CN101528704B

CN101528704B - 丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和parp调节剂

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Publication number: CN101528704B
Application number: CN200780037330.6A
Authority: CN
Inventors: P·C·楚埃; F·皮埃尔; J·P·惠藤
Original assignee: Senhwa Biosciences Inc
Current assignee: Senhwa Biosciences Inc
Priority date: 2006-09-01
Filing date: 2007-08-31
Publication date: 2014-04-09
Anticipated expiration: 2027-08-31
Also published as: CN101528704A; ZA200901917B

Abstract

本发明部分涉及具有特定生物学活性的分子，所述生物学活性包括但不限于：抑制细胞增殖、调节蛋白激酶活性和调节聚合酶活性。本发明的分子可调节酪蛋白激酶(CK)活性和/或多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)活性。本发明还部分涉及利用这些分子的方法。

Description

丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和PARP调节剂

相关申请的交叉引用

根据35 U.S.C.§119(e)，本申请要求以下申请的优先权：2006年9月1日提交的美国临时申请序列号60/842,061；2006年9月13日提交的美国临时申请序列号60/844,542；2006年9月22日提交的美国临时申请序列号60/846,683；2006年12月7日提交的美国临时申请序列号60/873,936；和2007年3月19日提交的美国临时申请序列号60/859,716。这些文献的内容通过引用全文纳入本文。

发明领域

本发明部分涉及具有特定生物学活性的分子，所述生物学活性包括但不限于：抑制细胞增殖、调节丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶活性和调节聚合酶活性。本发明的分子可调节酪蛋白激酶(CK)活性(例如，CK2活性)和/或多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)活性。本发明还部分涉及利用这些分子的方法。

发明内容

本发明部分提供具有特定生物学活性的化学化合物，所述生物学活性包括但不限于：抑制细胞增殖、抑制血管生成、调节蛋白激酶活性和调节聚合酶活性。某些分子可调节酪蛋白激酶2(CK2)活性和/或多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)活性，可影响以下生物学功能，包括但不限于：例如抑制γ磷酸从ATP转移至蛋白质或肽底物、抑制血管生成、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。本发明还部分提供制备新型化合物及其类似物的方法，以及使用这些物质的方法。还提供了包含上述分子与其它试剂的组合的组合物，以及联用这些分子与其它试剂的方法。

本发明的化合物如通式(A)所示：

式中标有α的基团代表稠合到含Q¹的环上的5-6员芳环或杂芳环，其中α是任选含有一个或多个氮原子作为环成员的6-员芳环，或选自噻吩或噻唑的5员芳环；

Q¹是C＝X，Q²是NR⁵，Q¹和Q²之间的键是单键；或Q¹是C-X-R⁵，Q²是N，Q¹和Q²之间的键是双键；和

其中X代表O、S或NR⁴，Z¹-Z⁸和R⁴及R⁵如下所限定；

前提条件是当式(A)中的Q¹是C-NHΦ时，其中Φ是任选取代的苯基：

如果标有α的环是含有至少一个N作为环成员的6-员环，存在的至少一个R³必须是极性取代基，或者如果各R³是H，则Φ必须是被取代的；和

如果标有α的环是苯基，并且Z¹-Z⁴中的3个代表CH，则Z²不能是C-OR”，Z³不能是NH₂、NO₂、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。

本发明还包括式(A)所示化合物的药学上可接受的盐。因此，在本发明的各化合物中，式(A)代表通过Q¹或Q²连接于基团R⁵的稠合的三环系统，下文将进一步描述。

因此，本文提供式I、II、III和IV所示化合物及其药学上可接受的盐、酯、前药和互变异构体：

式中：

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是N或CR³；

Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自是CR⁶或N；

各R³和各R⁶独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基(heteroacyl)、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

或者各R³和各R⁶可以是卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

其中同一原子或毗邻原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环；

各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，

其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；

其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环，

R⁴是H或选自下组的任选取代的成员：C₁-C₆烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；

各R⁵独立为H或选自下组的任选取代的成员：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、C_3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；或者R⁵是被任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环取代的C_2-10杂烷基、C_1-10烷基或C_2-10烯基；和

在各-NR⁴R⁵中，R⁴和R⁵可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员；

前提条件是当式(I)中的-NR⁴R⁵是-NHΦ时，其中Φ是任选取代的苯基：

如果Z⁵-Z⁸中至少一个是N，存在的至少一个R³必须是极性取代基，或者如果各R³是H，则Φ必须是被取代的；和

如果Z⁵-Z⁸各自是CR⁶，并且Z¹-Z⁴中3个表示CH，则Z²不能是C-OR”，并且Z³不能是NH₂、NO₂、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。

某些实施方式提供式I、II、III和IV所示的化合物中，及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体；其中：

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是N或CR³；

Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自是N或CR⁶；

Z¹-Z⁴中零个、一个或两个是N，Z⁵-Z⁸中零个、一个或两个是N；

各R³和各R⁶独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

或者各R³和各R⁶独立为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR、极性取代基、羧基生物电子等排体(carboxybioisostere)、COOH或NO₂，

其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环；

如果Z⁵-Z⁸均是CH，或者Z⁵-Z⁸中一个是N，则Z¹-Z⁴中至少一个是CR³并且至少一个R³必须是非氢取代基；或；

如果各R³是H，则Φ必须是被取代的；或

如果Z⁵-Z⁸均是CH或者Z⁵-Z⁸中一个是N，则Z²不是C-OR”，并且Z³不是NH₂、NO₂、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。

在某些实施方式中，Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸中的1、2、3或4个是N。对于其中Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸中的两个是N的实施方式，环氮原子可以是毗连的(例如，Z⁵和Z⁶，Z⁶和Z⁷，或Z⁷和Z⁸的氮原子)或者可以间隔一个或两个环位置(例如，Z⁵和Z⁷，Z⁶和Z⁸，或Z⁵和Z⁸的氮原子)。在某些实施方式中，至少一个R³取代基是极性取代基，例如羧酸或其盐、酯或其生物电子等排体。例如，在一些实施方式中，至少一个R³是含羧酸的取代基或羧酸生物电子等排体(carboxylate bioisostere)，或其盐或酯。在一些实施方式中，至少一个R³是含羧酸的取代基或其盐。

本文所用的术语“极性取代基”指具有电偶极子和任选偶极矩(例如，不对称极性取代基具有偶极矩，而对称的极性取代基不具有偶极矩)的任何取代基。极性取代基包括接受或提供氢键的取代基，和在生理pH水平的水溶液中携带至少部分正电荷或负电荷的基团。在某些实施方式中，极性取代基是在与另一化学部分形成的非共价氢键中接受或提供电子的取代基。在某些实施方式中，极性取代基选自羧基、羧基生物电子等排体或在pH约7-8时主要以阴离子存在的其它酸衍生的部分。其它极性取代基包括但不限于：含OH或NH的基团、醚氧、胺氮、氧化的硫或氮、羰基、腈和含氮或含氧的杂环(无论芳族或非芳族)。在一些实施方式中，R³表示的极性取代基是羧酸酯基或羧酸生物电子等排体。

本文所用的“羧酸生物电子等排体”或“羧基生物电子等排体”指预计在生理pH下实质性程度地带负电荷的部分。在某些实施方式中，羧酸生物电子等排体是选自以下的部分：

和以上的盐和前药，其中各R⁷独立为H或选自下组的任选取代的成员：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、C_3-8碳环和与其它任选取代的碳环或杂环任选稠合的C_3-8杂环；或者R⁷是被任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环取代的C_2-10杂烷基、C_1-10烷基或C_2-10烯基。在某些实施方式中，极性取代基选自下组：羧酸、羧酸酯、羧酰胺、四唑、三唑、羧基甲磺酰胺(carboxymethanesulfonamide)、二唑、氧代噻二唑(oxothiadiazole)、噻唑、氨基噻唑和羟基噻唑。在一些实施方式中，存在的至少一个R³是羧酸或其盐、或酯或生物电子等排体。在某些实施方式中，存在的至少一个R³是含羧酸的取代基或其盐、酯或生物电子等排体。在后一实施方式中，R³取代基可以是与羧酸(或其盐、酯或生物电子等排体)相连的C1-C10烷基或C1-C10烯基，例如，在一些实施方式中，R³取代基不是-NHCOOCH₂CH₃。

在某些实施方式中，Z¹-Z⁴和Z⁵-Z⁸中至少一个是氮原子，一个或多个环氮原子可以位于含Z¹-Z⁴的环或含Z⁵-Z⁸的环中，从而使得各环独立为任选取代的吡啶、嘧啶或哒嗪环。例如，含Z⁵-Z⁸的环内的一个或多个环氮原子可如下所示布置：

其中各R^6A、R^6B、R^6C和R^6D独立选自以上式I、II、III或IV所示化合物所限定的R⁶取代基。在某些实施方式中，Z¹-Z⁴或Z⁵-Z⁸中毗连的两个不均是N。

极性取代基可以位于式I、II、III或IV所示含Z¹-Z⁴的环中任何位置，该环可包含1、2、3或4个极性取代基。在某些实施方式中，Z¹-Z⁴可以各自为CR³，R³取代基中的一个可以是布置在含Z¹-Z⁴的环中任一位置的极性取代基(例如，羧酸酯基或羧酸酯，或四唑)：

其中R^3P是极性取代基，R^3A、R^3B、R^3C和R^3D各自独立选自R³取代基，R³取代基如以上式I、II、III或IV所示化合物所限定。

在上式所示化合物的某些实施方式中，R⁴是H。在一些实施方式中，R⁴是H或CH₃，R⁵任选取代的3-8员环，其可以是芳族、非芳族和碳环或杂环，或者R⁵是用这种任选取代的3-8员环取代的C_1-10烷基。在具体的实施方式中，R⁵是任选取代的5-、6-、或7-员碳环或杂环，有时是任选取代的苯环。

在一些涉及式I所示化合物的实施方式中，R⁴是H或CH₃，R⁵是用一个或多个卤素(例如，F、Cl)或炔属取代基(acetylene)取代的苯基，这些取代基有时位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合(例如，3-位和5-位)。

在某些实施方式中，R⁵是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C_1-2烷基，或用-NR⁴R⁴取代的C_1-2烷基，其中R⁴如上限定(例如，R⁵可以是-N(CH₃)₂)。在一些实施方式中，R³所示的极性基团是羧基、羧基烷基(例如，羧甲基)、四唑或酰胺(例如，-CONH₂)取代基。在一些实施方式中，R³代表羧酸生物电子等排体。

例如，在某些实施方式中，R⁶取代基，例如R^6B有时是-NR⁴R⁵取代基，如-NH-(C1-C6烷基)部分(如-NH-CH₃)。在一些实施方式中，化合物的结构如式I所示；R⁴是H或CH₃；R⁵是任选取代的5-、6-或7-员碳环或杂环，有时是任选取代的苯环；和一个R³是羧酸或其盐、酯或羧酸生物电子等排体。在一些实施方式中，化合物的结构如式I所示；R⁴是H或CH₃；R⁵是任选取代的5-、6-或7-员碳环或杂环，有时是任选取代的苯环；Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸中一个或两个是N。

在式I、II、III或IV所示化合物的一些实施方式中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是CR³，至少一个R³是H，或者至少两个R³是H。通常，至少一个R⁶是H，或者至少两个R⁶是H。在一些实施方式中，(i)Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁵、Z⁶，Z⁸各自是CR³和Z⁷是氮；或(ii)Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自是CR³，Z⁵是氮；或(iii)Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁶和Z⁸各自是CR³，Z⁵和Z⁷各自是氮。在某些实施方式中，除了存在的至少一个R³是极性取代基，存在的各R³和/或各R⁶是氢。在一些实施方式中，R^3A、R^3C、R^3D、R^6A、R^6B、R^6C和R^6D各自是H，R^3B是极性取代基(例如，羧酸酯基、羧酸、四唑)。

本文还提供式V、VI、VII或VIII之一所表示的式(A)化合物及其药学上可接受的盐、酯、前药和互变异构体：

式中Z¹、Z²、Z³、Z⁴、R⁴和R⁵如上式I、II、III和IV所示化合物所限定的，R^6A和R^6B各自独立选自以上式I、II、III和IV所示化合物所限定的R⁶取代基。与式I、II、III和IV所示化合物一样，存在的至少一个R³是极性取代基，例如上述极性取代基。描述式I、II、III和IV所示化合物的实施方式也适用于式V、VI、VII和VIII所示化合物。

某些实施方式提供结构如式V、VI、VII和VIII所示的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体；其中：

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立为N或CR³，Z¹、Z²、Z³和Z⁴中零个、一个或两个是N；

R³、R^6A和R^6B各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

或R³、R^6A和R^6B各自独立为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

其中同一原子或毗连原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环；

前提条件是如果式IV中的R⁵是苯基、取代的苯基、-CH(CH₃)-(CH₂)₃-NEt₂、-(CH₂)₃-哌嗪-(CH₂)₃-NH₂、环己烷或丁基，则存在的一个或多个R³是非氢部分。

在涉及式V、VI、VII和VIII所示化合物的一些实施方式中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是CR³，至少一个R³是H，或者至少两个R³是H。通常，R^6A和R^6B中至少一个是H，有时R^6A和R^6B各自是H。在某些实施方式中，除了存在的至少一个R³是极性取代基，存在的各R³和/或R^6A和R^6B各自为H。在一些实施方式中，R^3A、R^3C、R^3D、R^6A和R^6B各自是H，R^3B是极性取代基(例如，羧酸生物电子等排体、羧酸、四唑)。

在涉及式V所示化合物的某些实施方式中，R⁴是H或CH₃，R⁵是任选取代的5-、6-或7-员碳环或杂环(例如，任选取代的苯环)。在涉及式V所示化合物的一些实施方式中，R⁴是H或CH₃，R⁵是用一个或多个卤素(例如，F、Cl)或炔属取代基取代的苯环，这些取代基有时位于3-位、4-位或5-位或它们的组合(例如，3-位和5-位)。在某些实施方式中，R⁵是用任选取代的苯基、吡啶基、吗啉基或吡咯基取代基取代的C_1-3烷基，或用羟基取代基取代的C_1-3烷基或用-NR⁴R⁴取代的C_1-3烷基，其中R⁴如上限定(例如，R⁵可以是-N(CH₃)₂)。例如，在某些实施方式中，R⁶取代基，例如R^6A或R^6B，有时是-NR⁴R⁵取代基，例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如，-NH-CH₃)。

还提供式IX、X、XI和XII所示化合物及其药学上可接受的盐、酯、前药和互变异构体：

式中Z¹、Z²、Z³、Z⁴、R⁴、R⁵和R⁶如式I、II、III和IV所示化合物中所限定。与式I、II、III和IV所示化合物一样，存在的至少一个R³是极性取代基，例如上述极性取代基(例如，羧酸、羧酸酯基、四唑)。对于式IX所示化合物，R⁴和R⁵不均是氢，独立为H、-Y⁰或-LY¹，其中Y⁰是任选取代的5-员环或任选取代的6-员环(例如，杂环或碳环，各自可以是芳基或非-芳基)，Y¹是任选取代的5-员芳环或任选取代的6-员芳环，L是C1-C20烷基接头或C1-C20亚烷基接头(alkylene linker)。

一些实施方式提供了结构如式IX、X、XI和XII所示的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体；其中：

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是N或CR³，Z¹、Z²、Z³和Z⁴中零个、一个或两个是N；

R³和R⁶独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

或者R³和R⁶各自可以是卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

在各-NR⁴R⁵中，R⁴和R⁵可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员。

描述式I、II、III、IV、V、VI、VII和VIII所示化合物的实施方式也适用于式IX、X、XI和XII所示化合物。在涉及式IX、X、XI和XII所示化合物的一些实施方式中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³，至少一个R³是H，或者至少两个R³是H。R⁶通常是H，在某些实施方式中，除了存在的至少一个R³是极性取代基，存在的R⁶和R³各自是H。在一些实施方式中，各R^3A、R^3C、R^3D和R⁶是H，R^3B是极性取代基(例如，羧酸酯基、羧酸、四唑)。

在涉及式IX所示化合物的某些实施方式中，R⁴是H或CH₃，R⁵是任选取代的5-、6-或7-员碳环或杂环(例如，任选取代的苯环)。在涉及式IX所示化合物的一些实施方式中，R⁴是H或CH₃，R⁵是用一个或多个卤素(例如，F、Cl)或炔属取代基取代的苯环，这些取代基有时位于3-位、4-位或5-位或它们的组合(例如，3-位和5-位)。在某些实施方式中，R⁵是用任选取代的苯基、吡啶基、吗啉基或吡咯基取代基取代的C_1-3烷基，或用羟基取代基取代的C_1-3烷基或用-NR⁴R⁴(例如，-N(CH₃)₂)取代基取代的C_1-3烷基。例如，在某些实施方式中，R⁶有时是-NR⁴R⁵取代基，例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如，-NH-CH₃)。

还提供式XIII、XIV、XV和XVI所示化合物及其药学上可接受的盐、酯、前药和互变异构体：

式中：

Z⁵是N或CR^6A；

R^6A、R^6B、R^6C和R⁸各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

或者R^6A、R^6B、R^6C和R⁸各自独立为卤素、CF₃、CFN、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、羧基生物电子等排体、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

R⁹独立为任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，或

R⁹独立为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

n是0-4；和

p是0-4。

在式XIII、XIV、XV和XVI所示化合物的某些实施方式中，Z⁵是N。在一些实施方式中，R⁸是羧基部分，例如羧酸酯基或羧酸。在某些实施方式中，R⁹选自-C≡CR、-C≡CH、-CH₃、-CH₂CH₃、-CF₃、-CFN、-C≡N、-OR或卤素。在一些实施方式中，R⁹选自卤素、-C≡CR或-C≡CH。在某些实施方式中，R⁹选自卤素或-C≡CH，在一些实施方式中，R⁹是卤素、是氯、是溴或是-C≡CH。

本文还提供包含本文所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。药物组合物可用于本文所述的治疗方法。

还提供了鉴定与CK2或PARP蛋白质相互作用的候选分子的方法，该方法包括：将含CK2或PARP蛋白质和本文所述化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白质相互作用的条件下接触，和测定与没有候选分子时该化合物与该蛋白质的对照相互作用相比，与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此与对照相互作用相比，能调节与该蛋白质相互作用的化合物的含量的候选分子鉴定为能与该蛋白质相互作用的候选分子。在某些实施方式中，该蛋白质是CK2蛋白，例如包含SEQ ID NO：1、2或3所述氨基酸序列或其实质性相同变体的CK2蛋白：

SEQ ID NO：1(NP_001886；酪蛋白激酶IIα1亚单位同种型a[智人 (Homo sapiens)])

1 msgpvpsrar vytdvnthrp reywdyeshv vewgnqddyq lvrklgrgky sevfeainit

61 nnekvvvkil kpvkkkkikr eikilenlrg gpniitladi vkdpvsrtpa lvfehvnntd

121 fkqlyqtltd ydirfymyei lkaldychsm gimhrdvkph nvmidhehrk lrlidwglae

181 fyhpgqeynv rvasryfkgp ellvdyqmyd ysldmwslgc mlasmifrke pffhghdnyd

241 qlvriakvlg tedlydyidk ynieldprfn dilgrhsrkr werfvhsenq hlvspealdf

301 ldkllrydhq srltareame hpyfytvvkd qarmgsssmp ggstpvssan mmsgissvpt

361 psplgplags pviaaanplg mpvpaaagaq q

SEQ ID NO：2(NP_808227；酪蛋白激酶IIα1亚单位同种型a[智人])

1 msgpvpsrar vytdvnthrp reywdyeshv vewgnqddyq lvrklgrgky sevfeainit

61 nnekvvvkil kpvkkkkikr eikilenlrg gpniitladi vkdpvsrtpa lvfehvnntd

121 fkqlyqtltd vdirfymyei lkaldychsm gimhrdvkph nvmidhehrk lrlidwglae

181 fyhpgqeynv rvasryfkgp ellvdyqmyd ysldmwslgc mlasmifrke pffhghdnyd

241 qlvriakvlg tedlydyidk ynieldprfn dilgrhsrkr werfvhsenq hlvspealdf

301 ldkllrydhq srltareame hpyfytvvkd qarmgsssmp ggstpvssan mmsgissvpt

361 psplgplags pviaaanplg mpvpaaagaq q

SEQ ID NO：3(NP_808228；酪蛋白激酶IIα1亚单位同种型b[智人])

