CN101530434B - 含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉以及蛹血清粉的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及诱导家蚕或柞蚕蛹产生抗菌肽(Cecropin)的技术领域；具体涉及含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉以及蛹血清粉的制备方法及其应用。本发明用家蚕熟蚕，未吐丝的五龄末期幼虫、柞蚕蛹为原料，用超声波诱导产生抗菌肽，用喷雾干燥技术将含抗菌肽的蚕体\蛹体\蛹血清制成干粉，保存抗菌肽的杀菌活性达300～3000单位/克的水平。含抗菌肽的蚕粉或蛹粉经口服能抑制鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA在鸭体内增殖，抑制率达80％以上。以含抗菌肽的蚕粉或蛹粉或蛹血清粉作为中药原料，制成胶囊供治疗肝炎之用。

Description

含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉以及蛹血清粉的制备方法

技术领域

本发明涉及诱导家蚕或柞蚕蛹产生抗菌肽(Cecropin)的技术领域；具体涉及含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉以及蛹血清粉的制备方法及其应用。 

背景技术

昆虫及蛙类抗菌肽据基因银行(GenBank)的资料已公布1200种以上，其中家蚕及柞蚕抗菌肽达50种以上。从家蚕或柞蚕蛹中诱导产生抗菌肽可以直接用作抗菌药物。通常诱导家蚕或柞蚕蛹产生抗菌肽是注射大肠杆菌或阴沟肠杆菌于体内，经一段时间孵育后体内产生抗菌肽。由于注射大肠杆菌等势必造成污染，不符合中药天然物的要求；其次采用人工逐头注射，需耗大量的人力，容易污染环境卫生及对工人健康会有不良影响。产生抗菌肽的蚕体或蛹体，用真空干燥方法制成干粉，由于高温长时间干燥，将导致抗菌肽破坏，杀菌活力大为降低，影响产品的品质。如用低温干燥方法，则耗能多，时间长，增加成本。 

为解决上述技术问题，申请号是03128069.2的专利申请，公开了“一种家蚕体中提取多肽抗生素的制备方法”但是该申请的缺点是：培养基中含有活性大肠杆菌的浓度没有说明，添食活的大肠杆菌势必造成污染，经口添食大肠杆菌不可能诱导抗菌肽；另外，采用超声波诱导条件是10～20千赫处理2～5小时，超声波最低的频率是20千赫以上，10千赫不是超声波，而且超声波的功率也没有说明，超声波在水或其他载体中才能传播，蚕体如浸在水中2～5小时势必导致窒息死亡；提取前蚕体中抗菌肽的活性有多少也没有说明，因此该专利的制备方法是不可实施的。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点或不足，提供一种含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉以及蛹血清粉的制备方法及其应用，操作简便，快速，成本低，不污染环境和不损害工人健康的方法。诱导产生抗菌的家蚕、柞蚕蛹加工成中药原料，代替真空高温干燥，避免对抗菌肽活性的破坏；代替低温干燥，减少能耗，大大缩短干燥时间，降低成本的技术。产品符合中药原料的要求。 

本发明目的通过以下技术方案实现： 

一种含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉的制备方法，包括以下步骤： 

(1)家蚕熟蚕或柞蚕蛹的收集、清洗： 

收集家蚕熟蚕，清除残桑及蚕粪，剔出病蚕或未熟蚕；柞蚕蛹的收集是将柞蚕蛹削开茧壳，取出蛹体，剔除病蛹及死蛹；清洗； 

(2)超声诱导抗菌肽： 

将家蚕熟蚕或柞蚕蛹作材料，投入常温水浴中，使用四方型超声波探头，向四个方向发射同一频率的超声波，诱导产生抗菌肽；诱导条件是：频率20～30千赫兹，功率200～300 瓦，时间15～20分钟，温度20～50℃，诱导产生抗菌肽； 

(3)喷雾干燥： 

将诱导产生抗菌肽的家蚕或柞蚕蛹用10000转/分钟匀浆器制成匀浆；将匀浆输入喷雾干燥器，物料流速为0.5公斤/分钟；喷雾干燥条件：热空气温度130～135℃，排气口温度60～65℃，物料在喷雾干燥中15～40秒内完成干燥；过40筛目，得到的含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉，作为中药原料。 

