CN101549059B - 一种治疗支气管哮喘的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗支气管哮喘的药物及其制备方法。本发明药物选用纯天然植物药麻黄、白果、桑白皮、黄芩、苦杏仁、半夏、苏子、款冬花等组成；本发明药物组方治疗以涤痰降气为首要，开宣肺气，降气平喘，清肺消痰。同时，配合解痉缓急通络，化瘀通络，驱邪畅络等治络之法，共奏宣肺降气平喘，清热化痰通络之效。实验研究从平喘、止咳、化痰、抗炎等不同角度证实本发明药物对支气管哮喘具有良好的治疗效果。

Description

一种治疗支气管哮喘的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于治疗支气管哮喘的药物及其制备方法，属于中草药制剂技术领域。

背景技术

支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见的慢性肺部疾病，目前全球约有2亿人患有哮喘，我国大约有哮喘患者2000万人。全国五大城市的资料显示3～14岁学生的哮喘发病率为3％～5％。一般认为儿童发病率高于成人，成人男女患病率大致相同，约40％的患者有家族史。一项调查显示，33％的哮喘患者过去一年中因哮喘病需要住院或急诊治疗，58％的患者因哮喘而误工，79％的哮喘患者无法进行正常的运动和休闲活动，63％的患者不得不因哮喘而改变原来的生活方式，68％的哮喘患者因哮喘夜间睡眠受到影响，74％的患者因哮喘无法进行正常的体力劳动。哮喘是现代病，并不会因为人们卫生、生活水平提高而下降，哮喘发病率仍在提高。

近20年来，积极寻求有效防治哮喘的方法，一直是医药界不倦探索的课题，国内外西医治疗本病常用药物有如下几类：吸入性糖皮质激素、β2受体激动剂、抗胆碱能药物吸入剂、茶碱类、白三烯拮抗剂、其他炎性介质拮抗剂和细胞因子拮抗剂、骨髓嗜酸粒细胞祖细胞抑制剂以及变应原特异性免疫治疗和基因治疗。上述药物近年来在临床上取得了一定的效果，主要目的仍然是缓解支气管发作时的一系列炎性反应和症状。仍然没有解决呼吸界人士普遍关注的减少发作频率，临床长期控制病情的问题。同时哮喘患者治疗中的诸多问题，如疗程应多长？何时减量？如何减量？何时停药？需要考虑到何种方法或方案更有助于达到控制哮喘的目标，对哮喘病人更为有效、更为安全，这些既困扰着广大临床医师，也给患者的持续治疗增加了难度。同时，西药的一些毒副作用也严重地影响了患者的持续治疗。据调查，我国近半数的哮喘病人没有得到理想的控制。在基层及农村地区，大多数哮喘病人没有得到有效的防治。因此，普遍提高哮喘的防治水平，任重而道远。

中医药防治支气管哮喘已有上千年的历史，历代医家对该病的理、法、方、药进行了不断的探索，为后世留下了许多有效的方剂。药理研究表明，中药治疗哮喘体现调节免疫抗过敏、平喘、镇咳、祛痰、抗炎等综合作用，可减轻气道的炎症反应，降低气道高反应性；临床研究表明，中药治疗可明显缓解喘息、胸憋、咳、痰等症状，较之西药不良反应少，大部分患者在治疗期内能进入缓解期，或可减少使用激素的剂量，提高患者生活质量。

《摄生众妙方》所收录的定喘汤药物组成如下：炙麻黄、炒白果、桑白皮、黄芩、苦杏仁、半夏、苏子、款冬花、赤芍、地龙、蝉蜕、天花粉、连翘、鱼腥草，该方是治疗哮喘的名方，实验表明[李政木，等.定喘汤治疗支气管哮喘的药理学研究.中药材.1999，22(8)：411.]：定喘汤对组胺和氯化乙酞胆碱喷雾所致的实验性哮喘有保护作用，能拮抗组胺所致的豚鼠离体气管平滑肌收缩，并能促进小鼠呼吸道苯酚红的分泌量，从药理学角度证明了定喘汤有较好的平喘、化痰作用。

本发明药物选用纯天然植物药麻黄、桑白皮、黄芩、苦杏仁、半夏、苏子、款冬花等组成，可明显缓解支气管哮喘的喘息、胸憋、咳嗽、咯痰等症状，作用明显优于定喘汤。

发明内容

本发明的目的在于提供一种疗效显著的治疗支气管哮喘的药物及其制备方法。

本药物发明人吴以岭教授在实践中发现支气管哮喘存在痰热阻络，气道绌急，肺络瘀阻，外邪滞络等多种病理改变，运用络病理论进行辨证论治，针对痰热壅肺，肺失宣降的基本病机，治疗以涤痰降气为首要，开宣肺气，降气平喘，同时清肺消痰，而达涤痰利气之目的。同时，配合解痉缓急通络，化瘀通络，驱邪畅络等治络之法，以纠正上述病理改变。痰瘀相结是本病久病不愈的一个当然结果，喘息、咳嗽久羁不解，损伤肺肾之气，肺络运行不利，瘀闭脉络，表现为络脉瘀塞或绌急，故加用活血化瘀、入络息风之品以恢复肺络功能，共奏宣肺降气平喘，清热化痰通络之效。

