CN101568349B - 减少磷酸盐吸收的方法 - Google Patents

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Abstract

公开了一种用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的方法。所述方法包括以有效减少或保持受治疗者的血清磷酸盐浓度的量将抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体口服施用至受治疗者的步骤。

Description

减少磷酸盐吸收的方法
相关申请的交叉引用 
本申请要求2006年10月25日提交的序号为60/862,876的美国临时申请的利益，其通过引用整体并入本文。 
关于联邦赞助的研究或开发的声明 
不适用。 
[0005] 技术领域
本发明涉及一种在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的方法，并且涉及一种减少维生素D治疗的副作用的方法。 
发明背景 
磷是人类营养的必要元素，并且在机体生物化学、细胞完整性和生理过程中起必要的结构和功能作用。在包含动物或植物性物质的食物中，可发现磷作为无机磷酸盐(Pi)(例如，以其五价形式与氧结合作为磷酸盐(PO4 3-))，所述无机磷酸盐可容易地从胃肠道被吸收。还可发现磷酸盐作为生物大分子如蛋白质、核酸、脂类和糖类的组分。植物材料也可富含植酸(C6H6[OPO(OH)2]6)，所述植酸是许多植物组织(例如，麸和种子)中磷酸盐的主要储存形式(植酸磷酸盐(phytic phosphate))，占植物中磷酸盐的70％至80％。植酸或其盐(植酸盐)一般不能被单胃动物吸收，并且将随粪便排泄。植酸/植酸盐可占成体每日膳食磷酸盐摄入的大约25％。 
磷酸盐是骨矿物质的必要组分，因为成体磷酸盐的大约85％在矿化的胞外基质(如骨和牙齿)中。大约15％的磷酸盐是细胞内的(例如，在软组织中)，而约0.1％发现于细胞外液(Tenenhouse等，Vitamin D(维生素D)，第2版，Elsevier，2005)。还可发现细胞磷酸盐为构成细胞膜结构的磷脂形式。磷酸盐也是核酸(如DNA和RNA)以及核苷酸(如腺苷三磷酸(ATP)和环腺苷酸)的必要结构组分，腺苷三磷酸(ATP)是重要的 能量储存和转移分子，环腺苷酸是重要的细胞信号分子。细胞内磷酸盐的其他生理功能包括下述：(1)磷酸化许多蛋白酶、激素和细胞信号分子，以使它们活化；(2)作为生理缓冲剂保持正常的酸-碱平衡；和(3)在红细胞中包含含有磷酸盐的分子2，3-二磷酸甘油酸酯(2，3-diphosphoglycerate，2，3-DPG)。普通人含有约700至1,000克磷(LauK.，Phosphate Disorders(磷酸盐病症).Saunders；1986：398-470)，并且每天以PO4 3-形式消耗和排泄约一克至约三克磷。 
人类通过至少三条途径保持磷酸盐体内平衡(phosphate homeostasis)—胃肠道、肾和骨。胃肠道作为磷酸盐吸收和排泄/再吸收的器官参与磷酸盐体内平衡。骨作为磷酸盐的储库，所述磷酸盐可响应于各种生理信号而被动员。膳食磷酸盐的胃肠吸收是非常高效的，主要吸收部位是十二指肠和空肠(Delmez JA等，Am J Kidney Dis，1992，19：303-317)。可变量的膳食磷酸盐(摄食量的10％至80％)被排泄在粪便中，依赖于饮食是植物来源(大多不能利用的磷酸盐)还是动物组织来源(大多可消化的)。食物中的无机磷酸盐以两种方式被吸收，经由刷状缘膜的主动跨细胞途径和经由细胞间紧密连接的被动细胞旁路途径(paracellular route)(Cross等，MinerElectrolyte Metab 1990，16：115-124，和Walton J等，Clin Sci 1979，56：407-412)。基于大鼠研究的一些报道指出，结肠的磷酸盐转运主要是通过细胞旁路扩散途径介导的(Hu等，Miner Electrolyte Metab，1997，23：7-12；和Peters等，Res Exp Med(Berl)，1988，188：139-149)。基于大鼠研究的其他报道提出，跨细胞主动转运是跨小肠磷酸盐吸收的主要途径(Eto等，Drug Metab Pharmacokinet，2006，21：217-221)。 
肾作为磷酸盐滤过、重吸收和排泄的器官参与磷酸盐体内平衡。肾是保持磷酸盐体内平衡的主要调节器官。在健康成体个体中，每日肾的磷酸盐排泄等于每日胃肠磷酸盐吸收的量。然而，在磷酸盐缺乏的状态，肾减少尿的磷酸盐排泄到几乎为零(Knox F等，Am.J.Physiol.1977，233：F261-F268)。肾的磷酸盐重吸收主要发生在近端小管。磷酸盐的尿排泄分数可在0.1％至20％之间变化，因此代表了有力的体内平衡机制。在严重肾衰竭中(如由慢性肾病引起的肾衰竭)，由于不完全的肾磷酸盐清除 而发生高磷酸盐血症(hyperphosphatemia)。 
磷酸盐体内平衡的主要调节因子是血清磷酸盐和甲状旁腺素(PTH)。增加的血清磷酸盐水平增强了磷酸盐的尿排泄。PTH减少了肾小管磷酸盐的重吸收，并且增加了可溶性磷酸盐向尿中的排泄。影响磷酸盐体内平衡的其他因子包括但不限于，年龄、饮食(即摄食的磷酸盐量和/或摄食的磷酸盐的化学形式)、疾病、药剂和昼夜变异。 
维生素D，特别是其活性形式1，25-二羟基维生素D(也称为钙三醇)，也可通过直接刺激磷酸盐的肠吸收来影响磷酸盐体内平衡。此外，维生素D通过动员钙和磷酸盐到血浆来增强骨再吸收(Albaaj F & Hutchison A，Drugs 2003，63：577-596)。 
异常磷酸盐体内平衡的实例是高磷酸盐血症，其可通过下述三种机制的一种或多种而发生。第一种机制是过量的磷酸盐吸收。第二种机制是减少的磷酸盐排泄。第三种机制是磷酸盐从胞内间隙向胞外间隙的移动。严重的高磷酸盐血症可引起瘫痪、惊厥和心脏骤停。在血清磷酸盐浓度高于5mg/dl时发生高磷酸盐血症，其与增加的死亡危险相关(Block G等，J.Am.Soc.Nephrol.2004，15：2208-2218)。正常的生理血清磷酸盐浓度一般认为是血清磷酸盐浓度在约2.4mg/dl至约4.5mg/dl之间(Block G & Port F，Am.J.Kidney Dis.2000，35：1226-1237)。 
肾功能受损的患者由于肾减少的磷酸盐排泄可发展高磷酸盐血症。当到肾的维管联结(vascular supply)变得减少或当肾小球变得受损并停止从血液中滤过磷酸盐时，高磷酸盐血症接着发生。因此，高磷酸盐血症是肾病的可预测结果，并且大多数肾病患者患有或者将发展高磷酸盐血症。所述肾病的实例包括但不限于终末期肾病、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、多囊肾病、慢性肾病、急性肾小管坏死(例如肾动脉狭窄)、使肾功能衰退的感染(例如败血症或肾感染如急性肾盂肾炎)、肾移植排斥和尿路梗阻。 
