CN101518540A - 一种药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物组合物，属于一种药物制剂。包含0.01％－10％(w/v)的伪人参皂苷GQ、药学可接受的溶剂，pH值为3.0至7.0。本发明的优点伪人参皂苷GQ注射液全身主动过敏反应阴性。伪人参皂苷GQ注射液被动皮肤过敏试验反应阴性。注射液稳定，澄明度好，冻干粉稳定。

Description

一种药物组合物

技术领域

本发明属于一种药物制剂。

背景技术

心肌缺血(MI)是心肌氧的供应和需求间平衡失调的结果。一方面由于冠脉供血不足，另一方面需求过大以致心肌组织缺少氧和营养物，造成心肌代谢与功能障碍。缺血引起氧化代谢障碍，促进无氧代谢而导致乳酸等无氧代谢的有害产物堆积，引起中毒。临床上心肌缺血的表现有心绞痛、急性心肌梗塞，也有无症状但有缺血性心电图改变的无症状心肌缺血。

据《中国心血管病报告2006》报道，中国处于经济转型期，国民经济发展较快，人们的生活方式发生重大变化。总体上看，中国人口预期寿命有所延长，但以心血管病为代表的慢性病日趋增加，发病年龄前移。心血管病的高发病率、高致残率和高死亡率给社会与居民造成沉重负担，已成为重大的公共卫生问题。根据第三次全国卫生服务调查研究的数据，2003年中国人群冠心病的患病率为4.6‰，其中城市人群为12.4‰，农村人群2.0‰。估计中国每年新发生心肌梗死50万人，心肌梗死现患200万人，其中1/2丧失劳动能力。1990～2005年，中国农村居民心血管病死亡率波动160～240人/10万人，城市居民为210～240人/10万人，居死因构成首位。估计每年全国心血管病死亡300万人，占总死亡人数的1/3强。

目前，心肌缺血的常见治疗为发作时舌下含化硝酸甘油或应用抗心肌缺血药物，如β-阻滞剂、钙通道阻滞剂和长效硝酸盐。长效硝酸盐类药物如硝酸甘油、消心痛，但长期服用易产生耐受性，疗效会愈来愈差，且快速服用硝酸盐类药物可导致交感神经兴奋，更加剧心动过速、心肌缺血。长效硝酸盐类药物的耐受性一直是引起争议的问题，有报道治疗24小时后人体就产生耐受性，因此有人对长效制剂提出疑问；β-阻滞剂如心得安，近来发现，在该药物治疗期间，肌体的代谢、生化性质会发生变化。这些变化对心血管疾病有潜在的影响。心得安能提高甘油三羧酸酯水平和降低HDL。一些研究证明，β-阻滞剂的心脏选择性越好，对HDL的影响越小。有文献报道具有内源性抑交感活性的药物对血脂有益，其副作用可通过合用利尿剂而得以减轻。由于目前还无确切数据证明这些生化变化对于发病率和死亡率的影响。应慎重解释上述β-阻滞剂对人体生化性质影响的研究说明。毫无疑问，由于抗心绞痛药物对动脉粥状硬化过程有潜在的影响，因此它对代谢的影响应引起重视。钙通道阻滞剂如异搏定、心可定等，该类药物引起的非致命性副作用也很常见，主要有头痛、外周水肿、便秘、后者对老年病人尤为麻烦。有报道钙通道阻滞剂能导致老年患者假性肠梗阻，以至于经剖腹手术才能缓解症状。

直接增加心脏供血是治疗心肌缺血的另一手段。患者通过气囊血管成形术和冠状动脉分流术可开放阻塞了的冠状动脉，从而改善心脏供血。但是，如果冠状动脉疾病部位比较分散则不宜手术，再加之手术治疗较之药物治疗费用昂贵，而且在手术后仍需服用药物维持治疗。因此，目前急需一种高效、低毒的抗心绞痛药。

人参为五加科(Araliaceae)植物Panax ginseng C.A.Mey.，其根是名贵的中药，“主补五脏、安精神、定魂魄、除邪气、明目开心益智、久服轻身延年”，具有扶正固本之功效。大量科学实验结果表明人参茎叶也富含有根的生物活性物质，尽管组成和含量上有差异，但是，作为扶正固本药已为各方面的研究逐步肯定。伪人参皂苷GQ(简称PGQ)是20(S)-人参皂苷Rg₃经结构修饰后得到的全新的Ocotillon型化合物，已取得专利保护。

化学名称：3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖基-达玛-20S，24S-环氧-3β，12β，25-三醇

分子式：C₄₂H₇₂O₁₄·H₂O

分子量：819.01

结构式：

发明内容

本发明提供一种药物组合物，是一种伪人参皂苷GQ制剂。

本发明采取的技术方案是：

包含0.01％-10％(w/v)的伪人参皂苷GQ、药学可接受的溶剂，pH值为3.0至7.0。

本发明还包括缓冲剂、渗透压调节剂、0.005％-1％的防腐剂中的一种或几种。

药学可接受的溶剂为水、甘油、乙醇、丙二醇中的一种或几种的组合，优选为丙二醇。

本发明中缓冲剂为盐酸、硫酸、磷酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、碳酸钠、氢氧化钠等。

本发明中渗透压调节剂为碳水化合物、多元醇或氯化钠等，优选葡萄糖、氯化钠。

本发明中防腐剂为间甲酚、酚、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。

本发明还含增溶剂。

本发明中增溶剂为吐温-80。

本发明pH值为4.0至6.0。

本发明是冻干的。

本发明制剂用于心肌缺血、心绞痛、心肌梗塞、失血性休克的治疗。每天给予用者1-4次。每次的剂量为0.05mg/kg-3mg/kg。通过注射途径给药，注射途径为静脉给药。