1 myeilkaldy chsmgimhrd vkphnvmidh ehrklrlidw glaefyhpgq eynvrvasry

61 fkgpellvdy qmydysldmw slgcmlasmi frkepffhgh dnydqlvria kvlgtedlyd

121 yidkynield prfndilgrh srkrwerfvh senqhlvspe aldfldkllr ydhqsrltar

181 eamehpyfyt vvkdqarmgs ssmpggstpv ssanmmsgis svptpsplgp lagspviaaa

241 nplgmpvpaa agaqq

在一些实施方式中，该蛋白质是PARP蛋白，例如包含SEQ ID NO：4所述氨基酸序列或其实质性相同变体的PARP蛋白：

SEQ ID NO：4(NP_001609；多聚(ADP-核糖)聚合酶家族，成员1[智人])

1 maessdklyr veyaksgras ckkcsesipk dslrmaimvq spmtdgkvph wyhfscfwkv

61 ghsirhpdve vdgfselrwd dqqkvkktae aggvtgkgqd gigskaektl gdfaaeyaks

121 nrstckgcme kiekgqvrls kkmvdpekpq lgmidrwyhp gcfvknreel gfrpeysasq

181 lkgfsllate dkealkkqlp gvksegkrkg devdgvdeva kkkskkekdk dsklekalka

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661 tksklpkpvq dlikmifdve smkkamveye idlqkmplgk lskrqiqaay silsevqqav

721 sqgssdsqil dlsnrfytli phdfgmkkpp llnnadsvqa kvemldnlld ievaysllrg

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961 nisldgvdvp lgtgissgvi dtsllyneyi vydiaqvnlk yllklkfnfk tslw

在某些实施方式中，该蛋白质处于细胞或无细胞的系统中。在一些实施方式中，蛋白质、化合物或分子与固相相连。在某些实施方式中，借助可检测标记检测化合物和蛋白质之间的相互作用，其中在一些实施方式中，蛋白质包含可检测标记，在某些实施方式中，化合物包含可检测标记。有时可不用可检测标记检测化合物与蛋白质之间的相互作用。

还提供了调节CK2蛋白或PARP蛋白活性的方法，该方法包括将含有该蛋白质的系统与调节该蛋白质活性有效量的本文所述化合物接触。在某些实施方式中，蛋白质的活性受抑制，有时蛋白质是CK2蛋白，例如包含SEQ ID NO：1、2或3所述氨基酸序列或其实质性相同变体的CK2蛋白。在一些实施方式中，蛋白质是PARP蛋白，例如包含SEQ ID NO：4所述氨基酸序列或其实质性相同变体的PARP蛋白。在某些实施方式中，所述系统是细胞，在其它实施方式中，所述系统是无细胞系统。在某些实施方式中，蛋白质或化合物可以连接于固相。

还提供了抑制细胞增殖的方法，该方法包括将细胞与抑制该细胞增殖有效量的本文所述化合物接触。有时细胞处于细胞系中，例如癌细胞系(例如，乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、造血癌症(hemopoietic cancer)、结肠直肠癌、皮肤癌、卵巢癌细胞系)。在一些实施方式中，癌细胞系是乳腺癌、前列腺癌或胰腺癌细胞系。有时细胞处于组织中，可以处于对象中，有时处于肿瘤中，有时处于对象的肿瘤中。在某些实施方式中，该方法还包括诱导细胞凋亡。有时细胞来自具有黄斑变性的对象。

还提供治疗与细胞异常增殖相关疾病的方法，该方法包括将治疗细胞增殖疾病有效量的本文所述化合物给予有此需要的对象。在某些实施方式中，细胞增殖疾病是肿瘤相关癌症。有时，癌症是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、皮肤癌或卵巢癌。在一些实施方式中，细胞增殖疾病是无肿瘤癌症(non-tumor cancer)，例如造血癌症。在一些实施方式中，细胞增殖疾病是黄斑变性。

还提供治疗需要这种治疗的对象的癌症或炎性疾病的方法，该方法包括：给予该对象治疗有效量的本文所述治疗剂；和给予该对象抑制PARP或CK2的分子，该分子的用量能有效增强该治疗剂的所需作用。有时，治疗剂是本文所述式TA1-1、TA2、TA3-1、TA4-1、TA5-1或TA6-1所示化合物，或这些化合物之一的药学上可接受的盐。在某些实施方式中，抑制PARP或CK2的分子是本文所述式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII所示化合物，或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，抑制PARP或CK2的分子是如上所示的已知化合物，或本文所提供的表格之一中的化合物，或这些化合物之一的药学上可接受的盐。在一些实施方式中，被抑制PARP或CK2的分子增强的治疗剂的所需作用是降低细胞增殖。在某些实施方式中，被抑制PARP或CK2的分子增强的治疗剂的所需作用是增加至少一种类型细胞的凋亡。在某些实施方式中，治疗剂是：

或其药学上可接受的盐，或其特定异构体或异构体的混合物。在一些实施方式中，基本上同时给予治疗剂和抑制PARP或CK2的分子。有时，对象同时使用治疗剂和抑制PARP或CK2的分子。在某些实施方式中，治疗剂和抑制PARP或CK2的分子组合在一个药物组合物中。一些实施方式涉及包含式TA1-1、TA2、TA3-1、TA4-1、TA5-1或TA6中任一所示治疗剂并混合了抑制PARP或CK2的分子或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一些药物组合物中，抑制PARP或CK2的分子是PARP抑制剂，是上述的已知化合物，或是GPI 15427、GPI 16539。在一些实施方式中，抑制PARP或CK2的分子是本文所述式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII所示化合物，或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，治疗剂是式TA2所示化合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方式中，治疗性组合物包含治疗有效量的式TA2所示治疗剂：

或其药学上可接受的盐，或其特定异构体或异构体的混合物，并混合有一定量的PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐，其中所述PARP抑制剂选自：GPI 15427、GPI 16539和上文所示的已知化合物；其中所述PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐的用量是增强所述治疗剂所需作用的有效量。

还提供了包含本文所述化合物和分离的蛋白质的组合物。有时，蛋白质是是CK2蛋白，例如包含SEQ ID NO：1、2或3所述氨基酸序列或其实质性相同变体的CK2蛋白。在一些实施方式中，蛋白质是PARP蛋白，例如包含SEQID NO：4所述氨基酸序列或其实质性相同变体的PARP蛋白。某些组合物包含本文所述化合物与细胞的组合。细胞可以来自细胞系，例如癌症细胞系。在后一实施方式中，有时，癌症细胞系是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、造血癌症、结肠直肠癌、皮肤癌、卵巢癌细胞系。

下文描述了本发明的这些和其它实施方式。

附图简述

图1描述了显示抑制CK2活性的试验数据。

图2A和2B显示了静脉内和口服给予ICR小鼠后，本文所述化合物对时间的平均血浆浓度。

图3A和3B分别显示了在给予本文所述化合物的带肿瘤异种移植动物中，肿瘤体积和体重随时间的变化。图3C和3D显示了各动物中化合物对肿瘤的作用。

图4A和4B分别显示了在给予本文所述化合物的带肿瘤异种移植动物中，肿瘤体积和体重随时间的变化。

本发明实施方式

式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV和XVI所示化合物能产生生物学活性，包括但不限于：抑制细胞增殖、调节蛋白激酶活性和调节聚合酶活性。例如，这些结构式所示化合物能调节CK2活性和/或PARP活性。因此，本领域普通技术人员可将这些化合物用于多种领域。例如，本文所述化合物的应用包括但不限于：(i)调节蛋白激酶活性(例如，CK2活性)，(ii)调节聚合酶活性(例如，PARP活性)，(iii)调节细胞增殖，(iv)调节凋亡，和(v)治疗细胞增殖相关疾病(例如，单独给予或与另一种分子共同给予)。

本文所用“任选取代的”表明所述的一个或多个特定基团可不具有非氢取代基，或者一个或多个基团可具有一个或多个非氢取代基。如果未另有说明，可存在的这种取代基的总数等于存在于未取代形式的所述基团上的H原子数。根据可用化合价的数目，如果任选的取代基通过双键连接，例如羰基氧(＝O)，则该基团使用了两个可用的化合价，因此可包括的取代基总数减少。

本发明化合物常具有可电离基团，从而能制备成盐。在该情形中，凡是述及化合物之处，本领域知道也可使用药学上可接受的盐。这些盐可以是涉及无机酸或有机酸的酸加成盐，或者以酸形式的本发明化合物为例，可由无机碱或有机碱制备所述盐。这些化合物常制备成或用作药学上可接受的盐，制备成药学上可接受的酸或碱的加成产物。本领域熟知合适的药学上可接受的酸和碱，例如用于形成酸加成盐的盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、柠檬酸或酒石酸，和用于形成碱性盐的氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡因、各种胺等。本领域熟知制备合适盐的方法。在一些情形中，这些化合物可同时含有酸性和碱性官能团，在这种情形中它们可具有两个可电离基团但没有净电荷。

在一些情形中，本发明化合物可含有一个或多个手性中心。本发明包括各种分离的立体异构体形式以及各种手性纯度的立体异构体混合物，包括外消旋混合物。还包括可以形成的各种非对映异构体和互变异构体。本发明化合物还可存在一种以上互变异构体形式；本文描述的一种互变异构体只是为了方便，还应知道包括所示形式的其它互变异构体。

本文所用的术语“烷基”、“烯基”和“炔基”包括直链、支链和环状单价烃基，以及这些基团的组合，这些基团在未取代时只包含C和H。例子包括甲基、乙基、异丁基、环己基、环戊基乙基、2-丙烯基、3-丁炔基等。有时，本文描述了这种基团各自的碳原子总数，例如当基团含有最多10个碳原子时，其表示为1-10C或C1-C10或C1-10。当允许杂原子(通常是N、O和S)替代碳原子时，例如杂烷基中，虽然描述基团的数字仍写作，例如C1-C6，但其表示该基团中的碳原子总数加上纳入所述环或链的主链中以替代碳原子的这种杂原子数。

本发明的烷基、烯基和炔基取代基通常含有1-10C(烷基)或2-10C(烯基或炔基)。它们优选含有1-8C(烷基)或2-8C(烯基或炔基)。有时，它们含有1-4C(烷基)或2-4C(烯基或炔基)。一个基团可包含一种以上类型的多重键，或一个以上多重键；当这种基团含有至少一个碳-碳双键时，它们属于术语“烯基”的定义，当这种基团含有至少一个碳-碳三键时，它们属于术语“炔基”的定义。

烷基、烯基和炔基常任选有一定程度的取代，这种取代是有化学意义的。典型的取代基包括但不限于：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR、＝NR、OR、NR₂、SR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、C≡CR、COOR、CONR₂、OOCR、COR和NO₂，其中各R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基，和各R任选被以下基团取代：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、C≡CR’、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，其中各R’独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基。烷基、烯基和炔基还可以被C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基取代，各取代基团可被适合特定基团的取代基取代。

“炔属取代基”是任选取代的2-10C炔基，如式-C≡C-R^a所示，其中R^a是H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

和各R^a基团任选被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，各取代基任选被选自下组的一个或多个基团取代：卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；其中两个R’可以相连以形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环。在一些实施方式中，-C≡C-R^a中的R^a是H或Me。

“杂烷基”、“杂烯基”和“杂炔基”等与相应烃基(烷基、烯基和炔基)的定义相似，但“杂”术语指在主链残基中含有1-3个O、S或N杂原子或它们的组合的基团；因此相应烷基、烯基或炔基的至少一个碳原子被所述杂原子之一取代从而形成杂烷基、杂烯基或杂炔基。烷基、烯基和炔基的杂合形式(heteroform)的典型而优选的大小通常与相应烃基的相同，杂合形式上可能存在的取代基与上述烃基的相同。出于化学稳定性的原因，还应知道除非另有规定，这些基团不包括多于两个的毗连杂原子，除了N或S上存在氧代基团，例如硝基或磺酰基。

虽然本文利用“烷基”包括环烷基和环烷基烷基，本文可用术语“环烷基”描述通过环碳原子相连的碳环非芳族基团，“环烷基烷基”可用于描述通过烷基接头与分子相连的碳环非芳族基团。类似地，“杂环基”可用于描述含有至少一个杂原子作为环成员并通过环原子与分子相连的非芳族环状基团，所述环原子可以是C或N；“杂环基烷基”可用于描述通过接头与另一分子相连的这种基团。适合于环烷基、环烷基烷基、杂环基和杂环基烷基的大小和取代基与上述烷基的相似。本文所用的这些术语还包括含有一个或两个双键的环，只要该环不是芳族的。

本文所用的“酰基”包括含有连接于羰基碳原子的两个可用化合价位置之一的烷基、烯基、炔基、芳基或芳基烷基的基团，“杂酰基”指其中除羰基碳以外的至少一个碳被选自N、O或S的杂原子取代的相应基团。因此，杂酰基包括，例如-C(＝O)OR和-C(＝O)NR₂以及-C(＝O)-杂芳基。

酰基和杂酰基通过羰基碳原子的开放化合价结合于与之相连的任何基团或分子。它们通常是C1-C8酰基，包括甲酰基、乙酰基、新戊酰基和苯甲酰基；和C2-C8杂酰基，包括甲氧基乙酰基、乙氧基羰基和4-哌啶甲酰基(pyridinoyl)。烃基、芳基和包含酰基或杂酰基的这些基团的杂合形式可被本文所述的取代基取代，例如通常适合于酰基或杂酰基各相应部分的取代基。

“芳族”部分或“芳基”部分指具有熟知芳香特征的单环或稠合双环部分；例子包括苯基和萘基。类似地，“杂芳族”和“杂芳基”指含有选自O、S或N的一个或多个杂原子作为环成员的这种单环或稠合双环系统。包含杂原子使得在5-员环以及6-员环中有芳香性。典型的杂芳族系统包括单环C5-C6芳族基团，例如吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、唑基和咪唑基以及通过将这些单环基团之一与苯环稠合形成的稠合双环部分，通过将这些单环基团之一与或任何杂芳族单环基团稠合以形成C8-C10双环基团，例如吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、异喹啉基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、吡唑并吡啶基(pyrazolopyridyl)、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基等。就遍布环系统的电子分布而言，该定义包括具有芳香性特征的任何单环或稠合双环系统。还包括双环基团，其中至少与该分子的其余部分直接相连的环具有芳香性特征。该环系统通常含有5-12个环成员原子。单环杂芳基优选含有5-6个环成员，双环杂芳基含有8-10个环成员。

可用各种取代基取代芳基和杂芳基部分，所述取代基包括C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-C12芳基、C1-C8酰基和这些取代基的杂合形式，这些取代基各自本身可被进一步取代；芳基和杂芳基部分的其它取代基包括卤素、OR、NR₂、SR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、C≡CR、COOR、CONR₂、OOCR、COR和NO₂，其中各R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，各R如以上烷基所述被任选取代。当然，芳基或杂芳基上的取代基可以用适合于这些取代基的各种类型或取代基的各部分的本文所述基团进一步取代。因此，例如可以用本文所述的芳基的典型取代基取代芳基烷基取代基的芳基部分，也可用本文所述的烷基的典型或合适取代基取代烷基部分。

类似地，“芳基烷基”和“杂芳基烷基”指通过连接基团，例如亚烷基，包括取代或未取代的、饱和或不饱和的、环状或非环状的接头而结合于它们的连接点的芳族和杂芳族环系统。所述接头通常是C1-C8烷基或其杂合形式。这些接头还可包括羰基，因而使得它们能提供取代基，例如酰基或杂酰基部分。可以用与上述芳基的相同取代基取代芳基烷基或杂芳基烷基中的芳环或杂芳环。芳基烷基优选包括用上述芳基的基团任选取代的苯环和C1-C4亚烷基，该亚烷基是未取代的或被一个或两个C1-C4烷基或杂烷基取代，其中所述烷基或杂烷基可任选环化形成环，例如环丙烷、二氧戊环或氧杂环戊烷。类似地，杂芳基烷基优选包括用上述芳基的典型取代基任选取代的C5-C6单环杂芳基和C1-C4亚烷基，该亚烷基是未取代的或被一个或两个C1-C4烷基或杂烷基取代，或者包括任选取代的苯环或C5-C6单环杂芳基和C1-C4杂亚烷基，所述C1-C4杂亚烷基是未取代的或被一个或两个C1-C4烷基或杂烷基取代，其中所述烷基或杂烷基可任选环化形成环，例如环丙烷、二氧戊环或氧杂环戊烷。

如果将芳基烷基或杂芳基烷基描述成任选取代的，则取代基可以位于该基团的烷基或杂烷基部分或芳基或杂芳基部分上。该烷基或杂烷基部分上任选存在的取代基通常与上述烷基的那些取代基相同；该芳基或杂芳基部分上任选存在的取代基通常与上述芳基的那些取代基相同。

如果本文所用的“芳基烷基”是未取代的，则它们是烃基，并且描述了环和亚烷基或类似接头中的碳原子总数。因此，苄基是C7-芳基烷基，苯乙基是C8-芳基烷基。

上述“杂芳基烷基”指含有通过连接基团相连的芳基的部分，其与“芳基烷基”的区别在于该芳基部分的至少一个环原子或连接基团中的一个原子是选自N、O或S的杂原子。本文根据环和与之结合的接头中的原子总数描述了杂芳基烷基，它们包括通过杂烷基接头相连的芳基；通过烃基接头，例如亚烷基相连的杂芳基；和通过杂烷基接头相连的杂芳基。因此，例如C7-杂芳基烷基可包括吡啶基甲基、苯氧基和N-吡咯基甲氧基。

本文所用的“亚烷基”指二价烃基；因为其是二价的，它能将两个其它基团连接在一起。通常其指-(CH₂)_n-，其中n是1-8，n优选是1-4，尽管有说明，但亚烷基还可被其它基团取代，可以是其它长度，开放的化合价无需处于某链的相对两端。因此，-CH(Me)-和-C(Me)₂-也可被称作亚烷基，例如可以是环状基团，如环丙烷-1，1-二基。如果亚烷基被取代，这些取代基包括本文所述通常存在于烷基上的那些取代基。

通常，包含在取代基中的任何烷基、烯基、炔基、酰基或芳基或芳基烷基或这些基团之一的任何杂合形式本身可任选被其它取代基取代。如果不对这些取代基另作描述，这些取代基的性质类似于关于原来的取代基本身所述的。因此，在例如R⁷是烷基的实施方式中，该烷基可任选被有化学意义且不破坏烷基本身大小限制的R⁷实施方式所列的其余取代基取代；例如，被烷基或烯基取代的烷基可简单地扩展这些实施方式的碳原子上限，不包括这种烷基。然而，被芳基、氨基、烷氧基、＝O等取代的烷基属于本发明的范围，这些取代基的原子不算在描述烷基、烯基等基团所用的数值内。如果未指定取代基的数目，这些烷基、烯基、炔基、酰基或芳基各自可根据其化合价而被许多取代基取代；具体地说，例如，任何这些基团可在其任何或所有可用的化合价处被氟原子取代。

本文所用的“杂合形式”指某基团，例如烷基、芳基或酰基的衍生物，其中所指定碳环基团的至少一个碳原子被选自N、O或S的杂原子取代。因此，烷基、烯基、炔基、酰基、芳基和芳基烷基的杂合形式分别是杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂酰基、杂芳基和杂芳基烷基。应该知道除了氧代基团连接于N或S以形成酰基或磺酰基，通常不超过两个的N、O或S原子顺序相连。

本文所用的“卤素”包括氟、氯、溴和碘。常优选氟和氯。

本文所用的“氨基”指NH₂，但在氨基描述为“取代的”或“任选取代的”的情形下，该术语包括NR’R”，其中各R’和R”独立为H，或是烷基、烯基、炔基、酰基、芳基或芳基烷基或这些基团之一的杂合形式，各烷基、烯基、炔基、酰基、芳基或芳基烷基或这些基团之一的杂合形式被本文所述适合于相应基团的取代基任选取代。该术语还包括其中R’和R”连接在一起形成3-8员环的形式，所述环可以是饱和的、不饱和的或芳族的，含有1-3个选自N、O或S的杂原子作为环成员并用所述适合于烷基的取代基任选取代，或者如果NR’R”是芳族基团，其可被所述的杂芳基的典型取代基任选取代。