与慢性肾病相关的高磷酸盐血症导致钙和磷酸盐体内平衡的严重病理生理，特别是长时间存在时。所述病理生理包括但不限于，甲状旁腺功能亢进、骨疾病(例如肾性骨营养不良)和关节、肺、眼和维管结构的钙化。患有慢性肾病患者的高磷酸盐血症独立地与死亡危险相关，并且高磷 酸盐血症增加死亡危险的确切机制未知。对表现肾功能不全的个体，在正常范围内血清磷酸盐的升高与肾衰竭的渐进和增加的心血管事件危险相关。美国国家肾脏基金会的肾病结果质量初步调查临床实践指南(TheNational Kidney Foundation Kidney Disease Outcomes Quality InitiativeClinical Practice Guidelines)针对骨骼代谢和慢性肾病疾病推荐，保持血清磷酸盐低于5.5mg/dl、钙-磷酸盐(Ca X P)产物少于55mg2/dl2，以及全段甲状旁腺素(iPTH)在150pg/ml和300pg/ml之间。尽管没有完全说明病因，认为高钙-磷酸盐产物对软组织钙化和心血管疾病负有责任。在几乎半数的所有透析患者中，心血管疾病是死亡的原因。 
许多肾病患者需要服用活性形式的维生素D，如1α，25-二羟基维生素D3，来保持钙体内平衡和/或来治疗或预防低血钙和/或继发性甲状旁腺功能亢进，因为这些患者缺乏活性维生素D。维生素D3首先在肝中代谢为25-羟基维生素D3(也称为钙二醇)，并且随后在肾中代谢为1α，25-二羟基维生素D3。1α，25-二羟基维生素D3远比25-羟基维生素D3更有活性。功能受损的肾不能将25-羟基维生素D3转变为1α，25-二羟基维生素D3。低1α，25-二羟基维生素D3水平刺激甲状旁腺分泌更多的PTH，并且甲状旁腺增生和继发性甲状旁腺功能亢进接着发生。患有慢性肾病个体的继发性甲状旁腺功能亢进的标准治疗包括活性维生素D或其类似物。同样地，大约70％的患有终末期肾病或衰竭的个体接受某种形式的维生素D。如上述讨论，维生素D刺激磷酸盐的肠吸收。因此，服用维生素D(如1α，25-二羟基维生素D3)的肾病患者更易患高磷酸盐血症，并且由于增加的磷酸盐吸收和伴随的减少的磷酸盐排泄的结合，也能使他们现有的高磷酸盐血症加重。 
减少血清磷酸盐水平的治疗性努力包括但不限于，透析、膳食磷酸盐摄入的减少、施用烟酰胺和口服施用不溶性磷酸盐结合剂。不溶性磷酸盐结合剂的实例包括但不限于，铝化合物(例如， 
Figure G200780048005XD00041
氢氧化铝凝胶)、钙化合物(例如，碳酸钙、乙酸盐如 
Figure G200780048005XD00042
乙酸钙片剂、柠檬酸盐、藻酸盐和酮酸盐)、阴离子交换聚合物(例如，美国专利第5,985,938、5,980,881、6,180,094、6,423,754号和PCT公布WO 95/05184所述的胺官能聚合物，氯化物形式的 
Figure G200780048005XD00043
阴离子交换树脂， 
Figure G200780048005XD00044
和结合盐酸胍的聚合物)、无机化合物如四水合碳酸镧(FosrenalTM)、柠檬酸和乙酸的铁盐和基于镧的多孔陶瓷材料(RenaZorbTM)。
发明概述 
一方面，本发明涉及一种用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的方法。所述方法包括以有效减少或保持所述受治疗者中血清磷酸盐浓度的量将抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体(例如，结合到肠Npt2B胞外环的抗体)口服施用至所述受治疗者的步骤。所述抗体可以是IgY抗体或结合到由SEQ ID NO：1定义的人类肠Npt2B蛋白的氨基酸234-362或氨基酸429-485内的表位的抗体。所述方法可进一步包括观察血清磷酸盐浓度的下降或稳定的步骤。例如，可测定并比较抗体处理之前和之后的血清磷酸盐浓度。 
另一方面，本发明涉及一种用于在人类受治疗者(例如，患有肾病、维生素D缺乏症、或两者的人类受治疗者)中减少维生素D治疗的副作用的方法。所述方法包括将(a)维生素D化合物和(b)抗肠Npt2B抗体(如抗人类肠Npt2B(SEQ ID NO：1)抗体)口服施用至所述受治疗者的步骤，其中所述抗体以有效减少维生素D治疗诱导的高磷酸盐血症的量施用。例如，所述受治疗者的血清磷酸盐水平可被减少或保持。在一个实施方案中，所述抗体是IgY抗体。在另一个实施方案中，所述抗体结合到由SEQ IDNO：1定义的人类肠Npt2B蛋白的氨基酸234-362或氨基酸429-485内的表位。所述方法可进一步包括观察血清磷酸盐浓度的下降或稳定的步骤。例如，可测定并比较抗体处理之前和之后的血清磷酸盐浓度。 
在一个方面，本发明提供了IgY抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体在制备用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ ID NO：1的Npt2B结合并且所述药物是用于口服施用的。 
在一个方面，本发明提供了抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体在制备用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ ID NO：1的氨基酸234-362内的表位结合并且所述药物是口服施用的。 
在一个方面，本发明提供了抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体在制备用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ ID NO：1的氨基酸429-485内的表位结合并且所述药物是口服施用的。 
在一个方面，本发明提供了抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体与维生素D化合物一起在制备用于在人类中减少维生素D治疗的副作用的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ ID NO：1的Npt2B结合并且所述药物是口服施用的。 
本文公开的方法可用来减弱或预防高磷酸盐血症。在一些实施方案中，血清磷酸盐浓度被减少到或保持在下述水平或低于下述水平：公认的正常范围内最大生理血清磷酸盐浓度的约150％、125％、120％、115％、110％或105％。在一些实施方案中，血清磷酸盐浓度被减少到或保持在正常范围内的水平。对人类受治疗者，最大的高-正常血清磷酸盐浓度是5.0mg/dl。在一个优选实施方案中，人类受治疗者的血清磷酸盐浓度被减少到 或保持在5.5mg/dl或更低或5.0mg/dl或更低。 
在本文公开的方法的一些实施方案中，所述受治疗者患有肾病、接受维生素D化合物(例如，1α，25-二羟基维生素D3)、或两者。在一些实施方案中，所述受治疗者是人类肾病患者，所述患者服用维生素D化合物(例如，1α，25-二羟基维生素D3)，并具有高于5.0mg/dl或5.5mg/dl的血清磷酸盐水平。肾病的实例包括终末期肾病、急性肾衰竭、多囊肾病、慢性肾病、急性肾小管坏死、使肾功能衰退的感染(例如败血症或肾感染如急性肾盂肾炎)、肾移植排斥或尿路梗阻。 
在本文公开的方法的一些实施方案中，所述抗肠Npt2B抗体与磷酸盐结合剂同时施用。在一些实施方案中，所述抗肠Npt2B抗体随食物一起施用或接近摄用食物的时间(即在之前或之后约一小时内)施用。 
附图简述 
图1是人类肠Npt2B的肽抗原图(antigen map)。显示了人类肠Npt2B的胞外(ECL1-ECL4)和胞内(ICL1-ICL3)环以及跨膜结构域(1-8)。数字11-20和31-35显示用来产生抗体的抗原肽位于胞外环的位置。 