本发明的优点

伪人参皂苷GQ在改善+dp/dt、平均血流量(MBF)、每搏量(SV)、心脏指数(CI)、每搏指数(SI)、冠脉血管阻力(CVR)、动脉血氧饱和度、心肌梗死病理改变等方面，优于阳性药硝酸甘油。

在改善-dp/dt、心肌缺血范围、心肌缺血程度、心肌梗塞面积、血清酶等方面，具有和阳性药硝酸甘油类似的作用。

故伪人参皂苷GQ能减轻心肌缺血损伤，增加心肌供血，对心脏有保护作用。

通过全身主动过敏试验表明，伪人参皂苷GQ注射液全身主动过敏反应阴性。伪人参皂苷GQ注射液被动皮肤过敏试验反应阴性。

伪人参皂苷GQ注射液稳定，澄明度好。

伪人参皂苷GQ冻干粉稳定。

具体实施方式

实施例1

伪人参皂苷GQ          60.0g

丙二醇                2000ml

制剂工艺取伪人参皂苷GQ原料药60.0g，加丙二醇2000ml，在60-80℃下加热溶解，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例2

伪人参皂苷GQ          0.2g

丙二醇                2000ml

制剂工艺取伪人参皂苷GQ原料药0.2g，加丙二醇2000ml，在60-80℃下加热溶解，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例3

伪人参皂苷GQ           200g

丙二醇                 2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药200g，加丙二醇2000ml，在60-80℃下加热溶解，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例4

伪人参皂苷GQ           50g

丙二醇                 500ml

注射用水               加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加注射用水至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例5

伪人参皂苷GQ           50g

甘油                   500ml

注射用水               加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加甘油500ml，在60-80℃下加热溶解，加注射用水至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例6

伪人参皂苷GQ           50g

乙醇                   200ml

注射用水               加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加乙醇200ml，在60-80℃下加热溶解，加注射用水至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例7

伪人参皂苷GQ         50g

乙醇                 200ml

甘油                 500ml

注射用水             加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加乙醇200ml，在60-80℃下加热溶解，加入甘油500ml，加注射用水至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例8

伪人参皂苷GQ         50g

丙二醇               500ml

吐温-80              4g

注射用水             加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml、吐温-804g，在60-80℃下加热溶解，加注射用水至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例9

伪人参皂苷GQ         50g

10％盐酸             50ml

丙二醇               加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加入10％盐酸，加丙二醇至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例10

伪人参皂苷GQ          50g

10％枸橼酸钠          50ml

丙二醇                加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加入10％枸橼酸，加丙二醇至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-7.0。

实施例11

伪人参皂苷GQ          50g

10％马来酸钠          50ml

丙二醇                加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加入10％马来酸钠，加丙二醇至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-7.0。

实施例12

伪人参皂苷GQ          50g

10％酒石酸钠          50ml

丙二醇                加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加入10％酒石酸钠，加丙二醇至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-7.0。

实施例13

伪人参皂苷GQ          50g

10％乳酸钠            50ml

丙二醇加至           2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加入10％乳酸钠，加丙二醇至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-7.0。

实施例14

伪人参皂苷GQ         50g

10％碳酸钠           50ml

丙二醇               加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加入10％碳酸钠，加丙二醇至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为5.0-7.0。

实施例15

伪人参皂苷GQ         50g

10％氢氧化钠         50ml

丙二醇               加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇500ml，在60-80℃下加热溶解，加入10％氢氧化钠，加丙二醇至2000ml，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为5.0-7.0。

实施例16

伪人参皂苷GQ         50g

丙二醇               2000ml

5％葡萄糖溶液        2501

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇2000ml，在60-80℃下加热溶解，加入5％葡萄糖溶液2501，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000瓶，pH值为4.0-6.0。

实施例17

伪人参皂苷GQ         50g

丙二醇               2000ml

0.9％氯化钠溶液      2501

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇2000ml，在60-80℃下加热溶解，加入0.9％氯化钠溶液2501，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000瓶，pH值为4.0-6.0。

实施例18

伪人参皂苷GQ         50g

对羟基苯甲酸甲酯     1g

丙二醇               2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇2000ml，在60-80℃下加热溶解，加入对羟基苯甲酸甲酯1g，溶解，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例19

伪人参皂苷GQ         50g

对羟基苯甲酸甲酯     2g

对羟基苯甲酸乙酯     1g

丙二醇               2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加丙二醇2000ml，在60-80℃下加热溶解，加入对羟基苯甲酸甲酯2g、对羟基苯甲酸乙酯1g，溶解，滤过，灌封，121℃湿热灭菌15min，分装，制成1000支，pH值为4.0-6.0。

实施例20

伪人参皂苷GQ         50g

聚乙二醇-200         200ml

注射用水            加至2000ml

取伪人参皂苷GQ原料药50g，加聚乙二醇200ml，在60-80℃下加热溶解，加注射用水至2000ml，加入0.05％(g/ml)的针用炭，室温搅拌吸附30分钟，过滤脱炭，再用0.22μm微孔滤膜精滤，灌装，冻干，制成1000支。

药效学试验：(一)伪人参皂苷GQ对犬急性心肌梗塞的影响

1.1 实验材料

1.1.1 药品伪人参皂苷GQ由吉林大学基础医学院化学教研室提供，白色粉末，纯度98.4％，批号：001022；硝酸甘油注射液由广州明兴制药厂生产，批号：990803；戊巴比妥钠，上海化学试剂分装厂，批号：84-06-12；氯化硝基四氮唑兰，上海前进化学试剂厂生产，批号：20000502；盐酸利多卡因注射液，上海第二军医大学朝晖制药厂生产，批号：990405。生化试剂天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒，肌酸激酶(CK)试剂盒，乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，均由北京众生康生物技术开发中心生产，批号：20010501。

