CN101538320A - 能特异上调ho-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种能特异上调HO－1基因表达的人工锌指蛋白转录因子，所述人工锌指蛋白转录因子的DNA结合结构域为能与HO－1基因增强子序列SEQ ID NO：3特异结合的人工锌指蛋白，具有SEQ ID NO：5所示的DNA序列，且能编码具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸残基序列的蛋白质。本发明还涉及含有所述能特异上调HO－1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体。以及所述表达载体在制备能特异上调HO－1基因表达的药物中的应用。

Description

能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子及其应用

技术领域

本发明涉及一种能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子及其在药学上的用途。

技术背景

血红素加氧酶(Heme Oxygenase，HO)是血红素分解代谢的关键酶，反应底物是血红素，产物分别是CO、游离Fe和胆绿素。迄今已发现3种哺乳动物源的HO，其中HO-1属于应激型。大量研究发现，HO-1及其代谢产物具有抑制缺血再灌注诱导的损伤，抑制心肌梗死后的纤维化重塑、恢复心室功能，抑制炎症反应和粘附分子表达及血管闭塞等功能，说明该基因对心血管疾病的防治具有重要作用。因此以HO-1为合成药物的靶基因，在抑制缺血再灌注损伤、移植排斥反应以及血管闭塞等方面具有广泛的应用前景。

以HO-1为合成药物的靶基因，最好的方法是通过一种药物能进入细胞内控制它的表达。利用酵母可进行单个基因的一系列研究，但由于哺乳动物基因组的抵抗，除了干细胞可进行同源和非同源的转基因外，有目的地改变哺乳动物细胞基因表达是困难的。有几个方法可有效改变在体基因表达，但都面临有效呈递到靶细胞组织和器官的问题。当编码特定基因cDNA可用时，运用转基因方法可有效提高细胞内的mRNA水平；另外同源同组的方法可整个改变基因表达，使用反义试剂、核糖核酸酶或RNAi干扰技术能降低mRNA水平，这些策略在特定的条件下是相当有效的，但在mRNA水平进行操作稳定性不强。瞬时转染尽管在许多生物学领域中被广泛应用，包括基因管理和DNA修复，但转染的DNA将导致细胞反应。另一个完全不同概念的方法选择性改变基因表达包括直接管理靶基因位点的转录，几个策略可达到这个目的。例如通过突变已存在的起主要作用的等位基因转录因子，可通过设计合成DNA连接分子，聚酰胺或肽核酸预先决定DNA连接的特异性，通过作用这些管理序列的分子，竞争性抑制转录因子从而达到选择性控制基因。但转录因子一般同时控制多个基因表达，不能特异作用于一个基因，而人工锌指蛋白转录因子为特异上调HO-1基因的表达提供了新的方法。

研究天然转录因子如果调控基因表达的机制，为设计能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子提供了可能。天然转录因子至少包括两个不同的结构域：DNA结合结构域(DNA-binding domain)和效应结构域(functiondomain)，二者分别起与特定DNA序列结合和调控转录的作用，其中DNA结合结构域是实现转录因子靶向性的关键。锌指蛋白(C₂H₂型)是天然转录因子最常见的DNA结合结构域，其与DNA双螺旋作用的特点是：每个锌指单元的α螺旋伸入DNA双螺旋的大沟中，通过其位置上的-1、+3和+6位氨基酸来一对一地识别大沟中的3个相邻碱基，其中-1位对应碱基的3’端、+3位对应碱基中间、+6位对应于碱基的5’端，改变锌指单元α螺旋上的这些氨基酸残基就会改变锌指蛋白的DNA结合位点。相对于其它DNA结合结构域，锌指蛋白(C₂H₂型)用于人工转录因子DNA结合结构域的构建有很多优点：不改变锌指单元的基本骨架，仅用其它氨基酸来替换其α螺旋上序列特异性相关位点的氨基酸残基，就可以得到具有新的序列特异性锌指单元；许多DNA结合结构域由于自身是对称或者二聚化的结构而只能识别对称序列，而锌指蛋白则可以识别非回文序列；多个锌指单元可以串联成簇，从而识别更长的DNA序列等。锌指蛋白(C₂H₂型)的这些特点，使其对于其识别序列的长度和结构没有太多的限制，理论上讲对于任意DNA序列都能找到能够与之特异结合的锌指蛋白，因此它迅速成为设计人工转录因子首选的DNA结合结构域。

