CN101526523A - 锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法 - Google Patents
锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101526523A CN101526523A CN200910029912A CN200910029912A CN101526523A CN 101526523 A CN101526523 A CN 101526523A CN 200910029912 A CN200910029912 A CN 200910029912A CN 200910029912 A CN200910029912 A CN 200910029912A CN 101526523 A CN101526523 A CN 101526523A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- quantum dot
- microsphere
- cadmium antimonide
- modified
- antimonide quantum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明涉及一种锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法，具有信号放大功能，通过与ATPS反应，室温下在二氧化硅粒子表面修饰上活性氨基基团，然后与量子点表面的羧基反应，使其成为表面修饰有量子点的二氧化硅微球。修饰后的二氧化硅微球在EDC和NHS的作用下，进一步在量子点表面修饰第二抗体，得到锑化镉量子点免疫标记物。电化学夹心免疫检测方法是在利用anti－AFP修饰Fe3O4磁性纳米微球将Si/QD/Ab2修饰到磁性颗粒上，然后电化学测定，由于该标记物表面富含量子点，使得单个夹心免疫过程负载的量子点数量大大增加，使得阳极溶出伏安检测信号得到放大，大大提高低浓度生物分子检测的灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及一种锑化镉量子点CdTe免疫标记物的制备技术，尤其是具有信号放大功能的由CdTe和第二抗体Ab2共修饰的二氧化硅小球SiO2免疫标记物的制备方法及其在生物分子检测中的应用。
背景技术
在肿瘤患者的治疗过程中，血清中肿瘤相关性蛋白质因子的灵敏、准确检测对于肿瘤治疗和愈后具有十分重要的意义。α-甲胎蛋白AFP是一种分子量约为70kDa的糖蛋白，通常在胎儿和新生儿的生长过程中由肝脏、卵黄囊和消化道排泄。AFP在健康的成人体内，其值低于25ng/mL。血清中AFP水平的增加被视为一些癌变的早期迹象，其中包括肝癌，卵黄囊肿瘤，由肝组织转移的胃癌，睾丸癌和鼻咽癌等。目前，通过酶联免疫吸附检测ELISA，表面等离子体共振，荧光免疫，化学发光，原子吸收光谱等检测手段在AFP抗原的检测中已有了一定的发展。但这些方法普遍存在灵敏度不高，且在疾病发展初期这些蛋白质的含量很低，用传统的方法难以检出等问题。因此，发展新的免疫检测方法，提高检测的灵敏度是目前临床诊断和疗效观察的迫切要求。
量子点，又称纳米晶，是一种由II-VI族或III-V族元素组成的纳米颗粒，其粒径一般介于1～10nm之间。基于量子效应，量子点在受激后可以发射荧光。与传统有机染料相比，量子点的优点在于荧光发射波长可控，激发光谱宽而连续、荧光光发射峰窄而对称、光稳定性好、耐光漂白、能实现一元激发多元发射，单一材料可以发射不同波段的荧光，因而在太阳能电池，发光器件，光学生物标记等领域具有广泛的应用前景。而单一量子点的元素含量及荧光强度受其本身颗粒大小和分散状态的制约并不利于观察。
发明内容
本发明的目的是为生物分子的超灵敏检测，提供一种工艺简单、成本低、且稳定性高的锑化镉量子点免疫标记物的制备及其生物分子超灵敏检测，实现低浓度生物分子的超灵敏电化学免疫检测。
本发明的技术方案为：一种锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，步骤为：
第一步，二氧化硅微球表面硅烷化：将粒径为200±3nm的纳米二氧化硅微球与3-氨基丙基三乙氧基硅烷室温下进行氨基硅烷化反应，得到氨基修饰的二氧化硅微球；具体就是将0.022g的纳米二氧化硅微球超声分散于2mL乙醇中，然后滴加0.4mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷，搅拌下反应6小时，离心分离、沉淀用乙醇洗涤得到氨基修饰的二氧化硅微球。
第二步，锑化镉量子点包裹二氧化硅微球的制备：将第一步处理得到的氨基修饰的二氧化硅微球和巯基丙酸覆盖的锑化镉量子点以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)反应，得到锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液；具体做法是第二步中，将第一步的氨基修饰的二氧化硅微球加入2mL浓度为5mg/mL的巯基丙酸覆盖的锑化镉量子点溶液中和1mL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液混合，在4℃下搅拌12小时，离心后蒸馏水洗涤稀释为2mL的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液。