1.1.2 动物 普通犬，体重10～17kg，由吉林大学实验动物部提供。

1.1.3 仪器 RM-6000型多导生理记录仪，MFV-3200型电磁流量计，均由日本光电公司生产。EOS880型半自动血液生化分析仪，意大利生产，Corning158血气分析仪，美国生产。SC-3电动呼吸机，上海医疗设备厂生产。

1.1.4 给药剂量：GQ1、2、4mg/kg，硝酸甘油1.25mg/kg。给药途径：静脉给药。给药体积均为1ml/kg。GQ配药浓溶液浓度分别为10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml的丙二醇溶液；给药前加9倍量体积的生理盐水稀释成浓度分别为1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml的溶液。溶媒对照组给予相应的10％丙二醇的生理盐水溶液。

1.2 实验方法

健康犬30只，随机分为5组，每组6只，用30mg/kg戊巴比妥钠溶液麻醉，iv。背位固定，用烧灼器切开颈部皮肤，分离气管进行气管插管，连接人工呼吸机，正压2～3kPa；分离左侧颈总动脉，插管连接压力换能器，测定动脉血压(BP)；分离右侧股动脉，插心室导管，连接压力换能器，记录左室内压(LVSP)，经耦合放大器，记录左室舒末压(LVEDP)，经微分处理器记录左室内压最大变化速率(±dp/dt)；分离右侧股静脉以备给药用；用针式电极刺入四肢皮下，记录标II导联心电图(ECG)，计算心率(HR)。

犬右侧卧位，沿胸骨左侧第4肋间开胸，去掉第4肋骨，用肋骨牵开器牵开肋骨，暴露心脏，将心包膜提起做心包床，分离主动脉根部，放置适宜电磁流量计探头，测定主动脉流量即心输出量(Co)；分离冠状动脉前降支下1/3处，备线待结扎用；分离冠状动脉左旋支，放置适宜电磁流量计探头，测定冠脉流量(CBF)；用湿布式电极，测量心外膜电图(EECG)。记录24点，一点放置正常区，其余23点分别放置于梗塞边缘区和梗塞中心区。

手术完毕，稳定10分钟。然后记录正常血流动力学各项指标和EECG；分别取动脉(A)血和静脉(V)血测血气值，取V血5ml进行离心，分离血清，待测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和天门冬氨酸转移酶(AST)。

结扎前iv盐酸利多卡因，防止心律失常。然后结扎冠脉前降支下1/3处，如心肌缺血EECG不明显，再结扎冠脉前降支1/2处，造成心肌缺血模型，记录心肌缺血时及给药后5、10、20、30、45、60、90、120、150、180、240分钟血流动力学各项指标；记录心肌缺血及药后5、10、20、30、45、60、90、120、180、240、300、360分钟EECG变化。以ST段升高总mV数(∑-ST)表示心肌缺血程度，以ST段抬高≥2mv的导联数表示心肌缺血范围(N-ST)；检测心肌缺血、药后60、120、180、240分钟血气值及心肌缺血6小时的血清心肌三酶含量；实验结束摘取心脏称全心重；沿冠状沟切除心房，称左室重。然后平行状将心室切成1cm厚的心肌片，剪下结扎线下1cm处心肌组织1cm³，放入10％福尔马林溶液中固定，做光镜病理切片检查；将心肌片放入0.1％的氯化硝基四氮唑兰溶液中染色，于37℃恒温水浴温孵10分钟左右，取出用滤纸吸去水分，将非梗塞区染成兰色的组织剪去，称重梗塞区心肌组织重量，按称重法计算梗塞心肌组织占全心或左心室重量的百分率。

将血流动力学一级数据按公式计算二级数据，包括心肌血流量、心搏出量、心脏指数、心搏指数、左室作功、冠脉阻力、总外周阻力、心肌耗氧量、心肌耗氧指数、心肌氧利用率、动脉和静脉血氧含量。所有实验数据用均值±标准差(x±s)表示，进行组间实测值及变化百分率t检验分析。

1.3 实验结果

1.3.1 对心率(HR)的影响

GQ各剂量组对HR无明显影响，与溶媒对照组比较，无显著差异。硝酸甘油在药后5～90、150、240分钟明显减慢HR，下降百分率与溶媒对照组比较有显著差异，P<0.05，P<0.01。

1.3.2 对血压(BP)的影响

(1)对收缩压(SBP)的影响

GQ各剂量组对SBP略有降低，但与溶媒对照组比较，无显著性意义。硝酸甘油在药后5～45分钟的下降百分率明显高于溶媒对照组，两组相比有显著差异，P<0.05，P<0.01。

(2)对舒张压(DBP)的影响

GQ各剂量组对DBP有下降趋势，大剂量组DBP还可达到-15.42±19.93％，但与溶媒对照组比较，P>0.05，无显著差异。硝酸甘油在药后20分钟时DBP的下降百分率明显高于溶媒对照组，差异显著，P<0.05。

(3)对平均动脉压(MBP)的影响

GQ各剂量组对MBP均有下降趋势，但与溶媒对照组比较，无明显差异。硝酸甘油在药后5～30分钟平均动脉压的下降百分率明显高于溶媒对照组，两组相比较差异显著，P<0.05。

1.3.3 对左室内压(LVSP)的影响

GQ各剂量组均对LVSP无显著影响，虽然大剂量组下降百分率高达-12.83±8.70，但与溶媒对照组比较，P>0.05。硝酸甘油组在给药后20分钟时LVSP百分率下降明显高于溶媒对照组。两组相比差异显著，P<0.05。