本文所用的术语“碳环”指在环中只含有碳原子的环状化合物，而“杂环”指含有杂原子的环状化合物。碳环和杂环结构包括具有单环、双环或多环系统的化合物。

本文所用的术语“杂原子”指不是碳或氢的任何原子，例如氮、氧或硫。

杂环的说明性例子包括但不限于四氢呋喃、1，3-二氧戊环、2，3-二氢呋喃、吡喃、四氢吡喃、苯并呋喃、异苯并呋喃(isobenzofuran)、1，3-二氢异苯并呋喃、异噁唑、4，5-二氢异噁唑、哌啶、吡咯烷、吡咯烷-2-酮、吡咯、吡啶、嘧啶、八氢吡咯并[3，4 b]吡啶、哌嗪、吡嗪、吗啉、硫代吗啉(thiomorpholine)、咪唑、咪唑啉-2，4-二酮、1，3-二氢苯并咪唑-2-酮、吲哚、噻唑、苯并噻唑、噻二唑、噻吩、四氢噻吩1，1-二氧化物(dioxide)、二氮杂环庚烯、三唑、胍、二氮杂双环[2.2.1]庚烷、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷、2，3，4，4a，9，9a-六氢-1Hβ咔啉(carboline)、环氧乙烷、氧杂环丁烷、四氢吡喃、二噁烷、内酯、氮丙啶、氮杂环丁烷、哌啶、内酰胺，还可包括杂芳基。杂芳基的其它示范性例子包括但不限于呋喃、吡咯、吡啶、嘧啶、咪唑、苯并咪唑和三唑。

本文所用的术语“无机取代基”指不含有碳或含有与除氢以外的元素结合的碳的取代基(例如，元素碳、一氧化碳、二氧化碳和碳酸酯基(carbonate))。无机取代基的例子包括但不限于硝基、卤素、叠氮基、氰基、磺酰基、亚硫酰基、磺酸酯基(sulfonate)、磷酸酯基(phosphate)等。

本文所用的术语“治疗”指改善、缓解、减轻和除去某疾病或病症的症状。制剂或药物中含有治疗有效量的本文所述候选分子或化合物，该用量是能导致生物学作用，例如某些细胞(如癌细胞)凋亡、某些细胞增殖降低，或改善、缓解、减轻或除去某疾病或病症的症状的用量。该术语还指降低或终止细胞增殖速度(例如，减缓肿瘤生长或使之停滞)或减少增殖癌细胞数目(例如，除去部分或全部肿瘤)。这些术语还适用于降低感染了微生物的系统(例如，细胞、组织或对象)中的微生物滴度，降低微生物繁殖速度、减少微生物感染相关症状的数量或症状的作用，和/或从系统中除去可检测数量的微生物。微生物的例子包括但不限于：病毒、细菌和真菌。

本文所用的术语“凋亡”指内在的细胞自身破坏或自杀程序。细胞对触发刺激起反应而经历包括细胞缩小、细胞膜起泡及染色质聚集和断裂在内的级联事件。这些事件在细胞转变成膜结合颗粒的群集体(凋亡小体)中达到顶点，随后由巨噬细胞吞噬这些群集体。

本发明部分提供包含本文所述本发明范围内的至少一种化合物的药物组合物，和使用本文所述化合物的方法。例如，本发明部分提供鉴定与CK2或PARP蛋白相互作用的候选分子的方法，该方法包括将含有CK2或PARP蛋白和本文所述分子的组合物与候选分子接触，测定与该蛋白质相互作用的本文所述分子的含量是否得到调节，藉此将能调节与该蛋白质相互作用的本文所述分子的含量的候选分子鉴定为能与该蛋白质相互作用的候选分子。

还提供调节CK2蛋白或PARP蛋白活性的方法，该方法包括使含有该蛋白质的系统与调节(例如，抑制)该蛋白质活性有效用量的本文所述化合物接触。这种实施方式中的系统可以是无细胞系统或包含细胞的系统。还提供了减少细胞增殖和任选诱导凋亡的方法，该方法包括使细胞与降低细胞增殖有效量的本文所述化合物接触。这种实施方式中的细胞可以是在细胞系、组织或对象(例如，科研动物或人)中。相关实施方式提供包含本文所述化合物连同蛋白质或细胞，例如分离的蛋白质(如分离的CK2或其它丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶蛋白或PARP蛋白)或细胞系(如HCT-116细胞系)中细胞的组合物。

还提供调节丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶活性的方法。丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶催化三磷酸腺苷的γ磷酸转移至肽或蛋白质底物中的丝氨酸或苏氨酸氨基酸。因此，本文包括的方法包括将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶蛋白的系统与调节(例如抑制)该蛋白质活性有效量的本文所述化合物接触。在一些实施方式中，丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的活性是该蛋白质的催化活性(例如，催化三磷酸腺苷的γ磷酸转移至肽或蛋白质底物)。某些实施方式提供了鉴定与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶相互作用的候选分子的方法，该方法包括：将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和本文所述化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白质相互作用的条件下接触，和测定与没有候选分子时该化合物与该蛋白质的对照相互作用相比，与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此与对照相互作用相比，将能调节与该蛋白质相互作用的化合物的含量的候选分子鉴定为能与该蛋白质相互作用的候选分子。这种实施方式中的系统可以是无细胞系统或包含细胞的系统(例如，体外)。在一些实施方式中，蛋白质、化合物或分子与固相相连。在某些实施方式中，通过可检测标记物检测化合物与蛋白质之间的相互作用，其中，在一些实施方式中，蛋白质包含可检测标记物，而在某些实施方式中，化合物包含可检测标记物。有时不用可检测标记物检测化合物和蛋白质之间的相互作用。

丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶可来自任何来源，例如哺乳动物、猿或人。本文所述化合物可抑制的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的例子包括但不限于：CK2、CK2α2、Pim-1、CDK1/细胞周期蛋白B、c-RAF、Mer、MELK、DYRK2、Flt3、Flt3(D835Y)、Flt4、HIPK3、HIPK2、ZIPK和ZIPK的人形式。有时，丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶是在对应于人CK2所列位置含有一个或多个以下氨基酸的亚家族中一员：45位的亮氨酸、163位的甲硫氨酸和174位的异亮氨酸。这些蛋白激酶的例子包括但不限于CK2、STK10、HIPK2、HIPK3、DAPK3、DYK2和PIM-1的人形式。公众可获得丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的核苷酸和氨基酸序列及试剂(例如，万维网URL ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez/和Invitrogen.com)。

本发明还部分提供治疗与异常细胞增殖相关疾病的方法。例如，提供了治疗对象中细胞增殖疾病的方法，该方法包括将治疗细胞增殖疾病有效量的本文所述化合物给予有此需要的对象。对象可以是任选含有肿瘤，例如异种移植肿瘤(例如，人肿瘤)的科研动物(例如，啮齿类、狗、猫、猴)，或者可以是人。有时，细胞增殖疾病是肿瘤或无肿瘤癌症，包括但不限于结肠直肠、乳腺、肺、肝、胰腺、淋巴结、结肠、前列腺、脑、头和颈、皮肤、肝、肾、血液和心脏的癌症(例如，白血病、淋巴瘤、癌瘤)。

还提供了治疗炎症或疼痛相关疾病的方法。例如，提供了治疗对象疼痛的方法，该方法包括将治疗疼痛有效量的本文所述化合物给予有此需要的对象。还提供了治疗对象中炎症的方法，该方法包括将治疗炎症有效量的本文所述化合物给予有此需要的对象。对象可以是，例如科研动物(如啮齿类、狗、猫、猴)，或者可以是人。炎症和疼痛相关疾病包括但不限于：酸回流(acid reflux)、烧心、痤疮、变态反应和敏感性、阿尔茨海默病、哮喘、动脉粥样硬化、支气管炎、心脏炎、乳糜泻、慢性疼痛、克罗恩病、肝硬化、大肠炎、痴呆、皮炎、糖尿病、干眼症、水肿、肺气肿、湿疹、纤维肌痛、胃肠炎、龈炎、心脏疾病、肝炎、高血压、胰岛素耐受、间质性膀胱炎、关节痛/关节炎/类风湿性关节炎、代谢综合征(X综合征)、肌炎、肾炎、肥胖症、骨质减少、骨质疏松症、帕金森病、牙周病、多动脉炎、多软骨炎、银屑病、硬皮病、鼻窦炎、斯耶格仑综合征、痉挛性结肠、全身性念珠菌病、腱炎、尿路感染、阴道炎、炎性癌症(例如炎性乳腺癌)等。已知测定本文所述化合物对疼痛或炎症的作用的方法。例如，可在给予本文所述化合物后监测科研动物中福尔马林刺激疼痛行为以评估疼痛的治疗(例如，Li等，Pain 115(1-2)：182-90(2005))。例如，还可在给予本文所述化合物后监测促炎分子(例如，IL-8、GRO-α、MCP-1、TNFα和iNOS)的调节以评估炎症的治疗(例如，Parhar等，Int J Colorectal Dis.22(6)：601-9(2006))。因此，还提供了测定本文所述化合物是否减轻炎症或疼痛的方法，该方法包括将某系统与调节(例如，抑制)疼痛信号或炎症信号活性有效量的本文所述化合物接触。还提供了鉴定减轻炎症或疼痛的化合物的方法，该方法包括将某系统与式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触；和检测疼痛信号或炎症信号，藉此与对照分子相比，将能调节疼痛信号的化合物鉴定为能减轻炎症或疼痛的化合物。疼痛信号的非限制性例子是福尔马林刺激疼痛行为，炎症信号的例子包括但不限于促炎分子的水平。

本发明还部分涉及调节对象中血管生成的方法，和治疗对象中与血管生成异常相关的疾病的方法。因此，提供了测定本文所述化合物是否能调节血管生成的方法，该方法包括将某系统与调节(例如，抑制)血管生成或血管生成相关信号有效量的本文所述化合物接触。血管生成相关信号是促血管生成生长因子，例如VEGF的水平。已知评估血管生成的调节情况的方法，例如分析人内皮管形成(human endothelial tube formation)(BD生物科学公司(BD Biosciences)的BD BioCoat^TM血管生成系统)。还提供了鉴定调节血管生成的化合物的方法，该方法包括将系统与式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触；和检测该系统中血管生成或血管生成信号，藉此与对照分子相比，将能调节血管生成或血管生成信号的化合物鉴定为能调节血管生成的化合物。还提供了治疗血管生成疾病的方法，该方法包括将治疗血管生成疾病有效量的本文所述化合物给予有此需要的对象。血管生成疾病包括但不限于实体瘤癌症、静脉曲张疾病(varicose disease)等。

可制备用于给药的上述化合物的任何合适制剂。可采用任何合适的给药途径，包括但不限于口服、胃肠外、静脉内、肌肉内、透皮、局部和皮下途径。根据待治疗的对象、给药方式和所需的治疗类型，例如防止、预防、治疗；可采用与这些参数相协调的方法配制这些化合物。本领域已知适合于各给药途径的合适制剂的制备方法。这些配制方法和技术的总结见通过引用纳入本文的Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，最新版，马克出版社(Mack Publishing Co.)，伊斯顿，宾夕法尼州。各物质的制剂或两种物质的组合的制剂通常包含稀释剂，在一些情形中还包含佐剂、缓冲剂、防腐剂等。待给予的物质还可在脂质体组合物中或作为微乳剂给予。

对于注射，可将制剂制备成常规形式，例如液体溶液或悬液或先制备成适合用于溶液或液体悬液的固体形式再注射或制备成乳剂。合适的赋形剂包括，例如水、盐水、葡萄糖、甘油等。这些组合物还可包含一定量的无毒辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等，如乙酸钠、失水山梨醇单月桂酸酯等等。

还设计了各种药物缓释系统，这些系统适用于本发明化合物。参见，例如美国专利号5,624,677，其方法通过引用纳入本文。

全身性给药还可包括相对非侵入性方法，例如利用栓剂、透皮贴剂、经粘膜递送和鼻内给药。口服给药也适合于本发明化合物。合适的形式包括糖浆、胶囊、片剂，如本领域所知的。

对于动物或人对象的给药，上述化合物的合适剂量常是0.01-15mg/kg，有时是0.1-10mg/kg。剂量水平依赖于疾病的性质、药效、患者的情况、从业医师的判断和给药的频率及方式；然而，本领域普通技术人员能优化这些参数。

治疗组合

本发明提供治疗疾病，例如癌症和炎症的方法，该方法将治疗有效量的结合某些DNA区段的治疗剂给予需要这种治疗的对象并将增强该治疗剂活性有效量的PARP或CK2调节剂给予同一对象。PARP或CK2调节剂是抑制或增强PARP蛋白或CK2蛋白的生物学活性的药剂，下文通常称为“调节剂”。可将治疗剂和调节剂作为不同的药物组合物或混合在单一药物组合中一起给予。还可分别给予治疗剂和调节剂，包括在不同时间并以不同频率给予，只要给予调节剂之时能增加治疗剂的效力。可通过任何已知的途径给予调节剂，例如口服、静脉内、肌肉内、鼻部等；还可通过任何常规途径给予治疗剂。在许多实施方式中，可口服给予调节剂和治疗剂中的至少一种和任选两种。

在一些实施方式中，同时给予调节剂和治疗剂，无论是以分开的剂量或混合在单一剂量中。如果可将两种物质的给予频率调节相匹配，优选将调节剂和治疗剂混合在单一药物组合物中，因此所治疗的患者可接受例如一次口服剂量或一次注射。

这些物质各自的给予量可根据给药途径、对象的状况、给予对象的其它治疗和其它参数而有所不同。当然，本发明治疗剂可导致多种所需作用；与治疗剂联用的调节剂的用量应是能增加这些所需作用中一种或多种的用量。调节剂的给予量应能有效增强治疗剂的所需作用。如本文所用的，如果某用量将一种治疗剂的至少一种所需作用增加至少约25％，则该用量能“有效增强治疗剂的所需作用”。优选将治疗剂的所需作用增加至少50％或至少100％(即，使得治疗剂的有效活性翻倍)的用量。在一些实施方式中，是将治疗剂的所需作用增加至少200％的用量。

可采用体外方法，例如细胞增殖试验测定增加治疗剂所需作用的调节剂用量。本发明治疗剂可用于抵御过度增殖疾病，例如癌症，因此它们能降低细胞增殖。因此，例如调节剂的合适量可以是采用细胞增殖试验测定到将治疗剂的抗增殖作用增强至少25％的所需用量。

本发明所用的调节剂增强与之联用的治疗剂所产生的至少一种所需作用，因此本发明的组合提供协同作用，而不仅仅是相加作用。调节剂本身有时用于治疗相同类型疾病，因此在这些试验中还可具有一定直接作用。在该情况中，“增加所需作用的有效量”必须是由于调节剂导致治疗剂作用增强的治疗剂活性的协同增强，而不是分别给予该两种物质而可以预料的简单相加作用。在许多情形中，预计调节剂的用量(浓度)对所治疗的对象或在体外试验中没有明显作用，因此该组合获得的增强作用直接归功于协同作用。

本发明包括用本文所述治疗剂和本文所述“调节剂”治疗具有细胞增殖疾病或炎性疾病的患者的方法和组合物，其中调节剂的给予时间使得它能增强治疗剂的所需作用。

PARP和CK2的调节剂是已知的。本领域熟知PARP抑制剂，一些抑制剂已显示能增强某些应用的其它药物的活性。例如，已有报道说用某浓度的单用无实质性生长抑制或细胞毒性的PARP抑制剂处理癌细胞菌落能实质性增加细胞毒性剂替莫唑胺和托泊替康的活性。C.R.Calabrese等，Clin.Cancer Res.，第9卷，2711-18(2003年7月)。据信，该作用与PARP在DNA修复中所起的作用有关：因为PARP促进受损DNA的修复，认为其能增强通过破坏DNA而起作用的化合物的作用。这些化合物包括能烷化DNA的化合物，包括替莫唑胺和拓扑异构酶抑制剂，例如托泊替康。同上。

本发明涉及上述“调节剂”与通过结合DNA中能形成某些四链结构(quadruplex structure)的区域而起作用的治疗剂联用；治疗剂本身有抗癌症活性，但当与调节剂联用时它们的活性增强。该协同作用允许以较低剂量给予治疗剂，而仍能获得等效或较高水平的至少一种所需作用。

本发明治疗剂是结合核酸中某些基序的化合物。要用的治疗剂可选自几个不同类别的化合物，例如结合DNA中四链形成区域的那些化合物。治疗剂可用于治疗癌症和其它适应症，例如炎性疾病，本领域已知制备和使用它们的方法。几种优选的治疗剂类别如下所述。各类治疗剂可与任何活性PARP抑制剂联用，包括但不限于本文公开的。

在一方面，治疗剂可以是式(TA1-1)所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药：

式中V是H、卤素或NR¹R²；

A是H、氟或NR¹ ₂；

Z是O、S、NR¹或CH₂；

U是OR²或NR¹R²；

X是OR²、NR¹R²、卤素、叠氮基或SR²；

n是1-3；

其中在NR¹R²中，R¹和R²可以形成双键或环，二者各被任选取代；

R¹是H或C_1-6烷基；

R²是H或任选含有一个或多个选自N、O或S的不毗连杂原子并且任选被碳环或杂环取代的C_2-10烯基或C_1-10烷基；或者R²是任选取代的杂环、芳基或杂芳基；

R⁵是W上任何位置的取代基；其是H、OR²、C_1-6烷基、C_2-6烯基、各自任选被卤素、＝O或一个或多个杂原子取代；或者R⁵是无机取代基；和

W是任选取代的芳基或杂芳基，其可以是单环或与单环或多环稠合并任选含有杂原子；

或式(TA1-2)所示化合物：

式中V、A、X、Z和U如式TA1-1中所限定，W选自下组：

式中Q、Q¹、Q²和Q³独立为CH或N；

Y独立为O、CH、＝O或NR¹；和

R⁵如式1中所限定。

该结构的化合物、制备和使用它们的方法描述于Whitten等于2005年4月15日提交的美国专利申请序列号11/106,909，该申请名为“SUBSTITUTEDQUINOBENZOXAZINE ANALOGS AND METHODS OF USINGTHEREOF”(取代的喹诺苯并噁嗪类似物及其使用方法)。

在式(TA1-1)所示治疗剂的具体实施方式中，该治疗剂是式(TA1-1A)所示化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药，或其特定的异构体或异构体混合物：

在另一方面，本发明组合的治疗剂是下式所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药：

式中V是H、卤素或NR¹R²；

A是H、氟或NR¹ ₂；

Z是O、S、NR¹或CH₂；

U是OR²或NR¹R²；

X是OR²、NR¹R²、卤素、叠氮基或SR²；

n是1-3；

R¹是H或C_1-6烷基；

R⁵是W上任何位置的取代基；其是H、OR²、C_1-6烷基、C_2-6烯基，各自任选被卤素、＝O或一个或多个杂原子取代；或者R⁵是无机取代基；和

或式(TA3-2)所示化合物：

式中V、A、X、Z和U如式1中所限定，W选自下组：

式中Q、Q¹、Q²和Q³独立为CH或N；

Y独立为O、CH、＝O或NR¹；和

R⁵如式1一样限定。

式(TA3-1)所示这些化合物的制备和活性描述于Nagasawa等于2006年6月8日提交的美国专利申请序列号60/811,992，该申请名为“QUINOLONEANALOGS DERIVATIZED WITH SULFONIC ACID，SULFONATE ORSULFONAMIDE”(用磺酸、磺酸酯或磺酰胺衍生的喹诺酮类似物)。

式中，如果Z²、Z³或Z⁴分别为N，B、X、A或V不存在，而如果Z²、Z³或Z⁴分别为C，B、X、A或V独立为H、卤素、叠氮基、R²、CH₂R²、SR²、OR²或NR¹R²；或者

A和V，A和X，或X和B可形成各自可任选取代和/或与环稠合的碳环、杂环、芳基或杂芳基；

Z是O、S、NR¹、CH₂或C＝O；

Z¹、Z²、Z³和Z⁴是C或N，只要任意两个N不毗连；

W与N和Z一起形成任选取代的5-或6-员环，该环与任选取代的饱和或不饱和环稠合；所述饱和或不饱和环可含有杂原子，并且所述饱和或不饱和环是单环或与一个或多个碳环或杂环稠合；

U是R²、OR²、NR¹R²、NR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴或N＝CR¹R²，其中在N＝CR¹R²中，R¹和R²可与C一起形成环，

前提条件是U不是H，并且当U是OH、OR²或NH₂时，Z¹-Z⁴中至少一个是N；

在各NR¹R²中，R¹和R²可与N一起形成任选取代的环；

在NR³R⁴中，R³和R⁴可与N一起形成任选取代的环；

R¹和R³独立为H或C_1-6烷基；

各R²是H或各自任选用卤素、一个或多个不毗连杂原子、碳环、杂环、芳基或杂芳基取代的C_1-10烷基或C_2-10烯基，其中各环是任选取代的；或者R²是任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基；

