CN101519429B

CN101519429B - 一种固相法合成阿加曲班的方法

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Publication number: CN101519429B
Application number: CN 200910106466
Authority: CN
Inventors: 李红玲; 刘建; 马亚平; 袁建成
Original assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2009-03-31
Filing date: 2009-03-31
Publication date: 2012-07-25
Anticipated expiration: 2029-03-31
Also published as: CN101519429A

Abstract

本发明公开了一种固相法合成阿加曲班的方法，包括以下步骤：1)由(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸、高分子树脂、保护氨基酸、偶联试剂和有机碱为起始原料，得到(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸-树脂；2)去Fmoc保护，采用固相法偶联Fmoc-Arg(X)-OH，得到Fmoc-Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-树脂；3)去Fmoc保护，偶联3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-磺酰氯后得到全保护的阿加曲班-树脂；4)全保护肽的阿加曲班-树脂经过脱侧链保护基团的反应，获得阿加曲班粗品；5)重结晶得到高纯度的阿加曲班。本发明的工艺具有反应操作简单、后处理容易、原料投入少、成本低、总收率高达80％以上，具有可观的经济实用价值，在多肽药物设计合成领域具有广泛的应用前景。

Description

一种固相法合成阿加曲班的方法

技术领域

本发明本发明属于制药技术领域，尤其是涉及一种固相法合成阿加曲班的新方法。

背景技术

阿加曲班是由日本三菱(Mitsubishi)化学研究所最早研制合成的抗血栓药，首先被应用于临床治疗周围动脉闭塞性疾病，然后开始将其用于治疗急性脑血栓形成，以及心肌梗死溶栓的辅助治疗，并用于在抗凝血酶(AT)缺乏患者进行血透时的抗凝处理。

美国食品与药品管理局(FDA)在2000年批准了史克必成(SmithKlineBeecham)和得克萨斯生物技术公司(Texas Bitechnology)的可注射抗血栓小分子药物阿加曲班(argatroban，Novastan)应用于治疗和预防血栓形成及肝素诱导的免疫性疾病-血小板减少症(HIT)，以及用于对需要进行经皮冠脉介入术(PCI)病人的治疗。2003年3月5日在美国中风学会第28届国际中风大会上公布的多中心二期临床试验结果表明，阿加曲班在急性缺血性中风治疗中的疗效显著、安全性高。

2005年，天津药物研究院药业有限责任公司治疗急性脑血栓的一种新药“达贝-阿加曲班”已获国家食品药品监督管理局批准上市，这种药是目前国内独家生产上市的二类新药，而且被列入“十五”国家863项目并由国家科技部颁发了国家重点新产品证书。

阿加曲班化学名：(2R，4R)-1-[(2S)-5-(氨基亚氨甲基)氨基-1-氧代-2-[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰胺基]戊烷]-4-甲基哌啶-2-甲酸，其结晶水合物分子结构为：

其化学成分是21(R)和21(S)的混合物，通常是64～65∶36～35(US6440417；Cossy.J.，et al，Bioorganic&Medicine Chemistry Letters，11(2001)，1989-1992；Journal of Pharmacertical Sciences，Vol.82，No.6，672(1993))，其结构式是：

1 Argagroban(21(R)∶21(S)＝65∶35) 1a X＝H，Y＝CH₃，21-(R)-Argatroban

1b X＝CH₃，Y＝H，21-(S)-Argatroban

已经报道的阿加曲班的合成路线都是以硝基-L-精氨酸为起始原料、以哌啶羧酸或喹啉磺酰氯缩合先后次序不同，分成两条主要路线。

1、氨基保护法

硝基-L-精氨酸首先与哌啶羧酸酯缩合时，称为氨基保护法：硝基-L-精氨酸的氨基用t-Boc保护、再与哌啶羧酸酯缩合、去t-Boc保护基、与喹啉磺酰氯缩合、酯水解、氢化去硝基得阿加曲班。在氨基保护法中又有两条合成线路：