所述家蚕熟蚕是指五龄末期未吐丝的幼虫。 

蚕体、蛹体制成匀浆，将蚕体或蛹体置匀浆器中，从10000转/分钟拌搅10～20分钟制成匀浆。 

匀浆器的绞刀应为旋片，直径为匀浆容器2/3，以利于搅拌时，让物料上下移动，浆体均匀。 

控制匀浆器内温度，控制在50℃以下，避免过高温度影响抗菌肽的活性。 

一种含蚕抗菌肽的蛹血清粉的制备方法，包括以下步骤： 

(1)柞蚕蛹的收集、清洗及超声诱导抗菌肽： 

柞蚕蛹，先行削开茧壳，取出蛹体，剔除病蛹及死蛹；清洗，将柞蚕蛹作材料，投入常温水浴中，使用四方型超声波探头发射超声波诱导材料产生抗菌肽，频率20～30千赫兹，功率200～300瓦，时间15～20分钟，温度20～50℃，诱导产生抗菌肽；其间适当拌搅务使蛹体均匀接受声波的刺激；将蛹体捞出，晾干，置25℃，相对湿度80％无菌室内，放置3～4天，由于蛹体受超声波的冲激而诱导产生抗菌肽； 

(2)蛹血清的收集、蛹渣中抗菌肽的回收： 

用刺辊刺破诱导产生抗菌肽的柞蚕蛹，再将蛹体投入预先装有滤布的篮式离心机内，3000转/分钟，离心20～25分钟，收集蛹血；将蛹血投入管式离心机中，10000转/分钟，离心10～15分钟，蛹血即得到分离，收集蛹血清作为材料，蛹渣仍在离心机内； 

蛹渣中尚含有一定的抗菌肽成份，将蛹渣放入容器内，加入1/3体积的无菌水浸泡约30分钟，同时加以拌搅及压榨，务使抗菌肽等浸出；浸出物投入预先装有滤布的篮式离心机中，3000转/分钟，离心10～15分钟，收集滤出液；投入管式离心机中，10000转/分钟，离心10分钟，收集上清液，与蛹血清合并； 

(3)喷雾干燥： 

将上清液和蛹血清投入喷雾干燥器，物料流速为0.2～0.25公斤/分钟，喷雾干燥条件：热空气130～135℃，排气口温度60～65℃，物料在喷雾干燥中15～40秒内完成干燥。蛹血清粉过40筛目，密封保存，作为中药原料。 

所述的刺辊的长为3mm。 

将所述的家蚕熟蚕或柞蚕蛹作材料，投入常温水浴中，材料与水之比为1∶4。 

所述的清洗是将家蚕熟蚕铺于塑料网上，以50℃温水经喷雾器喷淋其上，达到清洗的效果。 

所述制备方法制备的含蚕抗菌肽的蚕粉、蛹粉或蛹血清粉在治疗乙型肝炎的药物中的 应用。 

超声波处理的容器为圆筒型，直径与筒高相等。如直径1米，筒高1米，体积0.78米立方米。投入常温水浴中，材料与水之比为1∶4，可放15～16公斤蚕蛹。超声波探头放在桶中轴线中央，使发射出的超声波能均匀分布在蚕蛹上。如扩大容器体积应增加超声波探头。 

处理时间15～30分钟，由于超声波功率较大，会引起水温升高。如常温水25℃，可以上升到35～40℃。务必控制水温不宜超过50℃。超声波处理后将蚕体或蛹体捞出，晾干。 

超声波探头宜选择Acason公司的四方型探头，处理后的蚕蛹超声波成象如图3、图4所示；与三角型探头(见图1、图2)相比，使用四方型超声波探头发射超声波诱导材料产生抗菌肽，效果优于三角型探头，超声波能够深入到蛹体内3mm，见图4的波型，三角形探头只能在蛹体表面0.5mm～0.7mm，见图3；因此四方型探头发射的超声波能诱导抗菌肽的效果更好。 