1.3.4 对左室舒末压(LVEDP)的影响

GQ各剂量组均可使LVEDP先略有升高，中剂量和大剂量组在后期有所降低，但与溶媒对照组比较，无显著差异。硝酸甘油组LVEDP略有下降，但与溶媒对照组比较，无显著性意义。

1.3.5 对左室内压最大变化速率(±dp/dt)的影响

(1)对+dp/dt的影响

GQ小、中剂量组对+dp/dt无明显影响；大剂量组给药后20～180分钟+dp/dt的变化百分率明显低于溶媒对照组，两组相比，有显著差异，P<0.05，P<0.01。硝酸甘油组药后5～60分钟+dp/dt变化百分率明显低于溶媒对照组，两组相比有明显差异，P<0.05，P<0.01。

(2)对-dp/dt的影响

GQ小、大剂量组对-dp/dt无明显影响。中剂量组在药后30分钟时-dp/dt明显低于溶媒对照组，两组相比差异显著，P<0.05。硝酸甘油在药后30分钟时-dp/dt显著低于溶媒对照组，两组相比差异明显，P<0.05。

1.3.6 对冠脉流量(CBF)的影响

GQ小剂量组在药后10分钟、中剂量组在药后30分钟、大剂量组在药后5~45分钟CBF均明显高于溶媒对照组，两组相比差异显著，P<0.05。硝酸甘油组在药后5～90分钟CBF明显增加，与溶媒对照组相比，差异显著，P<0.05，P<0.01。其药后20~30分钟CBF的上升百分率显著高于溶媒对照组，P<0.05，P<0.01。

1.3.7 对心输出量(Co)的影响

GQ各剂量组，给药后Co逐渐减少，但小剂量组在240分钟时Co仍高于溶媒对照组，两组比较差异显著，P<0.05。硝酸甘油组在药后45分钟Co明显低于溶媒对照组，两组相比，有显著差异，P<0.05。

1.3.8 对平均血流量(MBF)的影响

GQ小剂量组对MBF无明显影响；中剂量组在药后各时间点均可增加MBF，与溶媒对照组比较差异显著，P<0.05，P<0.01；大剂量组在药后5～45分钟MBF明显高于溶媒对照组，两组相比，有显著差异，P<0.05。硝酸甘油组药后20～30分钟MBF上升百分率明显高于溶媒对照组，两组比较差异显著，P<0.05，P<0.01。

1.3.9 对每搏量(SV)的影响

GQ各剂量组给药后SV逐渐减少，GQ小剂量组240分钟其下降百分率明显低于溶媒对照组，P<0.05。硝酸甘油组给药后SV逐渐减少。

1.3.10 对心脏指数(CI)的影响

GQ小、大剂量组均对CI无明显影响。中剂量组药后120～150分CI明显高于溶媒对照组，两组比较差异显著，P<0.05。硝酸甘油组药后5分钟时CI的下降百分率明显低于溶媒对照组，两组比较，差异显著，P<0.05。

1.3.11 对每搏指数(SI)的影响

GQ小剂量组在药后240分钟时SI的下降百分率明显低于溶媒对照组，两组比较差异显著，P<0.05。PGQ其余组对SI无明显影响。硝酸甘油组对SI无明显影响。

1.3.12 对左室作功的影响

GQ各剂量组给药后左室作功逐渐减少，但与溶媒对照组比较无显著性差异。硝酸甘油组在给药后5、45分钟左室作功的下降百分率明显高于溶媒对照组，两组比较差异显著P<0.05。

1.3.13 对冠脉血管阻力(CVR)影响

GQ小、大剂量组对CVR无明显影响。GQ中剂量组药后5、20、45、60、120～240分钟多个时间点CVR明显降低，与溶媒对照组相比，差异显著，P<0.05。硝酸甘油组合在药后5～45、90分钟CVR的下降百分率明显高于溶媒对照组，两组相比差异显著，P<0.05，P<0.01，P<0.001。

1.3.14 对总外周血管阻力(TPVR)的影响

GQ各剂量组对TPVR均无显著影响。硝酸甘油组对TPVR无显著影响。

1.3.15 对心肌耗氧量的影响

GQ各剂量组及硝酸甘油组给药后对心肌耗氧量影响不明显，与溶媒对照组比较，无显著差异，P>0.05。

1.3.16 对心肌耗氧指数的影响

GQ各剂量组对心肌耗氧指数略有下降，但与溶媒对照组相比较，无显著差异，P>0.05。硝酸甘油组在给药后5～90分钟、240分钟心肌耗氧指数百分率明显低于溶媒对照组，两组相比，差异显著，P<0.05，P<0.01。

1.3.17 对心肌氧利用率的影响

GQ各剂量组及硝酸甘油组对心肌氧利用率均无明显影响，与溶媒对照组比较，无显著差异。

1.3.18 对血氧含量的影响

GQ各剂量组和硝酸甘油组对动脉和静脉血氧含量均无明显影响。结果见表21。

1.3.19 对血氧饱和度的影响

GQ小剂量组在给药后120分钟时动脉血氧饱和度的上升百分率明显高于溶媒对照组，两组比较差异显著，P<0.05。其余各组均无明显影响。

1.3.20 对心外膜电图(EECG)的影响

(1)对心肌缺血范围(N-ST)的影响

GQ小剂量组在给药后45～120分钟、360分钟N-ST明显低于溶媒对照组，P<0.05，其降低百分率明显高于溶媒对照组，P<0.05。

中剂量组在药后45～360分钟N-ST明显小于溶媒对照组，两组相比差异显著，P<0.05，其20～180、240～360分钟N-ST的下降百分率明显高于溶媒对照组，P<0.05。

