CN101569663A - 用于治疗原发性痛经的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

具有治疗原发性痛经的药物组合物及其制备方法，重量配比是：当归50～150份，肉桂30～90份，木香30～90份，醋制延胡索75～225份。当归采用挥发油、提取挥发油后药渣的水煎液醇沉得到的当归多糖提取物，及醇沉清液上大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱得到当归酚酸提取物；肉桂、木香采用挥发油，及提取挥发油后药渣的水煎液的醇沉清液，回收乙醇，浓缩，制成的清膏；延胡索采用乙醇回流提取，上大孔吸附树脂柱乙醇洗脱得到的延胡索生物碱提取物；各提取物混合后得本发明药物的活性组分。本发明保持了现有技术的镇痛效果，减少了痛经的不良反应，同时具更优的解痉作用。制备方法工艺合理，能进行大规模生产。

Description

用于治疗原发性痛经的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种具有治疗原发性痛经的中药组合物及其制备方法。

背景技术

痛经是指在月经期间或经行前后出现的明显下腹疼痛，表现为胀痛或痉挛性疼痛，或伴腰酸胀痛，全身不适，以致影响生活、工作或学习的妇科疾病。痛经根据发病情况又分为原发性痛经和继发性痛经两类。原发性痛经指生殖器官无明显器质性病变所致的痛经，多属功能性痛经，主要发生在青春期少女和未婚或未育的年轻妇女。

西医治疗原发性痛经多采用解痉、镇静和镇痛疗法、口服避孕药、前列腺合成酶抑制剂、钙离子通道阻滞剂，肾上腺素受体激动剂等，但其效果均不太理想，且副作用较为明显，临床上曾尝试通过改变剂型来增加疗效和降低副作用，但目前仍未取得令人振奋的结果。

中药在治疗原发性痛经方面有着独特的优势和广阔的应用前景，不仅疗效好而且副作用少，因此中医药在治疗原发性痛经方面发挥着越来越重要的作用。目前常用的中成药有：月月舒痛经宝颗粒、乌鸡白凤丸、延胡止痛片等，但普遍存在服用剂量较大的缺陷。

月月舒痛经宝颗粒由当归，延胡索(醋制)，肉桂，木香，三棱，莪术，红花，丹参，五灵脂九味药材组成，具有温经化瘀，理气止痛之功效，临床上对寒凝气滞血瘀，妇女痛经，少腹冷痛，月经不调，经色暗淡等症具有较好的疗效，该制剂由江苏省中医药研究院研制开发，并由生产厂家申请了专利：申请号200610076208.7，发明名称：一种治疗痛经的药物组合物及其制备方法和应用。

由于痛经宝颗粒原处方由九味中药组成，所用药物种类较多，制剂服用量较大，在生产过程中质量控制也相对较难，且在临床使用时，由于其活血化瘀作用较强，患者在服用后多有反映月经量明显增多的不良反应。

经检索，现有专利中存在一些治疗原发性痛经的中药组合物如“痛经散冲剂”(专利号93111705.4)、“一种治疗原发性痛经的内服中药”(申请号200610130819.5)、“一种治疗痛经的中药组合物”(申请号200810139921.0)等，但组成这些组方的药物种类较多，且多以汤剂服用，或工艺较简单，提取得浸膏后直接做成口服制剂，虽然有一定效果，但有效成分提取率不高，制剂较粗大，不利于控制其生产质量。

有的组合物虽然药味简单，如“用于治疗妇女痛经的药物及其制备方法”(专利号200510025931.8)采用当归、延胡索、肉桂三味药，但只是利用了当归挥发油、肉桂挥发油以及延胡索生物碱，对于当归水提液和肉桂水提液未进行充分利用，而多篇文献报道当归水提液中含有酚酸和多糖等治疗痛经的有效成分，酚酸类成分具有抗血栓和血小板凝集作用，多糖具有补血活血和镇痛作用(王芳，李东.当归的化学及药理研究进展[J].中国药房，2003，14(10)：630-631.乐江，彭仁琇，孔锐，等.当归粗多糖镇痛作用的实验研究[J].中国药学杂志，2002，37(10)：746-748)；肉桂水提物亦具有镇痛抗炎等作用(朱自平，张明发，沈稚琴，等.肉桂的温中止痛药理研究[J].中国中药杂志，1993，18(9)：553-556.方琴.肉桂的研究进展[J].中药新药与临床药理，2007，18(3)：249-252.)。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种治疗原发性痛经有明显疗效、方便安全的中药组合物，该中药组合物是对确有疗效的名优中成药的二次开发，根据中医药理论和现代药理实验方法精简处方，获得组方简单、疗效显著、用药依从性好、副作用较小的中药组合物，以提高疗效并方便临床使用。本发明的另一目的在于提供这种中药组合物的制备方法，应用现代的提取纯化技术优化精简方的生产工艺并对其制备技术进行优化。

本发明的第一个发明目的是通过以下的技术方案来实现的：

一种具有治疗原发性痛经的药物组合物，其特征在于，该组合物原料药的重量配比如下：当归50～150份，肉桂30～90份，木香30～90份，延胡索(醋制)75～225份。

