CN101513258A - 一种甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液的制备方法，属于微量元素铁强化食品技术领域。本发明采用反相蒸发法制备甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液。将卵磷脂、胆固醇按适当比例溶于适量无水乙醚；将甘氨酸螯合铁溶于一定pH的柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液中；将两者混合超声处理，形成油包水型乳状液，减压蒸发有机溶剂，再加入含一定浓度表面活性剂的柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液，经水合溶胀，再超声分散得到甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液。该甘氨酸螯合铁纳米脂质体的平均粒径小于100nm，甘氨酸螯合铁的包封率可达50％－70％，可克服甘氨酸螯合铁在胃液强酸性环境中易于解离、生物利用率低等问题。
Description
技术领域
一种甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液的制备方法，属于微量元素铁强化食品技术领域。
背景技术
铁是人体必须的微量元素，是血红蛋白、肌红蛋白和多种酶系的重要组成成分，在体内起着营养、免疫等重要作用。铁添加剂的发展经历了三个阶段，第一代产品为无机铁盐类，如硫酸亚铁、碳酸亚铁等，第二代产品为一些简单的有机酸铁盐，如柠檬酸铁、富马酸铁等，但以上两类产品均存在其应用弊端。无机盐不仅吸收利用率差，而且容易造成环境污染，资源浪费，影响食品组分中其他营养物质。而简单的有机酸铁盐也仍然难以克服吸收利用率低的缺陷。第三代产品为氨基酸螯合铁，不少研究报道证明氨基酸螯合铁有更高的生物利用率、更好的稳定性、更低的毒性、更易于吸收以及体内含量的自我调节。因此，铁的氨基酸螯合物在最近十几年来被广泛应用在食物的铁强化和缺铁型贫血的治疗中，其中甘氨酸螯合铁的研究和应用最为普遍。
大量研究表明，甘氨酸螯合铁具有较高的生物学效价，是接近于人体内天然形态的微量元素补充剂，可以完全被人体吸收和利用，且具有良好的化学稳定性，既避免了矿物质之间的相互拮抗作用，又消除了无机盐对维生素和脂类物质氧化的弊端，同时甘氨酸螯合铁具有溶解性好、吸收率高、抗干扰、无刺激、无毒害等优点，在饲料、食品工业中得到了广泛的应用。但是甘氨酸螯合铁作为一种金属络合物，在强酸环境中易于解离，因此甘氨酸螯合铁在人体消化系统中经过胃环境时，胃液的强酸性会使甘氨酸螯合铁严重解离，从而降低了它的生物利用率，使甘氨酸螯合铁的生物利用率远低于所预期的水平。
迄今为止，国内外未见有关于甘氨酸螯合铁纳米脂质体制备的报道。脂质体制剂是以磷脂等两性物质为基础的制剂，是将待包封的活性物质包封于类脂质双分子层的薄膜中间或者是包封于类脂质双分子层的内水相中得到的。由于活性物质被包封在脂质体中，具有长效、靶向等优点，脂质体制剂在新产品开发方面表现出极大的开发潜力。许多研究机构和制药公司都致力于脂质体制剂产品开发，其中一个重要的应用是保护所包封的活性物质不受外界环境的破坏。
发明内容
本发明的目的是提供一种甘氨酸螯合铁纳米脂质体的制备方法，为了增强甘氨酸螯合铁在胃液强酸体系中的稳定性，达到提高生物利用率和更好的补铁效果。
本发明的技术方案：一种甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液的制备方法，以甘氨酸螯合铁为芯材，卵磷脂、胆固醇为膜材，辅以吐温80，采用反相蒸发法制备甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液，制备工艺为：
(1)配制甘氨酸螯合铁柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液：将甘氨酸螯合铁溶解在pH 6.8、柠檬酸(0.0227mol/L)-磷酸氢二钠(0.1545mol/L)缓冲液中，控制甘氨酸螯合铁的浓度不大于7mg/mL，得水相。
(2)配制脂质无水乙醚溶液：将卵磷脂∶胆固醇按质量比10∶1～2∶1溶于无水乙醚中，控制卵磷脂在其乙醚溶液中的浓度为10mg/mL～25mg/mL，得有机相。
(3)乳状液形成：将甘氨酸螯合铁柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液和脂质无水乙醚溶液混合，有机相∶水相的体积比为3∶1，再经过探头式超声处理，超声强度60％～90％，1秒开，1秒停，处理6～10分钟，即可形成油包水型乳状液。
(4)脂质体生成：将形成的油包水型乳状液转移至旋转蒸发烧瓶中，30～40℃水浴中旋转蒸发除去无水乙醚，去除无水乙醚时有凝胶生成，旋转蒸发5～10分钟凝胶塌陷，继续旋转蒸发15～30分钟，以除去残余乙醚；将吐温80添加入柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中，使缓冲液中含有的吐温80∶卵磷脂的质量比为1∶4～1∶1；将此含有吐温80的pH 6.8柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液加入到旋转蒸发烧瓶中，卵磷脂质量与缓冲液体积之比以g/mL计为1∶50～1∶100，将该体系在30～40℃水浴下旋转水合15～30分钟，得脂质体。
(5)超声分散：水合后的脂质体分散体系再经过探头式超声处理，超声强度50％～90％，1秒开，1秒停，处理5～8分钟，即得甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液。
粒径的测定：采用动态光散射粒度仪进行测定，测定温度为25℃，样品稀释至卵磷脂质量浓度0.025％。甘氨酸螯合铁包封率采用透析法测定。
制得的甘氨酸螯合铁纳米脂质体的平均粒径小于100nm，甘氨酸螯合铁的包封率可达50％～70％。
本发明的有益效果：以甘氨酸螯合铁为芯材，卵磷脂、胆固醇为膜材，辅以吐温80，采用反相蒸发法制备甘氨酸螯合铁纳米脂质体。可增强甘氨酸螯合铁在胃酸的强酸性体系中的稳定性，达到提高生物利用率和更好的补铁效果。