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果： 

(1)本发明使用喷雾干燥代替真空高温干燥，避免对抗菌肽活性的破坏；代替低温干燥，减少能耗，大大缩短干燥时间，降低成本的技术。 

(2)使用四方型超声波探头发射超声波诱导材料产生抗菌肽，效果优于三角型探头，可以从四个面均匀发射超声波，整个蚕体受到诱导，诱导效果好，产生更多抗菌肽。 

(3)喷雾干燥的温度精确控制到热空气130～135℃，排气口温度60～65℃，不仅可以达到迅速干燥的目的而且不损害蛹粉的杀菌能力。蛹浆在常温下的温度为25～30℃，喷雾干燥器进气温度选择130℃是因为当蛹浆进入喷雾干燥器后与热空气接触，温差100℃，雾点的平均温度约80℃，(30℃+130℃)÷2＝80℃；能把蛹浆水份迅速蒸发，达到干燥的目的；出口温度60～65℃，蛹粉温度为80℃，蛹粉与热空气接触，温差20℃，实际混合体温度约70℃，达到预期效果，而且由于抗菌肽能耐受100℃，30分钟，所以选择这个温度范围不仅可以达到迅速干燥的目的而且不损害蛹粉的杀菌能力。 

附图说明

图1为使用三角型探头发射的超声波处理雄性蚕蛹蛹体后的成象图； 

图2为使用三角型探头发射的超声波处理雌性蚕蛹蛹体后的成象图； 

图3为使用四方型探头发射的超声波处理雄性蚕蛹蛹体后的成象图； 

图4为使用四方型探头发射的超声波处理雌性蚕蛹蛹体后的成象图； 

图5为柞蚕蛹抗菌肽抑制鸭乙型肝炎病毒DNA复制的检测图。 

具体实施方式

下面结合实施例子，对本发明作进一步详细说明。 

实施例1 

对家蚕熟蚕诱导产生抗菌肽及其加工方法，包括以下步骤： 

1.家蚕熟蚕的收集：将家蚕五龄末期将吐丝的幼虫收集，清除残桑及蚕粪，剔除病蚕及未熟之蚕，作为材料，以10Kg材料为例。 

2.将熟蚕铺于塑料网上，以50℃温水经喷雾器喷淋其上，达到清洗的效果。 

3.将清洗后的熟蚕投入约40Kg的常温水的容器中，用四方型超声波探头处理，超声波频率30千赫兹，功率300瓦，时间30分钟，温度20℃，诱导产生抗菌肽。 

4.诱导后的熟蚕，捞起，晾干，置25℃，相对湿度80％的无菌室内，让体内继续产生抗菌肽，2天后，检测蚕体血液中具有杀菌大肠杆菌K₁₂D₃₁的效应。 

5.蚕体制成匀浆。将熟蚕体分批投入匀浆器中，以10000转/分钟的速度拌搅10分钟。收集全部匀浆作喷雾干燥。 

6.喷雾干燥，预先将喷雾干燥器预热到130℃，将匀浆按0.5升/分钟的流量输入干燥器内，经过旋转分散加热，释出水蒸汽，排气口温度60℃。蚕体匀浆在器内保持15秒内达到干燥的效果。此工艺不会引致抗菌肽活性丧失。收集干燥的蚕粉，过40筛目，密封保存，蚕粉含水份8％以下，约得2Kg。得率20％。 

7.活性检测：按以下方法，测定熟蚕粉的杀菌活力应为300单位/g，作为制备五令丸胶囊的原料。

抗菌肽杀菌活性检测方法，具体按下述步骤实施。 

1.抗菌肽杀菌活性判定 

根据天蚕抗菌肽B(Cecropin B)的结构与家蚕及柞蚕抗菌肽的结构作比较，同源性85％以上。 

                5    10    15    20    25    30     36 

SEQ.ID.NO1  KWKLI KKIEK VGQNI RDIIK KAGPA IALGE  AKATAL 

SEQ.ID.NO2  KWKLF KKIEK VGQRI RDIIK SAGPA IALVA  AKATAL 

SEQ.ID.NO3  KWKLF KKIEK VGQRV RDAVI SAGPA VATAQ  ATALAL  K 

天蚕(Hyalophora cecropia)抗菌肽的氨基酸序列为SEQ.ID.NO1； 

家蚕(Bombyx mori)抗菌肽的氨基酸序列为SEQ.ID.NO2； 

柞蚕(Antheraea pernyi)抗菌肽的氨基酸序列为SEQ.ID.NO3。 

购入Sigma公司Cecropin B作为标准，按不同浓度稀释后作抑菌圈试验。结果CecropinB的浓度与抑菌圈直径的相关系数为2.1mm/1μg/mL 

2.抗菌肽杀菌活性测定方法，按以下述步骤实施 

(1)大肠杆菌菌液的制备：将大肠杆菌(E.coli K₁₂D₃₁)接种于5mL液体LB培养基中，37℃培养过夜，取200μL培养液，接种于5mL培养液中，37℃培养4～5小时，使每毫升菌液含大肠杆菌10⁵cfu/mL。 