其中原料药较好的用量为：当归70～130份，肉桂40～80份，木香40～80份，延胡索(醋制)100～200份。

其中原料药更为理想的用量为：当归100份，肉桂60份，木香60份，延胡索(醋制)150份。

更优化和更具体的说，本发明的组合物的组成如下：

所述的当归是采用其挥发油、当归提取挥发油后药渣的水煎液加乙醇沉淀得到的当归多糖提取物；以及该乙醇沉淀后的清液减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到当归酚酸提取物；

所述的肉桂、木香是采用其挥发油、提取挥发油后药渣的水煎液加乙醇沉淀得到的清液，减压回收乙醇，浓缩，制成的清膏；

所述的延胡索(醋制)是采用其乙醇回流提取，滤过，减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到的延胡索生物碱提取物；

将上述各提取物按所述比例混合后，得本发明药物的活性组分。

本发明的第二个发明目的是通过以下的技术方案来实现的：

一种具有治疗原发性痛经的中药组合物的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

步骤1：按比例称取各药材，备用；

步骤2：当归粉碎过筛，提取挥发油，收集挥发油，药渣加水煎煮，滤过，将滤液浓缩，加乙醇沉淀，分别收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，除去不溶性杂质，浓缩，加乙醇进行二次沉淀，收集沉淀，将沉淀真空干燥，得当归多糖提取物；将上清液减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到当归酚酸提取物；

步骤3：肉桂、木香粉碎过筛，提取挥发油，收集挥发油，药渣加水煎煮，滤过，将滤液浓缩，加乙醇沉淀，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩，制成清膏；

步骤4：延胡索(醋制)用乙醇回流提取，滤过，减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到延胡索生物碱提取物；

步骤5：将上述提取物按所述比例混合后，得本发明药物的活性组分。该活性组分可与药学制剂上常规辅料混合，也可不加常规辅料，制成常规药物制剂。

在上述步骤2中，当归粉碎时，过30～50目筛。在本发明的优选实例中，当归粗粉过40目筛。

在上述步骤2中，采用超临界CO₂萃取法提取当归挥发油，超临界CO₂萃取条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h。

在上述步骤2中，当归药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶6～1∶15，优选为1∶9～1∶12，最优选为1∶10。

在上述步骤2中，当归药渣煎煮次数为1～4次，优选为1～3次，最优选为煎煮2次。

在上述步骤2中，当归药渣煎煮时间为1～3小时，优选为1～2小时，最优选为煎煮1小时。

在上述步骤2中，当归药液一次醇沉时浓缩至相对密度为1.1～1.4(常温)，最优选为1.4(常温)。

在上述步骤2中，当归浓缩液一次醇沉至乙醇浓度(体积百分比)为60～90％，优选为70～80％，最优选为80％。

在上述步骤2中，当归药液二次醇沉时浓缩至相对密度为1.1～1.4(常温)，最优选为1.3(常温)。

在上述步骤2中，当归浓缩液二次醇沉至乙醇浓度(体积百分比)为50～90％，优选为60～80％，最优选为70％。

在上述步骤2中，将当归药液浓缩，上AB-8或D101型大孔吸附树脂柱，最优选为上AB-8型大孔吸附树脂柱中。

在上述步骤2中，当归浓缩液上树脂柱的乙醇洗脱浓度(体积百分比)为30～70％，优选为40～60％，最优选为50％。

在上述步骤3中，肉桂、木香粉碎时，过30～50目筛。在本发明的优选实例中，肉桂、木香粉碎过40目筛。

在上述步骤3中，采用超临界CO₂萃取法提取肉桂、木香中挥发油，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h。

在上述步骤3中，肉桂、木香药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶6～1∶12，优选为1∶8～1∶11，最优选为1∶10。

在上述步骤3中，肉桂、木香药渣煎煮次数为1～4次，优选为1～3次，最优选为煎煮2次。

在上述步骤3中，肉桂、木香药渣煎煮时间为1～3小时，优选为1～2小时，最优选为煎煮1小时。

在上述步骤3中，肉桂、木香浓缩至相对密度为1.1～1.4(常温)，最优选为1.3(常温)。

在上述步骤3中，肉桂、木香浓缩液醇沉至乙醇浓度(体积百分比)为60～90％，优选为70～80％，最优选为80％。

在上述步骤4中，延胡索与乙醇的重量比为1∶4～1∶10，优选为1∶5～1∶8，最优选为1∶6。

在上述步骤4中，提取延胡索的乙醇浓度(体积百分比)为30～70％，优选为40～60％，最优选为50％。

在上述步骤4中，延胡索乙醇回流提取的次数为1～4次，优选为1～3次，最优选为2次。

在上述步骤4中，延胡索乙醇提取时间为1～3小时，优选为1～2小时，最优选为提取2小时。

在上述步骤4中，将延胡索浓缩液上AB-8或D101型大孔吸附树脂柱，最优选为上AB-8型大孔吸附树脂柱中。

在上述步骤4中，延胡索上树脂柱的乙醇洗脱浓度(体积百分比)为70～95％，优选为80～95％，最优选为90％。

在上述步骤5中，将当归多糖提取物、当归酚酸提取物、肉桂、木香提取物和延胡索生物碱提取物按所述比例混合后，加入适量的药用辅料，按药剂学方法加入挥发油，制成胶囊剂、片剂等剂型。