第三步，制备锑化镉量子点免疫标记物：将第二步得到的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液与α-甲胎蛋白抗体溶液混合，在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下，进一步在锑化镉量子点表面修饰α-甲胎蛋白抗体，得到α-甲胎蛋白第二抗体与锑化镉量子点共修饰的二氧化硅微球，即锑化镉量子点免疫标记物(Si/QD/Ab2)。具体步骤为：将1mL锑化镉量子点包裹的二氧化硅微球悬浮液与1mL浓度为12μg/mL的α-甲胎蛋白抗体溶液混合，加入100μL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液和100μL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液中，4℃下静置24小时，离心分离，离心所得沉淀用二次蒸馏水配成1mL的悬浮液。
一种基于锑化镉量子点免疫标记物的电化学夹心免疫检测方法，步骤为：
第一步，α-甲胎蛋白第一抗体修饰四氧化三铁磁性纳米微球的制备方法：利用3-氨基丙基三乙氧基硅烷与粒径为10±1nm的Fe3O4纳米颗粒表面的羟基反应，得到表面嫁接氨基基团的Fe3O4纳米颗粒，然后将表面嫁接氨基基团的Fe3O4纳米颗粒加入到戊二醛溶液中反应，反应结束后，利用外加磁场分离产物，清洗产物，然后将其加入到α-甲胎蛋白抗体中，得到α-甲胎蛋白第一抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球；具体步骤为：α-甲胎蛋白抗体修饰四氧化三铁磁性纳米微球的制备方法具体步骤为：按体积比为0.4∶150的比例将0.4mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷加入到150mL浓度为5g/L的Fe3O4磁性纳米微球在乙醇的悬浮液中，机械搅拌并升温至37℃，恒温搅拌7小时，反应结束后，利用外加磁力，将Fe3O4磁性纳米微球从反应液中分离出来，并用乙醇清洗后用乙醇稀释至50mL，得到氨基修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液；然后在上述氨基修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液中加入100μL质量浓度为3％的戊二醛溶液，恒温37℃搅拌3小时，利用外加磁场，将磁性纳米微球分离，并用二次蒸馏水清洗，用蒸馏水分散至最终体积为2mL，得到戊二醛修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液，再将上述修饰了醛基官能团的磁性纳米微球加入到2mL浓度为12μg/mL的α-甲胎蛋白抗体(anti-AFP)中，4℃下放置24小时，利用外加磁场，将磁性纳米微球分离，并用二次蒸馏水清洗三次，最终用蒸馏水分散为2mL的α-甲胎蛋白抗体修饰的磁性纳米微球悬浮液，将制得的修饰有α-甲胎蛋白抗体的磁性纳米微球在2mL质量分数为1％的牛血清白蛋白溶液中温浴30分钟以封闭未反应的活性基团，利用外加磁力，将磁性纳米微球从溶液中分离出来，加二次蒸馏水分散为4mL的α-甲胎蛋白抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球(MB/Ab1)悬浮液保存在4℃下备用。
第二步，夹心免疫方法：将制得的α-甲胎蛋白第一抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球悬浮在一组含有不同浓度的α-甲胎蛋白抗原的待测溶液中，通过免疫反应捕获α-甲胎蛋白抗原，利用外加磁场将修饰有结合态α-甲胎蛋白抗原的Fe3O4磁性纳米微球分离、清洗后，加入到锑化镉量子点免疫标记物悬浮液中反应，得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球，利用外加磁场分离、清洗得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球；具体做法是：取第一步得到的第一抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球悬浮液40μL，加入一组具有不同浓度的40μL的含有α-甲胎蛋白抗原的待测溶液中，并在37℃下温浴30分钟，通过免疫反应捕获溶液中游离的α-甲胎蛋白抗原，反应完成后，用外加磁力将磁性纳米微球分离，并清洗三次后加入40μL锑化镉量子点免疫标记物悬浮液，温浴30分钟，再次通过抗原抗体的免疫反应，得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球，利用外加磁场分离、清洗得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球；