R⁴是H、任选含有一个或多个选自N、O或S的不毗连杂原子并且任选被碳环或杂环取代的C_2-10烯基或C_1-10烷基；或者R³和R⁴可与N一起形成任选取代的环；

各R⁵是环W上任何位置的取代基；其是H、OR²、氨基、烷氧基、酰氨基、卤素、氰基或无机取代基；或者R⁵是C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、-CONHR¹，它们各自任选被卤素、羰基或一个或多个非毗连杂原子取代；或者两个毗连R⁵相连获得5-6员任选取代的碳环或杂环，该碳环或杂环可与其它任选取代的碳环或杂环稠合；和

n是1-6。

在以上式(TA4-1)，当Z¹是N时，B可以不存在，或者当Z¹是C时，B是H或卤素。

在上式(TA4-1)，W与N和Z一起形成任选取代的5-或6-员环，该环与选自下组的任选取代的芳基或杂芳基稠合：

式中各Q、Q¹、Q²和Q³独立为CH或N；

Y独立为O、CH、C＝O或NR¹；

n和R⁵如上所限定。

在其它实施方式中，W与N和Z一起形成下式所示的基团：

式中Z是O、S、CR¹、NR¹或C＝O；

各Z⁵是CR⁶、NR¹或C＝O，前提条件是如果Z和Z⁵毗连的话，二者不全是NR¹；

各R¹是H、C_1-6烷基、COR²或S(O)_pR²，其中p是1-2；

R⁶是H或本领域已知的取代基，包括但不限于炔基、烷基、烷氧基、卤素、氨基或酰氨基；和

环S和环T可以是饱和或不饱和的。

在一些实施方式中，W与N和Z一起形成与苯基稠合的5-或6-员环。在其它实施方式中，当U是NR¹R²时，只要U不是NH₂，W与N和Z一起形成与另一环任选稠合的5-或6-员环。在某些实施方式中，当U是NR¹R²(例如，NH₂)时，W与N和Z一起形成不与另一环稠合的5-或6-员环。

在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA4-2A)或(TA4-2B)所示：

式中A、B、V、X、U、Z、Z¹、Z²、Z³、Z⁴和n如TA4-1所述；

Z⁵是O、NR¹、CR⁶或C＝O；

R⁶是H、C_1-6烷基、羟基、烷氧基、卤素、氨基或酰氨基；和

Z和Z⁵可任选形成双键。

在上式(TA4-1)、(TA4-2A)和(TA4-2B)中，U可以是NR¹R²，其中R¹是H，R²是任选被杂原子取代的C_1-10烷基、C_3-6环烷基、芳基或含有一个或多个N、O或S的5-14员杂环。例如，R²可以是被任选取代的吗啉、硫代吗啉、咪唑、氨基二噻二唑(aminodithiadazole)、吡咯烷、哌嗪、吡啶或哌啶取代的C_1-10烷基。在其它实例中，R¹和R²与N一起形成任选取代的哌啶、吡咯烷、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、咪唑或氨基二噻唑(aminodithiazole)。

式(TA4-1)所示化合物、制备和使用它们的方法描述于Whitten等于2005年9月16日提交的美国专利申请号11/228,636，该申请名为“QUINOLONEANALOGS”(喹诺酮类似物)。

在还有另一方面，与PARP抑制剂组合的治疗剂可选自下式所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药：

式中，当V、X和Y与除氮以外的杂原子相连时，它们不存在，而当与C或N相连时，它们独立为H、卤素、叠氮基、R²、CH₂R²、SR²、OR²或NR¹R²；或

式中V和X，或X和Y可形成碳环、杂环、芳基或杂芳基，各自可以是任选取代的和/或与环稠合；

Z¹、Z²和Z³是C、N、O或S；

Z是O、S、NR²、CH²或C＝O；

W与N和Z一起形成与任选取代的芳基或杂芳基稠合的任选取代的5-或6-员环，其中所述芳基或杂芳基可以是单环或与单环或多环稠合，其中所述环任选含有杂原子；

U是-C(＝O)R²、-COOR²、-CONR¹R²、-CONR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴、SO₃R²、SO₂NR¹R²、SO₂NR¹NR¹R²、SO₂NR¹OR²、SO₂NR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴或SO₂NR¹NR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴或SO₂NR¹-O-(CR¹ ₂)_n-NR³R；

其中在各NR¹R²中，R¹和R²与N一起形成任选取代的环；

在NR³R⁴中，R³和R⁴与N一起形成任选取代的环；

R¹和R³独立为H或C_1-6烷基；

各R²是H或各自任选被卤素、一个或多个选自N、O或S的非毗连杂原子、碳环、杂环、芳基或杂芳基取代的C_1-10烷基或C_2-10烯基，其中各环是任选取代的；或者R²是任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基；或者R²是COR¹或S(O)_xR¹，其中x是1-2；

R⁴是H、任选含有一个或多个选自N、O或S的非毗连杂原子并且任选被碳环或杂环取代的C_2-10烯基或C_1-10烷基；或者R³和R⁴与N一起可形成任选取代的环；

各R⁵是W上任何位置的取代基；其是H、OR²、氨基、烷氧基、酰氨基、卤素、氰基或无机取代基；或者R⁵是C_1-6烷基、C_2-6烯基、-CONHR¹，它们各自任选被卤素、羰基或一个或多个非毗连杂原子取代；或者两个毗连R⁵相连以获得5-6员任选取代的碳环或杂环，该碳环或杂环任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合；和

n是1-6。

在上述(TA5-1)中，环T可形成选自下组的任选取代的5-员环：

在上式(TA5-1)中，W与N和Z一起可形成任选取代的5-或6-员芳环或杂芳环，所述芳环或杂芳环与选自下组的任选取代的芳基或杂芳基稠合：

式中各Q、Q¹、Q²和Q³独立为CH或N；

P独立为O、CH、C＝O或NR¹；

n和R⁵如上限定。

在这些化合物的其它实施方式中，W与N和Z一起可形成选自以下结构式所示的基团：

式中Z是O、S、NR²、CH₂或C＝O；

各Z⁴是CR⁶、NR²或C＝O；

R⁶是H或本领域已知的取代基，包括但不限于羟基、烷基、烷氧基、卤素、氨基或酰氨基；和

环S和M可以是饱和或不饱和的。

在一些实施方式中，W与N和Z一起可形成与苯基稠合的5-或6-员环。

在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA5-2A)或(TA5-2B)所示：

式中U、V、W、X、Y、Z、Z¹、Z²、Z³、R⁵和n如以上TA5-1所述；

Z⁴是CR⁶、NR²或C＝O；和

Z和Z⁴可任选形成双键。

在上式(TA5-1)、(TA5-2A)和(TA5-2B)中，U可以是SO₂NR¹R²，其中R¹是H，R²是任选被杂原子、C_3-6环烷基、芳基或含有一个或多个N、O或S的5-14员杂环取代的C_1-10烷基。例如，R²可以是被任选取代的吗啉、硫代吗啉、咪唑、氨基二噻二唑、吡咯烷、哌嗪、吡啶或哌啶取代的C_1-10烷基。在其它实例中，R¹和R²与N一起形成任选取代的哌啶、吡咯烷、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、咪唑或氨基二噻唑。

在这些化合物的其它实施方式中，U是SO₂NR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴；n是1-4；各R¹是H或烷基；NR³R⁴中的R³和R⁴一起形成任选取代的哌啶、吡咯烷、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、咪唑或氨基二噻唑。在一些实例中，U是SO₂NH-(CH₂)_n-NR³R⁴，式中R³和R⁴与N一起形成任选取代的吡咯烷，其可在该吡咯烷环中的任何位置连接于(CH₂)_n。在一个实施方式中，R³和R⁴与N一起形成N-甲基取代的吡咯烷。

在一个实施方式中，本发明提供式(TA5-1)、(TA5-2A)或(TA5-2B)所示化合物，式中：

如果V和Y存在，各自独立为H或卤素(例如，氯或氟)；

X是-(R⁵)R¹R²，式中R⁵是C或N，其中在各-(R⁵)R¹R²中，R¹和R²一起可形成任选取代的芳环或杂芳环；

Z是NH或N-烷基(例如，N-CH₃)；

W与N和Z一起可形成与任选取代的芳环或杂芳环稠合的任选取代5-或6-员环；和

U是-SO₂R⁵R⁶-(CH₂)_n-CHR²-NR³R⁴，式中R⁵是CR¹或N；R¹是H或烷基；R⁶是H或C_1-10烷基，其中在-CHR²-NR³R⁴部分中，各R³或R⁴与C一起可形成任选取代的杂环或杂芳环，或者其中在-CHR²-NR³R⁴部分中，各R³或R⁴与N一起可形成任选取代的碳环、杂环、芳环或杂芳环。

在另一实施方式中，本发明提供式(TA5-1)、(TA5-2A)或(TA5-2B)所示化合物，式中：

如果V和Y存在，其是H或卤素(例如，氯或氟)；

如果X存在，其是-(R⁵)R¹R²，其中R⁵是C或N，其中在各-(R⁵)R¹R²中，R¹和R²一起可形成任选取代的芳环或杂芳环；

Z是NH或N-烷基(例如，N-CH₃)；

W与N和Z一起形成与任选取代的芳环或杂芳环稠合的任选取代的5-或6-员环；和

U是-SO₂R⁵R⁶-(CH₂)_n-CHR²-NR³R⁴，

R⁵是CR¹或N；

R⁶是H或烷基，其中在-CHR²-NR³R⁴部分中，各R³或R⁴与C一起可形成任选取代的杂环或杂芳环，或者其中在-CHR²-NR³R⁴部分中，各R³或R⁴与N一起可形成任选取代的碳环、杂环、芳环或杂芳环。

在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA5-3)所示：

式中U、V、X、Y、Z、Z¹、Z²、Z³、R⁵和n如上所述。

在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA5-4A)或(TA5-4B)所示：

式中U、V、X、Z、R⁵和n如以上关于TA5-1所述。

式(TA5-1)所示化合物和它们的制备及使用方法描述于Pierre等于2006年6月8日提交的美国专利申请序列号60/811,990，名为PYRIDINONEANALOGS(吡啶酮类似物)，和Nagasawa等于2007年3月1日提交的美国临时专利申请，代理人案件号为53223-3003001。

在还有另一方面，用于本发明组合的治疗剂可以是下式所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药：

式中X是H、OR²、NR¹R²、卤素、叠氮基、SR²或CH₂R；

A是H、卤素、NR¹R²、SR²、OR²、CH₂R²、叠氮基或NR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴；

Z是O、S、NR¹或CH₂；

U是R²、OR²、NR¹R²或NR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴，只要U不是H；

W是任选取代的芳基或杂芳基，其可以是单环或与任选含有杂原子的单环或多环稠合；

其中在NR¹R²中，R¹和R²与N一起，在NR³R⁴中，R³和R⁴与N一起可独立形成含N和任选的O或S的任选取代5-6员环；

R¹和R³独立为H或C_1-6烷基；和

R²和R⁴独立为H、或任选含有一个或多个选自N、O或S的非毗连杂原子并任选被取代或未取代的芳环、杂芳环碳环或杂环取代的C_2-10烯基或C_1-10烷基；或者R²任选是环烷基、取代的杂环、芳基或杂芳基；

R⁵是W上任何位置处的取代基，其是H、卤素、氰基、叠氮基、-CONHR¹、OR²、或C_1-6烷基或C_2-6烯基，各任选被卤素、＝O或一个或多个杂原子取代；

前提条件是X和A不都是H，还有当A是H、卤素或NR¹R²时，R⁵是氰基或-CONHR¹；

或式(TA6-1A)所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药：

A是H、卤素、叠氮基、SR²、OR²、CH₂R²、NR¹R²或NR¹-(CR¹ ₂)_n-NR³R⁴；

Z、U、W、R¹、R²、R³和R⁴如式TA6-1中所限定；和

其中式TA6-1和-1A中各任选取代的部分被一个或多个卤素、氰基、叠氮基、乙酰基、酰氨基、OR²、NR¹R²、氨基甲酸酯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基取代，各基团被卤素、＝O、芳基或一个或多个选自N、O或S的杂原子任选取代；或被芳环、碳环或杂环取代。

在上式TA6-1或TA6-1A中，W可选自下组：

式中Q、Q¹、Q²和Q³独立为CH或N；

Y独立为O、CH、＝O或NR¹；和

R⁵如式1所限定。

在这些化合物的一些实施方式中，上式TA6-1或TA6-1A中的各W可以是任选取代的苯基、吡啶、联苯基、萘、菲、喹啉、异喹啉、喹唑啉、噌啉、2，3-二氮杂萘、喹喔啉、吲哚、苯并咪唑、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并呋喃、蒽酮、呫吨酮、吖啶酮、芴酮、咔唑基、嘧啶并[4，3-b]呋喃、吡啶并[4，3-b]吲哚、吡啶并[2，3-b]吲哚、芴酮、吖啶或酚嗪(acridizine)。在一些实施方式中，W是任选取代的苯基。

式(TA6-1)所示化合物，制备和使用它们的方法描述于Whitten等于2006年4月14日提交的美国专利申请序列号11/404,947，其名为QUINOBENZOXAZINE ANALOGS AND METHODS OF USINGTHEREOF(喹诺苯并噁嗪类似物及其使用方法)。

本发明联用上述治疗剂与至少一种调节剂。本领域已知PARP抑制剂的例子，它们描述于，例如C.R.Calebrese等，Clin.Cancer Res.第9卷，2711-18(2003)；S.J.Veuger等，Cancer Res.第63卷，6008-15(2003)；C.R.Calabrese等，J.Nat’l.Cancer Inst.96(1)，56-67(2004)；“Potent Novel PARPInhibitors”(强效的新PARP抑制剂)，Expert Reviews in Molecular Medicine，第7(4)卷(2005年3月)；和P.Jagtap，Nature Rev.： Drug Discovery，第4卷，421-40(20045)。这些文献中所揭示的PARP抑制剂适用于本发明的方法和组合物。可用的其它PARP抑制剂包括，例如10-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-2H-7-氧杂-1，2-二氮杂-苯并[de]蒽-3-酮(GPI 15427)和2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5H-苯并[c][1，5]二氮杂萘-6-酮(GPI 16539)。参见，Di Paola等，Eur.J.Pharmacology，527(1-3)，163-71(2005)。适用于本发明的PARP抑制剂的代表性但非限制性例子包括下文所示的已知化合物，包括其药学上可接受的盐和其单独异构体或异构体的混合物。

三环内酰胺吲哚三环苯并咪唑 AG14361

TI3：R＝4’-F R＝H

R＝H R＝2-Cl

R＝3-NH2

R＝2-OH

可与上述治疗剂联用的调节剂还包括具有本文所述的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII所示结构的化合物。

化合物TA1-1A是用于本发明方法和组合物的优选治疗剂。其配制和给药的合适方法的更多细节见Lim等于2006年6月3日提交的美国临时申请序列号60/803,864。

本发明还部分提供包含属于本文所述本发明范围的至少一种治疗剂与至少一种调节剂的组合的药物组合物。所述组合物可任选包含稀释剂或其它药学上可接受的赋形剂。

对于动物或人对象的给药，治疗剂的合适剂量通常是0.01-15mg/kg，优选0.1-10mg/kg。剂量水平依赖于疾病的性质、药效、患者的情况、职业医师的判断和给药频率及方式，然而，本领域普通技术人员可优化这些参数。

类似地，调节剂，例如本文所述式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII所示化合物的剂量通常在约0.01-15mg/kg之间，和约0.1-10mg/kg之间。调节剂单独可对治疗癌症有活性。对于上述组合治疗，当与治疗剂联用时，调节剂的剂量通常比单用调节剂治疗同一疾病或对象所需的剂量低2倍到10倍。采用本领域已知方法不难测定与治疗剂联用的调节剂的合适量。

还提供了调节PARP蛋白活性的方法，包括将包含PARP蛋白的系统与调节(例如，抑制)该蛋白质活性有效量的本文所述组合物接触。这种实施方式中的系统可以是无细胞系统或含细胞系统。还提供了降低细胞增殖和任选诱导凋亡的方法，包括将细胞与本文所述组合物或组合治疗接触，其中治疗剂的给药量能有效降低细胞增殖，PARP抑制剂的给药量足以增强治疗剂的效力。这种实施方式中的细胞可以是在细胞系、组织或对象(例如，科研动物或人)中。

本发明还部分提供治疗细胞增殖异常相关疾病的方法。例如，提供了治疗对象中细胞增殖疾病的方法，所述方法包括将本文所述治疗剂和本文所述PARP抑制剂给予需要治疗细胞增殖疾病的对象；治疗剂和PARP抑制剂的给药量能有效治疗细胞增殖疾病。所述对象可以是任选含有肿瘤，例如异种移植肿瘤(例如，人肿瘤)的科研动物(例如，啮齿类动物、狗、猫、猴)，或可以是人。

有时，细胞增殖疾病是肿瘤或无肿瘤癌症，包括但不限于：结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、淋巴结癌症、结肠癌、前列腺癌、脑癌、头颈癌、皮肤癌、肝癌、肾癌、血液和心脏癌症(例如，白血病、淋巴瘤、癌)。

可一起或分别制备用于给药的治疗剂和PARP抑制剂的任何合适制剂。对于各组分，可采用任何合适的给药途径，包括但不限于口服、胃肠外、静脉内、肌肉内、透皮、局部和皮下途径。可单独或一起给予一起使用的两种物质(PARP抑制剂和治疗剂)。当一起给予时，它们可以是不同的剂型，或者它们可混合在一个组合药物中。因此，本文提供了包含本文所述治疗剂和至少一种PARP抑制剂及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

以下实施例说明但不限制本发明。

实施例1

式I、II、III和IV所示化合物的合成工艺

工艺1

用浓硫酸(5mL)处理乙醇(100mL)中的3-溴-4-吡啶羧酸(3.0g，14.9mmol)。

使该混合物回流，此时所有物质溶解。回流12小时后，LCMS表明反应完成。将该反应混合物冷却至室温，用旋转蒸发仪浓缩至其原始体积的三分之一。然后用250mL乙酸乙酯稀释该混合物，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤两次。用旋转蒸发仪浓缩得到浅黄色油状的3.25g乙酯，其纯度足以进行随后的化学转化。LCMS(ESI)216.2(M+1)⁺。

将3-溴-4-吡啶羧酸乙酯(1.15g，5.0mmol)、2-氨基-4-甲氧基羰基-苯基硼酸(1.04g，4.5mmol)、乙酸钠(1.64g，20mmol)、氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(182mg，0.25mmol)和二甲基甲酰胺(7.5mL)混合在一个烧瓶中。将该烧瓶抽真空，充氮气两次并加热至125℃，搅拌12小时或直至LCMS表明不存在任何起始物质。将该混合物冷却至室温，加入水(100mL)以形成棕色沉淀物。滤出沉淀物得到637mg 5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯。LCMS(ESI)255.4(M+1)⁺。

混合5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(200mg，0.787mmol)与磷酰氯(1mL)并加热至回流。2小时后，LCMS表明不存在任何起始物质。减压除去挥发物质。将残留物溶解于二氯甲烷(50mL)，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤两次。硫酸钠干燥有机相，旋转蒸发仪浓缩得到浅灰色固体状的5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(140mg)。LCMS(ESI)273.3(M+1)⁺。

将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(20mg，0.074mmol)与苯胺(60mg，0.65mmol)和N-甲基吡咯烷酮(0.2mL)混合在微波试管中，将该混合物加热至120℃，持续10分钟，此时LCMS表明不存在任何起始物质从而表明反应完成。然后通过HPLC纯化该混合物得到酯(22mg)或者可用6N氢氧化钠处理其得到酸(19mg)。LCMS(ESI)316.3(M+1)⁺。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)10.17(1H，s)，9.67(1H，br)，8.99(1H，d，5.9Hz)，8.83(1H，d，8.6Hz)，8.62(1H，d，5.9Hz)，8.24(1H，d，1.6Hz)，8.04(1H，s)，8.02(1H，s)，7.93(1H，dd，8.2，1.6Hz)，7.43(1H，d，7.4Hz)，7.41(1H，d，7.4Hz)，7.10(1H，m)。

将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(232mg，0.853mmol)与间-氯苯胺(217mg，1.71mmol)和N-甲基吡咯烷酮(1mL)混合在烧瓶中，将该混合物加热至80℃，持续2小时，此时LCMS表明不存在任何起始物质从而表明反应完成。将该混合物溶解于CH₂Cl₂，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤，Na₂SO₄干燥。通过快速层析(SiO₂，EtOAc/己烷梯度为1∶1-9∶1)纯化该物质获得酯。将该物质溶解于甲醇和6 NNaOH水溶液中，50℃搅拌混合物30分钟。真空除去挥发物质。利用己烷和乙酸乙酯的混合物，从乙酸/THF/甲醇中研磨残留物。经过滤和干燥提供147mg 5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸。LCMS(ESI)350(M+1)⁺。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.21(s，1H)，9.72(br s，1H)，9.02(d，J＝5.6，1H)，8.89(d，J＝8.8，1H)，8.62(d，J＝5.6，1H)，8.31(br s，1H)，8.28(d，J＝1.6，1H)，8.10(br d，J＝8，1H)，7.99(dd，J＝2，J＝8.4，1H)，7.46(t，J＝8.0，1H)，7.16(br d，J＝7.2，1H)ppm。