GQ大剂量组在药后90～180分钟N-ST明低于溶媒对照组，P<0.05，其降低百分率明显高于溶媒对照组，与溶媒对照组相比差异显著，P<0.05。

硝酸甘油组在药后45分钟、90～360分钟N-ST明显小于溶媒对照组，两组相比差异显著，P<0.05，P<0.01。其45～360分钟N-ST的降低百分率明显高于溶媒对照组，P<0.05。

(2)对心肌缺血程度(∑-ST)的影响

GQ小剂量在药后90分钟∑-ST明显轻于溶媒对照组，两组比较差异显著，P<0.05，药后20～120分钟其下降百分率明显高于溶媒对照组，两组比较有显著差异，P<0.05，P<0.01。

GQ中剂量组在药后90～120分钟∑-ST显著轻于溶媒对照组，P<0.01，P<0.05，药后20～360分钟∑-ST的下降百分率明显高于溶媒对照组，P<0.05，P<0.01。

GQ大剂量组在药后60～360分钟∑-ST比溶媒对照组轻，其下降百分率明显高于溶媒对照组，P<0.05，P<0.01。

硝酸甘油组药后60～360分钟∑-ST明显轻于溶媒对照组，与溶媒对照组相比有显著差异，P<0.05，P<0.01，药后10～360分钟∑-ST的降低百分率明显高于溶媒对照组，P<0.05，P<0.01，P<0.001。

1.3.21 对血清酶的影响

GQ小剂量组给药后AST明显低于溶媒对照组，两组相比，差异显著，P<0.05，对CK、LDH无明显影响；GQ中剂量组给药后LDH含量明显降低，其下降百分率明显低于溶媒对照组，P<0.05，其AST、CK值与溶媒对照组比较无显著差异；GQ大剂量组AST和LDH含量及其下降百分率明显低于溶媒对照组，P<0.05，P<0.01。硝酸甘油组给药后AST、LDH含量显著下降，其下降百分率明显低于溶媒对照组，两组相比，差异显著，P<0.05，P<0.01。

1.3.22 对心肌梗塞面积的影响

GQ小剂量组心肌心梗重量占全心重％明显低于溶媒对照组，两组相比，差异显著，P<0.05；GQ中、大剂量组心梗面积占全心、左室重％均明显低于溶媒对照组，有非常显著意义，P<0.05，P<0.01。硝酸甘油组给药后心梗重量占全心、左室重量％均明显低于溶媒对照组，两组相比，差异显著，P<0.05，P<0.01。

1.3.23 对心肌梗塞病理切片的影响

溶媒对照组心肌梗死病变较明显、较重，而阳性药物组及给药组病变均较溶媒对照组有明显减轻，尤其大剂量组病变最轻，说明该药具有一定的抗心肌缺血作用，且剂量越大，效果越明显。

1.4 实验结论

1.4.1 模型建立的机制、原理

经典的实验性心肌缺血方法是结扎冠脉造成心肌缺血。冠状动脉血栓形成建立有效的实验性心肌缺血缺氧模型是评价新型抗心肌缺血药物药理学特点的常用手段。心肌是严格的需氧组织。正常心脏机能的维持有赖于心肌细胞不断从流经的血液中摄取氧和营养物质，排出代谢产物，这就要求冠状动脉血流量和心肌耗氧量完全适应，以保证心脏正常功能。当冠状动脉供血不足，使心肌的血流量减少不能满足心肌需氧的增长时，心肌细胞就不能从血液中摄取足够的氧，心肌供氧和需氧失衡，因此发生心肌缺氧并可发生不同程度的病理生理变化和临床症状。结扎冠脉诱发心肌缺血即利用结扎法阻断冠脉血流，使冠脉流量减少或完全阻断，导致心肌缺血缺氧。

1.4.2 测定心肌三酶AST、CPK、LDH的意义

AST、LDH、CK等酶广泛存在于心肌组织细胞中，在维持心肌正常生理功能方面发挥着重要作用。正常情况下，血清中AST、LDH、CK及CK-MB等酶的活性远比组织中的低(约1000倍)。当心肌发生缺血或梗塞时，代谢亦出现紊乱，由于细胞肿胀，细胞膜的完整性受到破坏，导致心肌细胞膜损伤，膜对蛋白酶的通透性增加，心肌细胞内大量可溶性酶(CK、LDH、AST)外漏而释放入血，引起血中AST、CPK、LDH含量增加，使血液中的酶活性增高，进而加重缺血对心肌的损伤。因此，血清CPK、LDH及AST的活性变化可作为观察心肌缺血损伤程度及药物抗心肌缺血损伤疗效和预后的重要指标。

1.4.3 测定心肌梗死面积的意义

心肌梗死是心肌因严重持久缺血而发生的死亡。心肌梗死面积大小对患者预后非常重要，急性心肌梗死发生后会对心功能产生不利影响，各项指标的改变及恢复程度及速度均与心肌梗死面积呈负相关。决定梗死后心功能的最主要因素是梗死面积。一般来说，梗死面积越大，后果越严重，因而现在已把缩小心肌梗死面积作为抗心肌缺血药物的主要疗效指标。

本实验结果直接证实了伪人参皂苷GQ可以明显降低冠脉结扎后犬的心肌梗死面积，为它的临床应用提供有力依据。

1.4.4 心肌缺血范围和缺血程度的测定意义

心肌缺血时，由于酸中毒及能量不足，ATP水平降低，Na⁺-K⁺泵功能受抑制，细胞膜上离子的主动转运受阻。随着缺血时间延长，膜对离子通透性增加，K⁺外流，极化程度比周围正常心肌要低，因而在缺血心肌与正常心肌间形成损伤电流，表现为心电图上ST段的抬高。心外膜心电图ST段电压变化幅度的改变(∑-ST和N-ST)是反映心肌缺血损伤程度和范围的可靠指标，缩小心电图心肌缺血程度和范围也是评价抗心肌缺血药物的可靠疗效指标。