第三步，锑化镉量子点免疫标记物的电化学测定：将第二步处理好的Fe3O4磁性纳米微球用质量浓度为0.05M的硫酸溶解后转入pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液中，利用阳极溶出伏安方法和铋膜修饰玻碳电极，检测溶解的Cd2+浓度，根据Cd2+阳极溶出峰电流与α-甲胎蛋白抗原浓度的关系，得到标准曲线，实现α-甲胎蛋白抗原的免疫检测。具体做法是：将第二步处理好的锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球加入20μL浓度为0.05M H2SO4溶液中，反应2分钟后转移到3mL的pH 7.0磷酸盐缓冲溶液中，以铋膜电极作为工作电极，铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，对溶出的Cd2+，进行阳极溶出伏安测定，根据Cd2+阳极溶出峰电流与α-甲胎蛋白抗原浓度的关系，得到一个标准曲线，实现α-甲胎蛋白抗原的免疫检测。
有益效果：(1)选用单分散性的二氧化硅微球作为修饰抗体的载体，因其在水、酸溶液中的良好稳定性，很好的提高了检测的灵敏度、可重复性以及分析性能。
(2)由于纳米二氧化硅粒子的比表面大，而且表面有着丰富的羟基。因此，通过与3-氨基丙基三乙氧基硅烷(ATPS)反应，室温下就可在其表面修饰上活性氨基基团。利用微球覆盖的氨基基团与量子点上的羧基基团反应，再利用量子点上的剩余羧基基团与anti-AFP抗体分子中的胺基反应实现抗体在二氧化硅微球表面的固定，然后，用质量分数为1％的牛血清白蛋白(BSA)处理修饰后的二氧化硅微球，封闭微球表面残留的活性环氧基团和非特异性的结合位置，可得到大量量子点和anti-AFP抗体共修饰的纳米免疫标志物。可以达到单位面积上量子点数量的增加，从而达到电化学信号和荧光信号增强的目的。
(3)在修饰了anti-AFP抗体后，包裹了量子点的二氧化硅微球表面富含anti-AFP抗体，并能有效保持其免疫活性，能被Fe3O4纳米颗粒表面捕捉的AFP抗原识别，从而使Si/QD/Ab2负载在Fe3O4纳米颗粒表面。
(4)由于使用二氧化硅小球作为载体，使得通过第二次免疫反应结合到Fe3O4纳米颗粒表面的量子点标记物大大增加，从而放大电化学阳极溶出伏安法检测信号，大大提高了对低浓度抗原检测的灵敏度。
(5)利用制得的Si/QD/Ab2标记物，并结合夹心免疫原理和阳极溶出伏安法，可检测抗原最小浓度为5pg mL-1，一定浓度范围内该检测方法的线性相关系数为0.9902。
附图说明
图1锑化镉量子点免疫标记物修饰方法及原理示意图；
图2α-甲胎蛋白抗体修饰四氧化三铁磁性纳米微球制备原理示意图；
图3夹心免疫方法原理及步骤示意图；
图4纳米标志物对AFP抗原信号放大的溶出伏安法电化学检测。a为工作电极对空白溶液的电化学响应；b为未用SiO2小球负载的量子点修饰anti-AFP抗体所得电化学响应；c为使用SiO2小球负载后所得到的电信号放大现象，此时免疫反应中的AFP抗原浓度为1ng/mL；
图5单分散量子点包裹二氧化硅微球电镜照片。
具体实施方式
具体实施实例，以α-甲胎蛋白的相关实验为例：
1)锑化镉量子点免疫标记物制备：
(1)二氧化硅微球表面硅烷化：将0.022g粒径为200±3nm的纳米二氧化硅微球加入到2mL乙醇中，超声分散30分钟后缓慢滴加0.4mL3-氨基丙基三乙氧基硅烷，搅拌6小时后，10000转/分钟离心分离30分钟后，将沉淀用乙醇溶液清洗4次，得到氨基修饰二氧化硅微球。
(2)量子点包裹二氧化硅微球制备：将上述氨基修饰二氧化硅微球加入到含2mL 5mg/mL市售巯基丙酸修饰的CdTe量子点(过量)和1mL 20mg/mL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐混合溶液中，在4℃下搅拌12小时。10000转/分钟离心分离30分钟后，用二次蒸馏水清洗4次，最终用蒸馏水稀释为2mL的量子点包裹二氧化硅微球的悬浮液。
(3)anti-AFP第二抗体修饰量子点包裹二氧化硅小球制备：将1mL上述量子点包裹二氧化硅微球的悬浮液与1mL 12μg/mL anti-AFP抗体溶液混合，加入100μL 20mg/mLEDC和100μL 10mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，4℃下静置24小时，离心分离，将多余抗体除去，离心所得用二次蒸馏水配成1mL的悬浮液备用。
2)电化学夹心免疫检测：
(1)anti-AFP抗体修饰Fe3O4磁性小球制备：①在250mL三口烧瓶中依次加入150mL 5g/L的粒径为10±1nm的Fe3O4磁性小球在乙醇中的悬浮液，1mL二次蒸馏水和0.4mL APTS，机械搅拌并升温至37℃，恒温搅拌7小时。反应结束后，利用外加磁力，将Fe3O4磁性纳米微球从反应液中分离出来，并用乙醇清洗4次后用乙醇稀释至50mL，得到氨基修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液。②进一步在上述氨基修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液中加入100μL3％的戊二醛溶液，恒温37℃搅拌3小时，利用外加磁场，将磁性纳米微球分离，并用二次蒸馏水清洗三次，最终用蒸馏水分散为2mL戊二醛修饰Fe3O4磁性小球悬浮液。再将上述修饰了醛基官能团的磁性颗粒加入到2mL 12μg/mL anti-AFP抗体中，4℃下放置24小时，利用外加磁场，将磁性纳米微球分离，并用二次蒸馏水清洗三次，最终用蒸馏水分散为2mL anti-AFP抗体修饰的磁性小球悬浮液。③将制得的修饰有anti-AFP抗体的磁性小球在2mL质量分数为1％的牛血清白蛋白(BSA)溶液中温浴30分钟以封闭未反应的活性基团，利用外加磁力，将磁性颗粒从溶液中分离出来，加二次蒸馏水分散为4mL的悬浮液保存在4℃下备用。