本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、湿润剂等。

适用的填充剂包括淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、微晶纤维素或其它类似的填充剂；适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或淀粉衍生物；适宜的润滑剂如硬脂酸镁或微粉硅胶等。适宜的湿润剂如水、乙醇或十二烷基硫酸钠等。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。

本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1～5剂，如：1～5粒或片。

由于临床上患者使用痛经宝颗粒有经血量过多的不良反应，所以，结合中医药理论，根据中药的不同功效进行拆方研究，申请者将当归，延胡索(醋制)，肉桂，木香作为一个基本方，即拆方1号，在此基础上分别加以不同的活血化瘀的药物作为不同的拆方，通过不同拆方的实验对比，说明本发明与现有技术相比所具有的显著效果：

拆方2号：当归，延胡索(醋制)，肉桂，木香，三棱，莪术；

拆方3号：当归，延胡索(醋制)，肉桂，木香，丹参，五灵脂，红花(所述三棱，莪术、丹参，五灵脂，红花的重量比按照传统配方处理)。

各拆方处方筛选实验药物制备方法如下：

拆方1号：将当归提取挥发油，滤过，母液另放，药渣加水煎煮一次，滤过，滤液与母液合并，浓缩；将延胡索用乙醇回流提取，合并提取液，滤过，浓缩；将肉桂、木香提取挥发油，收集挥发油，药液滤过，母液另放，药渣加水煎煮，滤过；滤液与提取挥发油后的母液合并，浓缩，得浓缩液。最后将各浓缩液混合，加入挥发油，混匀，备用。

拆方2号：取三棱、莪术与肉桂、木香提取挥发油后的药渣加水煎煮，其他工艺同拆方1号。

拆方3号：取丹参、五灵脂、红花与肉桂、木香提取挥发油后的药渣加水煎煮，其他工艺同拆方1号。

本发明还提供本发明的药物组合物处方筛选过程，以下为药理实验的数据：

处方筛选药理实验结果：

1.醋酸所致小鼠扭体反应的影响实验

KM小鼠120只，雌雄各半，随机分成12组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；拆方1号、2号、3号高剂量组；拆方1号、2号、3号低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。

各组小鼠分别按0.4mL/20g进行灌胃3天，每天一次，末次灌胃1小时后，腹腔注射0.6％醋酸0.2mL/只，观察15分钟内各组小鼠出现扭体反应的潜伏期和扭体次数。测定小鼠扭体抑制率、扭体潜伏期延长率，结果见表1。

表1  对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05

从扭体潜伏期和扭体平均次数上看，阳性组、市售痛经宝颗粒组以及拆方1号、2号、3号高剂量组与模型组相比具有显著性差异，具有很好的镇痛效果，拆方1号、2号、3号与市售痛经宝颗粒组相比没有显著性差异，表明拆方组与市售痛经宝颗粒组镇痛效果相当。

2.对小鼠痛经模型的影响

雌性KM小鼠120只，全雌，随机分成12组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；拆方1号、2号、3号高剂量组；拆方1号、2号、3号低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。

各组小鼠按2mg/kg体重/d，灌胃己烯雌酚混悬液，连续9天，从第10天开始，上午灌胃己烯雌酚，下午分别给予上述各组药物，给药3天。末次给药45分钟后腹腔注射缩宫素：20U/kg体重，观察15分钟内各组小鼠出现扭体反应的潜伏期和扭体次数，以扭体反应为子宫收缩(痛经)的指标。测定小鼠扭体抑制率、扭体潜伏期延长率，结果见表2。

表2  对小鼠痛经模型的影响(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05

从扭体潜伏期和扭体平均次数上看，各实验组与模型组相比具有显著性差异，具有很好的镇痛效果，拆方1号、2号、3号与市售痛经宝颗粒组相比没有显著性差异，表明拆方组与市售痛经宝颗粒组镇痛效果相当。

3.对小鼠尾出血时间的影响

KM小鼠120只，雌雄各半，随机分成12组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；拆方1号、2号、3号高剂量组；拆方1、2、3号低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。

各组小鼠每天灌胃1次，连续7天，末次给药后1小时，用剪刀将距离小鼠尾尖1.5mm处横断，计时，用滤纸每隔30秒吸一次血，直至血液自然停止吸不出血为止，记录所经历的时间，即为出血时间。测定出血时间延长率，结果见表3。

表3  对小鼠尾出血时间的影响(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05；与市售痛经宝颗粒高剂量组比较：△：p＜0.05