实验设计能与HO-1基因调控序列特异结合的人工锌指蛋白，再与强效的效应结构域及核定位信号(NLS)融合，就可得到能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子。通过构建人工锌指蛋白转录因子来特异上调HO-1基因表达的方法有望实现产业化，但目前国内外尚未有任何以HO-1基因为药物靶构建人工锌指蛋白转录因子的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于改进直接应用HO-1基因的不足，提供一种以HO-1为药物靶构建的、能够上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子；本发明的另一个目的是提供含有所述转录因子的载体在药学上的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是这样的，即一种能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子，其特征是：所述人工锌指蛋白转录因子的DNA结合结构域为能与HO-1基因增强子序列SEQ ID NO：3特异结合的人工锌指蛋白，具有SEQ ID NO：5所示的DNA序列，且能编码具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸残基序列的蛋白质。

上述能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子具有SEQ IDNO：13所示的DNA序列。

本发明包括含有上述能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体。所述载体中包含DNA结合结构域具有SEQ ID NO：5所示的DNA序列的人工锌指蛋白转录因子，或包含具有SEQ ID NO：13所示的DNA序列人工锌指蛋白转录因子。

本发明的一个非限定性的实施例是，所述能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体具有SEQ ID NO：11所示的DNA序列。该能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体，它含有由核定位信号、DNA结合结构域及效应结构域构成的、连接顺序为核定位信号-DNA结合结构域-效应结构域的人工锌指蛋白转录因子的DNA序列，其中：效应结构域为核转录因子NF-κB的p65亚基功能区，所述p65亚基功能区的序列为SEQID NO：12。

本发明还涉及上述人工锌指蛋白转录因子的表达载体在制备能特异上调HO-1基因表达的药物中的用途。所述药物包括：治疗抑制缺血再灌注诱导的损伤、抑制心肌梗死后的纤维化重塑、恢复心室功能，抑制炎症反应和粘附分子表达及血管闭塞的药物。

本发明解决的主要问题是人工设计合成以HO-1基因为药物靶的人工锌指蛋白转录因子，与现有技术相比具有以下优点：

1、直接应用HO-1基因面临不能稳定整合到基因组，不能有效长期转染等问题，而HO-1基因的功能与其表达水平直接相关，因此限制了其使用效果。本发明获得的人工锌指蛋白转录因子具有核定位信号，能有效进入细胞核内，上调HO-1基因的表达。

2、使用反义试剂、核糖核酸酶、或RNAi技术可以降低mRNA水平，但在mRNA水平进行操作稳定性不强。另一个方法选择性改变基因包括直接管理靶基因位点的转录，例如通过突变已存在的起主要作用的等位基因转录因子，可通过设计合成DNA连接分子，聚酰胺或肽核酸预先决定DNA连接的特异性，通过作用这些管理序列的分子，竞争性抑制转录因子从而达到选择性控制基因。但转录因子一般同时控制多个基因表达，不能特异作用于一个基因。而本发明设计的人工锌指蛋白转录因子能特异性的作用于靶基因，而不影响其他基因的功能。

3、在抑制器官移植排斥反应的治疗方面，现在使用的环孢素A等尽管具有很多的作用，但其抑制骨髓等副作用也非常大。本发明的能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子，通过生物信息学方法设计及实验佐证，能有效上调HO-1基因的表达。因为HO-1基因为生理性保护基因，该人工锌指蛋白转录因子能有效避免目前临床正在使用的相关药物的副作用。

4、利用上述设计合成人工锌指蛋白转录因子的方法，也可用以控制其他基因的表达。

5、本发明的能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子能有效上调人体内HO-1基因的表达，因此在抑制缺血再灌注损伤、移植排斥反应以及血管闭塞等方面具有广泛的应用前景。

附图说明

附图1a为一系列浓度梯度的4种待测质粒分别与质粒hHO4.9luc、质粒pRL-TK共转染ECV304细胞的双荧光素酶报告基因检测结果对照图。

附图1b为一系列浓度梯度的4种待测质粒分别与质粒pGL3-Control、质粒pRL-TK共转染ECV304细胞的双荧光素酶报告基因检测结果对照图。

质粒hHO4.9luc是将人Hmox1的调控序列克隆到萤火虫荧光素酶报告质粒pGL3-basic上得到的，它与海肾荧光素酶报告质粒pRL-TK作为双荧光素酶报告基因对一系列浓度梯度待测质粒的检测结果显示，报告基因的表达随着质粒pcDNA-ZFP-p65-flag转染用量的增加而升高，具有明显的量效关系，当质粒pcDNA-ZFP-p65-flag的转染用量为150ng时，报告基因的表达是基础表达的4.14倍。而pcDNA-nls-eGFP-p65-flag、PUC57-ZFP、pcDNA-zfp-p65-flag(针对另外一种基因A20设计的人工转录因子)等待测质粒对报告基因表达的上调效果则不明显，且不具有明显的量效关系(图1a)。当萤火虫荧光素酶报告质粒为pGL3-Control时，4种待测质粒对报告基因的上调效果均不明显(图1b)。