(2)夹心免疫反应：取40μL上述悬浮液，加入到一组40μL含有不同浓度的AFP抗原的溶液，并在37℃下温浴30分钟，通过免疫反应捕获溶液中游离的AFP抗原。反应完成后，用外加磁力将磁性颗粒分离，并清洗三次后加入40μL锑化镉量子点免疫标记物悬浮液，温浴30分钟。由于标志物表面含有anti-AFP抗体，因此，可再次通过抗原抗体的免疫反应，将该标志物修饰到磁性小球上。将上述反应液磁性分离并清洗三次后加入20μL 0.05M H2SO4溶液中，反应数分钟后转移到3mL pH 7.0磷酸盐缓冲溶液中，以铋膜电极作为工作电极，铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，对溶出的Cd2+，进行阳极溶出伏安测定，并与量子点直接标记的量子点/anti-AFP标记物比较(图4a和b)。结果显示，由于采用二氧化硅小球作为载体大大提高了单个免疫反应量子点的数量，从而使得检测信号放大，并能用于低浓度生物分子的检测(约5pg/mL)。
Claims (8)
1.一种锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，步骤为：
第一步，二氧化硅微球表面硅烷化：将粒径为200±3nm的纳米二氧化硅微球与3-氨基丙基三乙氧基硅烷室温下进行氨基硅烷化反应，得到氨基修饰的二氧化硅微球；
第二步，锑化镉量子点包裹二氧化硅微球的制备：将第一步处理得到的氨基修饰的二氧化硅微球和巯基丙酸修饰的锑化镉量子点以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐反应，得到锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液；
第三步，制备锑化镉量子点免疫标记物：将第二步得到的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液与α-甲胎蛋白抗体溶液混合，在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐和N-羟基琥珀酰亚胺的作用下，进一步在锑化镉量子点表面修饰α-甲胎蛋白抗体，得到α-甲胎蛋白第二抗体与锑化镉量子点共修饰的二氧化硅微球，即锑化镉量子点免疫标记物。
2.如权利要求1所述的锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，第一步中，将0.022g的纳米二氧化硅微球超声分散于2mL乙醇中，然后滴加0.4mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷，搅拌下反应6小时，离心分离、沉淀用乙醇洗涤得到氨基修饰的二氧化硅微球。
3.如权利要求1所述的锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，第二步中，将第一步的氨基修饰的二氧化硅微球加入2mL浓度为5mg/mL的巯基丙酸覆盖的锑化镉量子点溶液中和1mL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液混合，在4℃下搅拌12小时，离心后蒸馏水洗涤稀释为2mL的锑化镉量子点包裹二氧化硅微球悬浮液。
4.如权利要求1所述的锑化镉量子点免疫标记物的制备方法，其特征在于，第三步，制备锑化镉量子点免疫标记物的具体步骤为：将1mL锑化镉量子点包裹的二氧化硅微球悬浮液与1mL浓度为12μg/mL的α-甲胎蛋白抗体溶液混合，加入100μL浓度为20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液和100μL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液中，4℃下静置24小时，离心分离，离心所得沉淀用二次蒸馏水配成1mL的悬浮液。
5.一种基于权利要求1制备的锑化镉量子点免疫标记物的电化学夹心免疫检测方法，其特征在于，步骤为：
第一步，α-甲胎蛋白第一抗体修饰四氧化三铁磁性纳米微球的制备方法：利用3-氨基丙基三乙氧基硅烷与粒径为10±1nm的Fe3O4纳米颗粒表面的羟基反应，得到表面嫁接氨基基团的Fe3O4纳米颗粒，然后将表面嫁接氨基基团的Fe3O4纳米颗粒加入到戊二醛溶液中反应，反应结束后，利用外加磁场分离产物，清洗产物，然后将其加入到α-甲胎蛋白抗体中，得到α-甲胎蛋白第一抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球；