阳性组、市售痛经宝颗粒组与拆方1号、2号、3号高剂量组以及拆方2号、3号低剂量组与模型组相比有显著性差异，可显著地延长小鼠尾出血时间，拆方2号、3号高剂量组与市售痛经宝颗粒组高剂量相比具有显著性差异，其他之间无显著性差异，说明与市售痛经宝颗粒组相比，拆方2号、3号组可以显著地延长小鼠尾出血时间，而拆方1号延长率较市售痛经宝颗粒组弱。

4.对小鼠凝血时间的影响(毛细管法)

KM小鼠120只，雌雄各半，随机分成12组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；拆方1号、2号、3号高剂量组；拆方1、2、3号低剂量，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。

各组小鼠每天灌胃1次，连续7天，末次给药后1小时，用内径1mm玻璃毛细管插入小鼠内眦球后静脉丛取血，自血液流入管中开始计时，血液注满后取出毛细管平放于桌上，每隔30s折断两端毛细管，并缓慢向左右拉开，观察折断处是否有血凝丝，至血凝丝出现时停止计时，所得时间即为凝血时间。测定凝血时间延长率，结果见表4。

表4  对小鼠凝血时间的影响(毛细管法)(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05；^**：p＜0.01；与市售痛经宝颗粒高剂量组比较：△：p＜0.05

阳性组、市售痛经宝颗粒组、拆方1号、2号、3号高剂量组以及拆方3号低剂量组与模型组相比有显著性差异，可显著地延长小鼠凝血时间，拆方2号、3号高剂量组与市售痛经宝颗粒组高剂量组相比具有显著性差异，其他之间无显著性差异，说明与市售痛经宝颗粒组相比，拆方2号、3号组可以显著地延长小鼠凝血时间，而拆方1号延长率较市售痛经宝颗粒组弱。

5.对小鼠凝血时间的影响(玻片法)

KM小鼠120只，雌雄各半，随机分成12组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；拆方1号、2号、3号高剂量组；拆方1、2、3号低剂量，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。

各组小鼠每天灌胃1次，连续7天，末次给药后1小时，于眼眶取血，用玻璃毛细管自眼后静脉丛取血，第一滴弃去，滴一滴血于干净的载玻片上，每隔30秒用干净的大头针针头自血滴边缘向内轻挑，直至出现纤维蛋白丝为止，记录出现纤维蛋白丝的时间，即为凝血时间，结果见表5。

表5  对小鼠凝血时间的影响(玻片法)(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05；^**：p＜0.01；与市售痛经宝颗粒高剂量组比较：△：p＜0.05

阳性组、市售痛经宝颗粒组、拆方1号、2号、3号高剂量组以及拆方2号、3号低剂量组与模型组相比有显著性差异，可显著地延长小鼠凝血时间，拆方2、3号高剂量组与市售痛经宝颗粒高剂量组相比具有显著性差异，其他之间无显著性差异，说明与市售痛经宝颗粒组相比，拆方2、3号可以显著地延长小鼠凝血时间，而拆方1号延长率较市售痛经宝颗粒组弱。

以上5项实验结果表明：各拆方都保持了市售痛经宝颗粒组的镇痛效果，但拆方2、3组小鼠出血和凝血时间比市售痛经宝颗粒组显著性延长，而拆方1号组出血和凝血时间比市售痛经宝颗粒组缩短，表明拆方1号(当归、延胡索(醋制)、肉桂、木香)可以作为痛经宝优化处方。

从中药组方特点上来看，当归活血补血，养血祛瘀；肉桂温经散寒，通利血脉；延胡索可增强散寒止痛之作用，木香可以行气止痛。诸药合用可以温经散寒、化瘀止痛。

本发明还提供本发明的药物组合物在治疗原发性痛经方面的作用，并与市售痛经宝颗粒进行比较，以下为药理实验的数据：

组合物的制备同实施例1。

1.醋酸所致小鼠扭体反应的影响实验

KM小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；组合物高剂量组；组合物低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。实验过程详见处方筛选药理实验1。实验结果见表6。

结果表明：从扭体潜伏期和扭体平均次数上看，各实验组与模型组相比具有显著性差异，具有很好的镇痛效果，组合物组与市售痛经宝颗粒组相比没有显著性差异，表明组合物组与市售痛经宝颗粒组镇痛效果相当。

表6  对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05

2.对小鼠痛经模型的影响

雌性KM小鼠60只，随机分成6组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；组合物高剂量组；组合物低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。实验过程详见处方筛选药理实验2，实验结果见表7。

表7  对小鼠痛经模型的影响(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05

结果表明：从扭体潜伏期和扭体平均次数上看，各组与模型组相比具有显著性差异，具有很好的镇痛效果，组合物组与市售痛经宝颗粒组相比没有显著性差异，表明组合物组与市售痛经宝颗粒组镇痛效果相当。

3对小鼠尾出血时间的影响

KM小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；组合物高剂量组；组合物低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。实验过程详见处方筛选药理实验3。实验结果见表8。