附图2为一系列浓度梯度的两种待测质粒上调HO-1基因表达的荧光定量PCR检测结果对照图。以对照组的荧光值作为1，检测结果显示质粒pcDNA-ZFP-p65-flag 4个浓度梯度(50ng、100ng、150ng、200ng)的荧光值分别为1.09、1.30、1.69、1.75；质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag 4个浓度梯度(50ng、100ng、150ng、200ng)的荧光值分别为2.36、4.37、6.92、7.95。说明不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子由于不能有效进入细胞核内，仅能轻微上调HO-1的表达；而带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子则可有效进入细胞核从而上调HO-1基因的表达。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的内容作进一步说明。

实施例1、查阅相关文献，研究天然状态下HO-1基因表达的调控机制，确定该基因转录起始位点上游-4111～-3850处存在的长度为262bp的增强子，其序列为SEQ ID NO：1。

实施例2、将实施例1中所述的增强子上的一段长54bp的片段提交在线人工锌指蛋白设计软件Zinc finger tools 3.0，利用其预测DNA序列上潜在锌指蛋白靶序列的功能，筛选得到最佳的靶序列。提交片段序列为SEQ IDNO：2，筛选的最佳靶序列是SEQ ID NO：3。

实施例3、将实施例2中的最佳靶序列提交Zinc finger tools 3.0，利用其获取与已知DNA序列对应的锌指蛋白氨基酸序列的功能，得到对应该靶序列的锌指蛋白氨基酸残基序列为SEQ ID NO：4。

实施例4、通过Swiss Model在线服务器的Sequence Feature Scan预测实施例3中锌指蛋白的二级结构，进而进行三级结构同源建模，结果显示设计的锌指蛋白结构稳定，符合预期。

实施例5、通过Primer Premiere 5.0将实施例3中的锌指蛋白氨基酸序列逆向翻译为其核酸编码序列，参考人基因组密码子的使用频度对该序列进行优化，优化后的序列为SEQ ID NO：5。

实施例6、将实施例5中优化后的序列提交上海生工合成，合成后的锌指蛋白编码序列被克隆在质粒PUC57上(两端加上了合适的双酶切位点)，记为质粒PUC57-ZFP，其序列为SEQ ID NO：6。

实施例7、用含有核定位信号及效应结构域的质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-flag及实施例6中的质粒PUC57-ZFP构建得到质粒pcDNA-ZFP-p65-flag，该质粒上含有不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子的编码序列。p65亚基功能区的DNA编码序列为SEQ ID NO：7，质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-flag和质粒pcDNA-ZFP-p65-flag的序列分别为SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9。

实施例8、通过酶切及测序鉴定，确定实施例7中质粒pcDNA-ZFP-p65-flag的实际序列与理论相符。

实施例9、通过RT-PCR及免疫荧光技术，确定实施例7中质粒pcDNA-ZFP-p65-flag能够在ECV304细胞内正常转录及翻译。

实施例10、通过双荧光素酶报告基因检测技术检测实施例7中不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子的活性，同时用仅含效应结构域的质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-flag、实施例6中仅含DNA结合结构域的质粒PUC57-ZFP及质粒pcDNA-zfp-p65-flag(含有针对另外一种基因A20设计的人工转录因子的编码序列)作参照。萤火虫荧光素酶报告基因分别是hHO4.9luc(将人HO-1基因的调控序列克隆到质粒pGL3-basic上得到)和pGL3-Control，海肾荧光素酶报告基因是pRL-TK。质粒pcDNA-zfp-p65-flag和hHO4.9luc的序列分别为SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11。

检测结果显示，当萤火虫荧光素酶报告基因是hHO4.9luc时，其表达随着质粒pcDNA-ZFP-p65-flag转染用量的增加而升高，具有明显的量效关系，当质粒pcDNA-ZFP-p65-flag的转染用量为150ng时，报告基因的表达是基础表达的4.14倍。而pcDNA-nls-eGFP-p65-flag、PUC57-ZFP及pcDNA-zfp-p65-flag等对照质粒对报告基因表达的上调效果则不明显，且不具有明显的量效关系(参见附图1a)。当萤火虫荧光素酶报告质粒为pGL3-Control时，pcDNA-ZFP-p65-flag、pcDNA-nls-eGFP-p65-flag、PUC57-ZFP及pcDNA-zfp-p65-flag等4种质粒对报告基因的上调效果均不明显(参见附图1b)。说明不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子在胞浆中能够特异识别报告基因的增强子且有效上调其表达，而仅含有DNA结合结构域或效应结构域的质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-flag和质粒PUC57-ZFP则不具有这样的功能。