第二步，夹心免疫方法：将制得的α-甲胎蛋白第一抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球悬浮在一组含有不同浓度的α-甲胎蛋白抗原的待测溶液中，通过免疫反应捕获α-甲胎蛋白抗原，利用外加磁场将修饰有结合态α-甲胎蛋白抗原的Fe3O4磁性纳米微球分离、清洗后，加入到锑化镉量子点免疫标记物悬浮液中反应，得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球，利用外加磁场分离、清洗得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球；
第三步，锑化镉量子点免疫标记物的电化学测定：将第二步处理好的Fe3O4磁性纳米微球用质量浓度为0.05M的硫酸溶解后转入pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液中，利用阳极溶出伏安方法和铋膜修饰玻碳电极，检测溶解的Cd2+浓度，根据Cd2+阳极溶出峰电流与α-甲胎蛋白抗原浓度的关系，得到一条标准曲线，实现α-甲胎蛋白抗原的免疫检测。
6.如权利要求5所述的基于权利要求1制备的锑化镉量子点免疫标记物的电化学夹心免疫检测方法，其特征在于，第一步，α-甲胎蛋白抗体修饰四氧化三铁磁性纳米微球的制备方法具体步骤为：按体积比为0.4∶150的比例将0.4mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷加入到150mL浓度为5g/L的Fe3O4磁性纳米微球在乙醇的悬浮液中，机械搅拌并升温至37℃，恒温搅拌7小时，反应结束后，利用外加磁力，将Fe3O4磁性纳米微球从反应液中分离出来，并用乙醇清洗后用乙醇稀释至50mL，得到氨基修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液；然后在上述氨基修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液中加入100μL质量浓度为3％的戊二醛溶液，恒温37℃搅拌3小时，利用外加磁场，将磁性纳米微球分离，并用二次蒸馏水清洗，用蒸馏水分散至最终体积为2mL，得到戊二醛修饰Fe3O4磁性纳米微球悬浮液，再将上述修饰了醛基官能团的磁性纳米微球加入到2mL浓度为12μg/mL的α-甲胎蛋白抗体中，4℃下放置24小时，利用外加磁场，将磁性纳米微球分离，并用二次蒸馏水清洗三次，最终用蒸馏水分散为2mL的α-甲胎蛋白抗体修饰的磁性纳米微球悬浮液，将制得的修饰有α-甲胎蛋白抗体的磁性纳米微球在2mL质量分数为1％的牛血清白蛋白溶液中温浴30分钟以封闭未反应的活性基团，利用外加磁力，将磁性纳米微球从溶液中分离出来，加二次蒸馏水分散为4mL的α-甲胎蛋白抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球悬浮液保存在4℃下备用。
7.如权利要求5所述的基于权利要求1制备的锑化镉量子点免疫标记物的电化学夹心免疫检测方法，其特征在于，第二步，夹心免疫方法：取第一步得到的第一抗体修饰的Fe3O4磁性纳米微球悬浮液40μL，加入一组不同浓度的40μL含有α-甲胎蛋白抗原的待测溶液中，并在37℃下温浴30分钟，通过免疫反应捕获溶液中游离的α-甲胎蛋白抗原，反应完成后，用外加磁力将磁性纳米微球分离，并清洗三次后加入40μL锑化镉量子点免疫标记物悬浮液，温浴30分钟，再次通过抗原抗体的免疫反应，得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球，利用外加磁场分离、清洗得到锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球。
8.如权利要求5所述的基于权利要求1制备的锑化镉量子点免疫标记物的电化学夹心免疫检测方法，其特征在于，第三步，锑化镉量子点免疫标记物的电化学测定：将第二步处理好的锑化镉量子点免疫标记物修饰的Fe3O4磁性纳米微球加入20μL浓度为0.05M H2SO4溶液中，反应2分钟后转移到3mL的pH 7.0磷酸盐缓冲溶液中，以铋膜电极作为工作电极，铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，对溶出的Cd2+，进行阳极溶出伏安测定，根据Cd2+阳极溶出峰电流与α-甲胎蛋白抗原浓度的关系，得到一个标准曲线，实现α-甲胎蛋白抗原的免疫检测。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200910029912A CN101526523A (zh) | 2009-03-27 | 2009-03-27 | 锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200910029912A CN101526523A (zh) | 2009-03-27 | 2009-03-27 | 锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101526523A true CN101526523A (zh) | 2009-09-09 |
Family