将乙酸钠(410mg，5mmol)和氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(36mg，0.05mmol)加入3-溴-4-吡啶羧酸乙酯(230mg，1.0mmol)和2-氨基-4-氰基苯基硼酸盐酸盐(179mg，0.9mmol)的混合物中。将该混合物连接于出口起泡器，加热至120℃，持续18小时，此时LCMS分析根据起始物质的消失表明反应完成。冷却至室温后，加入水，滤出黑色固体，用二氯甲烷洗涤获得灰色固体状的5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(156mg)，其纯度足以进行随后的化学转化。LCMS(ESI)222.4(M+1)⁺。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)12.2(1H，s)，9.96(1H，s)，8.90(1H，d，5.1Hz)，8.77(1H，d，8.2Hz)，8.13(1H，d，5.1Hz)，7.73(1H，dd8.2，1.6Hz)，7.70(1H，d，1.6Hz)。

将磷酰氯(2mL)加入5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(150mg，0.66mmol)。将该混合物加热回流3小时，此时LCMS分析表明不存在任何起始物质。减压除去挥发物，将粗产物溶解于二氯甲烷，用盐水和饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥。减压浓缩后，用乙酸乙酯和己烷研磨粗产物得到5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(125mg)。LCMS(ESI)240.3(M+1)⁺。

在微波反应器中将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(30mg，0.13mmol)、苯胺(60mg，0.65mmol)和二甲基甲酰胺(0.2mL)的混合物加热至120℃，持续10分钟。LCMS表明不存在起始物质。用水稀释混合物，静置数分钟沉淀得到灰白色固体状5-(苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(25mg)。LCMS(ESI)297.3(M+1)⁺。

将叠氮钠(65mg，1mmol)和氯化铵(53mg，1mmol)加入5-(苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(25mg，0.084mmol)的二甲基甲酰胺(0.2mL)粗制混合物中。将该混合物在120℃加热18小时，此时LCMS分析表明不存在任何起始物质。用水稀释该混合物，通过制备型HPLC纯化得到N-苯基-8-(1H-四唑-5-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺(14mg)。LCMS(ESI)340.3(M+1)⁺.¹HNMR(400MHz，CD₃OD)10.11(1H，s)，8.96(1H，d，5.9Hz)，8.85(1H，d，8.2Hz)，8.53(1H，d，5.5Hz)，8.47(1H，s)，8.16(1H，d，8.6Hz)，7.88(1H，s)，7.86(1H，d，0.8Hz)，7.57-7.51(3H，m)，7.36-7.31(2H，m)。

代表性化合物见下表1A所示。

表1A

工艺2

将5-溴嘧啶-4-羧酸(按照美国专利4,110,450所述方法制备)(1.0当量，6.14g，30.2mmol)悬浮在CH₂Cl₂(100ml)中。加入草酰氯(1.1当量，2.9ml，33.0mmol)，再加入2滴DMF。室温下搅拌混合物过夜，真空除去挥发物。将残留物溶解于MeOH(50ml)中并加热。真空蒸发MeOH后，将化合物溶解于CH₂Cl₂中，倒在预填充的硅胶柱上。用20％的乙酸乙酯-己烷洗脱所述物质。蒸发溶剂获得淡橙色结晶固体状5-溴嘧啶-4-羧酸甲酯(2.54g，39％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 217[M]⁺；219[M+2]⁺；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ4.04(s，3H)，9.02(s，1H)，9.21(s，1H)ppm。

工艺3

将乙酸钠(4.0当量，1.92g，23.41mmol)和氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(0.05当量，214mg，0.29mmol)加入5-溴嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，1.27g，5.85mmol)和2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.0当量，1.35g，5.85mmol)的无水DMF(10ml)混合物中。120℃，氮气气氛下搅拌该混合物18小时。加入水和盐水，滤去得到的固体杂质。用CH₂Cl₂(4x)萃取该物质，Na₂SO₄干燥合并的萃取相。蒸发CH₂Cl₂后，真空加热残留物以蒸发剩余的DMF。CH₂Cl₂中研磨得到的固体，过滤并干燥以提供米色固体状5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(127mg，8.5％产率)。LCMS(ES)：＞80％纯度，m/z 256[M+1]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.79(s，3H)，7.81(d，J＝8.0，1H)，8.68(d，J＝8.8，1H)，9.49(s，1H)，10.19(s，1H)，12.37(s，1H)ppm。

工艺4

在一小瓶中，将5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，151mg，0.59mmol)在甲苯(1ml)中与DIEA(1.5当量，155ul，0.89mmol)和POCl₃(5当量，270ul，3.0mmol)混合。120℃，搅拌该混合物1小时，冷却至室温。加入冰和水后，用CH₂Cl₂(4x)萃取化合物。Na₂SO₄干燥溶液，经硅藻土垫过滤。蒸发挥发物后，在乙酸乙酯和己烷的混合物中研磨该物质，过滤并干燥获得浅棕色绒毛状固体的5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(115mg，71％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 274[M+1]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.96(s，3H)，8.37(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.60(d，J＝1.6，1H)，9.15(d，J＝8.8，1H)，9.74(s，1H)，10.6l(s，1H)ppm。

工艺5

将5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(10mg)在NMP(0.1ml)中与3，5-二氟苯胺(100mg)混合。利用微波将该混合物在120℃加热10分钟。加入水，用CH₂Cl₂萃取该物质。除去溶剂。在乙酸乙酯和己烷的混合物中研磨，过滤得到5-(3，5-二氟苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯。将该物质悬浮在THF和MeOH的1∶1混合物(2ml)中，加入5N氢氧化锂水溶液。室温下剧烈搅拌该混合物5小时。加入水和6N盐酸以诱导预期物质沉淀。滤出固体，用水洗涤，干燥并悬浮在MeOH中。经过滤和干燥得到黄色固体状的5-(3，5-二氟苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(4mg，31％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 353[M+1]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ6.90(br t，J＝9.6，1H)，8.02(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，8.18(br d，J＝10.8，2H)，8.34(d，J＝1.6，1H)，8.86(d，J＝8.4，1H)，9.65(s，1H)，10.40(s，1H)，10.44(s，1H)ppm。

工艺6

采用相同方法，从5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯和3-乙炔基苯胺制备5-(3-乙炔基苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 341[M+l]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ4.20(s，1H)，7.19(d，J＝7.6，1H)，7.42(t，J＝8.0，1H)，7.99(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.30(d，J＝1.6，1H)，8.34(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，8.49(br s，1H)，8.85(d，J＝8.8，1H)，9.65(s，1H)，10.11(s，1H)，10.43(s，1H)ppm。

通过相同方法，利用5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯和合适的胺制备代表性类似物(表1B)。

表1B

工艺7

按照工艺2中用于制备5-溴嘧啶-4-羧酸甲酯的方法制备5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-羧酸甲酯。LCMS(ES)：＞90％纯度，m/z 263[M]⁺，265[M+2]⁺；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ2.59(s，3H)，4.00(s，3H)，8.71(s，1H)ppm。

工艺8

将5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，661mg，2.52mmol)溶解于CH₂Cl₂(10ml)中。加入间-氯过苯甲酸(m-cpba，77％纯度级别，2.5当量，1.42g，6.34mmol)，室温下搅拌该混合物1小时。向得到的悬液中加入无水THF(10ml)、盐酸甲胺(10当量，1.7g，25.18mmol)和DIEA(10当量，4.3ml，24.69mmol)，室温下搅拌混合物过夜。先在真空中除去溶剂，然后加入CH₂Cl₂和饱和的碳酸氢钠水溶液。倾倒出两相，再作两次CH₂Cl₂萃取。Na₂SO₄干燥合并的萃取相，蒸发溶剂。通过硅胶快速层析纯化(20-30％乙酸乙酯/己烷)提供灰白色固体状的5-溴-2-(甲基氨基)嘧啶-4-羧酸甲酯(461mg，75％产率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 246[M]⁺，248[M+2]⁺。

工艺9

将乙酸钠(3.0当量，240mg，2.93mmol)和氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(0.05当量，36mg，0.049mmol)加入5-溴-2-(甲基氨基)嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，240mg，0.975mmol)和2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.0当量，226mg，0.98mmol)的无水DMF(2ml)混合物中。120℃微波加热并搅拌混合物10分钟。加水诱导预期化合物沉淀。过滤并干燥该化合物得到3-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(57mg，21％产率)。LCMS(ES)：＞80％纯度，m/z 285[M+1]⁺。

工艺10

采用工艺3和4所述的方法，从3-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯制备3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸。通过快速层析纯化终产物，分离得到黄色固体(0.35mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 346[M+1]⁺。

工艺11

在微波容器中，将5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，274mg，1.18mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.2当量，329mg，1.42mmol)和乙酸钠(3.0当量，291mg，3.55mmol)混合在无水DMF(2ml)中。通过在溶液中进行氮气鼓泡10分钟对混合物脱气，用微波将反应(体系)在120℃加热30分钟。冷却后，使得预期物质从NMP中沉淀出来。滤出固体，悬浮在水中，过滤并干燥。在AcOEt中研磨该物质，过滤得到黄色固体。利用相同量的物质重复同一方法9次获得3-(甲硫基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(283mg，10％产率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 302[M+1]⁺，¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ2.71(s，3H)，3.89(s，3H)，7.80(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，7.97(d，J＝1.6，1H)，8.59(d，J＝8.8，1H)，9.98(s，1H)，12.34(s，1H)ppm。

工艺12

将3-(甲硫基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，279mg，0.926mmol)悬浮在甲苯(2ml)中。加入POCl₃(2ml)和DIEA(0.5ml)，120℃搅拌该混合物5小时。真空除去挥发物，加入CH₂Cl₂。用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，用水洗涤，Na₂SO₄干燥。经硅藻土垫过滤溶液，真空除去溶剂。在己烷和AcOEt中研磨该物质，过滤和干燥得到米色固体状5-氯-3-(甲硫基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(184mg，63％产率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 320[M+1]⁺，322[M+3]⁺。

工艺13

将5-氯-3-(甲硫基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，182mg，0.57mmol)与苯胺(0.5ml)在NMP(1ml)中混合。用微波将混合物在120℃加热10分钟。加入水，过滤得到的固体并干燥。在EtOAc和己烷中研磨该化合物，过滤获得黄色固体状3-(甲硫基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 377[M+1]⁺。将该物质悬浮在CH₂Cl₂(4ml)中，小批量加入间-氯过苯甲酸(77％纯度，2.5当量，165mg，0.737mmol)。1小时后，加入额外量(100mg)的mcpba，搅拌混合物1.5小时。加入更多CH₂Cl₂后，用水(4x)洗涤有机相，Na₂SO₄干燥，溶液经硅胶垫过滤，用MeOH/CH₂Cl₂混合物洗脱。蒸发溶剂后，分离得到黄色固体状3-(甲基磺酰基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(166mg，72％产率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 409[M+1]⁺，¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.77(s，3H)，3.93(s，3H)，7.15(t，J＝7.2，1H)，7.45(t，J＝7.6，2H)，7.99(dd，J＝2.0，J＝8.4，1H)，8.16(d，J＝7.6，2H)，8.28(d，J＝2.0，1H)，8.89(d，J＝8.8，1H)，9.76(s，1H)，10.61(s，1H)ppm。

工艺14

在密闭的小瓶中，将3-(甲基磺酰基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，62mg，0.152mmol)与盐酸甲胺(100mg)、DIEA(260ul)在DMF(1ml)中混合。60℃搅拌该混合物40分钟。加入水诱导3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯沉淀，过滤分离。将该物质悬浮在THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物(4ml)中，有LiOH(200mg)存在下于60℃剧烈搅拌1.5小时。加入HCl水溶液达到pH＝1。过滤固体，干燥并在AcOEt/己烷中研磨得到黄色固体状3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(40mg，74％产率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 346[M+1]⁺。

采用相同的方法制备以下类似物(表1C)。通过制备型HPLC和吉尼维克(genevac)蒸发纯化后，分离得到固体物质。

表1C

工艺15

将3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(20mg)与2当量合适的伯胺在NMP(0.5ml)中混合。加入HOBt(14mg)、三乙胺(13uL)和EDCI(18mg)，70℃搅拌该混合物1小时。加入水和HCl，过滤分离该物质。采用该方法制备表1D所示化合物。

表1D

工艺16

将3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(100mg，0.23mmol)与二苯基磷酰基叠氮化物(50ul，0.23mmol)和三乙胺(34ul，0.23mmol)在异丙醇(8ml)中反应。95℃搅拌该混合物3小时。除去溶剂，将残留物在水和乙酸乙酯之间分配。Na₂SO₄干燥有机层，真空除去溶剂。加入CH₂Cl₂诱导固体形成，滤出并干燥获得3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-基氨基甲酸异丙酯。LCMS(ES)：90％纯度，m/z 497[M+1]⁺。

实施例2

式V、VI、VII和VIII所示化合物的合成工艺

工艺1

将2-溴-3-噻吩羧酸(1.0当量，12.56g，60.66mmol)悬浮在CH₂Cl₂(200ml)中。加入草酰氯(1.1当量，5.9ml，67.16mmol)和5滴DMF，诱导气体生成。室温下搅拌该混合物过夜，真空除去挥发物。将得到的固体悬浮在干燥甲醇(150ml)中，将该混合物加热至沸腾。蒸发溶剂得到粗制棕色油状的2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(13.16g，98％产率)。LCMS(ES)：99％纯度，m/z未测；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ3.88(s，3H)，7.23(d，J＝5.6，1H)，7.56(d，J＝5.6，1H)ppm。

工艺2

在微波容器中，将2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(1.0当量，260mg，1.18mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.1当量，300mg，1.30mmol)、乙酸钠(3.0当量，292mg，3.56mmol)和PdCl₂(dppf)(0.05当量，31mg，0.059mmol)一起混合在无水DMF(2ml)中。用微波炉在120℃加热该混合物10分钟。加入水，滤出固体并干燥。将该物质悬浮在CH₂Cl₂中，过滤并干燥获得黄色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(152mg，50％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 260[M+1]⁺；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.54(d，J＝5.2，1H)，7.79(d，J＝4.8，1H)，7.86(d，J＝8.4，1H)，7.91(dd，J＝8.4，J＝1.6，1H)，8.03(d，J＝1.2，1H)ppm。

工艺3

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，618mg，2.38mmol)悬浮在MeOH、THF和水的10ml混合物(1∶1∶1，v∶v∶v)中。加入LiOH(2.0当量，114mg，4.76mmol)，室温下搅拌该混合物2小时。加入额外量的LiOH(114mg)，搅拌该混合物1小时。加入LiOH(50mg)，再搅拌该混合物2小时。加入水，经硅藻土垫过滤溶液。用1NNaOH水溶液彻底清洗硅藻土垫。用6N水性HCl酸化该溶液以诱导预期物质沉淀。过滤并干燥获得黄色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(562mg，96％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 246[M+1]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.61(d，J＝5.2，1H)，7.73(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.88(d，J＝5.6，1H)，7.92(d，J＝8.4，1H)，8.02(d，J＝1.6，1H)，11.92(s，1H)，13.21(br.s，1H)ppm。

工艺4

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(1.0当量，38mg，0.155mmol)悬浮在二噁烷(1ml)中。加入LiAlH₄(7.0当量，40mg，1.05mmol)，100℃搅拌该混合物45分钟。加入水，然后加入MeOH和CH₂Cl₂。滤去固体盐，用MeOH和CH₂Cl₂洗涤。真空蒸发挥发物后，将该物质溶解于NMP、MeOH和水的混合物中，通过制备型HPLC纯化。吉尼维克(genevac)蒸发获得灰白色固体状7-(羟甲基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮(12mg，34％)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 232[M+1]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ4.56(s，2H)，7.15(d，J＝7.6，1H)，7.39(br s，1H)，7.55(d，J＝5.2，1H)，7.73(d，J＝5.2，1H)，7.76(d，J＝8.0，1H)，11.73(s，1H)ppm。

工艺5

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，17mg，0.066mmol)悬浮在氯仿(0.3ml)和乙酸(0.1ml)的混合物中。加入NBS(9.5当量，112mg，0.63mmol)，70℃搅拌该混合物16小时。加入水和氨水，CH₂Cl₂(2x)萃取该物质。Na₂SO₄干燥合并的萃取相，真空除去溶剂获得2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(17mg，76％)。LCMS(ES)：＞85％纯度，m/z 338[M]⁺，340[M+2]⁺；¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.30(m，1H)，7.69(d，J＝8.4，1H)，7.45(m，1H)，7.88(br d，J＝8，1H)，8.05(br s，1H)ppm。

工艺6

将2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，17mg，0.050mmol)悬浮在MeOH/THF/水的1∶1∶1混合物(0.6ml)中。加入LiOH(39mg)，室温下搅拌该混合物1小时。加入水和6N HCl，过滤得到的沉淀物。通过制备型HPLC纯化该物质。吉尼维克蒸发得到固体状2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(2.1mg，13％产率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 324[M]⁺，326[M+2]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.75(s，1H)，7.75(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.90(d，J＝8.4，1H)，8.03(d，J＝1.6，1H)，12.06(s，1H)ppm。

工艺7

在密闭的容器中，将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(44mg，0.170mmol)悬浮在浓氨水(1ml)中。100℃搅拌该混合物过夜。加入1NNaOH水溶液，室温下搅拌该混合物2小时。滤出该固体并干燥得到棕色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(13mg，32％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 245[M+1]⁺。

工艺8

在微波容器中，将2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(1.0当量，64mg，0.29mmol)、2-氨基苯基硼酸(1.2当量，48mg，0.35mmol)、乙酸钠(3.0当量，71mg，0.86mmol)和PdCl₂(dppf)(0.1当量，15mg，0.028mmol)一起混合在无水DMF(0.2ml)中。用微波炉在120℃加热该混合物5分钟。通过制备型HPLC纯化该物质。蒸发乙腈，用CH₂Cl₂(3x)萃取该化合物。水洗合并的有机相，Na₂SO₄干燥，真空除去溶剂。EtOH重结晶得到棕褐色结晶固体状噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮(7mg，12％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 202[M+1]⁺；¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ7.28(m，1H)，7.33(m，1H)，7.43-7.50(m，2H)，7.74(d，J＝4.4，1H)，7.82(d，J＝7.6，1H)ppm。

工艺9

在微波容器中，将2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(1.0当量，250mg，1.13mmol)、2-氨基-3-氰基苯基硼酸HCl(1.1当量，250mg，1.24mmol)、乙酸钠(3.0当量，278mg，3.39mmol)和PdCl₂(dPPf)(0.007当量，4.3mg，0.0082mmol)一起混合在无水DMF(2.5ml)中。用微波炉在120℃加热该混合物10分钟。加入水，用CH₂Cl₂萃取该物质。盐水洗涤有机萃取相，Na₂SO₄干燥，真空除去溶剂。在AcOEt中超声处理得到的固体，过滤并干燥得到米色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(121mg，48％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 227[M+1]⁺。

工艺10

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，20mg，0.088mmol)溶解于无水DMF(0.15ml)中。加入叠氮钠(4.0当量，23mg，0.354mmol)和氯化铵(4.0当量，19mg，0.354mmol)，120℃搅拌该混合物过夜。冷却反应混合物，加入水。加入6 NHCl水溶液诱导沉淀物形成。过滤和真空干燥后，分离得到浅绿色固体状7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮(18mg，76％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 270[M+1]⁺，242[M+1-N₂]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.64(d，J＝5.2，1H)，7.86(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，7.89(d，J＝5.2，1H)，8.09(d，J＝8.0，1H)，8.16(d，J＝1.6，1H)，12.03(s，1H)ppm。

工艺11

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，18mg，0.069mmol)溶解于无水DMF(0.4ml)中。加入K₂CO₃(7.0当量，70mg，0.506mmol)和3-溴-1-丙醇(16当量，100ul，1.144mmol)，100℃搅拌该混合物1.5小时。加入水后，用CH₂Cl₂萃取该混合物。Na₂SO₄干燥合并的萃取相，真空除去溶剂。通过制备型硅胶TLC分离化合物8和9(用30％AcOEt/己烷洗脱两次，然后用50％AcOEt/己烷洗脱一次)。极性较低的化合物是4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(12mg)。LCMS(ES)：80％纯度，m/z 318[M+1]⁺。极性较高的化合物是5-(3-羟丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(19mg)。LCMS(ES)：80％纯度，m/z 318[M+1]⁺。两种化合物无需进一步纯化即可用于后续步骤。