图2显示体外烟酰胺(抑制磷摄取的阳性对照)和各种抗肠Npt2B肽抗体对Caco-2细胞的磷摄取的影响。从左至右的处理是：2A，对照(来自注射佐剂的母鸡的抗体)、烟酰胺和抗肽抗体(从卵黄PEG纯化)16、17、18和19；2B，对照、烟酰胺和抗肽抗体(从卵黄PEG纯化)12、13、14和15。 
发明详述 
本文公开了某些抗肠Npt2B抗体可口服施用至人类或非人类动物受治疗者来减少所述受治疗者中磷酸盐的吸收。Npt2B与肠刷状缘膜结合(Hilfiker H等，Proc Natl Acad Sci U S A.1998，95：14564-14569)。现有技术表明，体内抗肠Npt2B抗体不能有效阻抑Npt2B的活性，因为为了保护黏膜表面不被肠腔内的蛋白水解酶降解，肠刷状缘膜由仅可透过低分子量 溶质而不可透过大的高分子(例如，抗体/蛋白质)的黏液层覆盖(Atuma等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2001，280：922；和M.Mantle和A.Allen，1989，Gastrointestinal mucus(胃肠黏液)，在GastrointestinalSecretions(胃肠分泌)的第202-229页，J.S.Davison，编辑，Butterworth andCo.，Great Britain)。此外，不确定口服施用的特定抗体是否能在胃的酸性环境中存活并保持活性。尽管现有技术有相反的证据，本发明人已显示，使用针对肠Npt2B以及另一个肠刷状缘膜结合蛋白肠碱性磷酸酶的抗体(Nakano等，Arch Histol Cytol 2001，64：483-491)，口服施用的抗体可到达并阻抑肠刷状缘膜结合蛋白的活性(下文实施例)。在下文实施例中，本发明人显示口服施用的抗肠Npt2B抗体可降低血浆磷酸盐水平、减少体重增加、减少骨灰和增加排泄物磷酸盐。 
除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有如本发明所属领域普通技术人员普遍理解的相同含义。尽管在实践或试验本发明中可使用任何与本文所述的那些相似或相同的方法和材料，现描述优选的方法和材料。 
在描述实施方案和要求保护本发明时，根据下文提出的定义使用下述术语。 
如本文所用，“抗体”包括与特定抗原免疫反应性的免疫球蛋白分子，并且包括多克隆和单克隆抗体。该术语还包括遗传改造形式如嵌合抗体(例如，人源化鼠抗体)和异源偶联抗体(heteroconjugate antibody)(例如，双特异性抗体)。该术语还包括二价或双特异性分子、双抗体(diabody)、三链抗体(triabody)和四链抗体(tetrabody)。二价和双特异性分子描述于，例如，Kostelny等，J Immunol 1992，148：1547；Pack和Pluckthun，Biochemistry 1992，31：1579；Zhu等，Protein Sci 1997，6：781；Hu等，Cancer Res.1996，56：3055；Adams等，Cancer Res.1993，53：4026；和McCartney等，Protein Eng.1995，8：301。术语“抗体”还包括抗体的抗原结合形式，如具有抗原结合能力的片段(例如，Fab′、F(ab′)2、Fab、Fv和rIgG)。该术语也指重组单链Fv片段(scFv)。此外，术语“抗体”包括具有使抗体更稳定的共价连接于其上的稳定基团的抗体。本发明可采用亲和力Kd为10-4M或更低的抗体。优选 地，采用亲和力Kd≤10-5M或≤10-6M的抗体。更优选地，采用亲和力Kd≤10-7M、≤10-8M或≤10-9M的抗体。 
如本文所用，术语“高磷酸盐血症”一般用来描述受治疗者中血清磷酸盐以高于医学公认的正常范围的浓度存在的状态。 
如本文所用，术语“减弱”或“预防”意指获得治疗性益处或预防性益处。对于治疗性益处，我们意指被治疗的潜在病症的改善或根除。例如，在患有高磷酸盐血症的受治疗者中，治疗性益处包括潜在高磷酸盐血症的改善或根除。治疗性益处还包括与潜在病症相关的一种或多种病理生理症状的改善或根除，以致在所述受治疗者中观察到改善，尽管受治疗者可能仍然受该潜在病症所困扰。例如，在患有肾功能不全和/或高磷酸盐血症的患者中，治疗性益处不仅指患者血清磷酸盐水平的降低，也指患者中关于伴随肾衰竭和/或高磷酸盐血症的其他病症(如异位钙化和肾性骨营养不良)的改善。对预防性益处，将根据本发明的抗体施用至处于发展高磷酸盐血症危险的患者或施用至报告了一种或多种高磷酸盐血症病理生理症状的患者(尽管没有作出高磷酸盐血症的诊断)。例如，根据本发明的抗体可被施用至其中还未诊断有高磷酸盐血症的患有慢性肾病的患者。预防性益处包括高磷酸盐血症的预防或延缓。 
如本文所用，抗体的有效量是降低患有高磷酸盐血症的受治疗者的血清磷酸盐、预防患有或处于患有高磷酸盐血症危险的受治疗者的血清磷酸盐升高、或减少食物磷酸盐吸收(其可例如通过增加的粪便磷酸盐或通过降低或稳定的血清磷酸盐水平而测定)的量。 
如本文所用，“肾病”指影响肾功能的任何疾病或病症，包括那些导致差的磷酸盐滤过的肾疾病，并且包括影响血液供给到肾的疾病，以及肾的功能性和结构性缺陷。肾病的实例包括但不限于，终末期肾病、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、多囊肾病、慢性肾病(例如，如按美国国家肾脏基金会的肾病结果质量初步调查临床实践指南分类的I、II、III、IV或V期慢性肾病，其表现为肾功能不全以及后期的肾衰竭)、急性肾小管坏死(如肾动脉狭窄)、使肾功能衰退的感染(例如，败血症或肾感染如急性肾盂肾炎)、肾移植排斥和尿路梗阻。 
如本文所用，术语“维生素D”一般指命名为维生素D2、维生素D3、维生素D4等的有机化合物，以及指它们的代谢物和激素形式，其影响钙和磷酸盐体内平衡。维生素D化合物的实例包括但不限于，维生素D2(麦角钙化醇)、25-羟基维生素D2、1α，25-二羟基维生素D2、维生素D3(胆钙化醇)、25-羟基维生素D3、1α，25-二羟基维生素D3、任何上述的类似物或可基本上占据细胞内维生素D受体的类似物，以及描述于Bouillon等，Endocrine Reviews 1995，16：200-257的那些，其通过引用整体并入本文。维生素D化合物还包括那些目前商业可获得的或处于临床试验中的那些，包括但不限于：19-去甲-1α，25-二羟基维生素D2(帕立骨化醇，Paricalcitol)；1α-羟基维生素D2(多西骨化醇，Doxercalciferol)；1α-羟基维生素D3(阿法骨化醇，Alfacalcidol)；Leo Pharmaceutical的研究药物，包括EB 1089(西奥骨化醇，Seocalcitol)、KH 1060(20-表-22-氧杂-24a，26a，27a-三同型-1α，25-二羟基-D3(20-epi-22-oxa-24a，26a，27a-trihomo-1α，25-dihydroxy-D3))、MC 1288和MC 903(钙泊三醇，Calcipotriol)；罗氏制药(RochePharmaceutical)的药物，包括1，25-二羟基-16-烯-D3、1，25-二羟基-16-烯-23-炔-D3和25-羟基-16-烯-23-炔-D3；Chugai Pharmaceuticals的22-氧杂钙三醇(22-氧杂-1α，25-二羟基-D3)；University of Illinois(伊利诺伊大学)的1α-羟基-D5；Institute of Medical Chemistry-Schering AG(医学化学研究所-先灵制药)的药物，包括ZK 161422和ZK 157202。 