ID=41094499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200910029912A Pending CN101526523A (zh) | 2009-03-27 | 2009-03-27 | 锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101526523A (zh) |
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101893623A (zh) * | 2010-06-22 | 2010-11-24 | 上海师范大学 | 超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法 |
| CN101907625A (zh) * | 2010-07-08 | 2010-12-08 | 浙江大学 | 一种量子点免疫荧光探针的制备方法 |
| CN102507678A (zh) * | 2011-11-17 | 2012-06-20 | 东南大学 | 量子点标记生物药物和生物标示物的溶出伏安测定法 |
| CN102520163A (zh) * | 2011-11-17 | 2012-06-27 | 东南大学 | 一种糖类过敏原的测定方法 |
| CN102928590A (zh) * | 2012-11-22 | 2013-02-13 | 上海师范大学 | 一种快速检测沙门氏菌的荧光量子点筛选分离检测试剂盒 |
| CN103063828A (zh) * | 2011-10-24 | 2013-04-24 | 韩焕兴 | 共价偶联制备量子点-抗体复合物的方法 |
| CN104181292A (zh) * | 2014-08-27 | 2014-12-03 | 湖南师范大学 | 一种蛋白质单分子水平安培免疫分析方法 |
| CN104345155A (zh) * | 2014-10-29 | 2015-02-11 | 深圳市第二人民医院 | 甲胎蛋白含量的检测方法 |
| CN104914084A (zh) * | 2015-06-25 | 2015-09-16 | 浙江大学 | 量子点阳离子交换信号放大技术检测蛋白类毒素的方法 |
| CN105203756A (zh) * | 2015-09-21 | 2015-12-30 | 江苏大学 | 快速磁分离电化学免疫传感及检测金黄色葡萄球菌的方法 |
| CN107422008A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-12-01 | 东南大学 | 一种测定甲胎蛋白的电化学免疫传感器及其制备方法与应用 |
| CN108144071A (zh) * | 2017-12-13 | 2018-06-12 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 原发性肝癌磁共振双靶点特异性分子探针及其制备方法 |
| CN109142713A (zh) * | 2018-06-29 | 2019-01-04 | 天津华科泰生物技术有限公司 | 一种基于金属离子标记的电化学检测方法 |
| CN109444251A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-08 | 亿纳谱（浙江）生物科技有限公司 | 纳米基质在核酸检测中的应用 |
| CN110411799A (zh) * | 2019-07-31 | 2019-11-05 | 重庆科技学院 | 一种甲胎蛋白快速检测玻片的制备方法 |
| CN111989571A (zh) * | 2018-04-23 | 2020-11-24 | 杰宜斯科技有限公司 | 包含接头材料和量子点珠的生物传感器以及使用其的目标抗原检测方法 |
| CN112204400A (zh) * | 2018-05-30 | 2021-01-08 | 杰宜斯科技有限公司 | 具有多官能配体的量子点珠以及使用其的目标抗原检测方法和生物诊断设备 |
| CN113049651A (zh) * | 2021-03-15 | 2021-06-29 | 重庆大学 | 一种同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器 |
| CN115248243A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-10-28 | 重庆工程职业技术学院 | 一种基于超支化聚乙烯亚胺的夹心电化学免疫分析模式对afp进行检测的方法 |
| CN112204400B (zh) * | 2018-05-30 | 2024-05-28 | 杰宜斯科技有限公司 | 具有多官能配体的量子点珠以及使用其的目标抗原检测方法和生物诊断设备 |
-
2009
- 2009-03-27 CN CN200910029912A patent/CN101526523A/zh active Pending
Cited By (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101893623A (zh) * | 2010-06-22 | 2010-11-24 | 上海师范大学 | 超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法 |