(1)硝基精氨酸t-Boc保护后与(2R，4R)哌啶甲酸酯缩合(CN 1951916；US4258192；US 4201863；JP 81-15267；US 6440417；特许公报平2-31055)。具体反应路线如图1所示。

(2)硝基精氨酸t-Boc保护后与反式哌啶羧酸酯缩合、分离、拆分，再与喹啉磺酰氯缩合(Cossy.J.，et al，Bioorganic&Medicine Chemistry Letters，11(2001)，1989-1992)。具体反应路线如图2所示。

2、非保护法

硝基-L-精氨酸首先与喹啉磺酰氯缩合时，称为非保护法：硝基-L-精氨酸与喹啉磺酰氯缩合后再与哌啶羧酸酯缩合、酯水解、氢化去硝基得阿加曲班。当L-精氨酸直接与喹啉磺酰氯缩合时反应副产物多、不易分离，不适用于工业化生产(特许公报平1-35000)。硝基-L-精氨酸为原料时反应产品单一，操作简易，适用于工业化生产(EP 823430)。具体反应路线如图3所示。

在已经报道的文献和专利中，阿加曲班的合成都是采用的液相法。采用液相法会增加大量的反应后处理工作，同时中间体和目标产物的纯化、分离也是很难的工作，再有就是液相反应收率较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污染小、有利于实现产业化的阿加曲班固相法合成方法，解决现有技术存在的缺陷。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种固相法合成阿加曲班的方法，包括以下步骤：

1)由(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸、高分子树脂、保护氨基酸、偶联试剂和有机碱为起始原料，在保护的有机溶剂中反应得到(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸-树脂；

2)将(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸-树脂去Fmoc保护，采用固相法偶联Fmoc-Arg(X)-OH，得到Fmoc-Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-树脂；

3)将Fmoc-Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-树脂去Fmoc保护，偶联3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-磺酰氯后得到全保护的阿加曲班-树脂；

4)全保护肽的阿加曲班-树脂经过脱侧链保护基团的反应，获得阿加曲班粗品；

5)阿加曲班粗品经过重结晶得到高纯度的阿加曲班。

所述保护的高分子树脂为羟基树脂和氯树脂。

所述保护的有机溶剂是N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、四氢呋喃(THF)、1，4-二氧六环或者二甲基亚砜(DMSO)中的一种或者几种组合。

所述保护的有机碱为季胺。

所述保护的有机碱为N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)、N-甲基吗啡啉(NMM)或者2，4，6-三甲基吡啶(TMP)中的一种或者几种组合。

所述保护的偶联剂体系包括DCC/HOBt、EDC/HOBt、DIC/HOBt、DIC/HOAt、PyBOP/HOBt、PyAOP/HOAt、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt、HCTU/HOCt和HATU/HOAt。

所述固相法偶联Fmoc-Arg(X)-OH，包括Fmoc-Arg(Pbf)-OH和/或Fmoc-Arg(Mtr)-OH。

所述步骤4)脱侧链保护基团的试剂包括三氟乙酸∶水＝0～100∶100～0(v/v)，或者三氟乙酸∶水∶三异丙基硅烷＝100～0∶0～50∶0～50(v/v)，或者三氟乙酸∶苯甲硫醚∶苯甲醚∶1，2-乙二硫醇＝100～0∶0～50∶0～30∶0～20(v/v)。

本发明与现有技术相比，有如下优点和有益效果：

本发明采用固相法合成阿加曲班，本发明的工艺具有反应操作简单、后处理容易、原料投入少、成本低、总收率高达80％以上，具有可观的经济实用价值，在多肽药物设计合成领域具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为氨基保护法合成工艺一条合成路线图；

图2为氨基保护法合成工艺另一条合成路线图；

图3为非保护法合成工艺合成路线图；

图4为本发明固相法合成阿加曲班合成路线图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明：

说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列如表1所示：

表1缩略词表

Fmoc	9-芴甲氧羰基
		HBTU	O-苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HATU	O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
		TBTU	O-(苯并三唑-1-氧)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟硼酸盐
PyBOP	(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐
		DIC	二异丙基碳二亚胺
HOBt	1-羟基苯并三唑
		HOAt	1-羟基-7-偶氮苯并三唑
DIPEA	二异丙基乙胺
		TMP	2，4，6-三甲基吡啶
Pbf	2，2，4，6，7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulf onyl
		Mtr	4-Methoxy-2，3，6-trimethylbenzenesulfonyl
Trt	三苯甲基
		DMF	N，N-二甲基甲酰胺
DCM	二氯甲烷
		DBLK	六氢吡啶/DMF溶液