本发明药物以麻黄、白果为君药；麻黄，性温，味辛苦，入肺、膀胱经。《本经》谓其：“发表出汗，去邪热之气，止咳逆上气”。《本草正义》：“麻黄轻清上浮，专疏肺郁，宣泄气机，是为治感第一要药，虽曰解表，实为开肺，虽曰散寒，实为泄邪，风寒固得之而外散，即温热无不赖之以宣通。”方中用麻黄宣肺散邪以平喘，使肺壅遏之气得宣。白果，味甘、苦、涩，性平，有小毒，归肺经。有收敛肺气、定喘祛痰之功，与麻黄相合，一散一收，既可加强平喘之功，又可防麻黄耗散肺气。二药配伍共为君药，达开宣肺气，定喘祛痰之功。

臣药：桑白皮、黄芩、苦杏仁、半夏、苏子、款冬花。桑白皮，味甘，性寒，入肺脾经。桑白皮有清肺消痰、降气平喘之功，《别录》谓：“去肺中水气，唾血，热渴，水肿腹满胪胀，利水道，去寸白”。黄芩，味苦，性寒，归肺经，功用清热燥湿，泻火解毒。黄芩擅长清肺热，丹溪曾言：“黄芩降痰，假其降火也”。桑白皮、黄芩配伍清泄肺中痰热，使痰热得消，气道得通，以清肺消痰之功助君药定喘化痰之力。苦杏仁，性微温，味苦，入肺、大肠经，功用止咳平喘。杏仁有苦泄降气、止咳平喘之功，“功专降气，气降则痰消嗽止”(《本草便读》)。半夏，味辛，性温，功用燥湿化痰降逆。《药性论》谓其善“消痰，下肺气，开胃健脾，去胸中痰满”，半夏为化痰降逆之要药，力能下达，能引肺中、胃中湿痰下行。苏子，味辛，性温，归肺、大肠经。性能下气，有降气消痰，止咳平喘之功。《日华子本草》曰其“止嗽，润心肺，消痰气”。款冬花，润肺下气，止咳化痰，《本经逢原》概其功能为“润肺消痰，止嗽定喘”。四药相合，可促进肺之肃降功能，而消痰定喘，止咳化痰。

佐药：赤芍、地龙、蝉蜕、天花粉、连翘、鱼腥草。赤芍，性苦微寒，赤芍可祛瘀行滞，且能清血分郁热。《别录》曰其“通顺血脉，缓中，散恶血，逐贼血，去水气”，本方用之化瘀通络，以纠正肺络瘀闭。地龙，味咸性寒，善入络息风，且可清肺平喘，其性寒而下行，既可解肺之郁热，又能降上逆之肺气，又能息风止痉，通利经络。蝉蜕，味甘性寒，属辛凉宣散之品，取其凉散风热可引邪达表、开宣肺气，且有定惊止痉之功，助地龙共奏解痉缓急通络之功。天花粉，能清泄肺热，降膈上热痰并润肺燥；连翘，外疏肌表、内清郁热，“具升浮宣散之力……能透肌解表，清热逐风，为治风热要药”《医学衷中参西录》，本方取其清热解毒之功，清滞络之热毒；鱼腥草，清热解毒，为治疗痰热壅肺之要药；三药共助桑白皮、黄芩清泄肺热，清肺而不留邪，热清气平则喘急可定。

诸药合用，有宣肺降气平喘，清热化痰通络之效，宣散而不耗气，气降而不伤正，清肺而不留邪，使痰消喘定，则哮喘痰多诸证自除。

本发明所述中药可以被有相同或相似功效果的中药代替，并且这些药材均可以按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》炮制。