(2)检测平板制备：将消毒后的LB培养基(固体)，在55℃时加入硫酸链霉素0.1％(硫酸链霉素为25万单位)。取一消毒容器，预先加入5μL大肠杆菌菌液，再加入6mL上述培养基，充份混合后，趁热倾入7.5cm直径的培养皿内，水平放置，待凝固后，用2.7mm的打孔器打孔，分别吸入5μL待试品于小孔中。重复3次，以灭菌水为对照。加盖后静置10分钟。倒置，37℃培养过夜，可见清晰的抑菌圈，用游标尺测定其直径，计算平均值。 

(3)计算方法： 

U(杀菌活力单位)＝2^x×1000×稀释倍数 

$X=\frac{b-a-2.7}{K}$

a：对照样本抑菌圈直径(mm) 

b：待测样本抑菌圈直径(mm) 

K：抗菌肽抑菌圈直径与抗菌肽浓度的斜率为2.1 

(4)举例：柞蚕蛹血清的抑菌效价的计算方法 

a：对照区抑菌圈直径0.1mm 

b：样品抑菌圈直径8.1mm 

$X=\frac{8.1\mathrm{mm}-0.1\mathrm{mm}-2.7\mathrm{mm}}{2.1}$

$=2.52$

U＝2^2.52×1000；2.52log2×1000 

＝5.70×1000 

＝5700单位 

应用本方法测定的家蚕熟蚕粉中含抗菌肽300单位/g；柞蚕蛹粉中含抗菌肽300～400单位/g，柞蚕蛹血清干冻粉含抗菌肽3000～3500单位/g，以上原料分别制成胶囊，供治疗乙型肝炎之用。 

实施例2 

本发明对柞蚕蛹诱导产生抗菌肽及其加工方法，具体包括下述步骤： 

1.柞蚕蛹的收集：将秋季的柞蚕茧，切开茧壳而得到滞育蛹，剔除病蛹及死蛹。以100Kg鲜蛹作材料。 

2.超声波诱导抗菌肽，将蚕蛹铺于塑料网上，用50℃温水喷淋清洗后，投入约700升容器中，注入常温自来水。超声波发生器购自Acason公司四方型超声波探头。通电后产生超声波，在该容器四壁各放一个超声探头，务使超声波在容器内均匀传播，掌握超声波频率25千赫兹，功率250瓦，连续处理15分钟，温度50℃，其间适当拌搅务使蛹体均匀接受声波的刺激。将蛹体捞出，晾干，置25℃，相对湿度80％无菌室内，放置4天，由于蛹体受超声波的冲激而诱导产生抗菌肽。检验蛹体血液中具有杀灭大肠杆菌K₁₂D₃₁的效应。 

3.蛹体制成匀浆：将蛹体10Kg分批投入匀浆器内，以10000转/分钟连续拌搅10分钟。待全部制成匀浆后供作喷雾干燥。 

4.喷雾干燥：预先将喷雾干燥器预热到135℃，将匀浆按0.5升/分钟的流量输入干燥器内，经旋转分散加热，释放出水蒸汽，排气口温度为65℃，蛹匀浆在器内保持20秒即达干燥效果。收集干燥的蛹粉，过40筛目，密封保存。蛹粉含水份10％，得蛹粉22Kg，得率约20％。 