表8  对小鼠尾出血时间的影响(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05

结果表明：阳性组、市售痛经宝颗粒高剂量组与组合物高剂量组与模型组相比有显著性差异，可显著地延长小鼠尾出血时间，组合物组与市售痛经宝颗粒组相比无显著性差异，但组合物组延长率较痛经宝颗粒弱。

4.对小鼠凝血时间的影响(毛细管法)

KM小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；组合物高剂量组；组合物低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。实验过程详见处方筛选药理实验4，实验结果见表9。

结果表明：阳性组、市售痛经宝颗粒高剂量组与组合物高剂量组与模型组相比有显著性差异，可显著地延长小鼠凝血时间，组合物组与市售痛经宝颗粒组相比无显著性差异，但组合物组延长率较痛经宝颗粒弱。

表9  对小鼠凝血时间的影响(毛细管法)(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05；^**：p＜0.01

5.对小鼠凝血时间的影响(玻片法)

KM小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组，每组10只。分别为模型组，阳性对照组(阿司匹林)，市售痛经宝颗粒高剂量组，市售痛经宝颗粒低剂量组；组合物高剂量组；组合物低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量组的1/4。实验过程详见处方筛选药理实验5，实验结果见表10。

表10  对小鼠凝血时间的影响(玻片法)(x±S)

注：与模型组比较：^*：p＜0.05；^**：p＜0.01

结果表明：阳性组、市售痛经宝颗粒高剂量组与组合物高剂量组与模型组相比有显著性差异，可显著地延长小鼠凝血时间，组合物组与市售痛经宝颗粒组相比无显著性差异，但组合物组延长率较痛经宝颗粒弱。

6.对己烯雌酚和缩宫素所致大鼠离体子宫痉挛的影响

取清洁级雌性大鼠50只，随机分成5组，每组10只。分别为模型组，市售痛经宝颗粒(TJB)高剂量组，市售痛经宝颗粒(TJB)低剂量组，组合物高剂量组，组合物低剂量组，低剂量组生药量分别为高剂量的1/4。

取实验前2天已灌胃已烯雌酚1mg/kg的大鼠，颈椎脱臼法处死后，迅速剖腹取出子宫，立即置于冰浴的De Jalon’s溶液的玻璃平皿中，轻柔剥离附着于子宫壁上的结缔组织和脂肪组织，取一侧子宫角，两端分别用线结扎，将一端固定于充满营养液的恒温浴槽中的支架上，另一端用缝合线固定在张力传感器上，标本负荷1g，通过连接生物电放大器将子宫平滑肌的张力变化转换为电信号，由MP-100多道生理记录仪记录下来。仪器工作温度保持在37±0.1℃，在营养液中连续通入含5％CO₂的氧气，使其分散为连续的微小气泡，由浴槽下口送入。浴槽容积25mL，营养液也由浴槽下口送入，多余营养液自动由浴槽上口侧管排出。

待标本稳定后，描记一段正常活动曲线，从浴槽上方按序加入供试药液，观察并记录子宫收缩频率幅度的变化。实验分三大组进行：第一大组为先加缩宫素(OXY)0.1U/次，1min后注入药液，使浴槽中营养液所含TJB组按高、低剂量分别为：36.00mg生药/mL，组合物组高剂量为13.73mg生药/mL，低剂量为3.43mg生药/mL，每次加药后观察描记12min，观察、记录各组药对OXY致大鼠离体子宫条痉挛性收缩的缓解情况。第二大组先按上述浓度加入各组药液，1min后再加入OXY。第三大组为空白对照组，仅加入OXY 0.1U/次，作为模型对照。然后描记子宫条的活动情况，观察各组药对缩宫素致大鼠离体子宫痉孪的保护作用，测取1，3，5，10min时离体子宫的活动情况。之后用营养液换洗3～4次，稳定10min后描记正常活动曲线。测定大鼠子宫收缩幅度，结果见表11、12。

表11  对己烯雌酚和缩宫素所致大鼠离体子宫收缩幅度的影响(治疗组，x±S)

注：与模型组比较：^*P＜0.05与市售痛经宝颗粒(TJB)高剂量组比较：^▲P＜0.05

表12对己烯雌酚和缩宫素所致大鼠离体子宫收缩幅度的影响(预防组，x±S)

注：与模型组比较：^*P＜0.05与市售痛经宝颗粒(TJB)高剂量组比较：^▲P＜0.05

治疗组结果表明，组合物高剂量组与模型组相比有显著性差异，说明对缩宫素引起的离体大鼠子宫痉挛有显著性抑制作用；组合物高剂量组与市售痛经宝颗粒高剂量组可显著性降低大鼠离体子宫收缩幅度，表明其解痉作用明显比市售痛经宝颗粒组好。

预防组结果表明：组合物高剂量组与模型组相比有显著性差异，说明对缩宫素引起的离体大鼠子宫痉挛有显著性预防作用；组合物高剂量组与市售痛经宝颗粒高剂量组相比可以显著性降低大鼠离体子宫收缩幅度，表明其解痉作用明显比市售痛经宝颗粒组好。