本发明药物由如下重量份的原料药制成：

麻黄50-76份      桑白皮166-253份  地龙166-253份     白果66-101份

款冬花66-101份   半夏66-101份     紫苏子66-101份    赤芍166-253份

苦杏仁66-101份   黄芩66-101份     蝉蜕66-101份      鱼腥草166-253份

天花粉166-253份  连翘66-101份。

本发明药物原料药的重量比优选为：

麻黄50份     桑白皮253份    地龙166份    白果66份

款冬花101份  半夏101份      紫苏子66份   赤芍166份

苦杏仁101份  黄芩66份       蝉蜕66份     鱼腥草253份

天花粉253份  连翘66份。

本发明中药组合物中原料药的重量比还优选为：

麻黄76份     桑白皮166份    地龙253份      白果101份

款冬花66份   半夏66份       紫苏子101份    赤芍253份

苦杏仁66份   黄芩101份      蝉蜕101份      鱼腥草166份

天花粉166份  连翘101份。

本发明中药组合物中原料药的重量比还优选为：

麻黄70份     桑白皮241份    地龙245份     白果98份

款冬花94份   半夏95份       紫苏子94份    赤芍230份

苦杏仁92份   黄芩91份       蝉蜕97份      鱼腥草237份

天花粉231份  连翘91份。

本发明中药组合物中原料药的重量比还优选为：

麻黄63份    桑白皮210份    地龙210份    白果84份

款冬花84份    半夏84份    紫苏子84份    赤芍210份

苦杏仁84份    黄芩84份    蝉蜕84份      鱼腥草210份

天花粉210份   连翘84份。

本发明中药组合物中原料药的重量比还优选为：

麻黄61份     桑白皮198份   地龙223份     白果78份

款冬花92份   半夏73份      紫苏子85份    赤芍188份

苦杏仁87份   黄芩88份      蝉蜕79份      鱼腥草221份

天花粉218份  连翘81份。

本发明药物原料中：麻黄为蜜炙麻黄，白果为炒白果，半夏为清半夏，紫苏子为炒紫苏子，苦杏仁为炒苦杏仁。

本发明药物的剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂中的一种。

本发明药物的活性成分由下列步骤制成：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加6-10倍量50-80％乙醇，加热回流提取三次，每次1-3小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加7-10倍量水煎煮二次，每次1-4小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10清膏，与步骤b)提清膏合并，备用；

步骤a)所得细粉和步骤c)所述合并后的清膏共同构成该药物的活性成分。

本发明药物片剂的制备方法由下列步骤制成：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加6-10倍量50-80％乙醇，加热回流提取三次，每次1-3小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加7-10倍量水煎煮二次，每次1-4小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10清膏，与步骤b)所得清膏合并，备用；

d)步骤c)所得合并后的清膏，以步骤a)所得细粉加入适量辅料为底料，喷雾制粒，整粒，备用；

e)将步骤d)所得颗粒，按常规制剂方法制成片剂，即得。

本发明胶囊剂、散剂、丸剂由上述步骤c)所得合并后的清膏和比例量的黄芩及一半的半夏，按常规制剂方法制成。

本发明药物片剂的制备方法优选为：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加8倍量60％乙醇，加热回流提取三次，每次1.5小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加9倍量水煎煮二次，每次2小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10清膏，与步骤b)所得清膏合并，备用；

d)步骤c)所得合并后的清膏，以步骤a)所得细粉加入适量辅料为底料，喷雾制粒，整粒，备用；

e)将步骤d)所得颗粒，按常规制剂方法制成片剂，即得。

本发明药物剂型为片剂、胶囊剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂中的一种，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。

本发明中药组合物的用量，按活性组分原料药总重量计，为15-30克/日，可每日服用一次或分2-4次服用，优选为22克/日，分3次服用。

为证实本发明药物治疗支气管哮喘的活性，用按实施例1方法制得的片剂研成粉末(以下称本发明药物)进行了下列药理试验，其中主要药效学部分与定喘汤进行了疗效比较，定喘汤制备方法：麻黄、款冬花、杏仁、半夏各9克，白果(炒黄)12克，苏子、桑白皮、黄芩各6克，甘草3克，作水煎剂即得[哈小博，肖娴.漫谈定喘汤.开卷有益.求医问药，2001(11)：21.]，实验证实本发明药物疗效明显由于定喘汤。

一、平喘试验

(一)本发明药物对支气管哮喘速发相的影响

1实验材料

1.1动物：纯白色Hartley健康豚鼠，体重200±25g，雌雄各半，购于中国药品生物制品检定所实验动物中心，合格证编号为SCXK(京)2002-0010。

1.2药品与试剂：

(1)受试药：本发明药物，批号：20060801，石家庄以岭药业股份有限公司提供。每克成品的生药量为4.5g。人临床拟用量为22g生药/日。临用前用0.5％CMC-Na配制成所需浓度。

(2)阳性对照药：氨茶碱片，北京市紫竹药业有限公司，适用于支气管哮喘、阻塞性肺气肿，批号：20061103。

(3)定喘汤：石家庄以岭药业股份有限公司提供。人临床用量为69g生药/日。临用前用0.5％CMC-Na配制成所需浓度。

(4)卵蛋白：Sigma公司产品。

(5)氯化乙酰胆碱：Sigma公司产品。

1.3仪器：亚都医用雾化器，型号YC-Y800B，北京亚都科技股份有限公司产。

2方法与结果

1、动物的分组与给药：将豚鼠80只分批放入密闭有机玻璃罩(4L)内，用超声雾化器雾化喷入引喘药液(2％氯化乙酰胆碱与0.1％磷酸组织胺等体积混合液)15s/次，雾化量4ml/min，雾化颗粒直径1-5μm。喷雾停止后，观察6min内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期，若喘息性抽搐的潜伏期大于120s者落选。挑选合格豚鼠66只按体重随机分为6组，即哮喘模型组，氨茶碱组，定喘汤组、本发明药物大、中、小三个剂量组。哮喘模型组豚鼠灌胃给予等体积溶媒，氨茶碱组灌胃给予氨茶碱0.06g/kg(相当于临床人用量的7倍)，定喘汤组灌胃给予8.1g/kg(相当于临床人用量的7倍)，本发明药物大、中、小剂量组分别灌胃给予本发明药物5.1g/kg、2.6g/kg和1.3g/kg(分别相当于临床人用量的14、7、3.5倍)。各组连续给药4天，末次给药1h后开始试验。