5.活性检测，按本发明提出的方法，测定柞蚕蛹粉的杀菌活力，应为300单位/g，作 为制备肾肝宁胶囊的原料。 

实施例3 

本发明柞蚕蛹血清干粉的加工方法，具体包括下述步骤： 

1、柞蚕蛹的收集：将秋季的柞蚕茧，切开茧壳而得到滞育蛹，剔除病蛹及死蛹。以100Kg鲜蛹作材料。 

2、超声波诱导抗菌肽，将蚕蛹铺于塑料网上，用50℃温水喷淋清洗后，投入约700升容器中，注入常温自来水。超声波发生器购自Acason公司四方型超声波探头。通电后产生超声波，在该容器四壁各放一个超声探头，务使超声波在容器内均匀传播，掌握超声波频率25千赫兹，功率250瓦，连续处理25分钟，温度35℃，其间适当拌搅务使蛹体均匀接受声波的刺激。将蛹体捞出，晾干，置25℃，相对湿度80％无菌室内，放置3天，由于蛹体受超声波的冲激而诱导产生抗菌肽，收集诱导后的柞蚕蛹作材料。 

3、蛹血清的收集：将诱导后的蚕蛹铺于平板上，用带刺(3mm)的钢辊滚过蛹体造成穿孔，将损破的柞蚕蛹放入预先铺设滤布(100目)的篮式离心机内，3000转/分钟，离心20分钟，蛹血即得到分离，残蛹仍在离心机内。收集蛹血，得率约为蛹体重15％。 

4、蛹渣中抗菌肽的回收。将离心后的蛹渣放入容器内，加入1/3体积无菌水，浸泡30分钟，其中不断拌搅及挤压，使抗菌肽等溶于水中。将浸提物投入预先装有滤布的篮式离心机中，3000转/分钟，离心10分钟，取滤液与蛹血清合并，作为喷雾干燥原料。 

5、喷雾干燥，制备蛹血清粉。蛹血清及蛹体浸出液合并后进行喷雾干燥，加料量0.25公斤/分钟。喷雾干燥器通入130℃热空气，排气口温度60℃，使蛹血清在40秒内干燥，蛹血清粉经40筛目后，密封保存，作为中药原料。杀菌效价检定3000单位/克，得率约鲜蛹2.5％。 

6、蛹血清粉杀菌效价检定：取蛹血清干粉1g，溶于无菌水中定容到10mL，3000转/分钟，离心5分钟，取上清液5μL，滴入预制备的LB培养基平板的孔穴中，重复3次，并以无菌水作对照。37℃培养过夜，用卡尺测定抑菌圈直径，代入公式计算其效价。平均抑菌圈直径5mm，对照为0.1mm。 

$X=\frac{5.0\mathrm{mm}-0.1\mathrm{mm}-0.27\mathrm{mm}}{2.1}=1.04$

U(单位/g)＝2^x×1000×10倍 

＝1.04log2×1000×10

＝0.312×1000×10

＝3120单位/g

以蛹血清干粉作为原料，制备柞蚕素胶囊。 

实施例4 

本发明制备的家蚕熟蚕粉(抗菌肽效价300单位/g)，柞蚕蛹粉(300～400单位/g)及柞蚕蛹血清粉(3000单位/g)，制成胶囊，作治疗乙型肝炎的药物，效果如下。 

1.家蚕熟蚕粉胶囊，五令丸：每粒含家蚕熟蚕粉0.3g，每日3次，每次3粒(0.9g/ 日)，一个疗程30天～60天。经调查治疗132例各种类型肝炎，31例对照。临床过程无不良副作用和过敏反应。治疗有效率91.7％，其中显效42％，对照组有效率64.5％。特别对白蛋白(A)/球蛋白(G)比例倒置得到恢复有明显效果。 

2.柞蚕蛹粉胶囊，肾肝宁：每粒含柞蚕蛹粉0.3g，每日3次，每次3粒。一个疗程30～60天。经调查154例肝炎，11例对照为灭奥灵。临床过程无不良反应。治疗效果，总有效率83.2％，其中显效45.0％，对照组有效率63.64％。 

3.柞蚕蛹血清干粉胶囊，柞蚕素：经委托中国医学科学院生物技术研究所试验。柞蚕素在鸭体内对鸭乙型病毒感染治疗效果，试验证实柞蚕素在鸭体内有抑制鸭乙型肝炎病毒DNA复制的作用，其有效期间较长。柞蚕蛹血清干粉，柞蚕素治疗乙型肝炎临床试验，每粒0.1g，每日3次，每次2-3粒，一个疗程30-60天。临床过程无不良反应亦无过敏反应。治疗104例，对照30例为常规降酶药物。治疗总有效率84％，显效48％；对照有效率61.4％，柞蚕素对澳抗转阴有一定作用。 