实验结果直接证实，伪人参皂苷GQ可以减轻心肌缺血范围，即N-ST，也能减轻缺血程度即-ST，减少心肌缺血区向心肌梗死区发展的可能性。

1.4.5 心肌营养性血流量的检测意义

心脏做功所需要的营养物质主要由冠状动脉循环提供，冠状动脉循环由冠状动脉、毛细血管和静脉组成。左、右冠状动脉均起自升主动脉，其分支的起始部直行于心脏表面的心外膜下，它不受心肌收缩压迫的影响，当冠状动脉继续分支为小动脉、微动脉时，则呈直角垂直穿人心肌层，在心内膜下形成网状，营养血流完全依赖于心内膜下血管丛。当心室舒张时，冠脉血液可以供应心肌和心内膜，跨心肌压力差减少可显著降低心内膜下血流，导致心肌缺血。冠脉血流除了通过毛细血管为心肌提供营养性血流外，一部分血液经动一静脉吻合支分流人静脉，两者构成冠脉总血流量。为寻找治疗冠心病药物，观测心肌营养性血流量比冠脉总血流量具有更大意义。

结果表明，伪人参皂苷GQ可降低冠脉阻力，增加心肌血流量，改善心肌供血，进而使其获得足够的氧，并能够存活下来，挽救濒死心肌。

1.4.6 心脏指数及心搏指数的测定意义

心肌在停止血液供应分钟以后即可发生不可逆损伤，缺血中心区大部分细胞死亡。心肌梗死会引起泵衰竭，其机制首先是心输出量锐减，这是大量心肌坏死收缩功能减弱的直接后果其次是心肌梗死所激发的应激反应引起交感一肾上腺髓质系统兴奋，大量儿茶酚胺分泌，从而导致小动脉毛细血管前括约肌痉挛收缩，这样，一方面加重心脏负荷，使心肌损伤严重，心泵功能下降另一方面全身微循环障碍大量血液淤滞在毛细血管网中，回心血量减少，心输出量进一步降低。心脏泵血功能虽可用每分输出量评价，但由于受体表面积影响，新陈代谢总量不相同，如果用心输出量绝对值做指标，进行不同个体间心功能比较，是不全面的。我们用心输出量和心搏出量与体表面积的比值即心脏指数与心搏指数来评价心脏泵血功能。

实验结果表明，伪人参皂苷GQ可以降低总外周阻力，减轻后负荷，降低心肌损伤程度，同时减少微循环中血液淤滞，从而抑制泵衰竭。可显著增加心脏指数与心搏指数，提高心脏泵血功能。可以抑制心肌的梗死。

1.4.7 伪人参皂苷GQ与阳性药硝酸甘油比较，具有的优点和特点

(1)对+dp/dt的变化百分率的影响方面：阳性药硝酸甘油组的维持时间为60分钟，而GQ大剂量组具有维持时间较长(180分钟)的特点，

(2)对-dp/dt的变化百分率的影响方面：GQ中剂量组具有和阳性药硝酸甘油相似的作用。

(3)对平均血流量(MBF)的影响方面：GQ中剂量组在药后各时间点均可增加MBF，大剂量组在药后5～45分钟MBF明显高于溶媒对照组，而阳性药硝酸甘油组药后20～30分钟MBF上升百分率明显高于溶媒对照组，由此可见，GQ在对平均血流量(MBF)的影响方面优于阳性药硝酸甘油，具有效果明显、作用时间长的特点。

(4)对每搏量(SV)的影响方面：GQ小剂量组240分钟下降百分率明显低于溶媒对照组，优于阳性药硝酸甘油。

(5)对心脏指数(CI)的影响方面：GQ中剂量组的心脏指数(CI)优于阳性药硝酸甘油。

(6)对每搏指数(SI)的影响方面：GQ小剂量组在药后240分钟时SI的下降百分率明显低于溶媒对照组，优于阳性药硝酸甘油。

(7)对冠脉血管阻力(CVR)影响方面：GQ中剂量组药后5、20、45、60、120～240分钟多个时间点CVR明显降低，而阳性药硝酸甘油只在药后5～45、90分钟CVR的下降百分率明显高于溶媒对照组，可见GQ能显著降低冠脉血管阻力，优于阳性药硝酸甘油。

(8)对动脉血氧饱和度的影响方面：GQ小剂量组也显示了提高动脉血氧饱和度的特点，而阳性药硝酸甘油对动脉血氧饱和度无明显影响。

(9)对心外膜电图(EECG)的影响方面：(1)对心肌缺血范围(N-ST)的影响：GQ中剂量组在药后45～360分钟N-ST明显小于溶媒对照组，硝酸甘油组在药后45分钟、90～360分钟N-ST明显小于溶媒对照组，可见，GQ具有和阳性药硝酸甘油具有明显减少心肌缺血范围的相似作用。(2)对心肌缺血程度(∑-ST)的影响：GQ大剂量组和阳性药硝酸甘油具有明显减轻心肌缺血程度的相似作用。