2、本发明药物对药物所致豚鼠哮喘的平喘作用：将各组动物放入密闭有机玻璃罩中，按上述方法引喘，喷雾停止后，观察6min内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期，若6min内未出现喘息性抽搐以6min计算。统计采用SPSS10.0软件包进行方差分析和t检验。结果显示，本发明药物大、中剂量组能显著延长氯化乙酰胆碱与磷酸组织胺引起豚鼠哮喘的潜伏期，本发明药物小剂量也有一定的延长豚鼠哮喘潜伏期的作用，但与哮喘模型组比较无显著性差异。见表1-1。

表1-1：本发明药物对药物所致豚鼠哮喘的平喘作用

注：与哮喘模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01。

正常豚鼠吸入组织胺和氯化乙酰胆碱的混合液后可引起哮喘发作，本发明药物大、中剂量(5.1g/kg、2.6g/kg)均能显著延长豚鼠哮喘出现喘息和跌倒的时间(p＜0.05和p＜0.01)。豚鼠用卵蛋白(Ovalbumin，OVA)致敏后产生抗OVA IgE抗体结合在肥大细胞上，当吸入抗原OVA时，OVA与细胞表面IgE结合后导致细胞脱颗粒，释放炎症介质引起哮喘发作。经本发明药物大、中剂量(5.1g/kg、2.6g/kg)给药后能显著延长豚鼠出现哮喘的潜伏期(p＜0.05和p＜0.01)，且本发明药物作用明显强于定喘汤。

(二)本发明药物对支气管哮喘迟发相的影响

1动物的分组与给药：健康纯白Hartley豚鼠60只随机分6组：哮喘模型组；本发明药物大、中、小剂量组(5.1g/kg、2.6g/kg、1.3g/kg)；定喘汤组(8.1g/kg)，阳性对照药氨茶碱组(灌胃氨茶碱0.06g/kg)，哮喘模型组给相同容积的溶媒。于引喘前3日开始灌胃给药，连续给药4天。

2本发明药物对卵蛋白(OVA)所致豚鼠哮喘的平喘作用：各组豚鼠用4％卵蛋白生理盐水溶液0.2ml后腿肌注和4％氢氧化铝乳胶0.2ml腹腔注射致敏，第7天采用同样的方法再次致敏一次。末次给药1小时后用超声雾化器喷雾引喘，引喘药液为2％卵蛋白生理盐水，雾化量不少于4ml/min，喷雾持续6min，观察6min内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期，若6min内未出现喘息性抽搐以6min计算。统计采用SPSS 10.0软件进行方差分析和t检验。结果显示，本发明药物大、中剂量组能显著延长卵蛋白致敏豚鼠引喘潜伏期，本发明药物小剂量也有一定的延长豚鼠哮喘潜伏期的作用，但与哮喘模型组比较无显著性差异。见表1-2。

表1-2：本发明药物对卵蛋白致敏豚鼠引喘潜伏期的影响

注：与哮喘模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01。

采用卵蛋白致敏，并用卵蛋白多次雾化吸入攻击豚鼠，可造成嗜酸性粒细胞(Eosinophil，EOS)浸润为主的气道炎症实验模型，即豚鼠过敏性支气管哮喘模型。研究发现，本发明药物大、中剂量(5.1g/kg、2.6g/kg)显著延长末次OVA引喘的潜伏期、降低全血中EOS数目(p＜0.05和p＜0.01)，大剂量与定喘汤比较p＜0.05，提示本发明药物对豚鼠迟发性支气管哮喘的疗效优于定喘汤。

二、止咳、化痰、抗炎试验

(一)本发明药物止咳作用实验研究

1.实验材料

1.1实验动物

健康KM小鼠，雌雄各半，72只，体重18～20g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2002-0003。动物识别采用5％苦味酸标记，小鼠笼养，5只/笼，饲养在河北医科大学医药研究院药理实验室，光照12小时/天，温度20～23℃，相对湿度40～60％。小鼠饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供，自由饮水。适应性饲养三天。

1.2实验药物

本发明药物，4.5g生药/g干粉，成人临床剂量为22g生药/天，即0.37g生药/kg体重(标准体重60kg)。由石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号：20060801。临用时用0.5％CMC-Na制成混悬液。