有益效果：

本发明经比较药效学研究，对中药大复方----九味药的痛经宝颗粒处方进行精简优化，获得药味组成简单(四味药)但疗效更优的中药组合物，与痛经宝原方制剂比较有如下优势：本组合物保持了市售痛经宝颗粒的镇痛效果，缩短了出凝血时间，减少了痛经宝颗粒的不良反应，同时具有比痛经宝颗粒组更优的解痉作用。

本发明采用现代技术对组合物中原料药物进行了提取和纯化，有效地去除了杂质，富集了有效组分；制备工艺合理，能进行大规模生产，适宜开发成治疗原发性痛经的中药新药；同时由于组方简单，易于控制生产环节中的质量问题，便于进行复方作用原理、药物动力学等研究及治疗药物的监测。

附图说明

图1为本发明治疗原发性痛经有效组分制备方法流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例进一步详细说明本发明的实质内容，但应注意本发明的范围并不受这些实例的任何限制。

实施例1

(1)称取当归100g，粉碎过40目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h，收集挥发油0.9mL，药渣加10倍量水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.4(常温)，加乙醇至含醇量达到80％，静置24小时，收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.3(常温)，加乙醇沉淀使含醇量达70％，静置24小时，将沉淀干燥，得当归多糖提取物14.1g；上清液减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用8倍树脂床体积的50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得当归酚酸提取物1.1g。

(2)分别称取肉桂、木香各60g粉碎过40目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h。收集挥发油4.2mL，药渣加10倍量水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.3(常温)，加乙醇至含醇量达到80％，静置24小时，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩得提取物19.2g。

(3)称取延胡索(醋制)150g用6倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用3倍树脂床体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物1.8g。

(4)合并上述提取物，喷入挥发油，装入明胶硬胶囊，共制备得90粒。服法：一天3次，一次3粒。

实施例2

(1)称取当归100g，粉碎过40目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h，收集挥发油0.9mL，药渣加10倍量水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.4(常温)，加乙醇至含醇量达到80％，静置24小时，收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.3(常温)，加乙醇沉淀使含醇量达70％，静置24小时，将沉淀干燥，得当归多糖提取物14.1g；上清液减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用8倍树脂床体积的50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得当归酚酸提取物1.1g。

(2)分别称取肉桂、木香各60g粉碎过40目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h。收集挥发油4.2mL，药渣加10倍量水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.3(常温)，加乙醇至含醇量达到80％，静置24小时，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩得提取物19.2g。

(3)称取延胡索(醋制)150g用6倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用3倍树脂床体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物1.8g。

(4)合并上述提取物，喷入挥发油，加赋形剂，压片，共制备得90片。服法：一天3次，一次3片。

实施例3

(1)称取当归50g粉碎过30目筛，采用超临界CO²萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h，收集挥发油0.5mL，药渣加6倍量水煎煮1次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.1(常温)，加乙醇至含醇量达到60％，静置24小时，收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.1(常温)，加乙醇沉淀使含醇量达50％，静置24小时，将沉淀干燥，得当归多糖提取物7.3g；上清液减压回收乙醇，浓缩，上D101型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用8倍树脂床体积的30％乙醇洗脱，收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得当归酚酸提取物0.5g。

(2)分别称取肉桂、木香各90g粉碎过50目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h。收集挥发油6.3mL，药渣加12倍量水煎煮4次，每次3小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.4(常温)，加乙醇至含醇量达到90％，静置24小时，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩得提取物28.8g。

(3)称取延胡索(醋制)75g用4倍量30％乙醇回流提取1次，每次1小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，上D101型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用3倍树脂床体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物1.0g。

(4)合并上述提取物，喷入挥发油，加赋形剂，压片，共制备得75片。服法：一天3次，一次3片。

实施例4

(1)称取当归150g粉碎过50目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h，收集挥发油1.3mL，药渣加15倍量水煎煮4次，每次3小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.4(常温)，加乙醇至含醇量达到90％，静置24小时，收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.4(常温)，加乙醇沉淀使含醇量达90％，静置24小时，将沉淀干燥，得当归多糖提取物20.8g；将醇沉上清液减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用8倍树脂床体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得当归酚酸提取物1.5g。

(2)分别称取肉桂、木香各30g粉碎过30目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h。收集挥发油2.8mL，药渣加6倍量水煎煮1次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.1(常温)，加乙醇至含醇量达到60％，静置24小时，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩得提取物9.6g。

(3)称取延胡索(醋制)225g用10倍量70％乙醇回流提取4次，每次3小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用3倍树脂床体积的95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物2.8g。

(4)合并上述提取物，喷入挥发油，装入明胶硬胶囊，共制备得105粒。服法：一天3次，一次3片。

实施例5

(1)称取当归110g粉碎过40目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h，收集挥发油0.99mL，药渣加8倍量水煎煮4次，每次3小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.2(常温)，加乙醇至含醇量达到70％，静置24小时，收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.2(常温)，加乙醇沉淀使含醇量达50％，静置24小时，将沉淀干燥，得当归多糖提取物16.1g；将醇沉上清液减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用8倍树脂床体积的50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得当归酚酸提取物1.0g。

