CN101519667A - 一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条 - Google Patents
一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101519667A CN101519667A CN200810082860A CN200810082860A CN101519667A CN 101519667 A CN101519667 A CN 101519667A CN 200810082860 A CN200810082860 A CN 200810082860A CN 200810082860 A CN200810082860 A CN 200810082860A CN 101519667 A CN101519667 A CN 101519667A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nitrate
- paper
- test
- test strip
- nitrite
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明提供的快速测定食品中硝酸盐的试纸条利用了硝酸盐还原酶的生物化学还原方法，由硝酸盐还原酶+还原型辅酶I(又叫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，缩写符号为NADH)系统或由硝酸盐还原酶+还原型辅酶II(又叫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，缩写符号为NADPH)系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。本发明提供的试纸条在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用。本发明提供的试纸条使用方便、专一性强、能够有助于食品中硝酸盐含量的快速测定。
Description
技术领域
本发明属于检测技术领域，涉及检测硝酸盐含量的技术，尤其涉及利用硝酸盐还原酶将硝酸盐还原生成亚硝酸盐而快速测定食品中硝酸盐的试纸条及其应用。
背景技术
目前，检测食品(包括食用农产品，下同)中硝酸盐含量意义十分重要。硝酸盐本身没有危害但被人体摄入后可在硝酸还原细菌的作用下转化成亚硝酸盐，亚硝酸盐可使血红蛋白丧失携氧能力，引起中毒；另外亚硝酸盐在一定情况下可形成据有致癌作用的亚硝胺类化合物。现在食品的安全质量问题在国内市场和出口贸易中日益受到重视。因此研究快速检测食品中硝酸盐的方法对于无公害和绿色食品生产、贸易和市场监测具有重要意义。
在硝酸盐检测的若干种方法中，Griess检测是最流行，最简单的方法之一。Griess检测的原理为亚硝酸根离子与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮反应，然后再与二盐酸-1-萘乙二胺发生偶联反应，生成一种紫红色的偶氮化合物，其颜色深浅与亚硝酸盐含量成正比，再根据亚硝酸盐和硝酸盐之间的转化比例确定不同浓度的硝酸盐所对应的颜色。但硝酸盐检测时必须先把硝酸盐先转化为亚硝酸盐。目前，在国家标准(GB/T5009.33-2003)中用于检测硝酸盐的方法为镉柱还原法，但此法必须在实验室中操作，并且操作冗长；镉可以挥发，对人体具有很大的毒性。经检索文献专利可知，谢增鸿等人发明的“蔬菜中亚硝酸盐、硝酸盐的快速检测试纸及其检测方法”(申请号：03116663.6；公开号：CN1445531A)，吴良欢等人发明的“硝酸盐、亚硝酸盐快速测定试纸及其应用”(申请号：200510048918.4；公开号：CN 1645114A)均采用锌粒或锌粉或其它金属还原法，此方法中，样品需要一定的前处理，专一性不太强，灵敏度不太高。采用生物化学方法将硝酸盐还原生成亚硝酸盐并应用于硝酸盐含量的检测报道很少。
发明内容
本发明的目的是克服上述现有技术的不足，提供硝酸盐含量检测过程中更方便、专一性更强，灵敏度更高的还原方法，以更有助于硝酸盐含量的检测。
本发明提供的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法为生物化学方法，由硝酸盐还原酶+NAD(P)H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。本发明提供的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用，特别是应用于本发明设计的试纸条中。本发明提供的方法使用方便、专一性强、能够实现食品中硝酸盐含量的快速测定。
本发明提供的是一种利用硝酸盐还原酶快速测定食品中硝酸盐的试纸条及其应用，具体是：
1.本发明涉及的试纸条中硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法是生物化学方法，由硝酸盐还原酶+NAD(P)H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。其中硝酸盐还原酶指NADH依赖型硝酸盐还原酶(E.C.1.7.7.1)或NADPH依赖型硝酸盐还原酶(E.C.1.7.7.2)。
2.本发明涉及的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用，特别是应用于本发明设计的试纸条中。
3.本发明涉及的快速测定食品中硝酸盐的试纸条，由显色区和还原区组合构成，显色区为浸有等体积N-1-萘基乙二胺二盐酸和对氨基苯磺酸、酒石酸的混合液，还原区含有发明内容1所述的硝酸盐还原酶。具体通过以下方法制备：
(1)还原区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于7000.0μmol·L-1硝酸盐还原酶、10.0mmol·L-1NAD(P)H的0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH7.5)15min后，于35℃干燥或用冷风吹干，将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；
(2)显色区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于4.5％N-1-萘基乙二胺二盐酸的蒸馏水溶液15min后，于35℃干燥或用冷风吹干；后于7.5％对氨基苯磺酸、15.0％酒石酸的等体积混合蒸馏水溶液中浸泡15min，再于35℃干燥或用冷风吹干；将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；
(3)试纸条的制备：将一显色区试纸片粘接在准备好的6.0cm×0.6cm长形硬滤纸条的一端，将一还原区试纸片间隔0.3cm粘接在同一长形硬滤纸条的显色区试纸片的上端。将制作好的试纸条在避光、干燥、低温(2～8℃)下保存，即制成硝酸盐试纸条。注意试纸条免于污染。
4.本发明涉及的快速测定食品中硝酸盐的试纸条，配套有硝酸盐标准色阶为11个色块，分别代表11个硝酸盐含量等级，即0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500mg·L-1汁液重。
