CN102041283A - 利用高活性生物酶合成d-苯丙氨酸的制备工艺 - Google Patents

利用高活性生物酶合成d-苯丙氨酸的制备工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN102041283A
CN102041283A CN2009100756304A CN200910075630A CN102041283A CN 102041283 A CN102041283 A CN 102041283A CN 2009100756304 A CN2009100756304 A CN 2009100756304A CN 200910075630 A CN200910075630 A CN 200910075630A CN 102041283 A CN102041283 A CN 102041283A
Authority
CN
China
Prior art keywords
phenylalanine
transformation
hours
liquid
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2009100756304A
Other languages
English (en)
Inventor
崔传僧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN2009100756304A priority Critical patent/CN102041283A/zh
Publication of CN102041283A publication Critical patent/CN102041283A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种利用高活性生物酶合成D-苯丙氨酸的制备工艺，其步骤为：利用多元培养基培养Psudomonas No.1菌种，絮凝收集菌丝体，将收集的菌丝体投入转化罐，同时投入5苄基海因，5苄基海因重量为絮凝前发酵液总重量的1/5-1/6；转化罐采用氮气保护，压力为0.1-0.2公斤，转化温度90℃，搅拌速度120转/分钟，pH值保持在8，转化时间24小时；常规收集转化清液，经后提炼、浓缩蒸发、结晶、离心、干燥得成品。本发明中，菌种发酵后可产生高酶活的D-海因酶及N-氨甲酰基酶。而且经适宜的转化温度转化，酶对底物的转化率稳定在99-100％，进而使D-苯丙氨酸的产品收率可达84-86％。