一方面，本发明涉及一种用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的方法。所述方法包括以有效减少或保持所述受治疗者中血清磷酸盐浓度的量将抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体(例如，结合到肠Npt2B胞外环的抗体)口服施用至所述受治疗者的步骤。所述抗体可以是IgY抗体或结合到由SEQ ID NO：1定义的人类肠Npt2B蛋白的氨基酸234-362或氨基酸429-485内的表位的抗体。所述方法可进一步包括观察血清磷酸盐浓度的下降或稳定的步骤。例如，可测定并比较抗体处理之前和之后的血清磷酸盐浓度。 
另一方面，本发明涉及一种用于在人类受治疗者(例如，患有肾病、 维生素D缺乏症、或两者的人类受治疗者)中减少维生素D治疗的副作用的方法。所述方法包括将(a)维生素D化合物和(b)抗肠Npt2B抗体(如抗人类肠Npt2B(SEQ ID NO：1)抗体)口服施用至所述受治疗者的步骤，其中所述抗体以有效减少维生素D治疗诱导的高磷酸盐血症的量施用。例如，所述受治疗者的血清磷酸盐水平可被减少或保持。在一个实施方案中，所述抗体是IgY抗体。在另一个实施方案中，所述抗体结合到由SEQ IDNO：1定义的人类肠Npt2B蛋白的氨基酸234-362或氨基酸429-485内的表位。所述方法可进一步包括观察血清磷酸盐浓度的下降或稳定的步骤。例如，可测定并比较抗体处理之前和之后的血清磷酸盐浓度。 
本文公开的方法可用来减弱或预防高磷酸盐血症。在一些实施方案中，血清磷酸盐浓度被减少到或保持在下述水平或低于下述水平：公认的正常范围内最大生理血清磷酸盐浓度的约150％、125％、120％、115％、110％或105％。在一些实施方案中，血清磷酸盐浓度被减少到或保持在正常范围内的水平。对人类受治疗者，最大的高-正常血清磷酸盐浓度是5.0mg/dl。在一个优选实施方案中，人类受治疗者的血清磷酸盐浓度被减少到或保持在5.5mg/dl或更低或5.0mg/dl或更低。 
处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的患者包括但不限于具有下述的患者：由于过量摄入维生素D化合物的维生素D中毒；过量磷酸盐摄入如过量使用含有磷酸盐的缓泻药或灌肠剂；肾疾病或肾功能不全，如本文所述的急性或慢性的肾衰竭；原发性甲状旁腺机能减退；PTH抵抗状况如肾小管抵抗PTH的综合征，包括各种类型的假甲状旁腺机能减退(1a、1b、1c和2)或严重的低镁血症，其损害了PTH分泌并引起外周PTH抵抗；和/或其中细胞内磷酸盐移动到胞外间隙的状态，如横纹肌溶解、肿瘤溶解、胰岛素缺乏或急性酸中毒。 
在一些实施方案中，本发明的方法用于在患有肾病、接受维生素D化合物(例如，1α，25-二羟基维生素D3)、或两者的人类或非人类受治疗者中减少磷酸盐的吸收。 
来自各个物种的肠Npt2B的氨基酸序列是已知的。例如，人类肠Npt2B(SEQ ID NO：1)、小鼠肠Npt2B(SEQ ID NO：2)、大鼠肠Npt2B(SEQ ID NO：3)和鸡肠Npt2B(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列分别可以NCBI GenBank登录号O95436、Q9DBP0、Q9JJ09和AAQ90408找到。肠Npt2B蛋白显示四个保守的胞外环。例如，上述提供的四个物种之间所有环的序列相似性是高的(环1：＞76％、环2：＞64％、环3：＞82.5％和环4：＞87.5％)，三个哺乳动物序列具有比鸡序列更高的同一性百分比。对人类肠Npt2B(SEQ ID NO：1)，胞外环1-4分别为氨基酸122-135、234-362、429-485和547-552。对小鼠肠Npt2B(SEQ ID NO：2)，胞外环1-4分别为125-138、188-361、440-461和549-554。对大鼠肠Npt2B(SEQ ID NO：3)，胞外环1-4分别为112-136、235-363、430-486和548-551。对鸡肠Npt2B(SEQ IDNO：4)，胞外环1-4分别为109-133、185-358、427-482和544-551。 
优选地，使用结合到肠Npt2B蛋白的胞外环2或3内的表位的抗体来实践本发明的方法。例如，使用结合到SEQ ID NO：1的氨基酸234-362(即环2)或SEQ ID NO：1的氨基酸429-485(即环3)内的表位的抗体。在这方面，抗体可结合到SEQ ID NO：1的氨基酸234-362或429-485内至少4、5、6、7或8个连续的氨基酸，并且可选地所述抗体具有的亲和力Kd为约10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M或更低。在一些实施方案中，使用结合到SEQ ID NO：1的氨基酸245-340、SEQ ID NO：1的氨基酸252-330、SEQ ID NO：1的氨基酸445-480或SEQ ID NO：1的氨基酸455-474内的表位的抗体来实践本发明。在一些实施方案中，使用针对下述肠Npt2B环2或环3片段内的表位的抗体来实践本发明：人类肠Npt2B(SEQ IDNO：1)的氨基酸肽252-259、278-285、297-304、323-330、455-462和467-474；小鼠肠Npt2B(SEQ ID NO：2)与上述人类肠Npt2B片段对应的片段；大鼠肠Npt2B(SEQ ID NO：3)与上述人类肠Npt2B片段对应的片段；或鸡肠Npt2B(SEQ ID NO：4)与上述人类肠Npt2B片段对应的片段。在一个实施方案中，使用针对人类肠Npt2B蛋白(SEQ ID NO：1)的氨基酸323-330或455-462或来自小鼠、大鼠或鸡肠Npt2B蛋白的对应片段内的表位的抗体来实践本发明。 
通过本领域普通技术人员熟悉的任何比对程序可容易地鉴定对应片段。例如，可如Altschul等(Nucleic Acids Res.25，3389-3402，1997)所述 使用缺口BLAST(Gapped BLAST)。缺口BLAST可在NCBI网站获得。当使用缺口BLAST程序时，可使用程序的默认参数。 
制备抗肠Npt2B抗体如Igy抗体或结合到Npt2B胞外环内的表位的抗体完全在本领域普通技术人员的能力内。在一些实施方案中，所述方法中采用的抗体来自卵(例如，卵黄)，特别地来自禽类的卵如鸡卵。可使用下述方法来产生卵黄抗体的制品：Polson，A.、M.B.von Wechmar和M.H.van Regenmortel，“Isolation of Viral IgY Antibodies from Yolks of ImmunizedHens(从免疫母鸡的卵黄中分离病毒IgY抗体)”，ImmunologicalCommunications 9：475-493(1980)，其通过引用整体并入本文。产卵母鸡可用肠Npt2B蛋白或来自胞外环的其免疫原性片段接种。优选地，合适的佐剂与接种物(inoculation)结合施用以增强免疫接种。用于此目的的佐剂为油包水乳剂佐剂，如完全弗氏佐剂。肠Npt2B蛋白或来自胞外环的其免疫原性片段促使母鸡产生抗肠Npt2B抗体，所述抗体被动地被转移进母鸡产的卵的卵黄内。可收集含有所述抗体的卵黄或完整的卵并匀浆以形成乳剂。可干燥得到的乳剂以形成含有所述抗体的粉末。然后该粉末可以适合口服施用的方式配制，然后口服施用至人类或非人类动物受治疗者。制品可作为饮食或食品补充剂口服施用。 