5.本发明快速测定食品中硝酸盐的原理是：硝酸盐应用硝酸盐还原酶还原生成亚硝酸盐后，根据国家标准(GB/T5009.33-2003)或其它改良的Griess比色法检测亚硝酸盐量，再根据亚硝酸盐和硝酸盐之间的转化比例确定不同浓度的硝酸盐量。本发明具体检测亚硝酸盐的原理是：亚硝酸盐根离子与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮反应，然后再与二盐酸-1-萘乙二胺发生偶联反应，生成一种紫红色的偶氮化合物，其颜色深浅与亚硝酸盐含量成正比。
附图说明
附图1为本发明试纸条实图，(A代表显色区，B代表还原区)
附图2为硝酸盐标准色阶(mg·L-1汁液重)
具体实施方式
本发明结合实例作进一步说明。
实施例1本发明试纸条的制备方法
还原区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于7000.0μmol·L-1硝酸盐还原酶、10.0mmol·L-1NAD(P)H的0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH7.5)15min后，于35℃干燥或用冷风吹干，将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；
显色区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于4.5％N-1-萘基乙二胺二盐酸的蒸馏水溶液15min后，于35℃干燥或用冷风吹干；后于7.5％对氨基苯磺酸、15.0％酒石酸的等体积混合蒸馏水溶液中浸泡15min，再于35℃干燥或用冷风吹干；将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；
试纸条的制备：将一显色区试纸片粘接在准备好的6.0cm×0.6cm长形硬滤纸条的一端，将一还原区试纸片间隔0.3cm粘接在同一长形硬滤纸条的显色区试纸片的上端。将制作好的试纸条在避光、干燥、低温(2～8℃)下保存，即制成硝酸盐试纸条。注意试纸条免于污染。
实施例2 本发明试剂条快速测定食品方法
取食品汁液数滴(2～3滴为宜)滴在还原区，1～2min后树立试纸条，让还原后汁液顺流至下端显色区上进行显色反应，1～2min后与标准色阶相比较，估计硝酸盐含量范围。表1为酶法硝酸盐试纸条与国家标准法(GB/T5009.33-2003)检测几种新鲜蔬菜中的硝酸盐含量的比较。酶法硝酸盐试纸条法检测的新鲜蔬菜中的硝酸盐含量虽低于国家标准法相应含量，但差异均不显著(p>0.05)。结果表明，硝酸盐试纸条法基本能够满足检测的准确度；对硝酸盐含量较低的辣椒和黄瓜也表现了较好的灵敏度。若硝酸盐浓度超过标准色阶500mg·L-1对应色阶，则需先将样品汁液稀释到500mg·L-1以内，再如上进行测定，最终数据乘以稀释倍数。不能挤出汁液的其它食品需先制备汁液。
表2 酶法硝酸盐试纸条与国家标准法检测几种新鲜蔬菜中的硝酸盐含量的比较(n＝3)
Claims (6)
1.硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法，其特征是：该方法是生物化学方法，由硝酸盐还原酶+NAD(P)H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。
2.根据权利要求1或2硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法，其特征是：由硝酸盐还原酶+NAD(P)H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。其中硝酸盐还原酶指NADH依赖型硝酸盐还原酶(E.C.1.7.7.1)或NADPH依赖型硝酸盐还原酶(E.C.1.7.7.2)。
3.根据权利要求1或2所述的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法，应用在本发明设计的试纸条中，在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用。
4.根据权利要求1或2，快速测定食品中硝酸盐的试纸条，其特征是：由显色区和还原区组合构成，显色区为浸有等体积N-1-萘基乙二胺二盐酸和对氨基苯磺酸、酒石酸的混合液，还原区含有权利要求2所述的硝酸盐还原酶。
5.根据权利要求4所述的快速测定食品中硝酸盐的试纸条，其特征是通过以下方法制备：
(1)还原区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于7000.0μmol·L-1硝酸盐还原酶、10.0mmol·L-1NAD(P)H的0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH7.5)15min后，于35℃干燥或用冷风吹干，将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；
(2)显色区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于4.5％ N-1-萘基乙二胺二盐酸的蒸馏水溶液15min后，于35℃干燥或用冷风吹干；后于7.5％对氨基苯磺酸、15.0％酒石酸的等体积混合蒸馏水溶液中浸泡15min，再于35℃干燥或用冷风吹干；将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；
(3)试纸条的制备：将一显色区试纸片粘接在准备好的6.0cm×0.6cm长形硬滤纸条的一端，将一还原区试纸片间隔0.3cm粘接在同一长形硬滤纸条的显色区试纸片的上端。将制作好的试纸条在避光、干燥、低温(2～8℃)下保存，即制成硝酸盐试纸条。注意试纸条免于污染。
6.根据权利要求5所述的快速测定食品中硝酸盐的试纸条，其特征是：配套硝酸盐标准色阶为11个色块，分别代表11个硝酸盐含量等级，即0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500mg·L-1汁液重。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810082860A CN101519667A (zh) | 2008-02-28 | 2008-02-28 | 一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810082860A CN101519667A (zh) | 2008-02-28 | 2008-02-28 | 一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101519667A true CN101519667A (zh) | 2009-09-02 |
Family
ID=41080470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200810082860A Pending CN101519667A (zh) | 2008-02-28 | 2008-02-28 | 一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101519667A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105866111A (zh) * | 2016-03-29 | 2016-08-17 | 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 | 降压保健食品中硝苯地平快速检测法及检测卡研制方法 |