实施例1：(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂的制备

将氯树脂或羟基树脂200.0g(替代度为0.5mmol/g)，加入到1000ml的圆底烧瓶中，加入DMF600ml后剧烈搅拌。冰水浴，将36g(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸和相等摩尔比的DIC、HOBt、DIPEA加入至上述装有树脂的圆底烧瓶中反应2小时。反应结束，过滤，用DMF洗涤3次，DCM洗3次，后用甲醇30min收缩得到(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂，检测替代度为0.48mmol/g，收率96％。

实施例2：(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂的制备

将上述制得的(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸和氯树脂加入至1000ml圆底烧瓶中，加入20％DBLK 600ml后剧烈搅拌30min。反应结束，过滤，用DMF洗涤3次，DCM洗3次，放置待用。

实施例3：Fmoc-Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂的制备

将防止待用的(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂加入至1000ml圆底烧瓶中，加入700ml四氢呋喃剧烈搅拌。冰水浴，将65g Fmoc-Arg(X)-OH和相等摩尔比的DIC、HOBt、DIPEA加入至上述装有树脂的圆底烧瓶中反应2小时。反应结束，过滤，用DMF洗涤3次，DCM洗3次，后用甲醇30min收缩得到Fmoc-Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂，检测替代度为0.45mmol/g，收率94％。

实施例4：Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂的制备

将制得的Fmoc-Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂加入至1000ml圆底烧瓶中，加入20％DBLK 600ml后剧烈搅拌30min。反应结束，过滤，用DMF洗涤3次，DCM洗3次，放置待用。

实施例5：全保护的阿加曲班-氯树脂或羟基树脂的制备

将放置待用的Arg(X)-(2R，4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸-氯树脂或羟基树脂加入至1000ml圆底烧瓶中，加入800ml二氯甲烷剧烈搅拌。冰水浴，将0.1mol 3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-磺酰氯和相等摩尔比的DIPEA加入至上述装有树脂的圆底烧瓶中反应2小时。反应结束，过滤，用DMF洗涤3次，DCM洗3次，后用甲醇30min收缩得到全保护的阿加曲班树脂。

实施例6：阿加曲班的制备

将全保护的阿加曲班树脂加入至5000ml圆底烧瓶中，冰水浴冷却，加入250ml三氟乙酸和水的混合物(体积比95∶5)反应4小时。反应结束，过滤，用25L冰乙醚沉淀、离心、洗涤、离心和干燥，得到阿加曲班白色固体 47.9g，收率99％。重结晶后得到高纯度阿加曲班42.6g，总收率81％。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种固相法合成阿加曲班的方法，包括以下步骤：

1)由(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸、高分子树脂、Fmoc基团保护的氨基酸、偶联试剂和有机碱为起始原料，在保护的有机溶剂中反应得到(2R，4R)-N-Fmoc-4-甲基-2-哌啶甲酸-树脂，所述的高分子树脂为羟基树脂或氯树脂；所述偶联试剂是DIC/HOBt；所述有机碱是N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)；所述保护的有机溶剂是N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)、四氢呋喃(THF)中的一种或者几种组合；

4)全保护的阿加曲班-树脂经过脱侧链保护基团的反应，获得阿加曲班粗品，所述的脱侧链保护基团试剂是三氟乙酸∶水＝95∶5(v/v)；

5)阿加曲班粗品经过重结晶得到高纯度的阿加曲班。

2.根据权利要求1所述固相法合成阿加曲班的方法，其特征在于：所述固相法偶联Fmoc-Arg(X)-OH，包括Fmoc-Arg(Pbf)-OH和/或Fmoc-Arg(Mtr)-OH。