涵盖任何同种型类或亚类的抗体(例如，IgY、IgG、IgM、IgD、IgA、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)及其片段(不管通过酶促还是化学消化所述抗体来产生)以及通过合成方法或通过编码所述抗体或其片段的基因序列的表达来制备所述抗体。在IgY的一个实施方案中，使用禽类动物(如鸡、雉、鸭、火鸡、鹅及类似动物)卵黄中的抗体来实践本发明(参见例如，美国专利第5,080,895、5,989,584和6,213,930号，其每个通过引用整体并入本文)。可使用可商业途径获得的卵抗体纯化试剂盒来纯化所述抗体，所述试剂盒如 
Figure G200780048005XD00121
IgY纯化系统(Promega；Madison，WI)或 
Figure G200780048005XD00122
鸡IgY纯化(Pierce Biotechnology，Inc.；Rockford，IL)。也可使用标准亲和纯化方法基于抗体对肽或蛋白质片段的亲和力来纯化抗体。可选地，含有所述抗体的卵、卵黄或干卵黄粉末可与食物直接混合用于口服摄用或将其容易地引入丸剂、片剂或胶囊。也可通 过完善的分子克隆或噬菌体展示技术使用所述抗体鉴定编码所述抗体的基因，以产生可单独或组合使用的所述抗体的完整或部分单克隆形式。 
含有根据本发明的抗肠Npt2B抗体的组合物可例如一天一次、两次或三次给药。可选地，给药可以某种方式细分，其中处方剂量的一部分在摄用食物或饮料之前摄入，另一部分与食物或饮料一起摄入，而其他部分在接近摄入食物或饮料之后的时间摄入。活性成分可作为颗粒或粉末通过口服途径施用，所述颗粒或粉末如下述：撒或散布在食物上或食物内；或者溶解或悬浮在饮料中；或者以药物固体剂型(如片剂、胶囊和粉末)，或液体剂型(如酏剂、糖浆剂和混悬剂)提供。在一些实施方案中，所述抗体随食物一起施用或接近摄用具有膳食磷酸盐食物的时间(即之前或之后约1小时内)施用。在一些实施方案中，所述抗体与磷酸盐结合剂同时施用。 
根据本发明的示例性药物组合物包含IgY和可选地卵组分、或包含IgY和可选地卵黄组分，可选地具有额外的稳定剂或药学可接受的载体。完整的卵、或卵黄、或脂类被部分或大部分去除的卵黄可被乳化，可选地与包囊化合物或冻干保护剂(lyoprotectant)混合，并且经喷雾干燥或冷冻干燥以形成粉末。 
卵黄抗体可被部分纯化，例如去除大量的脂类。参见Camenisch C等，FASEB J.1999，13：81-88；Akita E&Nakai S，J.Immunol.Methods 1993，160：207-214，其每个通过引用并入本文，如同以其整体提出一样；以及美国专利公布第2004/0087522号，其通过引用并入本文，如同以其整体提出一样。 
胶囊或片剂可包含控释制剂，所述控释制剂可提供为于羟丙基甲基纤维素或已知改变活性剂释放动力学的相关材料中的活性化合物的分散体。使用已知的药学技术，固体剂型可被生产为缓释产品以提供在一段时间内药物的连续释放。压制片剂可以经糖包衣或薄膜包衣以掩盖任何令人不快的味道并保护片剂不与大气接触，或包肠溶衣以在胃肠道中选择性崩解。固体和液体口服剂型都可含有着色剂和调味剂以增加患者的接受度。 
稳定剂是在变性条件下(如热或酸)保持抗体结合活性的保护剂。稳 定剂不抑制抗体与靶抗原的相互作用，因而也保持了需要的生物效应。示例性稳定剂包括卵白、清蛋白或糖类化合物。优选地，所述糖类化合物以完整卵液体的约5％至30％(按重量)存在，并且更优选地以完整卵液体的10％至20％(按重量)的量存在。抗体与糖类化合物在液态混悬剂中混合，然后干燥混悬剂以产生含有所述蛋白质和糖类的固体。用作稳定剂的糖类化合物包括单糖、二糖、多糖、烷化单糖、烷化二糖、烷化多糖、单糖醇和烷化单糖醇。优选地，所述糖类化合物主要由5或6碳的单糖单位组成或基于5或6碳的单糖单位。单糖是具有式(CH2O)n的单个糖残基，其中n为3或大于3。单糖的实例包括但不限于葡萄糖、核糖、果糖、半乳糖、塔罗糖、阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、木糖和赤藓糖。所有异构形式的单糖具有活性，所述异构形式如α-异构体、β-异构体、D-异构体和L-异构体。二糖是具有通过糖苷键连接在一起的两个单糖残基的分子。可用在本发明的二糖的实例包括但不限于海藻糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖和乳酮糖。多糖是具有以线性、不分支的链或支链连接在一起的三个或更多单糖的分子。淀粉、糖原和纤维素是具有上百或甚至上千单糖残基的多糖的实例。淀粉可含有线性、不分支的链(直链淀粉)或高度支链(支链淀粉)。糖原含有支链，而纤维素含有线性、不分支的链。烷化单糖、烷化二糖和烷化多糖是至少一个氢基被烷基取代的单糖、二糖和多糖。单糖醇是含有三个或更多羟基基团的无环多元醇。它们可通过将单糖的酮或醛基团转变为羟基基团而生成。单糖醇的实例包括但不限于丙三醇、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、乳糖醇、异麦芽糖醇(isomalt)、麦芽糖醇和氢化淀粉水解物。烷化单糖醇是至少一个氢基被烷基取代的单糖醇。 
抗体也可为增强抗体的功效或稳定性目的而被连接到基质(聚合的或非聚合的)底物上，然后被施用。 
考虑下述非限制性实施例后将更完全地理解本发明。 
实施例1 
通过抗肠Npt2B抗体抑制磷酸盐的转运 
材料和方法
动物：将单冠白来航鸡(Single Comb White Leghorn)产卵母鸡用于抗体的产生(每种肽抗原3只母鸡)。使用标准戊二醛程序，通过将肽偶联到牛γ球蛋白上制备每种人类肠Npt2B肽抗原(序列参见下表1，在协同转运蛋白上的位置参见图1)。 
表1.用来产生卵抗体的肽的氨基酸序列。氨基酸序列是基于动物物种之间的肠Npt2B的预测保守区域。感兴趣的区域包括胞外环1-3的亲水表面。 
随意肽#             氨基酸序列                   酶的位置 
(SEQ ID NO)         (氨基酸在SEQ ID NO：1的位置) 
11(SEQ ID NO：5)    LVGGKMAG(124-131)            ECL-11
12(8EQ ID NO：6)    FHFKNGED(252-259)            靠近D-3的ECL-2 
13(SEQ ID NO：7)    LKVITKPF(264-271)            靠近D-3的ECL-2 
14(SEQ ID NO：8)    LDKKVISQ(278-285)            D-3，4顶端的ECL-2 
15(SEQ ID NO：9)    SLVKIWCK(297-304)            D-3，4顶端的ECL-2 
16(SEQ ID NO：10)   TSPSLCWT(323-330)            靠近D-4的ECL-2 
17(SEQ ID NO：11)   YPLTLGSN(455-462)            靠近D-6的ECL-3 