定喘汤：石家庄以岭药业股份有限公司提供。人临床用量为69g生药/日。临用前用0.5％CMC-Na配制成所需浓度。

复方磷酸可待因溶液：0.9mg/ml，香港澳美制药厂，批号：060115。

1.3实验试剂

浓硫酸：分析纯，北京化工厂，批号：20020809。

2.实验方法

2.1剂量设置原则

本发明药物最大临床拟用量为22g生药/天，即0.37g生药/kg(标准体重按60kg)，设定小鼠给用药剂量为拟临床用量的20、10、5倍，即为1.85、3.7、7.4g生药/kg/day(低、中、高剂量组)；定喘汤组，按11.5g生药/kg/day给药，为临床拟用剂量的10倍，另设对照组，阳性药组。

2.2给药途径与给药量

灌胃给药，与临床推荐的口服途径相一致。于每天上午9～10点进行，按0.1ml/10g体重给药，连续5天。

2.3给药剂量与分组

根据以上剂量设置情况，将小鼠分为下列5组，见表2.1：

表2.1  本发明药物对小鼠止咳实验的分组和给药剂量

2.4实验步骤

2.4.1二氧化硫的制备：用250ml侧口烧瓶，侧口用橡皮管连接球胆，瓶内盛亚硫酸氢钠，瓶塞上装一滴定管，内放浓硫酸，打开滴定管上的活塞，浓硫酸滴下后，在瓶内产生二氧化硫气体，气体处于球胆中，用止血钳夹紧，应用时，用注射器吸取4～10ml。

2.4.2 KM小鼠，随机分为6组，每组12只，雌雄各半，分别为对照组，定喘汤组，磷酸可待因组，本发明药物高、中、低剂量组。各组均灌胃给药，0.1ml/10g，连续5天，对照组给0.5％CMC-Na。各组小鼠均于末次给药0.5h后，将小鼠放入250ml的广口瓶中，注入二氧化硫，观察小鼠的咳嗽潜伏期(由注入二氧化硫开始至发生咳嗽所需的时间为潜伏期)和2min内小鼠的咳嗽次数。典型咳嗽是小鼠腹肌收缩，同时张大口，有时有咳声。用以下公式计算止咳率：

止咳率％＝用药组咳嗽反应时间/对照组咳嗽反应时间×100％。

3.统计方法

实验数据采用SPSS11.5统计软件进行分析处理，统计结果用均数±标准差

表示，组间差异比较采用单因素方差分析。

4.实验结果

观察本发明药物对二氧化硫诱发小鼠咳嗽的作用，结果见表2.2，结果显示对照组小鼠诱发咳嗽潜伏期为19.58±8.17秒，2min内咳嗽次数为69.25±26.93次，本发明药物低、中、高剂量组咳嗽潜伏期分别为54.58±35.57秒、57.67±30.53秒、73.50±37.81秒，与对照组比较显著延长(P＜0.05或P＜0.01)；2min内咳嗽次数分别为27.42±22.86次、27.08±17.17次、11.92±19.44次。

表2.2本发明药物对二氧化硫诱发小鼠咳嗽的影响

注：与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

与对照组比较显著减少(P＜0.01)。其中高、中剂量较定喘汤组潜伏期和咳嗽次数明显延长(P＜0.05)，提示本发明药物有一定的止咳作用且优于定喘汤。

(二)本发明药物化痰作用实验研究

1.实验材料

1.1实验动物

健康KM小鼠，雌雄各半，72只，体重18～20g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2002-0003。动物识别采用5％苦味酸标记，小鼠笼养，5只/笼，饲养在河北医科大学医药研究院药理实验室，光照12小时/天，温度20～23℃，相对湿度40～60％。小鼠饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供，自由饮水。适应性饲养三天。

1.2实验药物

本发明药物，4.5g生药/g干粉，成人临床剂量为22g生药/天，即0.37g生药/kg体重(标准体重60kg)。由石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号：20060801。临用时用0.5％CMC-Na制成混悬液。

定喘汤：石家庄以岭药业股份有限公司提供。人临床用量为69g生药/日。临用前用0.5％CMC-Na配制成所需浓度。

氯化铵：30mg/片，西南药业股份有限公司提供，批号：66050005。

2.实验方法

2.1剂量设置原则

本发明药物最大临床拟用量为22g生药/天，即0.37g生药/kg(标准体重按60kg)，设定小鼠给用药剂量为拟临床用量的20、10、5倍，即为1.85、3.7、7.4g生药/kg/day(低、中、高剂量组)；定喘汤组，按11.5g生药/kg/day给药，为临床拟用剂量的10倍，另设对照组，阳性药组。

2.2给药途径与给药量

灌胃给药，与临床推荐的口服途径相一致。于每天上午9～10点进行，按0.1ml/10g体重给药，连续5天。

2.3给药剂量与分组

根据以上剂量设置情况，将小鼠分为下列6组，见表2.3：

表2.3本发明药物对小鼠止咳实验的分组和给药剂量

2.4实验步骤

KM小鼠，随机分为6组，每组12只，雌雄各半，分别为对照组，氯化铵组，定喘汤组，本发明药物高、中、低剂量组。各组均灌胃给药，0.1ml/10g，连续5天，对照组给0.5％CMC-Na。各组小鼠(禁食16h)均于末次给药0.5h后，ip酚红0.1ml(5mg)/10g体重，注射酚红后0.5h，处死动物，剥离器官周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有2ml生理盐水的试管中，再加入0.1ml(或1～2滴)氢氧化钠，混匀，用酶标仪540nm测OD值，用酚红做标准曲线，根据曲线计算酚红含量(μg/ml)，与对照组比较。