| CN101893623B (zh) * | 2010-06-22 | 2014-09-24 | 上海师范大学 | 超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法 |
| CN101907625A (zh) * | 2010-07-08 | 2010-12-08 | 浙江大学 | 一种量子点免疫荧光探针的制备方法 |
| CN103063828A (zh) * | 2011-10-24 | 2013-04-24 | 韩焕兴 | 共价偶联制备量子点-抗体复合物的方法 |
| CN102507678B (zh) * | 2011-11-17 | 2013-11-27 | 东南大学 | 量子点标记生物药物和生物标示物的溶出伏安测定法 |
| CN102520163B (zh) * | 2011-11-17 | 2014-03-12 | 东南大学 | 一种糖类过敏原的测定方法 |
| CN102520163A (zh) * | 2011-11-17 | 2012-06-27 | 东南大学 | 一种糖类过敏原的测定方法 |
| CN102507678A (zh) * | 2011-11-17 | 2012-06-20 | 东南大学 | 量子点标记生物药物和生物标示物的溶出伏安测定法 |
| CN102928590A (zh) * | 2012-11-22 | 2013-02-13 | 上海师范大学 | 一种快速检测沙门氏菌的荧光量子点筛选分离检测试剂盒 |
| CN104181292A (zh) * | 2014-08-27 | 2014-12-03 | 湖南师范大学 | 一种蛋白质单分子水平安培免疫分析方法 |
| CN104345155A (zh) * | 2014-10-29 | 2015-02-11 | 深圳市第二人民医院 | 甲胎蛋白含量的检测方法 |
| CN104914084A (zh) * | 2015-06-25 | 2015-09-16 | 浙江大学 | 量子点阳离子交换信号放大技术检测蛋白类毒素的方法 |
| CN105203756A (zh) * | 2015-09-21 | 2015-12-30 | 江苏大学 | 快速磁分离电化学免疫传感及检测金黄色葡萄球菌的方法 |
| CN107422008B (zh) * | 2017-06-29 | 2019-06-21 | 东南大学 | 一种测定甲胎蛋白的电化学免疫传感器及其制备方法与应用 |
| CN107422008A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-12-01 | 东南大学 | 一种测定甲胎蛋白的电化学免疫传感器及其制备方法与应用 |
| CN108144071A (zh) * | 2017-12-13 | 2018-06-12 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 原发性肝癌磁共振双靶点特异性分子探针及其制备方法 |
| CN108144071B (zh) * | 2017-12-13 | 2021-05-18 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 原发性肝癌磁共振双靶点特异性分子探针及其制备方法 |
| CN111989571A (zh) * | 2018-04-23 | 2020-11-24 | 杰宜斯科技有限公司 | 包含接头材料和量子点珠的生物传感器以及使用其的目标抗原检测方法 |
| CN111989571B (zh) * | 2018-04-23 | 2024-04-12 | 杰宜斯科技有限公司 | 包含接头材料和量子点珠的生物传感器以及使用其的目标抗原检测方法 |
| CN112204400A (zh) * | 2018-05-30 | 2021-01-08 | 杰宜斯科技有限公司 | 具有多官能配体的量子点珠以及使用其的目标抗原检测方法和生物诊断设备 |
| CN112204400B (zh) * | 2018-05-30 | 2024-05-28 | 杰宜斯科技有限公司 | 具有多官能配体的量子点珠以及使用其的目标抗原检测方法和生物诊断设备 |
| CN109142713A (zh) * | 2018-06-29 | 2019-01-04 | 天津华科泰生物技术有限公司 | 一种基于金属离子标记的电化学检测方法 |
| CN109444251A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-08 | 亿纳谱（浙江）生物科技有限公司 | 纳米基质在核酸检测中的应用 |
| CN109444251B (zh) * | 2018-11-23 | 2021-12-21 | 亿纳谱（浙江）生物科技有限公司 | 纳米基质在核酸检测中的应用 |
| CN110411799A (zh) * | 2019-07-31 | 2019-11-05 | 重庆科技学院 | 一种甲胎蛋白快速检测玻片的制备方法 |