实施例11、用含有核定位信号及效应结构域的质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-flag及实施例6中的质粒PUC57-ZFP构建得到质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag，该质粒上含有带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子的编码序列。人工锌指蛋白转录因子的DNA序列为SEQ ID NO：12，质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag的序列为SEQ ID NO：13。

实施例12、通过酶切及测序鉴定，确定实施例11中质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag的实际序列与理论相符。

实施例13、通过RT-PCR及免疫荧光技术，确定实施例11中质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag能够在ECV304细胞内正常转录及翻译。

实施例14、通过RT-PCR技术检测实施例11中带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子的活性，同时用仅含效应结构域的质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-flag、实施例6中仅含DNA结合结构域的质粒PUC57-ZFP、实施例7中含有不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子的质粒pcDNA-ZFP-p65-flag及脂多糖刺激作参照。结果显示在质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag转染组，HO-1基因RNA的表达有明显提高，升高程度与脂多糖刺激组相近，而质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-Flag、PUC57-ZFP及pcDNA-ZFP-p65-Flag转染组中HO-1基因RNA的表达无明显变化。说明实施例11中带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子能够有效进入细胞核内并特异上调HO-1基因的表达，而仅含有DNA结合结构域或效应结构域的质粒pcDNA-nls-eGFP-p65-flag、质粒PUC57-ZFP及不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子则不具有这样的功能。

实施例15、通过荧光定量PCR技术分别检测实施例7中不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子及实施例11中带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子上调HO-1基因表达的效率。以对照组的荧光值作为1，检测结果显示质粒pcDNA-ZFP-p65-flag 4个浓度梯度(50ng、100ng、150ng、200ng)的荧光值分别为1.09、1.30、1.69、1.75；质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag 4个浓度梯度(50ng、100ng、150ng、200ng)的荧光值分别为2.36、4.37、6.92、7.95(参见附图2)。说明不带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子由于不能有效进入细胞核内，仅能轻微上调HO-1的表达；而带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子则可有效进入细胞核从而上调HO-1基因的表达。

实施例16、通过流式细胞技术检测带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子对细胞凋亡的抑制作用。检测结果显示在肿瘤坏死因子、内毒素、高糖、氧化型低密度脂蛋白等因素的刺激下，质粒pcDNA-nls-ZFP-p65-Flag转染组的细胞早期凋亡率仅为1.52％，对照组(未转染组)的细胞早期凋亡率为14.81％，二者具有显著性差异。说明带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子能特异上调细胞HO-1基因的表达，有效抑制各种因素诱导的细胞凋亡作用。

实施例17、用实施例11中带核定位信号的人工锌指蛋白转录因子和转染试剂Lipofection2000按照一定比例混合后作用于移植血管，可见HO-1的表达明显升高。阳性组移植血管2个月后仍保持通畅，未见血栓形成和血管内膜增生，而对照组移植血管则全部闭塞，部分移植血管血栓形成，部分可见内膜增生明显，经检测证实为增殖的平滑肌细胞。

与本发明有关的序列

<110>中国人民解放军第三军医大学

<120>能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子及用途

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gcgccacata gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc ggggcgaaaa    2880

ctctcaagga tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac    2940

tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa    3000

aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt    3060

tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa    3120

tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct    3180

gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg    3240

ccctttcgtc                                                          3250

<210>7

<211>813

<212>DNA

<213>人类(Home sapiens)

<400>7

atggaattcc agtacctgcc agatacagac gatcgtcacc ggattgagga gaaacgtaaa     60

aggacatatg agaccttcaa gagcatcatg aagaagagtc ctttcagcgg acccaccgac    120

ccccggcctc cacctcgacg cattgctgtg ccttcccgca gctcagcttc tgtccccaag    180

ccagcacccc agccctatcc ctttacgtca tccctgagca ccatcaacta tgatgagttt    240

cccaccatgg tgtttccttc tgggcagatc agccaggcct cggccttggc cccggcccct    300

ccccaagtcc tgccccaggc tccagcccct gcccctgctc cagccatggt atcagctctg    360

gcccaggccc cagcccctgt cccagtccta gccccaggcc ctcctcaggc tgtggcccca    420

cctgccccca agcccaccca ggctggggaa ggaacgctgt cagaggccct gctgcagctg    480

cagtttgatg atgaagacct gggggccttg cttggcaaca gcacagaccc agctgtgttc    540

acagacctgg catccgtcga caactccgag tttcagcagc tgctgaacca gggcatacct    600

gtggcccccc acacaactga gcccatgctg atggagtacc ctgaggctat aactcgccta    660

gtgacagggg cccagaggcc ccccgaccca gctcctgctc cactgggggc cccggggctc    720

cccaatggcc tcctttcagg agatgaagac ttctcctcca ttgcggacat ggacttctca    780

gccctgctga gtcagatcag ctccggcagc gac                                 813

<210>8

<211>7009

<212>DNA

<213>重组质粒序列

<400>8

gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg     60

ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg    120

cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc    180

ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt    240

gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata    300

tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc    360

cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc    420

attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt    480

atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt    540

atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca    600

tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg    660

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aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg    780

gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca    840

ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc    900

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ccccaagaag aagaggaagg tgggaatcca tggggtaccg gtgagcaagg gcgaggagct   1020

gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc gacgtaaacg gccacaagtt    1080

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catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca actacaacag    1440

ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga acttcaagat    1500

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catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagcaccc agtccgccct    1620

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ggctggggaa ggaacgctgt cagaggccct gctgcagctg cagtttgatg atgaagacct    2220

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cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct    3180

tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga    3240

ttttggggat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga    3300

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<210>9

<211>6736

<212>DNA

<213>重组质粒序列

<400>9

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cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc     420

attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt     480

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tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg     660

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<210>10

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<212>DNA

<213>重组质粒序列

<400>10

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atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca     600

tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg     660

actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc     720

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gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt    6600

caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag    6660

ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta    6720

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<210>11

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<212>DNA

<213>重组质粒序列

<400>11

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agcacaggga gagacgctct ctggaatttc cttatctgac caagaacact tctttacaaa    2760

agaaatgcaa ttgtgttaag tctttttttc ctttgagaca gagtctcgct cttgtcaccc    2820

aggctggagt gcagtggcac tatcttggct cactgcaacc tcctcctcct cccgggttca    2880

agcgattctc ctgcctcagc ctcccaaagt gctgggatta caggtgtgag ccaccgcgcc    2940

cggccagtgt taagcccttt ttctagtaat ctcatcaaat atccaggaaa gatcaaccac    3000

tggagagaga aagagactgg gagtcatcac cagacccaga cagatttacc tgttcttctg    3060

aggacagtgc caagagatta cctgggggac tttatctgcc taggacaacc tttgtccctg    3120

tgcggctcca cctccacctt cccttaaagt cggcctttca cctccagggc cattccttct    3180

tgctaatgat ttactgtctt tcaaaagaat tgtctgcatt ccctatctcc cttctcccct    3240

ataaaaaagg ctgggtagcc tctgtactcc actgggttac agggtcacca ttcttccgtg    3300

attaccccat tacaatacat ttttgtatgt cttttctcct cttaacctga cttttgtcgg    3360

ttggttttcg gggaaccttc agaggaagaa ggggaatttt tttcaaggcc ccttagctca    3420

cccttgggag gatgatcctt tccaatacaa tctcagaagt gcctctgggc tgtagtggcc    3480

ctaggctgaa ttccaggaag tttttttttt ttttttttgt tttttttttt ttttgaggga    3540

cagcgtcttg ttctgttgcc caggttagaa tacagtagcg tggtcacagc tcactccagc    3600

ctctacatcc caggctcaag tgaacctcca gcctcagcct cccaagtagc tgggaccaca    3660

ggcatgtgcc accatgccca gctaatttat tttatatttt gtagagacag ggtctcccta    3720

tgttgcccag gccagtctcg aactcaaagc aatcttccca cctcgactgg gctcaaagcg    3780

ctcttcccac ctcaacctcc caaagtactg ggactacagg tgtgagctac catgccaggc    3840

ctgaaagcca tcttaaaaaa aaaatcttag aatgagaatc acagtattgg gaaaggactg    3900

tatgaatcat ctggtccatt cgttttgtcc tctgggttca cccagtgacc ctatttcccc    3960

cgagttctaa ggagtccacc tcatgcagaa ttgattcaat aggcgatcag caagggccag    4020

ctctgctctg ggccctgagc aggcactgag tataagtcag acctgaatgt gcctggaaga    4080

gtgtcccacg cattccagca gggaagcagt ttgtatgaca ggtgtcccag tccaggcgga    4140

taccaggtgc tgccagagtg tggaggaggc aggcggggac ttagtctcct ccctgggttt    4200

ggacactggc atcctgcttt atgtgtgaca ccactgcacc cctctgagcc tcggtttccc    4260

catctgtaaa atagaagcga tctaccctca caggtcagtt gtagggatga accatgaaaa    4320

tactagagtc tctgtttttt gacaggaact caaaaaacag atcctaaatg tacatttaaa    4380

gagggtgtga ggaggcaagc agtcagcaga ggattccagc aggtgacatt ttagggagct    4440

ggagacagca gagcctgggg ttgctaagtt cctgatgttg cccaccaggc tattgctctg    4500

agcagcgctg cctcccagct ttctggaacc ttctgggacg cctggggtgc atcaagtccc    4560

aaggggacag ggagcagaag ggggggctct ggaaggagca aaatcacacc cagagcctgc    4620

agcttctcag atttccttaa aggttttgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtatg    4680