| CN105866109A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 | 减肥类保健食品中酚酞快速检测法及检测卡研制方法 |
| CN110749641A (zh) * | 2019-11-04 | 2020-02-04 | 盐城工学院 | 一种实时监测水体中硝酸盐浓度的传感器 |
-
2008
- 2008-02-28 CN CN200810082860A patent/CN101519667A/zh active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105866109A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 | 减肥类保健食品中酚酞快速检测法及检测卡研制方法 |
| CN105866109B (zh) * | 2016-03-28 | 2018-06-12 | 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 | 减肥类保健食品中酚酞检测法及检测卡制备方法 |
| CN105866111A (zh) * | 2016-03-29 | 2016-08-17 | 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 | 降压保健食品中硝苯地平快速检测法及检测卡研制方法 |
| CN105866111B (zh) * | 2016-03-29 | 2018-05-08 | 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 | 降压保健食品中硝苯地平检测法及检测卡制备方法 |
| CN110749641A (zh) * | 2019-11-04 | 2020-02-04 | 盐城工学院 | 一种实时监测水体中硝酸盐浓度的传感器 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sengupta et al. | Chemically modified carbon nitride-chitin-acetic acid hybrid as a metal-free bifunctional nanozyme cascade of glucose oxidase-peroxidase for “click off” colorimetric detection of peroxide and glucose | |
| Chen et al. | A fluorescent biosensor based on catalytic activity of platinum nanoparticles for freshness evaluation of aquatic products | |
| Scheifinger et al. | H2 production by Selenomonas ruminantium in the absence and presence of methanogenic bacteria | |
| Ibarra-Escutia et al. | Amperometric biosensor based on a high resolution photopolymer deposited onto a screen-printed electrode for phenolic compounds monitoring in tea infusions | |
| CN108387545A (zh) | 四氧化三铁基复合碳纳米管模拟酶及其制备方法和应用 | |
| CN105241854A (zh) | 一种利用荧光碳量子点检测三价铁离子的方法 | |
| CN101776608B (zh) | 适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量Hg2+的方法 | |
| CN101519667A (zh) | 一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条 | |
| Soubeyrand et al. | Rehydration protocols for active dry wine yeasts and the search for early indicators of yeast activity | |
| Li et al. | Biomimetic enzyme MOF-NADH-mediated and 3, 3′, 5, 5′-tetramethylbenzidine-based colorimetric assay for formaldehyde detection | |
| AU2019100369A4 (en) | Utility of PtRu alloy nanozyme in detection of ascorbic acid | |
| CN107036982A (zh) | 一种基于循环酶法的无标记比色传感检测腺苷的方法 | |
| Li et al. | Reduced graphene oxide-persimmon tannin/Pt@ Pd nanozyme–based cascade colorimetric sensor for detection of 1, 5-anhydroglucitol | |
| CN115656072A (zh) | 一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中亚硝酸盐的方法 | |
| CN109470637B (zh) | 一种测定乙醇脱氢酶活性的方法 | |
| CN113861962A (zh) | 一种比率型荧光探针及其制备方法和在检测过氧化氢中的应用 | |
| WO2009041415A1 (ja) | 新規グルコース脱水素酵素 | |
| CN102680415A (zh) | 一种用比色法测定生物组织内草酰乙酸含量的方法 | |
| EP0386691A3 (en) | Dna probe detection method with bacterial luciferase system | |
| Yang et al. | Synthesis of Biotin Vitamers from Biotin Diaminocarboxylic Acid or 7, 8-Diaminopelargonic Acid by a Purified Enzyme of Pseudomonas graveolens | |
| Sýs et al. | Interference of ascorbic acid in the determination of hydroquinone using an amperometric enzyme biosensor based on carbon paste | |
| CN105738352A (zh) | 一种基于双金属共掺杂二维纳米材料的光电化学莱克多巴胺传感器的制备方法及应用 | |
| CN101329265A (zh) | 蔗糖测定试剂盒及蔗糖浓度测定方法 | |
| CN103529021A (zh) | 一种总糖快速分析方法 | |
| CN101329268A (zh) | 蔗糖测定试剂盒及蔗糖的浓度测定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20090902 |