| CN113049651A (zh) * | 2021-03-15 | 2021-06-29 | 重庆大学 | 一种同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器 |
| CN115248243A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-10-28 | 重庆工程职业技术学院 | 一种基于超支化聚乙烯亚胺的夹心电化学免疫分析模式对afp进行检测的方法 |
| CN115248243B (zh) * | 2021-12-15 | 2024-03-15 | 重庆工程职业技术学院 | 一种基于超支化聚乙烯亚胺的夹心电化学免疫分析模式对afp进行检测的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101526523A (zh) | 锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法 | |
| CN107621493B (zh) | 一种用于重金属铅污染物检测的电化学传感器制备方法 | |
| CN104280542B (zh) | 基于金属增强发光及纳米粒子标记放大的双增强化学发光免疫分析法 | |
| CN102262125B (zh) | 检测己烯雌酚的电化学免疫传感器及其制备方法和应用 | |
| CN104133069B (zh) | 一种双功能标记光电化学传感器的制备方法及应用 | |
| CN102362182B (zh) | N-(4-氨基丁基)-n-乙基异鲁米诺功能化纳米金及其制备方法和应用 | |
| Zhang et al. | Magnetic beads-based electrochemiluminescence immunosensor for determination of cancer markers using quantum dot functionalized PtRu alloys as labels | |
| Liu et al. | Detection of pathogens using luminescent CdSe/ZnS dendron nanocrystals and a porous membrane immunofilter | |
| Liu et al. | Magnetic graphene nanosheets based electrochemiluminescence immunoassay of cancer biomarker using CdTe quantum dots coated silica nanospheres as labels | |
| CN101509919A (zh) | 可用于squid检测的水溶性磁性纳米粒子的制备方法 | |
| CN110658168B (zh) | 一种金纳米团簇-金纳米棒免疫传感器对睾酮的检测方法 | |
| CN111693571B (zh) | 一种基于光寻址电位传感器检测gpc3的方法 | |
| CN104246500A (zh) | 宽范围发光免疫分析 | |
| CN101706498A (zh) | 一种电致化学发光免疫传感器的制备方法 | |
| CN104502584A (zh) | 基于金属纳米粒子增强荧光的干式免疫层析分析方法 | |
| CN106066324A (zh) | 一种电致化学发光生物传感器标记物的制备方法及应用 | |
| CN105954339A (zh) | 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN109613244B (zh) | 一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
| Zhao et al. | A CeO 2-matrical enhancing ECL sensing platform based on the Bi 2 S 3-labeled inverted quenching mechanism for PSA detection | |
| Wang et al. | Homogeneous immunoassays based on fluorescence emission intensity variations of zinc selenide quantum dot sensors | |
| WO2017088214A1 (zh) | 荧光生物检测系统 | |
| CN108375612B (zh) | 一种复合纳米材料电化学检测甲胎蛋白的方法 | |
| CN105158469B (zh) | 一种基于生物素化氨基化Fe3O4与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN102788879B (zh) | 一种生物检测试剂 | |
| CN102565020A (zh) | 一种利用量子点共振散射定量检测蛋白质的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20090909 |