2.5统计方法

实验数据采用SPSS11.5统计软件进行分析处理，统计结果用均数±标准差

表示，组间差异比较使用单因素方差分析。

3实验结果

采用气管段酚红法观察本发明药物的化痰作用，结果见表2.4，结果显示对照组小鼠气管段酚红浓度为0.43±0.12ug/ml，本发明药物低、中、高剂量组小鼠气管段酚红浓度分别为为0.82±0.34ug/ml、1.23±0.31ug/ml、1.48±0.61ug/ml，

表2.4本发明药物小鼠化痰实验结果

注：与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

与模型组和定喘汤组比较显著增高(P＜0.01或P＜0.05)。提示本发明药物具有一定的化痰作用且疗效较定喘汤更强。

(三)本发明药物抗一般性炎症作用

1实验材料

1.1动物：SD大鼠，雌雄各半，体重为160-180g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证编号为SCXK(京)2002-0003号。

1.2药物与试剂：

(1)受试药物：本发明药物，4.5g生药/g干粉，成人临床剂量为22g生药/天，即0.37g生药/kg体重(标准体重60kg)。由石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号：20060801。临用时用0.5％CMC-Na制成混悬液。

(2)阳性对照药：地塞米松片，天津天药药业股份有限公司生产。批号20060711。批准文号为国药准字H12020686。0.5％CMC配制使用。

(3)角叉菜胶：Sigma公司产品。本品在应用前一天，研为细粉，以注射用生理盐水配制成1％均匀混悬液，置4℃冰箱备用。

1.3仪器：大鼠足容积测量仪(排水法)。

2方法与结果

2.1分组与给药：实验用大鼠60只，随机分为模型对照组(灌胃给等体积0.5％CMC)、定喘汤组(灌胃8.7g/kg，相当于临床人用量的7.5倍)、阳性药(灌胃地塞米松0.1g/kg，相当于人日用量的7.5倍)、本发明药物大、中、小剂量组(分别灌胃本发明药物5.6g/kg、2.8g/kg和1.4g/kg，分别相当于临床人日用量的15、7.5、3.75倍)，每组10只。连续给药3d，末次给药60分钟后造模。

2.2足跖肿胀方法：参考文献[陈奇主编。中药药理研究方法学。人民卫生出版社，1993，364p]，各组大鼠给药前先测定其左后足跖容积并记录，末次给给药后60分钟，分别在各组大鼠左后足跖皮下注射1％角叉菜胶混悬液0.1ml/只，随后每隔1h后测一次左后足跖容积并记录，连续测量6次，记录结果，并按下式计算肿胀度和抑制率。统计学处理采用SPSS 10.0软件进行方差分析及组间t检验。

2.3结果 本发明药物抗一般性炎症作用结果见2-5。本发明药物5.6g/kg、2.8g/kg剂量能显著抑制大鼠注射角叉菜胶所致的足跖肿胀，造模1h后与对照组比较即有显著性差异，并一直维持到6h(p＜0.05，p＜0.01)。结果表明本发明药物大、中剂量组能显著抑制大鼠注射角叉菜胶所致的足跖肿胀。本发明药物5.6g/kg、2.8g/kg剂量还能显著抑制大鼠棉球肉芽肿的形成(p＜0.01，p＜0.05)，以上作用均优于定喘汤组。

表2-5本发明药物对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01。(括号内为肿胀抑制率)

3结论 本发明药物对一般性炎症有显著的抑制作用且疗效优于定喘汤。

支气管哮喘是一种气道内多种细胞和细胞成分起作用的慢性炎性病症，由此引起的气道高反应导致喘息、呼吸困难、胸闷和咳嗽的反复发作。其病因与特应性变态反应有关，同时由于部分患者病因不明，治疗中针对症状和对因治疗均有采用，而中药复方兼具多环节的综合作用，对该病的治疗具有独特优势。因此，本发明药物的药效学研究根据其宣肺平喘，清热化痰的功效，从平喘、化痰、止咳、抗炎症状改善入手、同时观察其对变态反应、肥大细胞脱颗粒、免疫调节等相关机制的作用，综合评价和分析其治疗作用和机制。