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtttt ctctaaaagt cctatggcca gactttgttt    4740

cccaagggtc atatgactgc tcctctccac cccacactgg cccggggcgg gctgggcgcg    4800

ggcccctgcg ggtgttgcaa cgcccggcca gaaagtgggc atcagctgtt ccgcctggcc    4860

cacgtgaccc gccgagcata aatgtgaccg gccgcggctc cggcagtcaa cgcctgcctc    4920

ctctcgagat ctgcgatcta agtaagcttg gcattccggt actgttggta aagccaccat    4980

ggaagacgcc aaaaacataa agaaaggccc ggcgccattc tatccgctgg aagatggaac    5040

cgctggagag caactgcata aggctatgaa gagatacgcc ctggttcctg gaacaattgc    5100

ttttacagat gcacatatcg aggtggacat cacttacgct gagtacttcg aaatgtccgt    5160

tcggttggca gaagctatga aacgatatgg gctgaataca aatcacagaa tcgtcgtatg    5220

cagtgaaaac tctcttcaat tctttatgcc ggtgttgggc gcgttattta tcggagttgc    5280

agttgcgccc gcgaacgaca tttataatga acgtgaattg ctcaacagta tgggcatttc    5340

gcagcctacc gtggtgttcg tttccaaaaa ggggttgcaa aaaattttga acgtgcaaaa    5400

aaagctccca atcatccaaa aaattattat catggattct aaaacggatt accagggatt    5460

tcagtcgatg tacacgttcg tcacatctca tctacctccc ggttttaatg aatacgattt    5520

tgtgccagag tccttcgata gggacaagac aattgcactg atcatgaact cctctggatc    5580

tactggtctg cctaaaggtg tcgctctgcc tcatagaact gcctgcgtga gattctcgca    5640

tgccagagat cctatttttg gcaatcaaat cattccggat actgcgattt taagtgttgt    5700

tccattccat cacggttttg gaatgtttac tacactcgga tatttgatat gtggatttcg    5760

agtcgtctta atgtatagat ttgaagaaga gctgtttctg aggagccttc aggattacaa    5820

gattcaaagt gcgctgctgg tgccaaccct attctccttc ttcgccaaaa gcactctgat    5880

tgacaaatac gatttatcta atttacacga aattgcttct ggtggcgctc ccctctctaa    5940

ggaagtcggg gaagcggttg ccaagaggtt ccatctgcca ggtatcaggc aaggatatgg    6000

gctcactgag actacatcag ctattctgat tacacccgag ggggatgata aaccgggcgc    6060

ggtcggtaaa gttgttccat tttttgaagc gaaggttgtg gatctggata ccgggaaaac    6120

gctgggcgtt aatcaaagag gcgaactgtg tgtgagaggt cctatgatta tgtccggtta    6180

tgtaaacaat ccggaagcga ccaacgcctt gattgacaag gatggatggc tacattctgg    6240

agacatagct tactgggacg aagacgaaca cttcttcatc gttgaccgcc tgaagtctct    6300

gattaagtac aaaggctatc aggtggctcc cgctgaattg gaatccatct tgctccaaca    6360

ccccaacatc ttcgacgcag gtgtcgcagg tcttcccgac gatgacgccg gtgaacttcc    6420

cgccgccgtt gttgttttgg agcacggaaa gacgatgacg gaaaaagaga tcgtggatta    6480

cgtcgccagt caagtaacaa ccgcgaaaaa gttgcgcgga ggagttgtgt ttgtggacga    6540

agtaccgaaa ggtcttaccg gaaaactcga cgcaagaaaa atcagagaga tcctcataaa    6600

ggccaagaag ggcggaaaga tcgccgtgta attctagagt cggggcggcc ggccgcttcg    6660

agcagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa    6720

aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg    6780

caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt    6840

gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt ggtaaaatcg ataaggatcc    6900

gtcgaccgat gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca    6960

tgactatcgt cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc    7020

cggcagcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg    7080

cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac    7120

gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg    7200

ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca    7260

agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc    7320

tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc    7380

ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag    7440

gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc    7500

ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca    7560

gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg    7620

aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg    7680

aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct    7740

ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa    7800

gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa    7860

gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa    7920

tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc    7980

ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga    8040

ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca    8100

atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc    8160

ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat    8220

tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc    8280

attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt    8340

tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc    8400

ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg    8460

gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt    8520

gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg    8580

gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga    8640

aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg    8700

taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg    8760

tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt    8820

tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc    8880

atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca    8940

tttccccgaa aagtgccacc tgacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg    9000

gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct    9060

ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg    9120

ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgattag    9180

ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg    9240

gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc    9300

tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat    9360

gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct tacaatttgc    9420

cattcgccat tcaggctgcg caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta    9480

ttacgccagc ccaagctacc atgataagta agtaatatta aggtacggga ggtacttgga    9540

gcggccgcaa taaaatatct ttattttcat tacatctgtg tgttggtttt ttgtgtgaat    9600

cgatagtact aacatacgct ctccatcaaa acaaaacgaa acaaaacaaa ctagcaaaat    9660

aggctgtccc cagtgcaagt gcaggtgcca gaacatttct ctatcgata                9709

<210>12

<211>1374

<212>DNA

<213>重组质粒片段

<400>13

cccaagaaga agaggaaggt gggaatccat ggggtaccgc caggggagaa accctataag     60

tgtccagaat gcggcaagtc cttcagccgg agcgacaagc tcgtgcggca tcaaaggaca    120

cacaccgggg aaaaacctta caaatgccca gagtgcggga agagctttag ccagagggct    180

aacctgcggg cccaccagcg gacacacaca ggagaaaaac cctataaatg tcccgagtgt    240

ggcaaatcct tcagcgatag cggcaatctc agagtccacc aaaggacaca caccggcgag    300

aagccctaca agtgtcctga gtgcggaaag tccttttccc agagggcaca cctcgaaagg    360

catcagcgga cacatactgg cgagaaacct tacaagtgcc ccgaatgtgg aaagagcttc    420

agccacaccg ggcatctgct ggagcatcag agaactcaca ctggggagaa gccttataaa    480

tgcccagaat gcggaaagag ctttagcact catctggacc tgatcagaca tcagagaacc    540

cacaccggca agaaaggatc catggaattc cagtacctgc cagatacaga cgatcgtcac    600

cggattgagg agaaacgtaa aaggacatat gagaccttca agagcatcat gaagaagagt    660

cctttcagcg gacccaccga cccccggcct ccacctcgac gcattgctgt gccttcccgc    720

agctcagctt ctgtccccaa gccagcaccc cagccctatc cctttacgtc atccctgagc    780

accatcaact atgatgagtt tcccaccatg gtgtttcctt ctgggcagat cagccaggcc    840

tcggccttgg ccccggcccc tccccaagtc ctgccccagg ctccagcccc tgcccctgct    900

ccagccatgg tatcagctct ggcccaggcc ccagcccctg tcccagtcct agccccaggc    960

cctcctcagg ctgtggcccc acctgccccc aagcccaccc aggctgggga aggaacgctg   1020

tcagaggccc tgctgcagct gcagtttgat gatgaagacc tgggggcctt gcttggcaac   1080

agcacagacc cagctgtgtt cacagacctg gcatccgtcg acaactccga gtttcagcag   1140

ctgctgaacc agggcatacc tgtggccccc cacacaactg agcccatgct gatggagtac   1200

cctgaggcta taactcgcct agtgacaggg gcccagaggc cccccgaccc agctcctgct   1260

ccactggggg ccccggggct ccccaatggc ctcctttcag gagatgaaga cttctcctcc   1320

attgcggaca tggacttctc agccctgctg agtcagatca gctccggcag cgac         1374

<210>13

<211>6811

<212>DNA

<213>重组质粒序列

<400>13

gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg     60

ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg    120

cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc    180

ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt    240

gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata    300

tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc     360

cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc     420

attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt     480

atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt     540

atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca     600

tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg     660

actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc     720

aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg     780

gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca     840

ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc     900

gtttaaactt aagctgatcc actagtccag tgtggtggaa ttcgctagcg ccaccatggc     960

ccccaagaag aagaggaagg tgggaatcca tggggtaccg ccaggggaga aaccctataa    1020

gtgtccagaa tgcggcaagt ccttcagccg gagcgacaag ctcgtgcggc atcaaaggac    1080

acacaccggg gaaaaacctt acaaatgccc agagtgcggg aagagcttta gccagagggc    1140

taacctgcgg gcccaccagc ggacacacac aggagaaaaa ccctataaat gtcccgagtg    1200

tggcaaatcc ttcagcgata gcggcaatct cagagtccac caaaggacac acaccggcga    1260

gaagccctac aagtgtcctg agtgcggaaa gtccttttcc cagagggcac acctcgaaag    1320

gcatcagcgg acacatactg gcgagaaacc ttacaagtgc cccgaatgtg gaaagagctt    1380

cagccacacc gggcatctgc tggagcatca gagaactcac actggggaga agccttataa    1440

atgcccagaa tgcggaaaga gctttagcac tcatctggac ctgatcagac atcagagaac    1500

ccacaccggc aagaaaggat ccatggaatt ccagtacctg ccagatacag acgatcgtca    1560

ccggattgag gagaaacgta aaaggacata tgagaccttc aagagcatca tgaagaagag    1620