(10)对心肌梗塞面积的影响方面：GQ具有和阳性药硝酸甘油类似的作用，可以显著减少心肌梗塞面积。

(11)对血清酶的影响方面：GQ具有和阳性药硝酸甘油类似的作用，都可以显著降低AST和LDH含量。

(12)对心肌梗塞病理切片的影响方面：GQ大剂量组病变最轻，说明该药具有一定的抗心肌缺血作用，且剂量越大，效果越明显。

综上所述，GQ在改善+dp/dt、平均血流量(MBF)、每搏量(SV)、心脏指数(CI)、每搏指数(SI)、冠脉血管阻力(CVR)、动脉血氧饱和度、心肌梗死病理改变等方面，优于阳性药硝酸甘油。

在改善-dp/dt、心肌缺血范围、心肌缺血程度、心肌梗塞面积、血清酶等方面，具有和阳性药硝酸甘油类似的作用。

故伪人参皂苷GQ能减轻心肌缺血损伤，增加心肌供血，对心脏有保护作用。

制剂特殊毒性

1.伪人参皂苷GQ注射液全身主动过敏试验(ASA)

1.1 试验药物

伪人参皂苷GQ注射液，由吉林大学再生医学研究所提供。

给药剂量：高剂量组33mg/kg，低剂量组22mg/kg。

配药浓度：高剂量：规格88mg/ml，批号：060512；低剂量：规格60mg/ml，批号：060512，试验时用生理盐水配成低剂量15mg/ml，高剂量22mg/ml。

1％新鲜卵白蛋白，试验时用生理盐水自配。

1.2 试验动物

健康豚鼠，体重310~330g，雌、雄各半，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，合格证号：SCXK(吉)2003-0001。

1.3 试验分组

试验共设立四组，每组6只健康豚鼠，四组分别为阴性对照组、阳性对照组、受试物高剂量组和受试物低剂量组。阴性对照组给予25％丙二醇生理盐水溶液0.5ml/只，阳性对照组给予1％的卵白蛋白0.5ml/只，受试物高剂量组给予伪人参皂苷GQ注射液0.5ml/只，受试物低剂量组给予伪人参皂苷GQ注射液0.5ml/只。

1.4 试验方法

致敏：阴性对照组、阳性对照组、受试物高剂量组和受试物低剂量组分别间日腹腔注射生理盐水1.5ml/只、1％新鲜卵白蛋白0.5ml/只、GQ注射液高剂量0.5ml/只、GQ注射液低剂量0.5ml/只，共5次。

激发：末次致敏注射后14日由耳缘静脉分别注射25％丙二醇生理盐水1ml、1％新鲜卵白蛋白1ml、伪人参皂苷GQ注射液高剂量1ml、伪人参皂苷GQ注射液低剂量1ml。

观察指标：致敏期间每日观察每只动物的症状，初次、最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。激发阶段，静脉注射后立刻开始观察至30分钟，按下表症状详细观察每只动物的反应，症状的出现及消失时间。

过敏反应症状

 

0正常	7呼吸急促	14步态不稳
			1躁动	8排尿	15跳跃
2竖毛	9排粪	16喘息
			3颤抖	10流泪	17痉挛
4搔鼻	11呼吸困难	18旋转
			5喷嚏	12哮鸣音	19潮式呼吸
6咳嗽	13紫癜	20死亡

结果评价：按下表判断过敏反应发生的程度。

全身致敏性评价标准

 

0	—	过敏反应阴性
			1-4症状	+	过敏反应弱阳性
5-10症状	++	过敏反应阳性
			11-19症状	+++	过敏反应强阳性
20症状	++++	过敏反应极强阳性

1.5 试验结果

致敏期间，各组动物活动正常，均未见异常反应。

激发后，阳性对照组出现咳嗽、呼吸困难、痉挛、死亡，阳性对照组豚鼠由耳静脉给药攻击后，30分钟内，6只豚鼠均痉挛死亡。阴性对照组及受试药组均未出现过敏症状。

初次、最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重，结果见表1。

表1 初次、最后一次致敏和激发当日各组动物的体重(g)表(x±s，n＝6)

1.6 试验结论

通过全身主动过敏试验表明，伪人参皂苷GQ注射液全身主动过敏反应阴性。

2.伪人参皂苷GQ注射液被动皮肤过敏试验(PCA)

2.1 试验药物

伪人参皂苷GQ注射液，由吉林大学再生医学研究所提供。

给药剂量：低剂量18mg/kg，高剂量54mg/kg。

配药浓度：高剂量：规格96mg/ml，批号：060512，低剂量：规格32mg/ml，批号：060512，试验时用生理盐水配成高剂量24mg/ml，低剂量8mg/ml。

2.2 试验动物

Wistar大鼠，体重180-220g，雌、雄各半，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，合格证号：SCXK(吉)2003-0001。

2.3 试验分组

试验共分为四组，每组6只大鼠，四组分别为阴性对照组、阳性对照组、受试物高剂量组和受试物低剂量组。阴性对照组给予25％丙二醇生理盐水溶液0.5ml/只，阳性对照组给予0.5ml/只1％的卵白蛋白，受试物高剂量组给予伪人参皂苷GQ注射液0.5ml/只，受试物低剂量组给予伪人参皂苷GQ注射液0.5ml/只。

2.4 试验方法

2.4.1 致敏

抗体制备：取12只Wistar大鼠分为4组，每组3只。4组分别腹腔注射25％丙二醇生理盐水溶液0.5ml/只、1％的卵白蛋白0.5ml/只、伪人参皂苷GQ(PGQ)注射液高剂量0.5ml/只、伪人参皂苷GQ注射液低剂量0.5ml/只，隔日一次，共5次。末次致敏后14天腹主动脉采血，2000转/分离心10分钟，分离血清，-20℃保存。