Description

利用高活性生物酶合成D-苯丙氨酸的制备工艺
技术领域
本发明涉及使用酶制备含氮有机化合物的方法，具体地说是利用高活性生物酶合成D-苯丙氨酸的制备工艺。
背景技术
D-苯丙氨酸是重要的非天然氨基酸，在医药和食品领域具有重要的应用价值，是国际上目前最具发展前景的II型糖尿病治疗药物那格列奈(NategliniDe，又称Starlix)的前体，显示了极好的应用前景。它又是治疗肿瘤药物的中间体，另外，D-苯丙氨酸还用于减肥等保健品。而目前D-苯丙氨酸的生产主要采用拆分法工艺，其具有生产规模小、收率低、成本高，难以满足国内外市场的需求。
发明内容
本发明的目的就是提供一种利用高活性生物酶合成D-苯丙氨酸的制备工艺，以合成光学纯度高，产品质量好的D-苯丙氨酸。
本发明是这样实现的：
(1)多元培养基培养Psudomonas No.1菌种：
a)一级发酵：发酵液中按重百分比计含液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1-0.12％，PH值为6.7-7.0，温度35-37℃，培养时间20小时；
b)二级发酵：发酵液中按重百分比计含液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1-0.12％，硫酸镁0.05-0.06％，PH值为6.7-7.0，温度35-37℃，培养时间20小时；
c)三级发酵：发酵液中按重百分比计含液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1-0.12％，硫酸镁0.05-0.06％，氯化钴0.01-0.02％，诱导剂2.0％，PH值为6.7-7.0，温度35-37℃，培养时间16小时；
(2)絮凝收集菌丝体，将收集的菌丝体投入转化罐，同时投入5苄基海因，5苄基海因重量为絮凝前发酵液总重量的1/5-1/6；转化罐采用氮气保护，压力为0.1-0.2公斤，转化温度90℃，搅拌速度120转/分钟，PH值保持在8，转化时间24小时；
(3)常规收集转化清液，经后提炼、浓缩蒸发、结晶、离心、干燥得成品。
在上述技术方案下，本发明可以这样实现：
在三级发酵中，培养16小时后检测发酵液，待酶活1.0，生物量0.8时进行絮凝并收集菌丝体。
转化时分批加入5苄基海因，维持底物浓度按重百分比计在3-4％。
本发明的发酵培养基中提供了适量的氮源和无机盐以及适宜的发酵工艺，使得Psudomonas No.1菌种发酵后可产生高酶活的D-海因酶及N-氨甲酰基酶。由于两种酶的酶活均可达1.0，生物量可达0.8，而且选用了适宜的转化温度，因而使得酶对底物的转化率稳定在99-100％，进而使D-苯丙氨酸的产品收率可达84-86％。
具体实施方式
本发明实施方式中所有百分比均为重量百分比。
实施例1
(1)以多元培养基培养Psudomonas No.1菌种得到发酵液。各级发酵液消毒工艺：消毒蒸汽温度120-130℃，压力1.2-1.5公斤/cm2，消毒时间为30分钟。三级发酵的工艺控制条件分别为：
a、一级发酵：发酵液中液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1％，余量为水。使用盐酸，液碱调节PH值为6.7-7.0。发酵温度35-37℃，搅拌转速60转/分钟，培养时间20小时；
b、二级发酵：发酵液中液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1％，硫酸镁0.06％，余量为水。使用盐酸，液碱调节PH值为6.7-7.0。发酵温度35-37℃，搅拌转速60转/分钟，培养时间20小时；
c、三级发酵：发酵液中液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1％，硫酸镁0.05％，氯化钴0.02％，诱导剂甲硫乙基海因2.0％，余量为水。使用盐酸，液碱调节PH值为6.7-7.0。发酵温度35-37℃，搅拌转速60转/分钟，培养时间16小时。
(2)检测发酵液，酶活为1.0，生物量0.8时向发酵液内加入絮凝剂聚丙烯酰胺2％，收集菌丝体，将收集的菌丝体投入转化罐，同时投入5苄基海因。底物5苄基海因总重量为絮凝前发酵液总重量的1/5-1/6。转化过程中5苄基海因分批投入，保持底物浓度4％。转化罐采用氮气保护，压力为0.1-0.2公斤，转化温度90℃，搅拌速度120转/分钟，PH值保持在8，转化时间24小时，底物5苄基海因转化率99％。
(3)常规收集转化清液，依次经后提炼、浓缩蒸发、结晶、离心、干燥得成品，D-苯丙氨酸的产品收率可达85％。
实施例2
(1)以多元培养基培养Psudomonas No.1菌种得到发酵液。各级发酵液消毒工艺：消毒蒸汽温度120-130℃，压力1.2-1.5公斤/cm2，消毒时间为30分钟。三级发酵的工艺控制条件分别为：
a、一级发酵：发酵液中液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1％，余量为水。使用盐酸，液碱调节PH值为6.7-7.0。发酵温度35-37℃，搅拌转速60转/分钟，培养时间20小时；
b、二级发酵：发酵液中液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.12％，硫酸镁0.05％，余量为水。使用盐酸，液碱调节PH值为6.7-7.0。发酵温度35-37℃，搅拌转速60转/分钟，培养时间20小时；
c、三级发酵：发酵液中液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1％，硫酸镁0.05％，氯化钴0.01％，诱导剂甲硫乙基海因2.0％，余量为水。使用盐酸，液碱调节PH值为6.7-7.0。发酵温度35-37℃，搅拌转速60转/分钟，培养时间16小时。
(2)检测发酵液，酶活为1.0，生物量0.8时向发酵液内加入絮凝剂聚丙烯酰胺2％，收集菌丝体，将收集的菌丝体投入转化罐，同时投入5苄基海因。底物5苄基海因总重量为絮凝前发酵液总重量的1/5-1/6。转化过程中5苄基海因分批投入，保持底物浓度3％。转化罐采用氮气保护，压力为0.1-0.2公斤，转化温度90℃，搅拌速度120转/分钟，PH值保持在8，转化时间24小时，底物5苄基海因转化率100％。
(3)常规收集转化清液，依次经后提炼、浓缩蒸发、结晶、离心、干燥得成品，D-苯丙氨酸的产品收率可达84％。

Claims (3)