工艺12

将5-(3-羟丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，19mg，0.060mmol)溶解于THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物(0.5ml)中。加入LiOH(40mg)，室温下搅拌得到的混合物1.5小时。加入水、MeOH和HCl，通过制备型HPLC纯化该溶液。吉尼维克蒸发得到白色固体状5-(3-羟丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(4mg，22％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 304[M+1]⁺。¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ2.08(qi，J＝6.0，2H)，3.61(t，J＝5.2，2H)，4.62(t，J＝6.0，2H)，7.53(d，J＝5.2，1H)，7.77(d，J＝5.2，1H)，7.93(d，J＝8.0，1H)，7.99(dd，J＝1.2，J＝8.4，1H)，8.26(d，J＝0.8，1H)ppm。

工艺13

按照工艺12所用的方法制备4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯。分离得到固体4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(3mg，26％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 304[M+1]⁺。

工艺14

按照工艺11所用的方法，从4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯和2-二甲基氨基乙基氯制备5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 331[M+1]⁺。

工艺15

按照工艺12所用的方法制备5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸。通过制备型HPLC和吉尼维克蒸发得到TFA盐物质。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 317[M+1]⁺，¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ3.06(s，6H)，3.50(t，J＝7.6，2H)，4.88(t，J＝7.6，2H)，7.53(d，J＝5.2，1H)，7.73(d，J＝5.6，1H)，7.89(d，J＝8.4，1H)，7.95(br d，J＝8.4，1H)，8.2(br s，1H)ppm。

工艺16

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，1.50g，5.79mmol)悬浮干燥甲苯(15ml)中。加入POCl₃(1.2当量，0.64mmol，6.99mmol)和DIEA(0.8当量，0.81mmol，4.65mmol)，120℃在氮气气氛下剧烈搅拌该混合物3小时。加入冰和水来水解该混合物。用CH₂Cl₂(4x)萃取化合物。Na₂SO₄干燥合并的萃取相，经硅藻土垫过滤黑色溶液。真空蒸发挥发物后，在AcOEt和己烷的混合物中研磨所得固体。经过滤和干燥得到黄色绒毛状固体4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.14g，71％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 278[M+1]⁺，¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ4.01(s，3H)，7.72(d，J＝4.8，1H)，7.74(d，J＝5.2，1H)，8.14(d，J＝8.4，1H)，8.25(d，J＝8.4，1H)，8.85(d，J＝1.6，1H)ppm。

工艺17

按照工艺16所用的方法，从噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮制备4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉。分离得到固体4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉(71mg，93％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 220[M+1]⁺，223[M+3]⁺。

工艺18

按照工艺16所用的方法制备4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈。分离得到黄色绒毛状固体4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(833mg，77％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 245[M+1]⁺，247[M+3]⁺。

工艺19

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，23mg，0.094mmol)、苯胺(0.1ml)和NMP(0.1ml)混合在小瓶中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入水，过滤并干燥得到的固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 302[M+1]⁺。

工艺20

将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(34mg，0.113mmol)溶解于NMP(0.3ml)中。加入30％H₂O₂(0.2ml)水溶液，然后加入6N NaOH(50ul)。50℃加热该混合物2小时。加入额外量的30％H₂O₂水溶液(0.3ml)和6NNaOH(100ul)，30分钟后有70％转化。加入水，过滤并干燥固体。在同一条件下使该物质进一步反应以获得完全的转化。分离得到固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(30mg，83％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 320[M+1]⁺。

工艺21

将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(28mg，0.088mmol)悬浮在N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛中，氮气气氛中在80℃加热该混合物2小时。真空除去挥发物。(加入)乙酸(0.5ml)和无水肼(0.1ml)，115℃搅拌该混合物1小时。加入水和盐水，过滤固体。通过制备型HPLC纯化该物质。吉尼维克蒸发和在AcOEt/己烷中研磨得到灰白色固体状N-苯基-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺(9mg，30％产率)。LCMS(ES)：94％纯度，m/z 344[M+1]⁺。

工艺22

将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，27mg，0.0897mmol)和盐酸羟胺(10当量，62mg，0.892mmol)及K₂CO₃(10当量，124mg，0.896mmol)混合在EtOH(0.5ml)中，用微波在100℃加热该混合物10分钟。过滤除去固体，用EtOH洗涤。真空除去溶剂。将粗制物质悬浮在氯仿(0.5ml)中。加入氯甲酸乙酯(20ul)和三乙胺(20ul)，室温下搅拌该混合物10分钟。加入CH₂Cl₂，用盐水洗涤有机相。Na₂SO₄干燥有机相，除去溶剂。将粗制物质悬浮在NMP(1ml)中，用微波在160℃加热10分钟。通过制备型HPLC纯化该物质。吉尼维克蒸发得到灰白色固体状3-(4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮(7mg，22％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 361[M+1]⁺。

工艺23

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，23mg，0.094mmol)、苯胺(0.1ml)和NMP(0.1ml)混合在小瓶中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入水，过滤并干燥得到的固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 302[M+1]⁺。将该物质在小瓶中与DMF(0.5ml)、NH₄Cl(50mg)和NaN₃(50mg)混合。120℃搅拌该混合物3小时。加入水和过滤后，分离得到米色固体状N-苯基-7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺(13mg，41％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 345[M+1]⁺，317[M+1-N₂]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.07(t，J＝7.2，1H)，7.40(t，J＝7.6，2H)，8.00(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.04(d，J＝5.2，1H)，8.10(dd，J＝1.2，J＝8.8，2H)，8.19(d，J＝8.0，1H)，8.25(d，J＝5.6，1H)，8.43(d，J＝1.6，1H)，9.34(s，1H)ppm。

通过相同的方法，用4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈和合适的胺制备代表性类似物(表1C)。微波反应所用的反应温度是120℃-180℃。四唑类合成后，通过制备型HPLC/吉尼维克蒸发分离这些物质。在一些情形中，向反应混合物中加入水后有物质沉淀，通过过滤分离。

表1C

工艺24

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉(23mg)与苯胺(0.1ml)和NMP(0.1ml)混合，用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入NMP(0.8ml)，通过制备型HPLC纯化该化合物。吉尼维克蒸发得到粉色固体状N-苯基噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺(31mg，定量)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 277[M+1]⁺。

工艺25

按照工艺24中的方法，利用N，N-二甲基乙二胺制备N1，N1-二甲基-N2-(噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基)乙-1，2-二胺。制备型HPLC和吉尼维克蒸发得到预期的TFA盐物质。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 272[M+1]⁺。

工艺26

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸酯(10mg，0.036mmol)悬浮在NMP(0.1ml)和3-氨基甲基吡啶(0.1ml)中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。将该反应混合物溶解于NMP和MeOH的混合物中，通过制备型HPLC纯化酯中间体。吉尼维克蒸发溶剂后，将得到的固体溶解于THF和MeOH的1∶1混合物(0.6ml)中。加入5NLiOH(0.2ml)水溶液，室温下搅拌该混合物17小时。加入水和HCl水溶液，通过制备型HPLC纯化4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸溶液。通过吉尼维克蒸发除去溶剂得到白色固体状化合物4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(10mg，62％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 336[M+1]⁺。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ5.23(s，2H)，7.71-7.78(m，4H)，8.11(d，J＝5.6，1H)，8.47(d，J＝8.0，1H)，8.49(d，J＝0.8，1H)，8.62(d，J＝5.2，1H)，8.97(s，1H)ppm。

通过相同的方法，用4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸酯和合适的胺制备代表性类似物(表2)。微波反应所用的反应温度是120℃-180℃。酯类水解后，通过制备型HPLC/吉尼维克蒸发分离这些物质。在一些情形中，酸化水解混合物后有物质沉淀，通过过滤分离。

表2

工艺27

将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(6mg)与甲磺酰胺(120mg)、EDCI(80mg)和DMAP(20mg)在无水DMF(0.5ml)中反应。5小时后，加入水，对该溶液实施制备型HPLC。吉尼维克蒸发得到固体N-(甲磺酰基)-4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(6mg，81％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 398[M+1]⁺。

工艺28

在一小瓶中，将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(1.0当量，20mg，0.081mmol)、N-羟基苯并三唑一水合物(2.0当量，22mg，0162mmol)、对-甲氧基苄胺(2.0当量，21ul，0.162mmol)和三乙胺(2.0当量，23ul，0.165mmol)溶解于无水DMF(0.5ml)中。加入EDCI(2.0当量，31mg，0.162mmol)，70℃搅拌反应混合物过夜。加入MeOH(0.5ml)和水(2ml)，过滤和干燥得到的沉淀物。在AcOEt中研磨该物质，过滤并干燥得到灰白色固体(19mg，65％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 365[M+1]⁺，¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.71(s，3H)，4.40(d，J＝6.0，2H)，6.88(d，J＝8.8，2H)，7.24(d，J＝8.8，2H)，7.60(d，J＝5.6，1H)，7.69(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.84(d，J＝5.6，1H)，7.90(s，1H)，7.91(d，J＝8.8，1H)，9.11(t，J＝5.6，1H)ppm。

通过这些工艺，利用4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸和合适的胺制备以下代表性类似物(表3)。在一些情形中，制备型HPLC纯化这些物质，吉尼维克蒸发后分离得到干燥固体。

表3

以下代表性类似物(表4)可从它们在表3中描述的相应甲酯类制备。

按照用于化合物15的水解方法制备这些化合物。

表4

以下代表性类似物(表5)可从它们在表3中描述的相应叔丁酯或N-Boc保护的前体制备。用30％三氟乙酸的CH₂Cl₂溶液处理这些前体2小时。真空除去挥发物得到预期物质。

表5

工艺29

将3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸乙酯(1.0当量，7.6mg，0.018mmol)悬浮在THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物中。加入氢氧化锂(40mg，1.66mmol)，室温下搅拌该混合物1小时。加入水和盐酸，过滤并干燥得到的固体获得固体3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 389[M+1]⁺。

采用工艺28所述方法，通过将3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸与合适的胺反应制备以下代表性类似物(表6)。通过制备型HPLC纯化这些物质，吉尼维克蒸发后分离得到干燥固体。

表6

工艺30

采用工艺28所述反应条件，通过将3-(7-(甲氧基羰基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸与合适的胺反应制备以下代表性类似物(表7)。采用工艺29所述的条件水解该酯获得以下类似物。

表7

工艺31

采用工艺30所述反应条件，通过将2-(3-(7-(甲氧基羰基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯基)乙酸与合适的胺反应制备以下代表性类似物(表8)。

表8

实施例3

式IX、X、XI和XII所示化合物的合成工艺

工艺1

将2-氨基-4-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.0当量，100mg，0.42mmol)溶解于无水DMF(0.8ml)。将该混合物在氮气气氛下加热至80℃。向该热混合物中滴加亚硝酸叔丁酯(1.2当量，60ul，0.50mmol)的DMF(0.8ml)溶液。几分钟后，不产生气体表明反应完成。冷却混合物，倾倒在预填充的硅胶柱上。利用己烷，然后用AcOEt/己烷(2∶8)进行快速层析得到黄色固体状5-溴噻唑-4-羧酸甲酯(49mg，53％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 222[M]⁺，224[M+2]⁺。

工艺2

在微波容器中，将5-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.0当量，97mg，0.44mmol)、2-氨基-3-甲氧基羰基苯基硼酸HCl(1.1当量，111mg，0.48mmol)、乙酸钠(3.0当量，107mg，1.31mmol)和PdCl₂(dppf)(0.05当量，11mg，0.022mmol)一起混合在无水DMF(1ml)中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入水，用CH₂Cl₂萃取物质。用盐水洗涤合并的萃取相，Na₂SO₄干燥并通过蒸发除去溶剂。将物质溶解于CH₂Cl₂和MeOH的混合物中，经硅藻土垫过滤该溶液。蒸发挥发物获得粗制的黑色固体状4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(44mg，39％产率)。为了分析，对少部分化合物进行制备型HPLC。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 261[M+1]⁺。

工艺3

在THF、MeOH和水的(1∶1∶1，v∶v∶v)混合物(0.6ml)中将4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(35mg，0.12mmol)和LiOH(60mg，0.83mmol)搅拌2小时。加入6NNaOH水溶液，硅藻土过滤溶液。酸化溶液，过滤得到的固体。经制备型HPLC纯化和吉尼维克蒸发得到白色固体状4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(0.8mg)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 247[M+1]⁺。

工艺4

将2-氨基-4-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.0当量，2.0g，8.44mmol)溶解于CH₂Cl₂(4ml)。加入乙酸酐(1.5当量，1.2ml，12.66mmol)和三乙胺(1.1当量，1.3ml，9.28mmol)，100℃搅拌该混合物1小时。过滤得到的固体，在AcOEt中研磨，然后再次过滤。干燥后，分离得到米色固体状2-乙酰氨基-5-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.81g，77％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 280[M+1]⁺。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ2.25(s，3H)，3.95(s，3H)ppm。

工艺5

按照工艺2所用的方法，从2-乙酰氨基-5-溴噻唑-4-羧酸甲酯制备2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯。分离得到黑色固体状2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(106mg，37％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 318[M+1]⁺。

工艺6

按照工艺3中的方法从2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯制备2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸。分离得到黑色固体状2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(14mg，44％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 304[M+1]⁺，¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ2.22(s，3H)，7.74(dd，J＝1.2，J＝8.0，1H)，7.89(d，J＝8.4，1H)，8.03(d，J＝1.6，1H)，12.07(s，1H)，12.80(s，1H)ppm。

工艺7

120℃将2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(102mg，0.34mmol)在6 NHCl水溶液中搅拌过夜。加入水，化合物经过滤和干燥获得黑色固体状2-氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(76mg，86％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 262[M+1]⁺，¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.60(d，J＝8.4，1H)，7.70(dd，J＝1.2，J＝8.0，1H)，7.99(d，J＝1.2，1H)，11.94(s，1H)ppm。

工艺8

将4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，0.62g，2.38mmol)悬浮在甲苯中。加入DIEA(1.5当量，122ul，3.57mmol)和POCl₃(2.3当量，507ul，5.47mmol)，120℃剧烈搅拌混合物1小时。加入水、冰和CH₂Cl₂，硅藻土过滤得到的乳液。倒出有机相，再用CH₂Cl₂萃取水相。Na₂SO₄干燥合并的有机萃取相，真空除去溶剂获得4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(0.31g，47％产率)。LCMS(ES)：＞90％纯度，m/z 279[M+1]⁺。

工艺9

在微波容器中，将4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，23mg，0.084mmol)和苯胺(13当量，0.1ml，1.1mmol)混合在NMP(0.1ml)中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。通过制备型HPLC纯化中间体酯，吉尼维克蒸发后分离得到固体。室温下在含LiOH(41mg)的THF、MeOH和水(1∶1∶1，v∶v∶v)混合物(0.6ml)中搅拌该固体2小时。加入HCl和水，蒸发有机溶剂，将溶液静置2小时。缓慢形成的沉淀物经过滤和干燥得到固体4-(苯基氨基)噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(2步骤的产率为8％)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 322[M+1]⁺。

利用4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯和合适的胺，通过相同工艺制备代表性类似物(表9)。微波反应所用的反应温度是120℃-180℃。最终化合物合成后，通过制备型HPLC/吉尼维克蒸发分离这些物质。在一些情形中，酸化后有物质沉淀，经过滤纯化。

表9

实施例4

在无细胞体外试验中调节CK2和PARP活性

在体外无细胞CK2试验中评估本文所述化合物的调节活性。在体外无细胞PARP试验中评估本文所述化合物的调节活性。下文描述了这些试验。

CK2试验

将10微升体积的测试化合物水溶液加入含10微升试验稀释缓冲剂(ADB；20mM MOPS，pH 7.2，25mM β-甘油磷酸，5mM EGTA，1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇)、10微升底物肽(RRRDDDSDDD，溶解于ADB，浓度为1mM)、10微升重组人CK2(25ng，溶解于ADB；州北公司(Upstate))的反应混合物中。加入10微升ATP溶液(90％75mM MgCl₂，75微摩尔/升溶解于ADB中的ATP；10％[γ-³³P]ATP(储备液1mCi/100μl；3000Ci/mmol(帕金埃尔默公司(Perkin Elmer))以引发反应，30℃维持10分钟。用100微升0.75％磷酸淬灭反应，然后转移并经磷酸纤维素过滤平板(毫孔公司(Millipore))过滤。用0.75％磷酸清洗各孔5次，真空干燥平板5分钟，向各孔加入15ul闪烁液体，然后利用华莱士发光计数器(Wallacluminescence counter)检测残留的放射性。

PARP试验

利用化学发光PARP测定试剂盒(特拉维金公司(Trevigen))进行PARP试验，简言之，通过将10微升溶解于1X PARP缓冲剂(通过混合用高纯度水稀释的20X PARP缓冲剂来制备)中的测试化合物和15微升稀释的PARP-HSA酶(用1X PARP缓冲剂稀释，0.1单位/孔)加入25微升PARP混合物(由10X PARP混合物和10X活化DNA(二者均是2.5微升/孔)及20微升/孔的1X PARP缓冲剂来制备)，在组蛋白包被的带孔中进行反应。环境温度下温育反应(体系)60分钟，然后除去液体。用PBS(200ul)清洗各孔4次后，加入50微升STREP-HRP(辣根过氧化物酶)溶液(用1X Strep-稀释剂稀释500-倍)，环境温度下温育反应(体系)30分钟。除去液体，用PBS(200ul)清洗各孔4次后，加入各50微升的PeroxyGlo A和B(化学发光辣根过氧化物酶底物)，用SpectraMax M5平板读数计定量测定得到的化学发光情况。

表10-15显示了化合物对CK2活性的调节作用。

表10

表11

表12显示了化合物对PARP和CK2的调节作用。

表12

表13

表14

表15

实施例5

细胞增殖调节活性

下文描述了利用Alamar蓝色染料(4℃保存，每孔用20ul)的代表性细胞增殖试验方案：

96-孔板设置和化合物处理

a.裂解和胰蛋白酶处理细胞

b.利用血细胞计数器计数细胞

c.按照以下平板布局，每孔涂布4,000-5,000个细胞(100μl培养基)，并接种入96-孔板。只向孔B10-B12加入细胞培养基。孔B1-B9有细胞但未加化合物。

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A 空

B 未加化合物只有培养基

C 10nM 100nM 1uM 10uM 对照1

D 10nM 100nM 1uM 10uM 化合物1

E 10nM 100nM 1uM 10uM 化合物2

F 10nM 100nM 1uM 10uM 化合物3

G 10nM 100nM 1uM 10uM 化合物4

H 空

d.将100μl的2X药物稀释液加入各孔，其浓度如以上平板布局所示。同时，将100μl培养基加入对照孔(孔B10-B12)。总体积为200μl/孔。

e.37℃，5％CO2在增湿培育箱中温育4天。

f.将20μl Alamar蓝色试剂加入各孔。

g.37℃，5％CO2在增湿培育箱中温育4小时。

h.利用微板读数计记录544nm激发波长和590nm发射波长的荧光。

在这些试验中，用测试化合物培养细胞约4天，然后将染料加入细胞，约4小时后检测非还原染料的荧光。这些试验中可利用不同类型的细胞(例如，HCT-116人结肠直肠癌细胞、PC3人前列腺癌细胞和MiaPaca人胰腺癌细胞)。下文提供了代表性化合物的抗增殖作用。

实施例6

调节内源性CK2活性

将人白血病Jurkat T-细胞系维持在补加了10％胎牛血清和50ng/mlGeutamycin的RPMI 1640(开姆布莱克斯公司(Cambrex))中。治疗前，先洗涤细胞，以约10⁶个细胞/毫升的密度重悬在含1％胎牛血清的培养基中并在有指定量的药物存在下温育2小时。离心回收细胞，用低渗缓冲液(20mM Tris/HClpH 7.4；2mM EDTA；5mM EGTA；10mM巯基乙醇；10mM NaF；1uM冈田酸(Okadaic acid)；10％v/v甘油；0.05％NP-40；1％蛋白酶抑制剂混合物)裂解，用试验稀释缓冲液(Assay Dilution Buffer)(ADB；20mM MOPS，pH 7.2，25mM β-甘油磷酸，5mM EGTA，1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇)将经澄清的裂解液的蛋白质稀释至1微克/微升。向20微升的稀释蛋白质加入10微升底物肽(RRRDDDSDDD，溶解于ADB，浓度为1mM)和10微升PKA抑制剂混合物(州北公司)。加入10微升ATP溶液(90％75mMMgCl₂，溶解于ADB中的100uM ATP；10％[γ-³³P]ATP(储备液1mCi/100μl；3000Ci/mmol(帕金埃尔默公司))，32℃维持15分钟。用100微升0.75％磷酸猝灭反应，然后转移并经磷酸纤维素过滤平板(毫孔公司)过滤。用0.75％磷酸清洗各孔5次后，利用华莱士发光计数器检测残留的放射性。