柞蚕蛹抗菌肽抑制鸭乙型肝炎病毒DNA的抑制效果 

昆虫抗菌肽具有广谱性杀菌作用，对金黄葡萄球菌、铜绿假单胞均、大肠杆菌、黑麴霉菌及白色念珠菌均有杀灭作用。本发明证实柞蚕蛹抗菌肽能抑制鸭乙型肝炎病毒DNA复制，按下述步骤进行。 

1.动物及病毒：北京鸭，鸭乙型肝炎病毒，上海麻鸭血清，鸭乙型肝炎病毒DNA阳性。³²P-标记DHBV探针，阳性对照药物为膦羧基甲酸钠(PFA)。 

2.试验方法：静脉注射上海麻鸭DHBV DNA阳性鸭血清，每只刚孵化24小时的北京鸭；感染后7天取血，分离血清，-70℃保存待检；给药治疗试验。每组5-6只，给药组分3个剂量，分别为2.5、1.25和0.65克/公斤体重。口服每天2次，给药10天；同批设阴性对照组，以生理盐水代替药物；阳性对照组，药物为PFA，腹腔注射200mg/公斤，每天2次，给药10天。各组自鸭胫静脉取血，分离血清，-70℃保存待检。 

DHBA DNA检测方法：各批样品同时点膜(40μL)按试验盒说明用³²P-标记DHBV探针，作斑点杂交，放射性自显影，用酶标仪检测光密度(OD)值。以杂交点490nm的消光值对鸭血清DHBA DNA水平，作出评价。 

3.结果 

试验小鸭在感染7天后血清DHBV DNA全部阳性。阴性对照服用蒸馏水，调查20天，DHBV DNA无显性差异。阳性对照，注射PFA 200mg/公斤。每天2次。给药10天。平均抑制率98.46％。停药后3天，平均抑制率73.52％。t检验有显著性差异(P＜0.05)。证明PFA治疗有显著效果。 

柞蚕抗菌肽三批治疗试验，3个剂量，3批重复试验平均对DHBV DNA抑制率分别为88.49％、81.47％及85.00％，均有显著和非常显著的抑制作用。停药后3天，抑制率分别为96.36％、87.48％及61.96％。中剂量组对鸭血清DHBV DNA有明显抑制作用。差异显著并且有效作用持续时间较长。结论：柞蚕蛹抗菌肽制剂(3000单位/g)对鸭乙型肝炎有较好的疗效。见表1及图5。表1为柞蚕蛹抗菌肽治疗鸭乙型肝炎的效果，其中P检验：P＜0.05*； P＜0.01**，PFA为膦羧基甲酸钠。 

图5为柞蚕蛹抗菌肽抑制鸭乙型肝炎病毒DNA复制的检测图。T0、T5、T10：给药天数；P3：停药天数；柞蚕蛹抗菌肽剂量：2.5、1.25、0.65mg/kg，每日2次口服，阴性对照：盐水对照；阳性对照：膦羧基甲酸钠，200mg/kg注射，每日2次。经中国医学科学院生物技术研究所测试给出报告如图5所示，柞蚕蛹抗菌肽的3个剂量，对DHBV DNA均有抑制作用，与阴性对照：盐水对照和阳性对照相比，颜色浅，表明抑制作用强于生理盐水和PFA。 

表1 

含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉以及蛹血清粉的制备方法及其应用序列表 

SEQUENCE LISTING 

<110>广州暨南大学医药生物技术研究开发中心 

华南农业大学 

<120>含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉以及蛹血清粉的制备方法及其应用 

<130> 

<160>3 

<170>PatentIn version 3.5 

<210>1 

<211>36 

<212>PRT 

<213>天蚕(Hyalophora cecropia) 

<400>1 

Lys Trp Lys Leu Ile Lys Lys Ile Glu Lys Val Gly Gln Asn Ile Arg 

1               5                   10                  15 

Asp Ile Ile Lys Lys Ala Gly Pro Ala Ile Ala Leu Gly Glu Ala Lys 

            20                  25                  30 

Ala Thr Ala Leu 

        35 

<210>2 

<211>36 

<212>PRT 

<213>家蚕(Bombyx mori) 