本发明药物的药效学研究中针对哮喘采用了三种病理学模型，包括哮喘发病速发相和迟发相两个阶段，观察药物对过敏性支气管作用。实验结果显示，本发明药物大、中剂量均能显著延长组织胺和氯化乙酰胆碱混合液引起豚鼠哮喘出现喘息和跌倒的时间，同时也可明显延长卵蛋白诱发豚鼠出现哮喘的潜伏期，对卵蛋白多次攻击引起的迟发相哮喘，本发明药物大、中剂量显著延长末次OVA引喘的潜伏期、降低全血和支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的比例。此外，本发明药物大、中剂量均能抑制支气管肺泡灌洗液中白三烯B4的产生。支气管肺泡的组织病理学也显示本发明药物三个剂量均能降低支气管壁中嗜酸性粒细胞的浸润数目及改善支气管肺组织炎症病理损伤。以上结果提示，本发明药物对支气管哮喘速发相和迟发相均有明显治疗作用，而且对相关的炎性细胞和介质的产生也有一定抑制作用。

针对支气管哮喘临床相关症状，采用止咳、化痰、抗炎等动物实验观察本发明药物的症状改善作用，结果显示本发明药物高、中、低剂量组均可显著延长二氧化硫致咳小鼠诱发咳嗽潜伏期、减少小鼠的咳嗽次数；气管段酚红法显示本发明药物高、中、低剂量组能显著增加小鼠气管段酚红分泌；抗炎实验表明本发明药物高、中剂量能显著抑制大鼠注射角叉菜胶所致的足跖肿胀和大鼠棉球肉芽肿的形成，造模1h后与对照组比较即有显著性差异，并一直维持到6h。以上结果提示本发明药物具有明显的止咳、化痰和抗炎作用，对哮喘的症状改善有良好的辅助作用。

急性毒性实验结果表明，本发明药物给予小鼠灌胃254.4g生药/kg一日内连续3次最大浓度，最大体积给药，连续观察十四天，小鼠未见明显毒性反应。该剂量相当于人拟临床剂量的687.57倍。

大鼠长期毒性实验结果表明，本发明药物22g、11g、5.5g生药/kg剂量下大鼠长期(26周)给药无明显毒性反应。

综上所述，本发明药物从平喘、止咳、化痰、抗炎等不同角度证实了本发明药物对支气管哮喘具有良好的治疗效果，支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见的慢性肺部疾病，本发明药物安全范围大，从多个环节发挥调节作用，标本兼治，既避免了西药单一靶向的副作用，又可针对慢性病进行长期治疗。

具体实施方式

下述实施例用于举例说明本发明药物的制备，但其不能对本发明的范围构成任何限制。

实施例1

本发明药物片剂的制备(暂命名为：连花定喘片)：

处方：

麻黄(蜜炙)63克   桑白皮210克     地龙210克         白果84克

款冬花84克       半夏(清)84克    紫苏子(炒)84克    赤芍210克

苦杏仁(炒)84克   黄芩84克        蝉蜕84克          鱼腥草210克

天花粉210克      连翘84克

制备方法：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加8倍量60％乙醇，加热回流提取三次，每次1.5小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.08的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加9倍量水煎煮二次，每次2小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.08清膏，与步骤b)所得清膏合并，备用；

d)步骤c)所得合并后的清膏，以步骤a)所得细粉加入适量辅料为底料，喷雾制粒，整粒，备用；

e)将步骤d)所得颗粒，按常规制剂方法制成片剂，即得。

实施例2

本发明药物胶囊剂的制备：

处方：

麻黄61克      桑白皮198克    地龙223克     白果78克

款冬花92克    半夏73克       紫苏子85克    赤芍188克

苦杏仁87克    黄芩88克       蝉蜕79克      鱼腥草221克

天花粉218克   连翘81克

制备方法：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加6倍量50％乙醇，加热回流提取三次，每次1小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加7倍量水煎煮二次，每次1小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05清膏，与步骤b)提清膏合并，备用；

d)步骤c)所得合并后的清膏，以步骤a)所得细粉加入适量辅料为底料，喷雾制粒，整粒，备用；

e)按常规方法制成胶囊剂。

实施例3

本发明药物散剂的制备：

处方：

麻黄50克       桑白皮253克    地龙166克     白果66克

款冬花101克    半夏101克      紫苏子66克    赤芍166克

苦杏仁101克    黄芩66克       蝉蜕66克      鱼腥草253克

天花粉253克    连翘66克

制备方法：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加10倍量80％乙醇，加热回流提取三次，每次3小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.10的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加10倍量水煎煮二次，每次4小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.10清膏，与步骤b)提清膏合并，备用；