通过图1所示试验所评估的两种化合物的调节活性。这些化合物的结构如下所示：

化合物1

化合物2

如图1所示，与未治疗的对照相比，该两种化合物各自显著抑制内源性CK2活性。与参比化合物4，5，6，7-四溴苯并三唑(TBB)(一种已知的CK2抑制剂)(Ruzzene等，Biochem J. 15：364(部分1)：41-7(2002))相比，该两种化合物也更强地抑制内源性CK2活性。

表20：调节内源性CK2活性

表20b：调节内源性CK2活性

实施例7

评估药代动力学特性

在静脉内(IV)推注和口服(PO)分别给予5mg/kg和25mg/kg药物剂量后的ICR小鼠中研究药物的药代动力学特性。在预定时间收集血液样品，分离血浆。从在给药后第5、15和30分钟和第1、2、4、8和24小时收集的血液样品分离血浆。

通过下述LC/MS/MS方法定量测定药物水平。将无隔室药代动力学分析(noncompartmental pharmacokinetic analysis)应用于静脉内给药。采用线形梯形法则(linear trapezoidal rule)计算AUC(0-24)。分别用最后3个和最初3个数据点计算最终t_1/2和C₀。

利用Quattro Micro LC/MS/MS仪器，采用MRM检测模式，利用内标(IS)实施生物分析。简言之，利用120μL乙腈沉淀蛋白质来制备15□L血浆样品以供分析。将上清液转移至96孔板，利用Phenomenex Polar-RP HPLC柱进行LC-MS/MS分析。流动相是水配制的10mM NH₄HCO₃(溶液-A)和甲醇配制的10mM NH₄HCO₃(溶液-B)。首先用25％溶液-B，然后用100％溶液-B平衡该柱，5分钟。该方法的动态范围是1-10,000ng/mL。按照生物分析样品清单，用两条定标校准曲线(bracketing calibration curve)以分批方式定量测定分析物。

以下化合物A1的药代动力学概况和估计的药代动力学参数见图2A和表21。

表21.静脉内和口服分别给予5和25mg/kg后的预计药代动力学参数

PK参数	IV	PO	单位
				剂量	5	25	mg/kg
AUC_(0-8h)	2910	1580
				AUC_(0-24h)	3337	2915	ng.h.ml^-1
AUC_(0-Inf)	3364	3149	ng.h.ml^-1
				Cmax-obs	N/A	343	ng/mL
Cp0-exp	13201	N/A	ng/mL
				Tmax	N/A	0.25	小时
Kel	0.1586	0.1076	小时^-1

t_1/2	4.4	6.4	小时
				Vd	9.4	N/A	L/kg
CL_s	1.5	N/A	L/kg/小时
				F(0-8h)	N/A	10.9	％
F(0-infh)	N/A	18.7	％

以下测试化合物的药代动力学概况和估计的药代动力学参数见图2B和表22。

表22.IV和PO给药后的预计药代动力学参数

PK参数	IV	PO	单位
				剂量	3.4	24.5	mg/kg
AUC_(0-8h)	3716	6005
				AUC_(0-24h)	4806	9120	ng.h.ml^-1
AUC_(0-Inf)	4898	10895	ng.h.ml^-1
				Cmax-obs	4744	1600.5	ng/mL
Cp0-exp	5631	N/A	ng/mL
				Tmax	N/A	0.5	小时
Kel	0.1418	0.0594	小时^-1
				t_1/2	4.9	11.7	小时
Vd	4.9	N/A	L/kg
				CL_s	0.7	N/A	L/kg/小时
F_(0-24h)	N/A	26.5	％
				F_(0-Inf)	N/A	31.1	％

实施例8

评估化合物在肿瘤抑制中的效力

通过静脉内和口服给予带肿瘤的异种移植小鼠来评估化合物A1和化合物A2(前述的)的体内活性。体内实验遵照动物使用和护理委员会(Animal Use andCare Committee)批准的方案。雌性NCr nu/nu小鼠购自塔寇尼克农场(TaconicFarms)，以12/12白天周期(light cycle)分组饲养在通风搁物架系统(ventilatedrack system)上。先将供给物质和水进行消毒，再使用。小鼠随意进食γ射线照射的实验室食物和酸化水。在层流通风橱中处理动物。

采用公式(lxw²)/2计算肿瘤大小(mm³)，其中w＝以mm计的肿瘤宽度和l＝以mm计的肿瘤长度。假定1mg等于1mm³的肿瘤体积来估计肿瘤重量。

对于静脉内给予化合物A1，在右腹给动物皮下接种5x10⁶个MiaPaca细胞。每周监测肿瘤两次，然后在肿瘤长到适于研究的大小后每日监测两次。在研究的第一天，将动物随机分成n＝5治疗组，组平均肿瘤大小为160mm³。

组l 平均值 160.966 UTC

组2 平均值 161.816 Gemzar

组3 平均值 161.807 30mg/kg CK2化合物

组4 平均值 159.621 60mg/kg CK2化合物

％Dif. 1.363

SD 1.034.

动物经QD静脉内给药接受14剂载体、100mg/kg Q3D的Gemzar或30mg/kg或60mg/kg化合物A1。在第3、6、8、10、13和15天记录肿瘤体积检测值(图3A)和体重(图3B)。具体未治疗的对照动物和给予60mg/kg化合物A1的动物的照片示于图3C和3D。化合物A1在图3A、3B、3C和3D中称为“CK2抑制剂”。

还将化合物A1口服给予MiaPaca异种移植动物并抑制肿瘤生长。用2％PEG 300将化合物A1配制成10mg/mL的钠盐，利用磷酸钠缓冲液缓冲至pH8.4。当以100mg/kg QDx8的剂量，然后以200mg/kg QDx5的剂量口服给予动物时，与未治疗的对照组相比，化合物A1显著抑制肿瘤生长。以80mg/kgIP Q3D剂量给予的Gemzar^TM用作阳性对照。通过口服给药将化合物A1以100mg/kg递送给带MCF-7异种移植物的动物，以150mg/kg递送给带PC-3异种移植物的动物，在两组研究均显著抑制肿瘤生长。

还测定到化合物A1降低肿瘤中的CK2活性。评估肿瘤中的CK2活性揭示用化合物A1治疗的动物的肿瘤的CK2活性是未用化合物A1治疗或用Gemzar^TM治疗动物的肿瘤的CK2活性的约40％。

评估了化合物A1在动物血浆和肿瘤中的分布。在给予30mg/kg化合物A1 IV、60mg/kg化合物A1 IV和200mg/kg化合物A1口服的动物中，分别在血浆中鉴定到约6.8、2.2和9.5微摩尔(micromolar)化合物A1，在肿瘤中分别鉴定到约42.9、7.0和6.4微摩尔化合物A1。

胱冬酶染色也评估为化合物A1治疗肿瘤的生物标记。在经IV给药用60mg/kg化合物A1治疗的动物中，胱冬酶-3染色水平比未治疗的对照细胞高4倍。这些结果提示胱冬酶-3染色可以是监测细胞增殖抑制和肿瘤抑制的有用生物标记。

对于评估化合物A2，通过静脉内和腹膜内给药将该化合物给予带肿瘤的异种移植小鼠。在右腹给动物皮下接种5×10⁶个BC-PC3细胞。每周监测肿瘤两次，然后在肿瘤长到适于研究的大小后每日监测两次。在研究的第一天，将动物随机分成n＝8个治疗组(对于阳性和阴性对照组，n＝5)，组平均肿瘤大小为97mm³。

组1 平均值 97.80 UTC

组2 平均值 96.95 Gemzar Q3D

组3 平均值 96.6850mg/kg CX-5011 IV BIDx10天

组4 平均值 98.9560mg/kg CX-5011 IV QDx17天

组5 平均值 96.51100mg/kg CX-5011 IP BIDx17天

％Dif 2.50

SD 1.01

动物接受17剂载体、100mg/kg Q3D的Gemzar或60mg/kg QD静脉内给药或100mg/kg BID腹膜内给药的化合物。一组(3号)接受10剂50mg/kg BID静脉内给药的化合物。在第1、4、7、11、13、15和18天记录肿瘤体积检测值和体重，数据显示化合物A2显著抑制肿瘤进展(图4A)，而不显著改变体重(图4B)。以50和60mg/kg的静脉内给药和100mg/kg的腹膜内给药将化合物A2递送至带MiaPaca异种移植物的动物显著抑制肿瘤进展。以30和60mg/kg的静脉内给药和200mg/kg的口服给药将化合物A2递送至带MDA-MB-231异种移植物的动物显著抑制肿瘤进展。以100mg/kg QDx8和200mg/kg QDx6的口服给药将化合物A2递送至带MiaPaca异种移植物的动物显著抑制肿瘤进展。pH 10.0和10mg/mL的化合物A2的葡甲胺盐用作研究的口服制剂。

静脉内QDx6给予30mg/kg化合物来进行化合物A2的肿瘤药代动力学研究。在第1、4和6天取得血浆、血液和肿瘤样品，各时间点处死3只动物。约3天后达到稳态，终点斜率降低，半衰期大致翻倍，6天后最低浓度高4-5倍，第4和第6天之间没有明显差异。

通过静脉内给药将化合物A3给予带MiaPaca异种移植物的动物也显著抑制肿瘤进展。

化合物A3

实施例9

调节非-CK2蛋白激酶活性

研究了本文所述化合物对除CK2以外的蛋白激酶的体外调节活性。采用已知方案进行体外分析(例如，在万维网网址upstate.com/img/pdf/KP_AssayProtocol_Booklet_v3.pdf描述的试验方案)。在这些试验中筛选本文所述化合物，根据针对除CK2外的蛋白激酶的调节活性和对CK2或PARP的特异性区分优先次序。

实施例10

通过内皮管形成试验(endothelial tube formation assay)评估血管生成抑制

采用生产商推荐的方案，利用BD生物科学公司的96孔BD BioCoat^TM血管生成系统进行人内皮管形成试验。

简言之，在有或没有各种浓度的化合物A2存在下，将HUVEC细胞(来自ATCC)悬浮在含10％FBS的150ul培养基中，在基质胶包被的平板的96-孔中，各自的密度为4x10⁵个细胞/ml。37℃温育平板18小时。用钙黄绿素AM染色细胞，通过荧光显微术或相差目测观察结果。在上述试验中观察到，1-5μM浓度范围的化合物A2抑制管形成。

实施例11

在无细胞体外试验中调节蛋白激酶活性

在PIM-1试验中，将5ul体积的测试化合物水溶液加入含5ul 5x反应缓冲液(40mM MOPS，pH 7.0，1mM EDTA)、2.5ul重组人PIM-1溶液(10ng)、2.5ul底物肽(KKRNRTLTK)和10ul ATP溶液-98％(75mM MgCl237.5uM ATP)2％([γ-33P]ATP：3000Ci/mmol-帕金埃尔默公司)的反应混合物。30℃温育反应(体系)10分钟，用100ul 0.75％磷酸猝灭，然后转移并经磷酸纤维素过滤平板(毫孔公司)过滤。用0.75％磷酸清洗各孔5次后，将闪烁液(15ul)加入各孔。利用发光计数器检测残留的放射性。化合物A2抑制PIM-1，IC₅₀＝189nM。

进一步测试化合物A2针对其它蛋白激酶的活性。采用各激酶的标准辐射测量激酶试验(standardized radiometric kinase assay)测定以下激酶抑制IC₅₀数据，该试验需要滤器通过感兴趣的激酶结合³³P标记底物蛋白。测定了10种药物浓度的各IC₅₀值。反应条件可见万维网URLupstate.com/discovery/services/ic50_profiler.q。

激酶	IC50(nM)
		CDK1/细胞周期蛋白B(h)	226
CK2(h)	2
		CK2α2(h)	1
c-RAF(h)	＞1,000
		DYRK2(h)	354
Flt3(h)	721
		Flt4(h)	815
HIPK3(h)	56
		ZIPK(h)	34

采用各激酶的标准辐射测量激酶试验测定以下激酶抑制数据，该试验需要滤器通过感兴趣的激酶结合³³P标记底物蛋白。测定了0.5μM药物浓度的活性百分比。反应条件可见万维网URLupstate.com/discovery/services/ic50_profiler.q。

激酶	0.5μM的活性％
		CK2α2(h)	-7
CK2(h)	-2
		Flt4(h)	-1
HIPK3(h)	10
		HIPK2(h)	11
ZIPK(h)	12
		Flt3(D835Y)(h)	17
Pim-1(h)	27
		Flt3(h)	42
Mer(h)	46
		MELK(h)	49
DYRK2(h)	50
		CDK1/细胞周期蛋白B(h)	52
GSK3β(h)	56
		MSK2(h)	56
DRAK1(h)	62
		CDK2/细胞周期蛋白A(h)	63
Lck(h)	63
		Mnk2(h)	63
SRPK1(h)	66
		KDR(h)	67
c-RAF(h)	69
		IGF-1R(h)	73
CDK7/细胞周期蛋白H/MAT1(h)	77
		NEK2(h)	77
Rsk1(h)	78
		EGFR(L861Q)(h)	79
MLK1(h)	80
		p70S6K(h)	80

激酶	0.5μM的活性％
		LOK(h)	84
EGFR(L858R)(h)	89
		PKA(h)	90
TrkA(h)	90
		Abl(h)	91
EGFR(T790M)(h)	92
		PRAK(h)	93
Aurora-A(h)	94
		Flt1(h)	95
MAPK1(h)	95
		MST1(h)	96
FAK(h)	97
		ROCK-I(h)	97
CHK1(h)	99
		EphA7(h)	99
JAK2(h)	99
		PKCα(h)	99
Tie2(h)	99
		Blk(m)	100
CDK9/细胞周期蛋白T1(h)	100
		CK1γ3(h)	100
cKit(D816H)(h)	101
		IKKα(h)	101
Src(1-530)(h)	101
		TAK1(h)	101
Fer(h)	103
		FGFR1(h)	103
CaMKI(h)	104
		PKBα(h)	104
CK1γ1(h)	105
		IR(h)	105
PKG1α(h)	105
		eEF-2K(h)	106
Plk3(h)	106
		Ron(h)	106
CK1γ2(h)	107
		FGFR2(h)	107
MAPKAP-K2(h)	107
		PKD2(h)	107
ARK5(h)	108

激酶	0.5μM的活性％
		CDK6/细胞周期蛋白D3(h)	108
DDR2(h)	109
		Lyn(h)	109
PDGFRα(h)	109
		PDGFRα(D842V)(h)	109
Rse(h)	109
		Yes(h)	109
BRK(h)	110
		PDGFRβ(h)	110
PDK1(h)	110
		Ros(h)	110
cKit(V560G)(h)	111
		Hck(h)	111
PKCθ(h)	111
		ALK(h)	112
PAK2(h)	112
		cKit(h)	114
Fyn(h)	114
		ASK1(h)	116
Snk(h)	117
		Bmx(h)	118
ZAP-70(h)	118
		IRAK4(h)	119
EGFR(T790M，L858R)(h)	121
		Met(h)	122
EGFR(h)	123
		EphA5(h)	125
ErbB4(h)	126
		MKK7β(h)	133
MEK1(h)	136
		Fes(h)	139
EphB4(h)	144
		CSK(h)	146
Fms(h)	174

本文述及的各专利、专利申请、出版物和文件通过引用全文纳入本文。引用以上专利、专利申请、出版物和文件不是承认任何上述文件属于现有技术，也不承认这些出版物或文件的内容或日期。

可对上文作出改进而不脱离本发明的基本面。虽然已参考一个或多个具体实施方式描述了本发明的实质细节，但本领域普通技术人员应知道可对本申请具体公开的这些实施方式作出改变，而这些改进和提高仍属于本发明的范围和构思。本文说明性描述的发明可在没有本文具体公开的一个或多个元素存在下实施。因此，例如，在本发明的各例子中，术语“包含”、“基本上由......构成”和“由......构成”中的任一个可另两个术语中的任一个替代。因此，所用的术语和表述用作描述而非限制性术语，不排除所示和所述特征的等价形式或它们的各部分，应该知道本发明范围内可有各种改进。以下各方面列出了本发明的实施方式。

A1.具有式I、II、III或IV所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体：

式中：

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是N或CR³；

Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自是CR⁶或N；

Z¹-Z⁴中零个、一个或两个是N，Z⁵-Z⁸中的零个、一个或两个是N；

如果Z⁵-Z⁸均是CH或Z⁵-Z⁸中一个是N，则Z¹-Z⁴中至少一个是CR³并且至少一个R³必须是非氢取代基；或者

如果各R³是H，则Φ必须是被取代的；或

如果Z⁵-Z⁸均是CH或Z⁵-Z⁸中一个是N，则Z²不是C-OR”，并且Z³不是NH₂、NO₂、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。

A2.如实施方式A1所述的化合物，其中所述极性取代基是具有电偶极子和任选具有偶极矩的取代基。

A3.如实施方式A1或A2所述的化合物，其中所述极性取代基接受或供给氢键。

A4.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基选自：羧基、羧基生物电子等排体或在pH约7-8时主要以阴离子存在的其它酸衍生的部分。

A5.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基含有OH或NH、醚氧、胺氮、氧化的硫或氮、羰基、腈和含氮或含氧的杂环(无论芳族或非芳族)。

A6.如实施方式A1-A5中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸酯基。

A7.如实施方式A1-A5中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸酯基或羧酸。

A8.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基是选自下组的羧基生物电子等排体：

和以上的盐，其中各R⁷独立为H或选自下组的任选取代的成员：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、C_3-8碳环和与其它任选取代的碳环或杂环任选稠合的C_3-8杂环；或者R⁷是被任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环取代的C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10杂烷基。

A9.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基选自：羧酸、羧酸酯、羧酰胺、四唑、三唑、羧基甲磺酰胺、噁二唑、氧代噻二唑、噻唑、氨基噻唑和羟基噻唑。

A10.如实施方式A1-A9中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基在含Z¹-Z⁴的环上。

A11.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中所述含Z¹-Z⁴的环包含1、2、3或4个极性取代基。

A12.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中Z¹-Z⁴各自为CR³，并且R³取代基中的一个是极性取代基。

A13.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中含Z¹-Z⁴的环选自以下结构之一：

其中R^3P是极性取代基，R^3A、R^3B、R^3C和R^3D各自独立选自R³取代基。

A14.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中Z¹-Z⁴和Z⁵-Z⁸中至少一个是氮原子。

A15.如实施方式A14所述的化合物，含Z¹-Z⁴的环或含Z⁵-Z⁸的环独立为任选取代的吡啶、嘧啶或哒嗪环。

A16.如实施方式A14所述的化合物，其中含Z⁵-Z⁸的环选自下组：

其中各R^6A、R^6B、R^6C和R^6D独立选自实施方式A1所限定的R⁶取代基。

A17.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R⁴是H。

A18.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R⁵是任选取代的3-8员环。

A19.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R⁵是用任选取代的3-8员环取代的C_1-10烷基。

A20.如实施方式A18所述的化合物，其中R⁵是任选取代的6员碳环或杂环。

A21.如实施方式A20所述的化合物，其中R⁵是任选取代的苯环。

A22.如实施方式A21所述的化合物，其中所述化合物具有式I所示结构，R⁴是H或CH₃，R⁵是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。

A23.如实施方式A22所述的化合物，其中所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。

A24.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R⁵是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C_1-3烷基，或用-NR⁴R⁵(例如，-N(CH₃)₂)取代的C_1-3烷基。

A25.如实施方式A1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧基、羧基烷基(例如，羧甲基)、四唑或酰胺(例如，-CONH₂)取代基。

A26.如实施方式A1所述的化合物，其中R⁶取代基是-NR⁴R⁵取代基。

A27.如实施方式A26所述的化合物，其中R⁶取代基是-NH-(C1-C6烷基)部分。

A28.如实施方式A1所述的化合物，其中Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³。

A29.如实施方式A1所述的化合物，其中至少一个R³是H。

A30.如实施方式A1所述的化合物，其中至少两个R³是H。

A31.如实施方式A1所述的化合物，其中至少一个R⁶是H。

A32.如实施方式A1所述的化合物，其中至少两个R⁶是H。

A33.如实施方式A13所述的化合物，其中R^3A、R^3C和R^3D各自是H，R^3B是极性取代基。

A34.一种含有实施方式A1所述化合物和药学上可接受的载体的组合物。

B1.具有式V、VI、VII或VIII所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体：

式中：

B2.如实施方式B1所述的化合物，前提条件是存在的至少一个R³是极性取代基。

B3.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基接受或供给氢键。

B4.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基选自：羧基、羧基生物电子等排体或在pH约7-8时主要以阴离子存在的其它酸衍生的部分。