附图说明
图1甘氨酸螯合铁纳米脂质体的粒径分布图。
具体实施方式
实施例1
称卵磷脂200mg、胆固醇50mg，溶于9mL无水乙醚中(有机相)；称20mg甘氨酸螯合铁溶解在3mL柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 6.8)中(水相)。将所得有机相和水相混合，经过6分钟的探头式超声处理(强度80％，1秒开，1秒停)形成稳定均一的油包水型乳状液，转移至250mL旋转蒸发烧瓶中，35℃水浴中旋转蒸发去除乙醚，5～10分钟会有凝胶状生成，随着旋转蒸发继续，凝胶塌陷，保持旋转蒸发15～30分钟，以除去残余乙醚。往蒸发烧瓶中加入含有200mg吐温80的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 6.8)12mL，35℃水浴中旋转水合20分钟。水合液体积为卵磷脂质量的75倍(以g/mL计)，甘氨酸螯合铁浓度为1.33mg/mL。水合后的脂质体分散体系再经过5分钟的探头式超声处理(强度90％，1秒开，1秒停)，即得甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液。将所得分散液于4℃冰箱中存放。
实施例2
称卵磷脂300mg、胆固醇30mg，溶于15mL无水乙醚中(有机相)；称30mg甘氨酸螯合铁溶解在5mL柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH6.8)中(水相)。将所得有机相和水相混合，经过10分钟的探头式超声处理(强度60％，1秒开，1秒停)形成稳定均一的油包水型乳状液，转移至250mL旋转蒸发瓶中，40℃水浴中旋转蒸发去除乙醚，5～10分钟会有凝胶状生成，随着旋转蒸发继续，凝胶塌陷，保持旋转蒸发15～30分钟，以除去残余乙醚。往蒸发瓶中加入含有300mg吐温80的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH6.8)20mL，40℃水浴中旋转水合15分钟。水合液体积为卵磷脂质量的83倍(以g/mL计)，甘氨酸螯合铁浓度为1.2mg/mL。水合后的脂质体分散体系再经过8分钟的探头式超声处理(强度50％，1秒开，1秒停)，即得甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液。将所得分散液于4℃冰箱中存放。
实施例3
称卵磷脂200mg、胆固醇50mg，溶于10mL无水乙醚中，转移至250mL旋转蒸发瓶中，35℃水浴中旋转蒸发去除乙醚，在瓶壁上形成均匀的一层脂质薄膜，薄膜形成后，往蒸发瓶中加入9mL无水乙醚重新溶解，得有机相。称20mg甘氨酸螯合铁溶解在3mL柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH6.8)中(水相)。将所得有机相和水相混合，经过6分钟的探头式超声处理(强度90％，1秒开，1秒停)形成稳定均一的油包水型乳状液，转移至250mL旋转蒸发瓶中，40℃水浴中旋转蒸发去除乙醚，5～10分钟会有凝胶状生成，随着旋转蒸发继续，凝胶塌陷，保持旋转蒸发15～30分钟，以除去残余乙醚。往蒸发瓶中加入含有200mg吐温80的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH6.8)12mL，30℃水浴中旋转水合30分钟。水合液体积为卵磷脂质量的75倍(以g/mL计)，甘氨酸螯合铁浓度为1.33mg/mL。水合后的脂质体分散体系再经过7分钟的探头式超声处理(强度70％，1秒开，1秒停)，即得甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液。将所得分散液于4℃冰箱中存放。
Claims (1)
1、一种甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液的制备方法，其特征在于以甘氨酸螯合铁为芯材，卵磷脂、胆固醇为膜材，辅以吐温80，采用反相蒸发法制备甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液，制备工艺为：
(1)配制甘氨酸螯合铁柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液：将甘氨酸螯合铁溶解在pH 6.8、柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中，控制甘氨酸螯合铁的浓度不大于7mg/mL，得水相；
(2)配制脂质无水乙醚溶液：将卵磷脂∶胆固醇按质量比10∶1～2∶1溶于无水乙醚中，控制卵磷脂在其乙醚溶液中的浓度为10mg/mL～25mg/mL，得有机相；
(3)乳状液形成：将甘氨酸螯合铁柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液和脂质无水乙醚溶液混合，有机相∶水相的体积比为3∶1，再经过探头式超声处理，超声强度60％～90％，1秒开，1秒停，处理6～10分钟，即形成油包水型乳状液；
(4)脂质体生成：将形成的油包水型乳状液转移至旋转蒸发烧瓶中，30～40℃水浴中旋转蒸发除去无水乙醚，去除无水乙醚时会有凝胶生成，旋转蒸发5～10分钟凝胶塌陷，继续旋转蒸发15～30分钟，以除去残余乙醚；将吐温80添加入柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中，使缓冲液中含有的吐温80∶卵磷脂的质量比为1∶4～1∶1；将此含有吐温80的pH 6.8柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液加入到旋转蒸发烧瓶中，卵磷脂质量与缓冲液体积之比以g/mL计为1∶50～1∶100，将该体系在30～40℃水浴下旋转水合15～30分钟，得脂质体；
(5)超声分散：水合后的脂质体分散体系再经过探头式超声处理，超声强度50％～90％，1秒开，1秒停，处理5～8分钟，即得甘氨酸螯合铁纳米脂质体分散液。
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