(2)分别称取肉桂、木香各80g粉碎过40目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h。收集挥发油5.6mL，药渣加12倍量水煎煮4次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.4(常温)，加乙醇至含醇量达到90％，静置24小时，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩得提取物25.5g。

(3)称取延胡索(醋制)140g用4倍量30％乙醇回流提取3次，每次3小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用3倍树脂床体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物1.7g。

(4)合并上述提取物，喷入挥发油，装入明胶硬胶囊，共制备得100粒。服法：一天3次，一次3粒。

实施例6

(1)称取当归90g粉碎过30目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h，收集挥发油0.82mL，药渣加8倍量水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.3(常温)，加乙醇至含醇量达到70％，静置24小时，收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.3(常温)，加乙醇沉淀使含醇量达70％，静置24小时，将沉淀干燥，得当归多糖提取物13.1g；上清液减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用8倍树脂床体积的50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得当归酚酸提取物0.9g。

(2)分别称取肉桂、木香各50g粉碎过40目筛，采用超临界CO₂萃取法提取挥发油，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h。收集挥发油3.6mL，药渣加12倍量水煎煮2次，每次3小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.4(常温)，加乙醇至含醇量达到90％，静置24小时，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩得提取物16.5g。

(3)称取延胡索(醋制)140g用4倍量60％乙醇回流提取3次，每次1小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，用3倍树脂床体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物1.7g。

(4)合并上述提取物，喷入挥发油，加赋形剂，压片，共制备得80片。服法：一天3次，一次3粒。

实施例7，与实施例1基本相同，但有以下改变，原料药的重量份为：当归50g、肉桂30g、木香90g、延胡索(醋制)75g。

实施例8，与实施例1基本相同，但有以下改变，原料药的重量份为：原料药的重量份为：当归150g、肉桂90g、木香30g、延胡索(醋制)225g。

实施例9，与实施例1基本相同，但有以下改变，原料药的重量份为：原料药的重量份为：当归70g、肉桂40g、木香80g、延胡索(醋制)100g。

实施例10，与实施例1基本相同，但有以下改变，原料药的重量份为：原料药的重量份为：当归130g、肉桂80g、木香40g、延胡索(醋制)200g。

实施例11，与实施例1基本相同，但有以下改变，原料药的重量份为：原料药的重量份为：当归100g、肉桂70g、木香60g、延胡索(醋制)140g。

实施例12，与实施例1基本相同，但有以下改变，原料药的重量份为：原料药的重量份为：当归120g、肉桂50g、木香70g、延胡索(醋制)150g。

Claims (8)

1、一种具有治疗原发性痛经的药物组合物，其特征在于，该组合物原料药的重量配比如下：当归50～150份，肉桂30～90份，木香30～90份，醋制延胡索75～225份。

2、根据权利要求1所述的具有治疗原发性痛经的药物组合物，其特征在于，该组合物原料药的重量配比如下：当归70～130份，肉桂40～80份，木香40～80份，醋制延胡索100～200份。

3、根据权利要求2所述的具有治疗原发性痛经的药物组合物，其特征在于，该组合物原料药的重量配比如下：当归100份，肉桂60份，木香60份，醋制延胡索150份。

4、根据权利要求1或2或3所述的具有治疗原发性痛经的药物组合物，其特征在于，所述的当归是采用其挥发油、当归提取挥发油后药渣的水煎液加乙醇沉淀得到的当归多糖提取物，以及该乙醇沉淀后的清液减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到当归酚酸提取物；

所述的肉桂、木香是采用其挥发油，以及提取挥发油后药渣的水煎液加乙醇沉淀得到的清液，减压回收乙醇，浓缩，制成的清膏；

所述的醋制延胡索是采用其乙醇回流提取，滤过，减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到的延胡索生物碱提取物；

将上述各提取物按所述比例混合后，得本发明药物的活性组分。

5、一种权利要求1所述的具有治疗原发性痛经的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：按比例称取各药材，备用；

步骤2：当归粉碎过筛，提取挥发油，收集挥发油，药渣加水煎煮，滤过，将滤液浓缩，加乙醇沉淀，分别收集上清液和沉淀，将沉淀干燥，加水溶解，滤过，除去不溶性杂质，浓缩，加乙醇进行二次沉淀，收集沉淀，将沉淀真空干燥，得当归多糖提取物；将上清液减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到当归酚酸提取物；

步骤3：肉桂、木香粉碎过筛，提取挥发油，收集挥发油，药渣加水煎煮，滤过，将滤液浓缩，加乙醇沉淀，滤过，将上清液减压回收乙醇，浓缩，制成清膏；

步骤4：醋制延胡索用乙醇回流提取，滤过，减压回收乙醇，浓缩，上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱得到延胡索生物碱提取物；

