丙氨酸,比例为10-50g/L,以蛋白胨或酵母提取物为氮源,比例为5-40g/L,培养基中加入玉米浆比例为5-50g/L,用氨水或硫酸调整培养基PH值到7~14,分装入烧瓶中,将保存在斜面上的微生物用接种环挑取一环接入上述培养基中,使用旋转震荡器,在20℃~40℃、90rpm~130rpm下培养12~48小时,合并上述细胞培养液,加入到底物溶液中,维持反应温度20~40度,PH值6~9,反应过程每小时用旋光仪测量反应体系比旋光度,待比旋光度为零时,继续反应0.5~2小时,升温至60℃~100℃,加入活性碳脱色30分钟,抽滤,用旋转薄膜蒸发器真空浓缩结晶,得D1-丙氨酸精制品。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,所述合并上述细胞培养液后,得到得到一级种子细胞悬液,配制含蛋白胨20g/L,酵母提取物20g/L,L-乳酸20g/L,氯化钠5g/L,玉米浆干粉5g/L,硫酸镁0.2g/L,磷酸二氢钾1g/L、L-丙氨酸5g/L的发酵液10升,调整整PH值7,将培养基加到有效容积10升的发酵罐中,115℃高压灭菌15-20分钟。冷却至30℃,接入上述一级种子细胞悬液400毫升。每分钟通入无菌空气2升,培养24小时,得细胞培养液10升,加入到100升含有20公斤底物溶液中,维持反应温度40度,PH值8,反应过程每小时用旋光仪测量反应体系比旋光度,待比旋光度为零时,继续反应1小时,升温至80℃,加入300g活性碳脱色30分钟,抽滤,真空浓缩结晶,得Dl-丙氨酸精制品。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,所述的底物溶液为L-丙氨酸水溶液。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,将培养基分装入烧瓶中后,将上述培养基在121℃高压灭菌15分钟,冷却到30℃。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,所述的微生物为大肠杆菌,或假单胞菌,或酪酸梭状芽孢杆菌,或胚芽乳杆菌,或尿葡萄球菌,或酵母,或霉菌或丝状真菌。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,所述丙氨酸水溶液的浓度为10-160g/L。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,所述L-丙氨酸水溶液最佳PH值为8,调节PH值的物质为氢氧化钠或氨。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,所述的微生物为大肠杆菌。
微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,所述的使用旋转震荡器震荡后,在30℃、110rpm下培养24小时。
本发明采用微生物酶消旋生产DL-丙氨酸,无需用到氰化物,避免了氰化物的剧毒,不会产生污染,同时本发明所述的生产方法所使用的原料价格均较低,使得整体生产成本较低。本发明经过简单的脱色、过滤、重结晶就可以达到精制提纯的目的,其生产工艺简单易行,产品化学纯度高,比旋光度为0,制造成本低。
具体实施方式
实施例1:
配制含有蛋白胨20g/L,L-乳酸15g/L,氯化钠5g/L,玉米浆干粉18g/L甘油5g/L,硫酸镁0.2g/L,磷酸二氢钾1g/L的培养基1升,用氨水或硫酸调整PH值到7左右,分装入1000毫升三角烧瓶中,每瓶装液量250毫升。将上述培养基121℃高压灭菌15分钟。冷却到30℃,将保存在斜面上的大肠杆菌用ф1mm接种环挑取一环接入上述培养基中。使用旋转震荡器,在30℃、110rpm下培养24小时。
合并上述细胞培养液1升,加入到10升含有1600gL-丙氨酸的底物溶液中,维持反应温度37度,PH值8。反应过程每小时用旋光仪测量反应体系比旋光度,待比旋光度为零时,继续反应1小时。升温至80℃,加入30g活性碳脱色30分钟,抽滤。用旋转薄膜蒸发器真空浓缩结晶,得Dl-丙氨酸精制品1200g,25℃母液2升。产品比旋光度为0,化学纯度99.6%。
实施例2