18(SEQ ID NO：12)   TTAILAAL(467-474)            靠近D-6的ECL-3 
19(SEQ ID NO：13)   VQSSSVFT(430-437)            靠近D-5的ECL-3 
20(SEQ ID NO：14)   LIGIGVIT(443-450)            靠近D-5的ECL-3 
31(SEQ ID NO：15)   EVATHYLE(235-242)            靠近D-3的ECL-2 
32(SEQ ID NO：16)   GIQNWTMK(332-339)            靠近D-4的ECL-2 
33(SEQ ID NO：17)   FVNFHLPD(354-361)            靠近D-4的ECL-2 
34(SEQ ID NO：18)   SPGNALRS(476-483)            靠近D-4的ECL-2 
35(SEQ ID NO：19)   ENIAKCQH(345-352)            靠近D-6的ECL-3 
1ECL＝胞外环。肠Npt2B有8个跨膜结构域(D)和4个胞外环(ECL)。靠近D意指其与该结构域最接近。T＝顶端，意指其在显示的结构域之间是等距的。参见图1。 
偶联制备：尽管用于将肽偶联到载体蛋白的程序(许多用于偶联的试剂盒可从Pierce Scientific获得)和载体蛋白的性质可有显著差异，在本实施例所述的研究中使用的方法涉及使用将需要的肽与载体蛋白牛γ球蛋白(BgG)偶联的戊二醛程序。溶于0.8ml 0.1M醋酸钠缓冲液(pH＝7)的BgG(4mg)与4mg需要的肽混合。向肽载体蛋白混合物中逐滴加入(以避免起泡)0.52ml 0.02M的戊二醛(溶于0.1M醋酸钠缓冲液)。搅拌所述混合物2小时。然后加入20mg甘氨酸以终止反应。允许所述混合物放 置1小时，然后用磷酸盐缓冲盐水(pH＝7)透析过夜(MW＝6000-8000)。然后将透析的偶联物冷冻于-80℃直至使用。 
疫苗的制备和用途：为制备针对每只母鸡的疫苗，将0.5mg偶联物用0.5ml PBS稀释至终浓度，并与0.5ml弗氏完全佐剂(第一次注射)或不完全佐剂(加强接种)混合以形成油包水的乳化液(emulsification)，其当滴在冰水上时能保持珠状。然后在四个部位(每条腿和每个胸部)用0.25ml疫苗乳剂肌内注射所述母鸡。不完全佐剂的加强注射发生在7天后。表1所示的每种肽被分别偶联到BgG上，并注射入3只产卵母鸡。 
抗体样品的制备：到21天获得峰值抗体，因此从21天到110天收集卵。在大约30天组中，从完整卵中分离每只母鸡的卵黄，混合并冻干。收集每只母鸡的卵样品，分离卵黄并使用Polson等，Immunol.Commun.1980，9：475-493)所述的程序聚乙烯纯化IgY。使用此方法制备的抗体被冷冻(-20℃)，并作为细胞培养和体外酶测定的试剂。 
细胞：Caco-2细胞从ATCC(#HTB-37，ATCC)获得。Caco-2细胞系是结肠直肠腺癌细胞系，并且在本研究中被用来模拟肠的肠细胞。 
磷酸盐摄取测定：从分会合单层Caco-2细胞中去除培养基，并且细胞用缓冲液A(137mMNaCl、5.4mM KCl、2.8mM CaCl2、1.2mM MgSO4、14mM Tris-HCl pH 7.4＝钠缓冲液)或用缓冲液B(137mM氯化胆碱、5.4mM KCl、2.8mM CaCl2、1.2mM MgSO4、14mM Tris-HCl pH 7.4＝不含钠的缓冲液)洗涤。将1ml含有0.1mg/ml抗体的缓冲液A或B加入细胞，并在37℃孵育1小时。一小时孵育后，吸出缓冲液A或缓冲液B，并加入100μl含K2H32PO4(1μCi/mL)的缓冲液A或缓冲液B。细胞在37℃孵育另外20分钟。在孵育期间，平板以100rpm/分钟连续振荡。通过去除摄取缓冲液并通过用冰冷的终止溶液(14mM Tris-HCl pH 7.4和137mM氯化胆碱)洗涤细胞来终止磷酸盐的摄取。使用Triton X-1001％的溶液裂解并收集细胞。将等分试样加入到闪烁液中，并通过液体闪烁计数确定放射性。使用两种缓冲液(缓冲液A和缓冲液B)的测定之间回收的放射性差异代表了钠依赖性磷酸盐转运。 
结果
如使用Caco-2细胞的图2所示，肽12、14、15、16、17和18的抗体抑制了磷酸盐的转运。相对抑制效力是16＞17＞18＞12＞15＝14。肽16和肽17的抗体在抑制磷酸盐转运上比烟酰胺(抑制磷摄取的阳性对照)更有效。 
实施例2 
抗肠Npt2B抗体对体重增加、血浆磷酸盐浓度和排泄物磷酸盐的影响 
材料和方法
使用各种Npt2B肽产生抗人类肠Npt2B抗体已描述于上述实施例1。代替纯化的IgY抗体，含有抗体的干卵黄粉末直接用在本实施例提出的喂养研究中。 
雄性一天龄的单冠白来航鸡雏鸡(2圈，每圈五只雏鸡)被分配对照饮食或抗体饮食(1g冻干的卵黄抗体/kg饮食)，所述抗体是Npt2B 14种肽(表1的肽11-20和31-34)中一种的抗体。所述对照饮食是标准的营养充足的基于玉米-大豆餐的饮食，并含有1g注射佐剂的对照干卵黄粉末/kg饮食。所述抗体饮食与所述对照饮食一样，除了肽特异性抗体粉末代替了对照粉末。用所述饮食喂养雏鸡21天。然后确定体重，收集血样用于使用罗氏/日立分析仪(Roche/Hitachi analyzer)确定总血浆磷水平(基于非还原条件下磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼酸铵)，并且在饮食的最后3天收集每圈的排泄物样品并分析总磷(干重计)。 
结果
如表2所示，抗肽11、13、15-17、20、31和32抑制了体重增加；抗肽20、32和34降低了血浆磷酸盐水平；而抗肽11、12、14、17-20和32增加了排泄物磷。 
表2.用选择肠Npt2B肽的卵抗体(1g/kg饮食)喂养对体重增加、血浆磷浓度和排泄物磷的影响。1
                         血液        排泄物        平均排泄物 
          体重增加       磷酸盐      磷酸盐        磷酸盐4
处理      (克)2(mg/dL)3  (％)4
对照      183±8.4       6.6±0.5    1.24，1.26    1.25 
抗肽11    164±6.16      6.6±0.2    1.3，1.44     1.37 
抗肽12    180±5.9       6.2±0.4    1.38，1.46    1.42 
抗肽13    166±107       6.3±0.4    1.16，1.34    1.25 
抗肽14    175±3.9       6.6±0.2    1.42，1.22    1.32 
抗肽15    170±8.67      6.7±0.4    1.38，1.18    1.28 
抗肽16    145±145       6.7±0.3    1.02，1.22    1.12 
抗肽17    165±7.56      6.3±0.1    1.32，1.5     1.41 
抗肽18    178±6.2       6.6±0.1    1.7，1.2      1.45 
抗肽19    176±8.0       6.4±0.3    1.32，1.34    1.33 