被动致敏：取24只Wistar大鼠分为4组，每组6只，上述制备的各组抗血清用生理盐水稀释成1：2、1：4、1：8、1：16，在动物背部预先脱毛(脱毛面积3×4cm²)，在脱毛区皮内注射各对应组的抗血清0.1ml，进行被动致敏。

2.4.2 激发

被动致敏24小时后，四组分别静脉注射生理盐水0.5ml加入1％伊文思兰0.5ml、1％的卵白蛋白0.5ml加入1％伊文思兰0.5ml、伪人参皂苷GQ注射液高剂量0.5ml加入1％伊文思兰0.5ml、伪人参皂苷GQ注射液低剂量0.5ml加入1％伊文思兰0.5ml，进行激发。

2.4.3 结果测定

30分钟后麻醉处死各组动物，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的斑点大小，直径大于5mm者判定为阳性。

2.5 试验结果

麻醉处死各组动物，测量皮肤内层斑点大小，阴性对照组与伪人参皂苷GQ(PGQ)注射液高剂量组及低剂量组动物皮肤内层均未出现斑点，而阳性对照组则出现超过5mm的斑点。

2.6 试验结论

伪人参皂苷GQ注射液被动皮肤过敏试验反应阴性。

(二)伪人参皂苷GQ溶血作用的研究

摘要 目的：考察伪人参皂苷GQ注射液是否引起溶血和红细胞凝聚反应，为临床静脉注射用药提供依据。方法：根据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》(2005年3月)中溶血试验方法：常规体外试管法。结果：伪人参皂苷GQ的系列浓度和氯化钠注射液的各观测试管，在37℃的恒温箱内观察4小时，上清液均呈澄明淡黄色，红细胞沉积管底，细胞无凝集。蒸馏水观测管溶液呈澄明红色，管底无细胞残留。结论：氯化钠注射液阴性对照管无溶血和凝聚发生，蒸馏水阳性对照管有溶血发生，而供试品伪人参皂苷GQ 2mg/ml(溶剂：2％丙二醇的氯化钠溶液)在4小时内未发生溶血和红细胞凝聚。

1 试验材料

1.1 动物 大耳白兔1只，雌雄不拘，体重3.0kg，购于中国人民解放军农牧大学实验动物中心。动物合格证号：10-5115。

1.2 药品 伪人参皂苷GQ由吉林大学再生医学科学研究所提供，白色粉末，纯度98.4％，批号：001022。

1.3 仪器 小型三用恒温水箱，由北京医疗设备厂生产；LDZ5-2型离心机，由北京医用离心机厂生产

2 试验方法—体外试管法

2.1 2％红细胞悬液的配制从家兔的颈静脉取血15ml，用玻璃棒搅动除去纤维蛋白原使成脱纤维血液，然后加入约10倍量的氯化钠注射液，摇匀，离心(3000rpm，10min)，倾去上清夜，沉淀的红细胞再用氯化钠注射液重复洗涤，直至上清液不显红色为止。将所得的红细胞用氯化钠注射液配成2％的红细胞混悬液，供试验用。

2.2 受试物的制备 伪人参皂苷GQ注射剂的临床用法与用量是：临用前以250ml或500ml的注射用生理盐水或5％葡萄糖注射液稀释后静脉滴注。60～120mg/次，1～2次/日。故本试验中采用2％丙二醇的氯化钠溶液作为溶剂，配制2mg/ml(相当于临床最大用量0.24mg/ml的8.3倍)的溶液，作为受试物。

2.3 试验方法 取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。按下表所示依次加入2％红细胞悬液、0.9％氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中进行温育，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，观察4小时。按下列顺序加入各种溶液：

3 结果观察标准及判断 若试验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9％氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。

当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在4小时内不发生溶血和凝聚，则受试物可以注射使用；若受试物管中的溶液在4小时内发生溶血和(或)凝聚，则受试物不宜注射使用。

4 试验结果 受试物管中的1-5号试管在37℃的恒温箱内观察4小时，上清液均呈澄明淡黄色，红细胞沉积管底，显微镜下观察细胞无凝集。6号试管(加氯化钠注射液)在37℃的恒温箱内观察4小时，上清液无色澄明，红细胞沉积管底，显微镜下观察细胞无凝集。7号试管(加蒸馏水)在37℃的恒温箱内观察4小时，溶液呈澄明红色，管底无细胞残留。

5 结论 氯化钠注射液阴性对照管无溶血和凝聚发生，蒸馏水阳性对照管有溶血发生，而供试品伪人参皂苷GQ 2mg/ml(溶剂：2％丙二醇的氯化钠溶液)(相当于临床最大用量0.24mg/ml的8.3倍)在4小时内未发生溶血和红细胞凝聚。

Claims (10)

1、一种药物组合物，其特征在于：包含0.01％-10％(w/v)的伪人参皂苷GQ、药学可接受的溶剂，pH值为3.0至7.0。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：还包括缓冲剂、渗透压调节剂、0.005％-1％的防腐剂中的一种或几种。

3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：药学可接受的溶剂为水、甘油、乙醇、丙二醇中的一种或几种的组合，优选为丙二醇。

4、如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于：缓冲剂为盐酸、硫酸、磷酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、碳酸钠或氢氧化钠。

5、如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于：渗透压调节剂为碳水化合物、多元醇或氯化钠，优选葡萄糖或氯化钠。

6、如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于：防腐剂为间甲酚、酚、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸丁酯。

7、如权利要求1至6所述的药物组合物，其特征在于：还包含增溶剂。

8、如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于：增溶剂为吐温-80。

9、如权利要求1-8所述的药物组合物，其特征在于：该药物组合物是冻干的。

10、如权利要求1-9所述的药物组合物在制备治疗心肌缺血、心绞痛、心肌梗塞、失血性休克的药物中的应用。