配制含有蛋白胨20g/L,酵母膏20g/L,L-丙氨酸20g/L,氯化钠5g/L,玉米浆干粉18g/L,硫酸镁0.2g/L,磷酸二氢钾1g/L的一级培养基150毫升,用氨水或硫酸调整PH值到7左右,分装入500毫升三角烧瓶中,每瓶装液量150毫升。将上述培养基121℃高压灭菌15分钟。冷却到37℃,将保存在斜面上的大肠杆菌用ф1mm接种环挑去一环接入上述培养基中。使用旋转震荡器,在30,110rpm下培养16小时,得到一级种子细胞悬液400毫升。
配制含蛋白胨20g/L(折干),酵母提取物20g/L,L-乳酸20g/L,氯化钠5g/L,玉米浆干粉5g/L,硫酸镁0.2g/L,磷酸二氢钾1g/L、L-丙氨酸5g/L的发酵液10升,调整整PH值7左右,将上述培养基加到有效容积10升的发酵罐中,115℃高压灭菌15-20分钟。冷却至30℃,接入上述一级种子细胞悬液400毫升。每分钟通入无菌空气2升,培养24小时。
上述细胞培养液10升,加入到100升含有20公斤L-丙氨酸的底物溶液中,维持反应温度40度,PH值8。反应过程每小时用旋光仪测量反应体系比旋光度,待比旋光度为零时,继续反应1小时。升温至80℃,加入300g活性碳脱色30分钟,抽滤。真空浓缩结晶,得D1-丙氨酸精制品18公斤,25℃母液10升。产品比旋光度为0,化学纯度99.6%。
Claims (7)
1.微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,其特征在于包括以下步骤:配制培养基,作为微生物培养基的碳源是L-乳酸、甘油、或L-丙氨酸,比例为10-50g/L,以蛋白胨或酵母提取物为氮源,比例为5-40g/L,培养基中加入玉米浆比例为5-50g/L,用氨水或硫酸调整培养基pH值到7,分装入烧瓶中,将保存在斜面上的微生物用接种环挑取一环接入上述培养基中,使用旋转震荡器,在20℃~40℃、90rpm~130rpm下培养12~48小时,合并上述细胞培养液,加入到L-丙氨酸水溶液中,维持反应温度20~40度,pH值6~9,反应过程每小时用旋光仪测量反应体系比旋光度,待比旋光度为零时,继续反应0.5~2小时,升温至60℃~100℃,加入活性碳脱色30分钟,抽滤,用旋转薄膜蒸发器真空浓缩结晶,得DL-丙氨酸精制品;所述的微生物为大肠杆菌,或假单胞菌,或酪酸梭状芽孢杆菌,或胚芽乳杆菌,或尿葡萄球菌,或酵母,或丝状真菌。
2.根据权利要求1所述的微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,其特征在于所述合并上述细胞培养液后,得到一级种子细胞悬液,配制含蛋白胨20g/L,酵母提取物20g/L,L-乳酸20g/L,氯化钠 5g/L,玉米浆干粉5g/L ,硫酸镁0.2g/L,磷酸二氢钾1g/L、L-丙氨酸5g/L的发酵液10升,调整pH值7,将培养基加到有效容积10升的发酵罐中,115℃高压灭菌15-20分钟,冷却至30℃,接入上述一级种子细胞悬液400毫升,每分钟通入无菌空气2升,培养24小时,得细胞培养液10升,加入到100升含有20公斤L-丙氨酸的水溶液中,维持反应温度40度,pH值8,反应过程每小时用旋光仪测量反应体系比旋光度,待比旋光度为零时,继续反应1小时,升温至80℃,加入300g活性碳脱色30分钟,抽滤,真空浓缩结晶,得DL-丙氨酸精制品。
3.根据权利要求1所述的微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,其特征在于将培养基分装入烧瓶中后,将上述培养基121℃高压灭菌15分钟,冷却到30℃。
4.根据权利要求1所述的微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,其特征在于所述L-丙氨酸水溶液的浓度为160g/L。
5.根据权利要求1所述的微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,其特征在于所述L-丙氨酸水溶液最佳pH值为8,调节pH值的物质为氢氧化钠或氨。
6.根据权利要求1所述的微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,其特征在于所述的微生物为大肠杆菌。
7.根据权利要求1所述的微生物酶消旋生产DL-丙氨酸的方法,其特征在于所述的使用旋转震荡器震荡后,在30℃、110rpm下培养24小时。
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