tcctttcagc ggacccaccg acccccggcc tccacctcga cgcattgctg tgccttcccg    1680

cagctcagct tctgtcccca agccagcacc ccagccctat ccctttacgt catccctgag    1740

caccatcaac tatgatgagt ttcccaccat ggtgtttcct tctgggcaga tcagccaggc    1800

ctcggccttg gccccggccc ctccccaagt cctgccccag gctccagccc ctgcccctgc    1860

tccagccatg gtatcagctc tggcccaggc cccagcccct gtcccagtcc tagccccagg    1920

ccctcctcag gctgtggccc cacctgcccc caagcccacc caggctgggg aaggaacgct    1980

gtcagaggcc ctgctgcagc tgcagtttga tgatgaagac ctgggggcct tgcttggcaa    2040

cagcacagac ccagctgtgt tcacagacct ggcatccgtc gacaactccg agtttcagca    2100

gctgctgaac cagggcatac ctgtggcccc ccacacaact gagcccatgc tgatggagta    2160

ccctgaggct ataactcgcc tagtgacagg ggcccagagg ccccccgacc cagctcctgc    2220

tccactgggg gccccggggc tccccaatgg cctcctttca ggagatgaag acttctcctc    2280

cattgcggac atggacttct cagccctgct gagtcagatc agctccggca gcgactacaa    2340

ggacgacgat gacaagtaac tcgagtctag ctagagggcc cgtttaaacc cgctgatcag    2400

cctcgactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct    2460

tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc    2520

attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg    2580

aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg    2640

cggaaagaac cagctggggc tctagggggt atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa    2700

gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc    2760

ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag    2820

ctctaaatcg gggcatccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca    2880

aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc    2940

gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa    3000

cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgggg atttcggcct    3060

attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt    3120

gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccaggc aggcagaagt atgcaaagca    3180

tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa    3240

gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca    3300

tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt    3360

ttatttatgc agaggccgag gccgcctctg cctctgagct attccagaag tagtgaggag    3420

gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agctcccggg agcttgtata tccattttcg    3480

gatctgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg    3540

caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa    3600

tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg    3660

tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt    3720

ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa    3780

gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc    3840

ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg    3900

ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg    3960

aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg    4020

aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg    4080

gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact    4140

gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg    4200

ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc    4260

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tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa    6660

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tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg    6780

cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt c                                   6811

Claims (10)

1、一种能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子，其特征是：所述人工锌指蛋白转录因子的DNA结合结构域为能与HO-1基因增强子序列SEQ ID NO：3特异结合的人工锌指蛋白，具有SEQ ID NO：5所示的DNA序列，且能编码具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸残基序列的蛋白质。

2、根据权利要求1所述的能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子，其特征是：所述人工锌指蛋白转录因子具有SEQ ID NO：13所示的DNA序列。

3、含有权利要求1所述的能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体。

4、含有权利要求2所述的能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体。

5、权利要求2所述的能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体具有SEQ ID NO：13所示的DNA序列。

6、根据权利要求2所述的能特异上调HO-1基因表达的人工锌指蛋白转录因子的表达载体，其特征是：含有由核定位信号、DNA结合结构域及效应结构域构成的、连接顺序为核定位信号-DNA结合结构域-效应结构域的人工锌指蛋白转录因子的DNA序列，其中：效应结构域为核转录因子NF-κB的p65亚基功能区，所述p65亚基功能区的DNA编码序列为SEQ ID NO：7。

7、权利要求3所述的人工锌指蛋白转录因子的表达载体在制备能特异上调HO-1基因表达的药物中的用途。

8、权利要求4所述的人工锌指蛋白转录因子的表达载体在制备能特异上调HO-1基因表达的药物中的用途。

9、权利要求5所述的人工锌指蛋白转录因子的表达载体在制备能特异上调HO-1基因表达的药物中的用途。

10、权利要求3、4或5所述的用途：其特征是，所述药物包括：治疗抑制缺血再灌注诱导的损伤、抑制心肌梗死后的纤维化重塑、恢复心室功能，抑制炎症反应和粘附分子表达及血管闭塞的药物。

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