1.一种利用高活性生物酶合成D-苯丙氨酸的制备工艺，其特征在于采用以下步骤制成：
(1)多元培养基培养Psudomonas No.1菌种：
a)一级发酵：发酵液中按重百分比计含液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1-0.12％，PH值为6.7-7.0，温度35-37℃，培养时间20小时；
b)二级发酵：发酵液中按重百分比计含液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1-0.12％，硫酸镁0.05-0.06％，PH值为6.7-7.0，温度35-37℃，培养时间20小时；
c)三级发酵：发酵液中按重百分比计含液糖2％，玉米浆2％，氯化钠0.3％，硫酸铵0.1-0.12％，硫酸镁0.05-0.06％，氯化钴0.01-0.02％，诱导剂2.0％，PH值为6.7-7.0，温度35-37℃，培养时间16小时；
(2)絮凝收集菌丝体，将收集的菌丝体投入转化罐，同时投入5苄基海因，5苄基海因重量为絮凝前发酵液总重量的1/5-1/6；转化罐采用氮气保护，压力为0.1-0.2公斤，转化温度90℃，搅拌速度120转/分钟，PH值保持在8，转化时间24小时；
(3)常规收集转化清液，经后提炼、浓缩蒸发、结晶、离心、干燥得成品。
2.根据权利要求1所述的高活性生物酶合成D-苯丙氨酸的制备工艺，其特征在于在三级发酵中，培养16小时后检测发酵液，待酶活1.0，生物量0.8时进行絮凝并收集菌丝体。
3.根据权利要求2所述的高活性生物酶合成D-苯丙氨酸的制备工艺，其特征在于转化时分批加入5苄基海因，维持底物浓度按重量百分比计在3-4％。
CN2009100756304A 2009-10-09 2009-10-09 利用高活性生物酶合成d-苯丙氨酸的制备工艺 Pending CN102041283A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009100756304A CN102041283A (zh) 2009-10-09 2009-10-09 利用高活性生物酶合成d-苯丙氨酸的制备工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009100756304A CN102041283A (zh) 2009-10-09 2009-10-09 利用高活性生物酶合成d-苯丙氨酸的制备工艺

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102041283A true CN102041283A (zh) 2011-05-04

Family

ID=43907830

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2009100756304A Pending CN102041283A (zh) 2009-10-09 2009-10-09 利用高活性生物酶合成d-苯丙氨酸的制备工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102041283A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103243054A (zh) * 2013-05-23 2013-08-14 南京工业大学 羧乙基海因酶生产菌株及其应用
CN104830824A (zh) * 2015-05-15 2015-08-12 南通荣泰生物科技有限公司 一种d型水解酶的生产工艺

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103243054A (zh) * 2013-05-23 2013-08-14 南京工业大学 羧乙基海因酶生产菌株及其应用
CN103243054B (zh) * 2013-05-23 2014-10-29 南京工业大学 羧乙基海因酶生产菌株及其应用
CN104830824A (zh) * 2015-05-15 2015-08-12 南通荣泰生物科技有限公司 一种d型水解酶的生产工艺

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103374534B (zh) 解脂亚罗酵母菌株及其用于合成赤藓糖醇的方法
CN102911897B (zh) 一种脱氮副球菌的培养方法及其在养殖水质净化中的应用
CN101705253B (zh) 一种木糖母液的处理方法
CN102533889B (zh) 一种赖氨酸连续发酵的方法
CN100535104C (zh) 以玉米皮水解液为原料制备饲料酵母的方法
CN106348817B (zh) 一种以玉米淀粉糖下脚料制备液体生物肥料的工艺
Pattanamanee et al. Repeated-batch production of hydrogen using Rhodobacter sphaeroides S10
CN104726510B (zh) 一种发酵制备赖氨酸的方法
CN101921810B (zh) 一种从木糖母液制备木糖醇与l-阿拉伯糖混合晶体的方法
CN103693779B (zh) 一种赖氨酸发酵液废水浓缩液的处理方法和发酵生产赖氨酸的方法
Arshad et al. Enhancing Profitability of Ethanol Fermentation through Gamma Ray Mutagenesis of Saccharomyces cerevisiae.
Purane et al. Gluconic acid production from golden syrup by Aspergillus niger strain using semiautomatic stirred-tank fermenter
CN102041283A (zh) 利用高活性生物酶合成d-苯丙氨酸的制备工艺
CN101054558A (zh) 以提取木糖后的玉米皮水解糖液为原料制备饲料酵母的方法
CN105950676B (zh) 一种制备、分离以及纯化聚谷氨酸的工艺
CN101497871B (zh) 乙醇发酵厌氧高温菌培养基,其制备方法和其应用
CN101880634A (zh) 以玉米浸泡水生产饲料酵母的方法
CN107827244A (zh) 一种用于养殖污水处理的菌藻复合剂及其制备方法
CN112851412A (zh) 一种新型有机硒肥料及其制备方法
CN103382491B (zh) 一种柠檬酸的生产方法
CN104789489A (zh) 一株高产精氨酸脱亚胺酶的蜡样芽孢杆菌及其应用
CN106496075B (zh) 一种l-瓜氨酸粗品的制备方法及由其制备的l-瓜氨酸
CN107814440A (zh) 一种用于污水处理的菌藻复合剂及其制备方法
TW201139679A (en) Method of treating raw materials containing lignocellulose as substrate for microbial fermentation
CN107119005A (zh) 一种纳豆芽孢杆菌增殖促进剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20110504