步骤5：将上述提取物按所述比例混合后，得本发明药物的活性组分。该活性组分可与药学制剂上常规辅料混合，也可不加常规辅料，制成常规药物制剂。

6、根据权利要求5所述的具有治疗原发性痛经的药物组合物的制备方法，其特征在于，

所述步骤2中，当归粉碎时是过30～50目筛；

所述的当归提取挥发油是采用超临界CO₂萃取法，该超临界CO₂萃取条件为：萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为2h；

当归药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶6～1∶15；

当归药渣煎煮次数为1～4次；

当归药渣煎煮时间为1～3小时；

当归药液一次醇沉时浓缩至常温下相对密度为1.1～1.4；

当归浓缩液一次醇沉至乙醇体积百分比浓度为60～90％；

当归药液二次醇沉时浓缩至常温下相对密度为1.1～1.4；

当归浓缩液二次醇沉至乙醇体积百分比浓度为50～90％；

将当归药液浓缩，是采用AB-8或D101型大孔吸附树脂柱；

当归浓缩液上树脂柱的乙醇洗脱体积百分比浓度为30～70％；

在步骤3中，肉桂、木香粉碎时是过30～50目筛；

提取肉桂、木香中挥发油是采用超临界CO₂萃取法，条件为：萃取压力为15MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为3h；

肉桂、木香药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶6～1∶12；

肉桂、木香药渣煎煮次数为1～4次；

肉桂、木香药渣煎煮时间为1～3小时；

肉桂、木香浓缩至常温下相对密度为1.1～1.4；

肉桂、木香浓缩液醇沉至乙醇体积百分比浓度为60～90％；

在步骤4中，延胡索与乙醇的重量比为1∶4～1∶10；

提取延胡索的乙醇体积百分比浓度为30～70％；

延胡索乙醇回流提取的次数为1～4次；

在步骤4中，延胡索乙醇提取时间为1～3小时；

将延胡索浓缩液上AB-8或D101型大孔吸附树脂柱；

延胡索上树脂柱的乙醇洗脱体积百分比浓度为70～95％；

在步骤5中，将当归多糖提取物、当归酚酸提取物、肉桂、木香提取物和延胡索生物碱提取物按所述比例混合后，加入药用辅料。

7、根据权利要求6所述的具有治疗原发性痛经的药物组合物的制备方法，其特征在于，

所述步骤2中，当归粉碎时是过40目筛。

当归药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶9～1∶12；

当归药渣煎煮次数为1～3次；

当归药渣煎煮时间为1～2小时；

当归药液一次醇沉时浓缩至常温下相对密度为1.4；

当归浓缩液一次醇沉至乙醇体积百分比浓度为70～80％；

当归药液二次醇沉时浓缩至常温下相对密度为1.3；

当归浓缩液二次醇沉至乙醇体积百分比浓度为60～80％；

将当归药液浓缩，是采用AB-8型大孔吸附树脂柱；

当归浓缩液上树脂柱的乙醇洗脱体积百分比浓度为40～60％；

在步骤3中，肉桂、木香粉碎时是过40目筛；

肉桂、木香药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶8～1∶11；

肉桂、木香药渣煎煮次数为1～3次；

肉桂、木香药渣煎煮时间为1～2小时；

肉桂、木香浓缩至常温下相对密度为1.3；

肉桂、木香浓缩液醇沉至乙醇体积百分比浓度为70～80％；

在步骤4中，延胡索与乙醇的重量比为1∶5～1∶8；

提取延胡索的乙醇体积百分比浓度为40～60％；

延胡索乙醇回流提取的次数为1～3次；

在步骤4中，延胡索乙醇提取时间为1～2小时；

将延胡索浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱；

延胡索上树脂柱的乙醇洗脱体积百分比浓度为80～95％；

在步骤5中，所述的药用辅料为粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂和/或湿润剂。

8、根据权利要求7所述的具有治疗原发性痛经的药物组合物的制备方法，其特征在于，

当归药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶10；

当归药渣煎煮次数为2次；

当归药渣煎煮时间为1小时；

当归浓缩液一次醇沉至乙醇体积百分比浓度为80％；

当归浓缩液二次醇沉至乙醇体积百分比浓度为70％；

当归浓缩液上树脂柱的乙醇洗脱体积百分比浓度为50％；

肉桂、木香药渣加水煎煮时，药渣与水的重量比为1∶10；

肉桂、木香药渣煎煮次数为2次；

肉桂、木香药渣煎煮时间为1小时；

肉桂、木香浓缩液醇沉至乙醇体积百分比浓度为80％；

在步骤4中，延胡索与乙醇的重量比为1∶6；

提取延胡索的乙醇体积百分比浓度为50％；

延胡索乙醇回流提取的次数为2次；

在步骤4中，延胡索乙醇提取时间为2小时；

延胡索上树脂柱的乙醇洗脱体积百分比浓度为90％；

在步骤5中，所述的填充剂选自：淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、微晶纤维素；所述的崩解剂选自淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或淀粉衍生物；所述的润滑剂选自硬脂酸镁或微粉硅胶；所述的湿润剂选自水、乙醇或十二烷基硫酸钠。

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