抗肽20    170±107       6.0±0.29   1.36，1.5     1.43 
抗肽31    169±7.07      6.3±0.2    1.16，1.12    1.14 
抗肽32    163±9.25      5.7±0.38   1.28，1.4     1.34 
抗肽33    177±9.5       6.6±0.2    1.14，1.18    1.16 
抗肽34    182±5.2       6.0±0.210  1.22，1.24    1.23 
1五只一天龄单冠白来航鸡雄性雏鸡的两个圈被喂食具有对照卵黄粉末(1g来自仅注射佐剂的母鸡的干卵黄/kg饮食)或用指示的肽抗原免疫的母鸡的卵黄粉末(1g/kg饮食)的充足营养(UW-标准家禽幼雏开食饮食)。雏鸡被饲养3周，并且测定在此期间的体重增加(减去起始重量)。在21天大时，对所有雏鸡提取血样，收集血浆并分析磷。所有排泄物从下面的粪盘收集，每圈雏鸡在本研究的最后3天内收集并分析总磷。 
2增加±标准误差＝21天重量减去起始重量。 
3血浆磷±标准误差。 
4两圈被取样并分析。显示原始值(干物质的％)和平均值。 
6*、5**、7***指示相对于对照p＜0.05**、p＜0.07*和p＜0.1***。 
5p＜0.05；6p＜0.07；7p＜0.1；8p＝0.07；9p＝0.13；和10p＝0.16。 
实施例3 
抗肠Npt2B抗体对体重增加、血浆磷酸盐浓度和骨灰的影响 
材料和方法
使用肽16产生抗人类肠Npt2B抗体已描述于上述实施例1。代替纯化的IgY抗体，含有抗体的干卵黄粉末直接用在本实施例提出的喂养研究中。 
七天龄的肉雏鸡(broiler chick)被分配对照饮食(4圈，每圈5只肉雏鸡)或抗体饮食(1g冻干的卵黄抗体/kg饮食)(8圈，每圈5只肉雏鸡)。所述对照饮食是标准的营养充足的饮食，并且含有1g注射佐剂的对照干卵黄粉末/kg饮食。所述抗体饮食与所述对照饮食一样，除了抗肽16抗体粉末代替了对照粉末。当雏鸡7天大时开始喂食，并喂养至21天大。在14天和21天确定体重。在21天，收集血样用于使用罗氏/日立分析仪确定总血浆磷水平(基于非还原条件下磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼酸铵)，并且收集右胫骨用于确定无脂的干骨灰(醚提取、干燥、并在马弗炉中成灰，并且确定灰分/干无脂骨的比例并转化为％)。 
结果
如表3所示，肽16抗体喂养的肉鸡与佐剂对照抗体卵黄粉末喂养的肉鸡相比14天的体重增加减少了(抗肽16饮食组和对照饮食组分别为413g对495g，p＝0.08)。这两个处理组之间的血浆磷没有差异(抗肽16饮食组和对照饮食组分别为6.12mg/dl对6.14mg/dl)。肽16抗体喂养的肉鸡与佐剂对照抗体卵黄粉末喂养的肉鸡相比骨矿物质含量减少了(抗肽16饮食组和对照饮食组分别为0.524％对0.539％)。相对于来航鸡，肉鸡是生长非常快速的品系。肉鸡在前3周期间的体重从35克增加到大约500-600克(超过15倍的增加)，而在来航鸡中，所述增加是从35克到只有约180克(5-6倍增加)。因此，肉鸡的体重增加可以是膳食可用磷的灵敏指征(indicator)。从骨灰数据，此品种中保持血液磷酸盐的优先级高于成骨和生肌。这支持了生长是此品系中最灵敏的指征。 
表3.用肠Npt2B肽16的卵抗体(1g/kg饮食)喂养对体重增加、血浆磷浓度和骨灰的影响。 
    对照   抗肽16
  体重增加(克)   495±15*   413±16*
  血浆磷酸盐(mg/dL)   6.14±0.31   6.12±0.19
  骨灰(％)   0.539±0.005**   0.524±0.005**
*肽16抗体喂养的肉鸡与佐剂对照抗体卵黄粉末喂养的肉鸡相比14天的体重增加减少了(p＝0.0003)。 
**肽16抗体喂养的肉鸡与佐剂对照抗体卵黄粉末喂养的肉鸡相比骨矿物质含量减少了(p＝0.02)。 
实施例4 
口服施用抗体可到达并阻抑肠刷状缘膜结合蛋白的活性 
材料和方法
抗体的制备：将单冠白来航鸡产卵母鸡用于抗体的产生(每种肽抗原3只母鸡)。鸡肠碱性磷酸酶购自Worthington。为制备每只母鸡的疫苗，将0.5mg鸡肠碱性磷酸酶用0.5ml PBS稀释至终浓度，并与0.5ml弗氏完全佐剂(第一次注射)或不完全佐剂(加强免疫)混合以形成油包水的乳化液(emulsification)，其当滴在冰水上时能保持珠状。然后在四个部位(每条腿和每个胸部)用0.25ml疫苗乳剂肌内注射所述母鸡。不完全佐剂的加强注射发生在7天后。 
到21天获得峰值抗体，因此从21天到110天收集卵。在大约30天组中，从完整卵中分离每只母鸡的卵黄，混合并冻干。将含有所述抗体的干卵黄粉末储存在室温下直至用在动物喂养研究中。 
动物实验：本研究使用的鸡模型如Biehl和Baker，J.Nutr.1997，127：2054-2059所述，除了使用肠碱性磷酸酶的抗体。本研究使用的阴性对照是Pi缺乏饮食(Pi＝无机磷酸盐，其主要是矿物磷酸盐或来自动物组织和产物(如乳和卵)的磷酸盐)，其中使用的膳食磷是植酸磷酸盐。如下述结果所示，该膳食处理导致低血浆磷。阳性对照是与阴性对照同样的饮食，但添加了1α-羟基维生素D3(20μg/kg饮食，Sigma)。如下述结果所示，此膳食处理与阴性对照相比增加了血液磷水平。所有剩余的膳食处理是阳性对照加抗体(1g如上述产生的干卵黄粉末)。所述阴性和阳性对照被喂食1g来自用佐剂注射的母鸡的干卵黄粉末/kg饮食。这些卵黄粉末缺少特定的抗体。 
使用总计3种处理(阴性对照、阳性对照、阳性对照加抗鸡肠碱性磷酸酶抗体)。六只一天龄的雄性单冠白来航鸡雏鸡被分配每种膳食处理。用所述膳食处理喂养雏鸡10天，称重，然后提取血样用于使用罗氏/日立分析仪确定血浆磷浓度(基于非还原条件下磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼酸铵)。 
结果
鸡肠碱性磷酸酶抗体在减少血浆磷水平上是有效的(表4)。 
表4.在活性维生素D存在下抗肠碱性磷酸酶(IAP)喂养的鸡的血浆磷1
1一天龄来航鸡雏鸡(n＝6)用含有植酸磷的Pi缺乏饮食喂养，所述饮食单独添加了1α-羟基维生素D3(活性维生素D，20μg/kg饮食)或添加了1α-羟基维生素D3加鸡肠碱性磷酸酶的卵抗体(1g干卵黄抗体粉末/kg饮食)。用所述饮食喂养10天后测定血浆磷。 
2用活性维生素D饮食(1α-羟基维生素D3)喂养的鸡相对于用Pi缺乏饮食喂养的鸡具有增加的血浆磷(p＝0.0004)。 
**添加了鸡肠碱性磷酸酶抗体的活性维生素D饮食(1α-羟基维生素D3)喂养的雏鸡相对于活性维生素D单独处理具有减少的血浆磷(p＜0.05)。 
实施例5 
减少腺嘌呤诱导的尿毒症动物中的血清磷酸盐水平 
本实施例中使用的动物模型是腺嘌呤诱导的尿毒症大鼠模型(参见例如Yokazawa等，Nephron 1986，44：230-234；Katsumata等，Kid Intl 2003， 64：441-450；和Levi R等，J Am Soc Nephrol 2006，17：107-112，其每个通过引用整体并入本文)。 