B5.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基含有OH或NH、醚氧、胺氮、氧化的硫或氮、羰基、腈和含氮或含氧的杂环(无论芳族或非芳族)。

B6.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸、或其盐、酯或生物电子等排体。

B7.如实施方式B6所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸或其盐。

B8.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基是选自下组的生物电子等排体：

B9.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基选自：羧酸、羧酸酯、羧酰胺、四唑、三唑、羧基甲磺酰胺、噁二唑、氧代噻二唑、噻唑、氨基噻唑和羟基噻唑。

B10.如实施方式B1-B9中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基在含Z¹-Z⁴的环上。

B11.如实施方式B1-B10中任一项所述的化合物，其中所述含Z¹-Z⁴的环包含1、2、3或4个极性取代基。

B12.如实施方式B1-B9中任-项所述的化合物，其中Z¹-Z⁴各自为CR³，并且R³取代基中的一个是极性取代基。

B13.如实施方式B1-B9中任一项所述的化合物，其中含Z¹-Z⁴的环选自以下结构之一：

B14.如实施方式B1-B13中任一项所述的化合物，其中Z¹-Z⁴中至少一个是氮原子。

B15.如实施方式B14所述的化合物，含Z¹-Z⁴的环独立为任选取代的吡啶、嘧啶或哒嗪环。

B16.如实施方式B1-B15中任一项所述的化合物，其中R⁴是H。

B17.如实施方式B1-B16中任一项所述的化合物，其中R⁵是任选取代的3-8员环。

B18.如实施方式B1-B16中任一项所述的化合物，其中R⁵是用任选取代的3-8员环取代的C_1-10烷基。

B19.如实施方式B18所述的化合物，其中R⁵是任选取代的6员碳环或杂环。

B20.如实施方式B19所述的化合物，其中R⁵是任选取代的苯环。

B21.如实施方式B20所述的化合物，其中所述化合物具有式V所示结构，R⁴是H或CH₃，R⁵是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。

B22.如实施方式B21所述的化合物，其中所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。

B23.如实施方式B1-B16中任一项所述的化合物，其中R⁵是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C_1-3烷基，或用-NR⁴R⁵(例如，-N(CH₃)₂)取代的C_1-3烷基。

B24.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧基、羧基烷基(例如，羧甲基)、四唑或酰胺(例如，-CONH₂)取代基。

B25.如实施方式B1所述的化合物，其中R⁶取代基是-NR⁴R⁵取代基。

B26.如实施方式B25所述的化合物，其中R⁶取代基是-NH-(C1-C6烷基)部分。

B27.如实施方式B1所述的化合物，其中Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³。

B28.如实施方式B1所述的化合物，其中至少一个R³是H。

B29.如实施方式B1所述的化合物，其中至少两个R³是H。

B30.如实施方式B1所述的化合物，其中R^6A和R^6B中至少一个是H。

B31.如实施方式B1所述的化合物，其中R^6A和R^6B各自是H。

B32.如实施方式B13所述的化合物，其中R^3A、R^3C、R^3D、R^6A和R^6B各自为H并且R^3B是极性取代基。

C1.具有IX、X、XI和XII所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体：

式中：

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为N或CR³，Z¹、Z²、Z³和Z⁴中零个、一个或两个是N；

R³和R⁶各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

或R³和R⁶各自可以是卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

C2.如实施方式C1所述的化合物，前提条件是存在的至少一个R³是极性取代基。

C3.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基接受或供给氢键。

C4.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基选自：羧基、羧基生物电子等排体或在pH约7-8时主要以阴离子存在的其它酸衍生的部分。

C5.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基含有OH或NH、醚氧、胺氮、氧化的硫或氮、羰基、腈和含氮或含氧的杂环(无论芳族或非芳族)。

C6.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸酯基。

C7.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸。

C8.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是选自下组的生物电子等排体：

C9.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基选自：羧酸、羧酸酯、羧酰胺、四唑、三唑、羧基甲磺酰胺、噁二唑、氧代噻二唑、噻唑、氨基噻唑和羟基噻唑。

C10.如实施方式C1-C9中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基在含Z¹-Z⁴的环上。

C11.如实施方式C10所述的化合物，其中所述含Z¹-Z⁴的环包含1、2、3或4个极性取代基。

C12.如实施方式C1-C9中任一项所述的化合物，其中Z¹-Z⁴各自为CR³，并且R³取代基之一是极性取代基。

C13.如实施方式C1所述的化合物，其中含Z¹-Z⁴的环选自以下结构之一：

C14.如实施方式C1-C13中任一项所述的化合物，其中Z¹-Z⁴中至少一个是氮原子。

C15.如实施方式C14所述的化合物，含Z¹-Z⁴的环独立为任选取代的吡啶、嘧啶或哒嗪环。

C16.如实施方式C1-C15中任一项所述的化合物，其中R⁴是H。

C17.如实施方式C1-C16中任一项所述的化合物，其中R⁵是任选取代的3-8员环。

C18.如实施方式C1-C16中任一项所述的化合物，其中R⁵是用任选取代的3-8员环取代的C_1-10烷基。

C19.如实施方式C18所述的化合物，其中R⁵是任选取代的6员碳环或杂环。

C20.如实施方式C19所述的化合物，其中R⁵是任选取代的苯环。

C21.如实施方式C20所述的化合物，其中所述化合物具有式IX所示结构，R⁴是H或CH₃，R⁵是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。

C22.如实施方式C21所述的化合物，其中所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。

C23.如实施方式C1-C16中任一项所述的化合物，其中R⁵是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C_1-3烷基，或用-NR⁴R⁵(例如，-N(CH₃)₂)取代的C_1-3烷基。

C24.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧基、羧基烷基(例如，羧甲基)、四唑或酰胺(例如，-CONH₂)取代基。

C25.如实施方式C1所述的化合物，其中R⁶取代基是-NR⁴R⁵取代基。

C26.如实施方式C25所述的化合物，其中R⁶取代基是-NH-(C1-C6烷基)部分。

C27.如实施方式C1所述的化合物，其中Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³。

C28.如实施方式C1所述的化合物，其中至少一个R³是H。

C29.如实施方式C1所述的化合物，其中至少两个R³是H。

C30.如实施方式C1所述的化合物，其中R⁶是H。

C31.如实施方式C13所述的化合物，其中R^3A、R^3C、R^3D和R⁶各自为H并且R^3B是极性取代基。

C32.如实施方式C1所述的化合物，其中所述化合物具有式IX所示结构，R⁴和R⁵不都是氢，R⁴和R⁵独立为H、-Y⁰或-LY¹，其中Y⁰是任选取代的5-员环或任选取代的6-员环，Y¹是任选取代的5-员芳环或任选取代的6-员芳环，L是C1-C20烷基接头或C1-C20亚烷基接头。

C33.如实施方式C1所述的化合物，前提条件是如果式IX中的R⁵是苯基、取代的苯基、-CH(CH₃)-(CH₂)₃-NEt₂、-(CH₂)₃-哌嗪-(CH₂)₃-NH₂、环己烷或丁基，则存在的一个或多个R³是非氢部分。

C34.一种包含实施方式C1所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。

E1.一种鉴定与PARP蛋白相互作用的候选分子的方法，包括：

将含有PARP蛋白和具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和

与不含该候选分子时该化合物与该蛋白质之间的对照相互作用相比，测定与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此将与对照相互作用相比，调节与该蛋白质相互作用的该化合物的含量的候选分子鉴定为能与该蛋白质相互作用的候选分子。

E2.如实施方式E1所述的方法，其中所述PARP蛋白包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列或其基本上相同的变体。

E3.如实施方式E1或E2所述的方法，其中所述蛋白质在细胞中。

E4.如实施方式E1-E3中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在无细胞系统中。

E5.如实施方式E1-E4中任一项所述的方法，其中所述蛋白质、化合物或分子结合于固相。

E6.如实施方式E1-E5中任一项所述的方法，其中通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。

E7.如实施方式E6所述的方法，其中所述蛋白质包含可检测标记。

E8.如实施方式E6所述的方法，其中所述化合物包含可检测标记。

E9.如实施方式E1-E5中任一项所述的方法，其中不用可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。

F1.一种调节PARP蛋白活性的方法，包括将含有该蛋白质的系统与调节该蛋白质活性有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物接触。

F2.如实施方式F1所述的方法，其中所述蛋白质的活性受抑制。

F3.如F1或F2所述的方法，其中所述系统是细胞。

F4.如实施方式F1-F3中任一项所述的方法，其中所述系统是无细胞系统。

F5.如实施方式F1-F4中任一项所述的方法，其中所述蛋白质或所述化合物结合于固相。

G1.一种抑制细胞增殖的方法，包括将细胞与抑制该细胞增殖有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物接触。

G2.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于细胞系中。

G3.如实施方式G2所述的方法，其中所述细胞处于癌细胞系中。

G4.如实施方式G3所述的方法，其中所述癌细胞系是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、造血癌症、结肠直肠癌、皮肤癌、卵巢癌细胞系。

G5.如实施方式G4所述的方法，其中所述癌细胞系是乳腺癌、前列腺癌或胰腺癌细胞系。

G6.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于组织中。

G7.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于对象中。

G8.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于肿瘤中。

G9.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于对象的肿瘤中。

G10.如实施方式G1-G9中任一项所述的方法，还包括诱导细胞凋亡。

G11.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞来自具有黄斑变性的对象的眼睛。

G12.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于具有黄斑变性的对象中。

H1.一种治疗细胞异常增殖相关疾病的方法，包括将治疗细胞增殖疾病有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物给予有此需要的对象。

H2.如实施方式H1所述的方法，其中所述细胞增殖疾病是肿瘤相关癌症。

H3.如实施方式H1或H2所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、皮肤癌或卵巢癌。

H4.如实施方式H1所述的方法，其中所述细胞增殖疾病是无肿瘤癌症。

H5.如实施方式H4所述的方法，其中所述无肿瘤癌症是造血癌症。

H6.如实施方式H1所述的方法，其中所述细胞增殖疾病是黄斑变性。

I1.一种治疗需要这种治疗的对象的癌症或炎性疾病的方法，包括：

给予该对象治疗有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的治疗剂或其药学上可接受的盐；和

给予该对象抑制PARP或CK2的分子，该分子的用量能有效增强该治疗剂的所需作用。

I2.如实施方式I1所述的方法，其中抑制PARP或CK2的所述分子是具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物或其药学上可接受的盐。

I3.如实施方式I1所述的方法，其中所述治疗剂是

或其特定异构体或异构体的混合物，或其药学上可接受的盐。

I4.如实施方式I1-I3中任一项所述的方法，其中所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子基本上同时给予。

I5.如实施方式I1-I3中任一项所述的方法，其中对象同时使用所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子。

I6.如实施方式I1-I3中任一项所述的方法，其中所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子组合在一个药物组合物中。

I7.一种包含式TA1-1、TA2、TA3-1、TA4-1、TA5-1或TA6中任一所示治疗剂并混合了抑制PARP或CK2的分子或其药学上可接受的盐的药物组合物。

I8.如实施方式I7所述的药物组合物，其中抑制PARP或CK2的分子是PARP抑制剂，是上述的已知化合物，或是GPI 15427、GPI 16539。

I9.如实施方式I7所述的药物组合物，其中抑制PARP或CK2的分子是本文所述式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物，或其药学上可接受的盐。

I10.如实施方式I9所述的药物组合物，其中所述治疗剂是式TA2所示化合物或其药学上可接受的盐。

I11.一种治疗组合物，其包含：

治疗有效量的式TA2所示治疗剂：

或其特定异构体或异构体的混合物，或其药学上可接受的盐，

混合有一定量的PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐，其中所述PARP抑制剂选自：GPI 15427、GPI 16539和上文所示的已知化合物；和

其中所述PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐的用量是增强所述治疗剂所需作用的有效量。

M1.一种具有式XIII、XIV、XV和XVI所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯、前药和互变异构体：

式中：

Z⁵是N或CR^6A；

n是0-4；和

p是0-4。

M2.如实施方式M1所述的化合物，其中Z⁵是N。

M3.如实施方式M1所述的化合物，其中R⁸是羧基部分或羧基生物电子等排体。

M4.如实施方式M3所述的化合物，其中，所述羧基部分是羧酸酯或羧酸。

M5.如实施方式M1所述的化合物，其中R⁹选自：-C≡CR、-C≡CH、-CH₃、-CH₂CH₃、-CF₃、-CFN、-C≡N、-OR和卤素。

M6.如实施方式M5所述的化合物，其中R⁹选自卤素、-C≡CR或-C≡CH。

M7.如实施方式M6所述的化合物，其中R⁹是卤素。

M8.如实施方式M7所述的化合物，其中R⁹是氯。

M9.如实施方式M7所述的化合物，其中R⁹是溴。

M10.如实施方式M7所述的化合物，其中R⁹是-C≡CH。

M11.如实施方式M8所述的化合物，其具有以下结构：

M12.如实施方式M10所述的化合物，其具有以下结构：

M13.如实施方式M1所述的化合物，其中p是1或2。

M14.如实施方式M1所述的化合物，其中p是1。

M15.如实施方式M1所述的化合物，其中n是1或2。

M16.如实施方式M1所述的化合物，其中n是1。

N1.一种鉴定与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶相互作用的候选分子的方法，包括：

将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和

N2.如实施方式N1所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶是人丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。

N3.如实施方式N1所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自：CK2、CK2α2、Pim-1、CDK1/细胞周期蛋白B、c-RAF、Mer、MELK、DYRK2、Flt3、Flt3(D835Y)、Flt4、HIPK3、HIPK2、ZIPK和ZIPK。

N4.如实施方式N1所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶在对应于人CK2所列位置含有一个或多个以下氨基酸：45位的亮氨酸、163位的甲硫氨酸和174位的异亮氨酸。

N5.如实施方式N4所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自：CK2、STK10、HIPK2、HIPK3、DAPK3、DYK2和PIM-1。

N6.如实施方式N1所述的方法，其中所述蛋白质、所述化合物或所述分子结合于固相。

N7.如实施方式N1所述的方法，其中通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。

O1.一种调节丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶活性的方法，包括将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶蛋白的系统与调节该蛋白质活性有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触。

O2.如实施方式O1所述的方法，其中所述蛋白激酶活性是将γ磷酸从三磷酸腺苷转移至肽或蛋白质底物。

P1.一种治疗对象的疼痛或炎症的方法，包括给予有此需要的对象治疗疼痛或炎症有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物。

P2.一种鉴定减轻炎症或疼痛的化合物的方法，该方法包括：

将某系统与式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触；和

检测该系统中的疼痛信号或炎症信号，藉此与对照分子相比，将能调节疼痛信号或炎症信号的化合物鉴定为能减轻炎症或疼痛的化合物。

P3.一种抑制对象中血管生成的方法，包括给予有此需要的对象抑制血管生成有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物。

P4.一种鉴定调节血管生成的化合物的方法，该化合物包括将某系统与式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触；和

检测该系统中血管生成或血管生成信号，藉此与对照分子相比，将能调节血管生成或血管生成信号的化合物鉴定为能调节血管生成的化合物。

Q1.一种式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药：

其中X代表O、S或NR⁴；

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是N或CR³并且Z¹、Z²、Z³和Z⁴中一个或多个是CR³；

Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自是CR⁶或N；

或者各R³和各R⁶独立为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

Claims

1.一种具有式XIII所示结构的化合物或其药学上可接受的盐：

式XIII

式中：

Z⁵是N或CH；

R⁸各自独立为任选被羟基取代的C1-C8烷基、CN、COOR、羧基生物电子等排体或CONR2，所述羧基生物电子等排体是

R⁹独立为任选被卤素取代的C1-C8烷基、C2-C8炔基、卤素、OR或CN，

其中各R独立为H或C1-C8烷基。

2.如权利要求1所述的化合物，结构式XIII所示化合物具有结构式XIV：

式XIV

其中Z⁵和R⁹如权利要求1所定义。

3.如权利要求1所述的化合物，结构式XIII所示化合物具有结构式XV：

式XV

其中Z⁵、R⁸和R⁹如权利要求1所定义。

4.如权利要求1所述的化合物，结构式XIII所示化合物具有结构式XVI：

式XVI

其中Z⁵和R⁹如权利要求1所定义。

5.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其特征在于，Z⁵是N。

6.如权利要求1或3中任一项所述的化合物，其特征在于，R⁸是权利要求1中所定义的羧基生物电子等排体。

7.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其特征在于，R⁹选自：-C≡CH、-CH₃、-CH₂CH₃、-CF₃、-C≡N、-OR和卤素。

8.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，R⁹选自卤素或-C≡CH。

9.如权利要求8所述的化合物，其特征在于，R⁹是卤素。

10.如权利要求9所述的化合物，其特征在于，R⁹是氯。

11.如权利要求9所述的化合物，其特征在于，R⁹是溴。

12.如权利要求8所述的化合物，其特征在于，R⁹是-C≡CH。

13.如权利要求10所述的化合物，其具有以下结构：

14.如权利要求8所述的化合物，其具有以下结构：

15.一种非治疗目的的体外鉴定与PARP蛋白相互作用的候选分子的方法，包括：

将含有PARP蛋白和如权利要求1-14中任一项的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述PARP蛋白包含SEQID NO：4所示氨基酸序列。

17.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述蛋白质在细胞中。

18.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述蛋白质在无细胞系统中。

19.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述蛋白质、化合物或分子结合于固相。

20.如权利要求15所述的方法，其特征在于，通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。

21.如权利要求15所述的方法，其特征在于，不用可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。

22.一种非治疗目的的体外调节PARP蛋白活性的方法，包括将含有该蛋白质的系统与调节该蛋白质活性有效量的如权利要求1-14中任一项的化合物接触。

23.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述蛋白质的活性被抑制。

24.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述系统是细胞。

25.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述系统是无细胞系统。

26.如权利要求1-14中任一项所述的化合物用于制造抑制癌细胞系增殖的药物的用途。

27.如权利要求26所述的用途，其特征在于，所述癌细胞系是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、造血癌症、结肠直肠癌、皮肤癌或卵巢癌细胞系。

28.如权利要求27所述的用途，其特征在于，所述细胞处于对象的肿瘤中。

29.如权利要求26所述的用途，所述药物诱导细胞凋亡。

30.如权利要求26所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗黄斑变性。

31.如权利要求1-14中任一项所述的化合物用于制造治疗细胞异常增殖相关疾病的药物的用途。

32.如权利要求31所述的用途，其特征在于，所述细胞增殖疾病是肿瘤相关癌症。

33.如权利要求32所述的用途，其特征在于，所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、皮肤癌或卵巢癌。

34.如权利要求31所述的用途，其特征在于，所述细胞增殖疾病是无肿瘤癌症。

35.如权利要求34所述的用途，其特征在于，所述无肿瘤癌症是造血癌症。

36.一种非治疗目的的体外鉴定与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶相互作用的候选分子的方法，包括：

将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和如权利要求1-14中任一项的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和

与不含该候选分子时该化合物与该蛋白质之间的对照相互作用相比，测定与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此将与对照相互作用相比，调节与该蛋白质相互作用的该化合物的含量的候选分子鉴定为与该蛋白质相互作用的候选分子。

37.如权利要求36所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶是人丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。

38.如权利要求36所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自：CK2、CK2α2、Pim-1、CDK1/细胞周期蛋白B、c-RAF、Mer、MELK、DYRK2、Flt3、Flt3(D835Y)、Flt4、HIPK3、HIPK2、和ZIPK。

39.如权利要求36所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶在对应于人CK2所列位置含有一个或多个以下氨基酸：45位的亮氨酸、163位的甲硫氨酸和174位的异亮氨酸。

40.如权利要求39所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自：CK2、STK10、HIPK2、HIPK3、DAPK3、DYK2和PIM-1。

41.如权利要求36所述的方法，其中所述蛋白质、所述化合物或所述分子结合于固相。

42.如权利要求36所述的方法，其中通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。

43.一种非治疗目的的体外调节丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶活性的方法，包括将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶蛋白的系统与调节该蛋白质活性有效量的如权利要求1-14中任一项所述的化合物接触。

44.如权利要求43所述的方法，其中所述蛋白激酶活性是将γ磷酸从三磷酸腺苷转移至肽或蛋白质底物。

45.如权利要求1-14中任一项所述的化合物用于制造抑制血管生成的药物的用途。

46.包含如权利要求1-14中任一项所述的化合物的药物组合物。