d)将步骤a)所得细粉与步骤c)所得清膏按常规方法制成散剂。

实施例4

本发明药物口服液的制备：

处方：

麻黄76克      桑白皮166克    地龙253克      白果101克

款冬花66克    半夏66克       紫苏子101克    赤芍253克

苦杏仁66克    黄芩101克      蝉蜕101克      鱼腥草166克

天花粉166克   连翘101克

制备方法：

按常规方法制成口服液。

实施例5

本发明药物软胶囊的制备：

处方：

麻黄70克      桑白皮241克    地龙245克     白果98克

款冬花94克    半夏95克       紫苏子94克    赤芍230克

苦杏仁92克    黄芩91克       蝉蜕97克      鱼腥草237克

天花粉231克   连翘91克

制备方法：

按常规方法制成软胶囊。

实施例6

本发明药物丸剂的制备：

处方：

麻黄76克       桑白皮253克    地龙253克      白果101克

款冬花101克    半夏101克      紫苏子101克    赤芍253克

苦杏仁101克    黄芩101克      蝉蜕101克      鱼腥草253克

天花粉253克    连翘101克

制备方法：

按常规方法制成丸剂。

实施例7

本发明药物酊剂的制备：

处方：

麻黄50克      桑白皮166克  地龙166克     白果66克

款冬花66克    半夏66克     紫苏子66克    赤芍166克

苦杏仁66克    黄芩66克     蝉蜕66克      鱼腥草166克

天花粉166克    连翘66克

按常规方法制成酊剂。

实施例8

本发明药物糖浆剂的制备：

处方：

麻黄50克      桑白皮166克   地龙166克     白果66克

款冬花66克    半夏66克      紫苏子66克    赤芍166克

苦杏仁66克    黄芩66克      蝉蜕66克      鱼腥草166克

天花粉166克   连翘66克

制备方法：

按常规方法制成糖浆剂。

实施例9

本发明药物栓剂的制备：

处方：

麻黄50克       桑白皮253克    地龙166克     白果66克

款冬花101克    半夏101克      紫苏子66克    赤芍166克

苦杏仁101克    黄芩66克       蝉蜕66克      鱼腥草253克

天花粉253克    连翘66克

制备方法：

按常规方法制成栓剂。

实施例10

本发明药物凝胶剂的制备：

处方：

麻黄76克      桑白皮166克  地龙253克      白果101克

款冬花66克    半夏66克     紫苏子101克    赤芍253克

苦杏仁66克    黄芩101克    蝉蜕101克      鱼腥草166克

天花粉166克    连翘101克

制备方法：

按常规方法制成凝胶剂。

实施例11

本发明药物喷雾剂的制备：

处方：

麻黄70克      桑白皮241克   地龙245克   白果98克

款冬花94克    半夏95克      紫苏子94克  赤芍230克

苦杏仁92克    黄芩91克      蝉蜕97克    鱼腥草237克

天花粉231克   连翘91克

制备方法：

按常规方法制成喷雾剂。

实施例12

本发明药物注射剂的制备：

处方：

麻黄63克        桑白皮210克   地龙210克     白果84克

款冬花84克      半夏84克      紫苏子84克    赤芍210克

苦杏仁84克      黄芩84克      蝉蜕84克      鱼腥草210克

天花粉210克    连翘84克

制备方法：

按常规方法制成注射剂。

Claims (12)

1.一种治疗支气管哮喘的药物，其特征在于是由如下重量份比例的原料药制成的：

2.根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：

3.根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：

4.根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：

5.根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：

6.根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：

7.根据权利要求1-6任一所述的药物，其特征在于：麻黄为蜜炙麻黄，白果为炒白果，半夏为清半夏，紫苏子为炒紫苏子，苦杏仁为炒苦杏仁。

8.根据权利要求1-6任一所述的药物，其特征在于该药物剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。

9.根据权利要求1-6任一所述的药物，其特征在于该药物的活性成分由下列步骤制成：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加6-10倍量50-80％乙醇，加热回流提取三次，每次1-3小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加7-10倍量水煎煮二次，每次1-4小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10清膏，与步骤b)提清膏合并，备用；

步骤a)所得细粉和步骤c)所述合并后的清膏共同构成该药物的活性成分。

10.权利要求8所述药物片剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加6-10倍量50-80％乙醇，加热回流提取三次，每次1-3小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加7-10倍量水煎煮二次，每次1-4小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10清膏，与步骤b)所得清膏合并，备用；

d)步骤c)所得合并后的清膏，以步骤a)所得细粉加入适量辅料为底料，喷雾制粒，整粒，备用；

e)将步骤d)所得颗粒，按常规制剂方法制成片剂，即得。

11.根据权利要求10所述药物片剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a)按比例称取黄芩及一半的半夏粉碎成细粉，备用；

b)按比例称取麻黄、白果、桑白皮、款冬花、紫苏子、苦杏仁、鱼腥草及余量半夏，加8倍量60％乙醇，加热回流提取三次，每次1.5小时，提取液减压回收乙醇，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10的清膏，备用；

c)按比例称取地龙、赤芍、蝉蜕、天花粉、连翘，加9倍量水煎煮二次，每次2小时，煎液过滤，合并，浓缩成在60℃测定相对密度为1.05-1.10清膏，与步骤b)所得清膏合并，备用；

d)步骤c)所得合并后的清膏，以步骤a)所得细粉加入适量辅料为底料，喷雾制粒，整粒，备用；

e)将步骤d)所得颗粒，按常规制剂方法制成片剂，即得。

12.权利要求8所述药物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

将权利要求10中步骤c)所得合并后的清膏和比例量的黄芩及一半的半夏，按常规制剂方法制成胶囊剂、散剂、丸剂。