大鼠(如雄性Sprague Dawley大鼠，大约175-250g，每组最多10只大鼠)用对照饮食或诱导尿毒症的腺嘌呤饮食(例如，含有0.75％腺嘌呤)喂养几周时间(例如，3至5周或更长)。腺嘌呤饮食喂养的大鼠将发展具有血清磷酸盐水平高于4.4mmol/L的高磷酸盐血症。这些大鼠也将发展维生素D3(1α-羟基维生素D3和1α，25-二羟基维生素D3)缺乏。用增加量的抗肠Npt2B抗体(如实施例1中所述的那些)每日口服处理这些腺嘌呤饮食喂养的大鼠，将导致剂量依赖性的血清磷酸盐水平的减少。如果在腺嘌呤处理的前4周内和之后供给这些抗体，这些抗肠Npt2B抗体将预防、延缓或逆转这些大鼠中高磷酸盐血症的发展。 
在其他组中，腺嘌呤饮食喂养的大鼠被供给某种形式的维生素D(例如，25-羟基维生素D或其衍生物或活性维生素D剂如1α，25-二羟基维生素D3)以预防或补偿活性维生素D缺乏。该处理将使大鼠更易患高磷酸盐血症，并且一旦发展将加重这些大鼠中的高磷酸盐血症。用增加剂量的抗肠Npt2B抗体(如实施例1中所述的那些)口服处理这些接受维生素D(例如，1α，25-二羟基维生素D3)的大鼠，将以剂量依赖性方式减少这些大鼠中的血清磷酸盐水平。如果在腺嘌呤处理的前4周内和之后供给所述抗体，这些抗肠Npt2B抗体将预防或延缓高磷酸盐血症的发展或加重。 
可使用其他腺嘌呤诱导的尿毒症动物(如狗、猪和猴)进行相似的实验。 
实施例6 
减少5/6肾切除大鼠的血清磷酸盐水平 
对于5/6肾切除术(参见例如，Cozzolino M等，Kidney Int.2003，64：1653-61)，结扎左肾动脉的几个分支并切除右肾。用高磷酸盐饮食(例如，0.9％磷酸盐)喂养5/6肾切除大鼠(例如，雄性Sprague Dawley大鼠，大约175-250g，每组最多10只大鼠)。手术后几周(例如，4至8周)这 些大鼠将变为尿毒症的，并发展肾衰竭、高磷酸盐血症和活性维生素D3(1α-羟基维生素D3和1α，25-二羟基维生素D3)缺乏。用增加量的抗肠Npt2B抗体(如实施例1中所述的那些)每日口服处理这些5/6肾切除的高磷酸盐饮食喂养的大鼠，将以剂量依赖性方式减少这些大鼠中的血清磷酸盐水平。如果在手术后的前几周内和之后供给所述抗体(如实施例1所述的那些)，它们将预防或延缓这些大鼠中高磷酸盐血症的发展。 
在其他组中，高磷酸盐饮食喂养的5/6肾切除大鼠被供给某种形式的维生素D(例如，25-羟基维生素D或其衍生物或活性维生素D剂如1α，25-二羟基维生素D3)以预防或补偿活性维生素D缺乏。然而，该处理将使大鼠更易患高磷酸盐血症，并且一旦发展将加重这些大鼠中的高磷酸盐血症。用增加剂量的抗肠Npt2B抗体(如实施例1中所述的那些)口服处理这些接受维生素D(例如，1α，25-二羟基维生素D3)的大鼠，将减少血清磷酸盐水平。如果在手术的前几周内和之后供给所述抗体，这些抗肠Npt2B抗体将预防或延缓这些大鼠中高磷酸盐血症的发展或加重。 
本发明将不限于上述实施例，而是包括如落入所附权利要求范围内的所有此类修改和变化。 

Claims (29)

1.IgY抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体在制备用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ IDNO：1的Npt2B结合并且所述药物是用于口服施用的。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述受治疗者是人类受治疗者。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述受治疗者患有肾病。
4.如权利要求3所述的用途，其中所述肾病选自终末期肾病、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、多囊肾病、慢性肾病、急性肾小管坏死、使肾功能衰退的感染和尿路梗阻。
5.如权利要求1所述的用途，其中所述受治疗者正在接受维生素D化合物。
6.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体从禽类的卵获得。
7.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体与磷酸盐结合剂一起施用。
8.抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体在制备用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ ID NO：1的氨基酸234-362内的表位结合并且所述药物是口服施用的。
9.如权利要求8所述的用途，其中所述抗肠Npt2B抗体结合到SEQ IDNO：1的氨基酸245-340内的表位。
10.如权利要求8所述的用途，其中所述抗肠Npt2B抗体结合到SEQID NO：1的氨基酸252-330内的表位。
11.如权利要求8所述的用途，其中所述受治疗者是人类受治疗者。
12.如权利要求8所述的用途，其中所述受治疗者患有肾病。
13.如权利要求12所述的用途，其中所述肾病选自终末期肾病、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、多囊肾病、慢性肾病、急性肾小管坏死、使肾功能衰退的感染和尿路梗阻。
14.如权利要求8所述的用途，其中所述受治疗者正在接受维生素D化合物。
15.如权利要求8所述的用途，其中所述抗体是IgY抗体。
16.如权利要求8所述的用途，其中所述抗体与磷酸盐结合剂一起施用。
17.抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体在制备用于在处于发展高磷酸盐血症危险或已发展高磷酸盐血症的人类或非人类动物受治疗者中减少磷酸盐吸收的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ ID NO：1的氨基酸429-485内的表位结合并且所述药物是口服施用的。
18.如权利要求17所述的用途，其中所述抗肠Npt2B抗体结合到SEQID NO：1的氨基酸445-480内的表位。
19.如权利要求17所述的用途，其中所述抗肠Npt2B抗体结合到SEQID NO：1的氨基酸455-474内的表位。
20.如权利要求17所述的用途，其中所述受治疗者是人类受治疗者。
21.如权利要求17所述的用途，其中所述受治疗者患有肾病。
22.如权利要求21所述的用途，其中所述肾病选自终末期肾病、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、多囊肾病、慢性肾病、急性肾小管坏死、使肾功能衰退的感染和尿路梗阻。
23.如权利要求17所述的用途，其中所述受治疗者正在接受维生素D化合物。
24.如权利要求17所述的用途，其中所述抗体是IgY抗体。
25.如权利要求17所述的用途，其中所述抗体与磷酸盐结合剂一起施用。
26.抗肠2B型磷酸钠协同转运蛋白(Npt2B)抗体与维生素D化合物一起在制备用于在人类中减少维生素D治疗的副作用的药物中的用途，其中所述抗体与SEQ ID NO：1的Npt2B结合并且所述药物是口服施用的。
27.如权利要求26所述的用途，其中所述受治疗者患有肾病。
28.如权利要求26所述的用途，其中所述人类患有维生素D缺乏症。
29.如权利要求26所述的用途，其中所述抗体与磷酸盐结合剂一起施用。
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