<400>2 

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Glu Lys Val Gly Gln Arg Ile Arg 

1               5                   10                  15 

Asp Ile Ile Lys Ser Ala Gly Pro Ala Ile Ala Leu Val Ala Ala Lys 

            20                  25                  30 

Ala Thr Ala Leu 

        35 

<210>3 

<211>37 

<212>PRT 

<213>柞蚕(Antheraea pernyi) 

<400>3 

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Glu Lys Val Gly Gln Arg Val Arg 

1               5                   10                  15 

Asp Ala Val Ile Ser Ala Gly Pro Ala Val Ala Thr Ala Gln Ala Thr 

            20                  25                  30 

Ala Leu Ala Leu Lys 

        35 

Claims (2)

1.含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉的制备方法，其特征在于，为以下步骤：

(1)家蚕熟蚕或柞蚕蛹的收集、清洗：

收集家蚕熟蚕，清除残桑及蚕粪，剔出病蚕或未熟蚕；

柞蚕蛹的收集是将柞蚕蛹削开茧壳，取出蛹体，剔除病蛹及死蛹，清洗；

(2)超声诱导抗菌肽：

将家蚕熟蚕或柞蚕蛹作材料，投入常温水浴中，使用四方型超声波探头，向四个方向发射同一频率的超声波，诱导产生抗菌肽；诱导条件是：频率20～30千赫兹，功率200～300瓦，时间15～20分钟，温度20～50℃，诱导产生抗菌肽；

(3)喷雾干燥：

将诱导产生抗菌肽的家蚕或柞蚕蛹用10000转/分钟匀浆器制成匀浆；将匀浆输入喷雾干燥器，物料流速为0.5公斤/分钟；喷雾干燥条件：热空气温度130～135℃，排气口温度60～65℃，物料在喷雾干燥中15～40秒内完成干燥；过40目筛，得到的含蚕抗菌肽的蚕粉或蛹粉，作为中药原料；

所述家蚕熟蚕是指五龄末期未吐丝的幼虫；

将所述的家蚕熟蚕或柞蚕蛹作材料，投入常温水浴中，材料与水之比为1∶4；

所述的清洗是将家蚕熟蚕铺于塑料网上，以50℃温水经喷雾器喷淋其上，达到清洗的效果。

2.含蚕抗菌肽的蛹血清粉的制备方法，其特征在于，为以下步骤：

(1)柞蚕蛹的收集、清洗及超声诱导抗菌肽：

柞蚕蛹，先行削开茧壳，取出蛹体，剔除病蛹及死蛹；清洗，将柞蚕蛹作材料，投入常温水浴中，使用四方型超声波探头发射超声波诱导材料产生抗菌肽，频率20～30千赫兹，功率200～300瓦，时间15～30分钟，温度20～50℃，诱导产生抗菌肽；

(2)蛹血清的收集、蛹渣中抗菌肽的回收：

用刺辊刺破诱导产生抗菌肽的柞蚕蛹，再将蛹体投入预先装有滤布的篮式离心机内，3000转/分钟，离心20～25分钟，收集蛹血；将蛹血投入管式离心机中，10000转/分钟，离心10～15分钟，蛹血即得到分离，收集蛹血清作为材料，蛹渣仍在离心机内；

蛹渣中尚含有一定的抗菌肽成份，将蛹渣放入容器内，加入1/3体积的无菌水浸泡30分钟，同时加以拌搅及压榨，使抗菌肽浸出；浸出物投入预先装有滤布的篮式离心机中，3000转/分钟，离心10～15分钟，收集滤出液；投入管式离心机中，10000转/分钟，离心10分钟，收集上清液，与蛹血清合并；

(3)喷雾干燥：

将上清液和蛹血清投入喷雾干燥器，物料流速为0.2～0.25公斤/分钟，喷雾干燥条件：热空气130～135℃，排气口温度60～65℃，物料在喷雾干燥中15～40秒内完成干燥；蛹血清粉过40目筛，密封保存，作为中药原料；

所述的刺辊的长度为3mm；

将所述的柞蚕蛹作材料，投入常温水浴中，材料与水之比为1∶4。

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