CN101491245B - 一种含林蛙抗菌肽的消毒制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种含林蛙抗菌肽的消毒制剂及其制备方法和应用，其消毒制剂由林蛙抗菌肽、保护剂、去污剂、润肤剂、稳定剂等制成，加入了多肽保护剂白蛋白，既保持了多肽本身的抑菌活性，又使其有效抑菌时间大大延长。本发明还提供了上述消毒剂负载于载体制成的消毒湿巾、抑菌卫生巾；本发明的消毒湿巾对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、酵母菌的杀菌效果十分理想，杀灭率均超过99％，可用于成人手、脸、皮肤粘膜的清洁和伤口创面的消毒，保持皮肤滋润，又能防止细菌的生长；本发明对流感病毒、艾滋病病毒及乙肝病毒具有很好的抑制作用。
Description
技术领域：
本发明涉及一种消毒制剂及其应用技术领域，尤其是提供一种含有林蛙抗菌肽的消毒制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
目前国内市场上销售的湿巾、消毒湿巾，其中所含的消毒成分都是化学成分，如漂粉精、新洁尔灭、碘伏、过氧乙酸或乙二醛等，虽然具有一定的消毒杀菌作用，但对皮肤有刺激甚至会有毒性，特别不适合与破损皮肤、婴儿娇嫩的皮肤。如果为了减少刺激而减少化学消毒成分的含量，又会使使劲的消毒效果减弱，不能有效地抑制细菌的生长。同时化学成分的残留又会对环境造成污染。目前迫切需要一种既能有效地消毒灭菌又不会产生刺激和毒副作用的湿巾。因此，如何解决上述问题成为研究的热点。
而随着社会进步，卫生巾已大大方便了妇女的日常生活，目前已发明了各种规格型号、具有特殊性能的卫生巾产品。然而，目前这些产品普遍存在一些不足，其一，一些药物卫生巾没有添加具有防腐功能的物质，因此药物易发霉，使药物卫生巾在存储期间可能被污染；其二，为防止霉变，添加了有机或无机化学防腐剂，而卫生巾在使用过程中直接与人体接触，所填加的防腐剂对人体可能造成毒副作用。
从最初人们研究北美天蚕的免疫机制时发现了其血淋巴产生具有抑菌作用的多肽物质以来，相继从其他昆虫以及两栖类动物、哺乳动物中，也分离到结构相似的抗菌多肽。迄今为止，在不同动物组织中已发现了很多具有抗菌作用的蛋白质和多肽，已有70多种抗菌多肽的结构被测定，抗菌肽的概念得到了极大的扩展。然而，作为一种多肽类物质，其生物活性也易随时间的延长而丧失，因此，如何在较长时间使其维持在较高的活性水平是近年来研究多肽类物质的热点。
发明内容：
本发明公开了一种含林蛙抗菌肽的消毒制剂，消毒剂中加入了多肽保护剂，使其抑菌活性能在较长时间内维持在较高的水平。
本发明还公开了一种含林蛙抗菌肽的消毒湿巾、抑菌卫生巾及其制备方法。
本发明的含林蛙抗菌肽的消毒制剂，其特征在于由以下原料按重量比制成的：
林蛙抗菌肽0.00002-0.02wt％，白蛋白0.005-0.05wt％，
去污剂0.015-2.4wt％，润肤剂0.15-15.6wt％，
稳定剂0.003-2.4wt％，余量为水。
本发明所述的消毒制剂可用于制备杀灭细菌、真菌卫生消毒制品；所述的细菌和真菌包括大肠杆菌、绿脓杆菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌及临床耐药菌克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌、酵母菌的一种或多种。
本发明所述的消毒制剂可用于在制备杀灭病毒卫生消毒制品；所述的病毒包括艾滋病病毒、乙型肝炎病毒、流感病毒中的一种或多种。
上述的所述卫生消毒制品，包括：卫生巾、湿巾、喷雾剂。
本发明涉及的消毒湿巾是经如下步骤得到的：
(1)按各物质比例配制消毒制剂。
(2)将配制好的溶液喷涂于所需规格的载体上或将载体浸渍与溶液中，取出，即获得本发明的湿巾。
本发明涉及的抑菌卫生巾是经如下步骤得到的：
(1)按各物质比例配制消毒制剂。
(2)将配制好的溶液喷涂于卫生巾使用面无纺布上，紫外照射，烘干即得。
本发明消毒制剂的体外抑菌试验如下(以消毒湿巾为例)：
1试验样品的制备
(1)抑菌湿巾样品：按照实施例一的方法制备。
(2)对照湿巾：其中聚乙二醇0.15wt％，润肤剂10wt％，聚山梨醇酯2.0wt％，余量为水。
2实验菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、蜡状芽孢杆菌、鲍曼不动杆菌、克雷伯菌。
3实验步骤：
(1)将培养好的实验菌株用1％蛋白胨PBS洗下新鲜斜面，并稀释到适宜浓度，在105-106cfu/ml。
(2)将样品湿巾和对照湿巾制成1×3cm大小，并置于无菌平皿中。
(3)取30vl菌液滴加到湿巾上，涂抹均匀同时开始计时。
(4)作用到6-8h后用无菌镊子将湿巾投入含有5ml中和剂的试管中，充分震荡混匀。
(5)对照湿巾投入中和剂试管中，充分振荡后做适当稀释。
(6)取终液1.0ml进行倾注平板，37℃恒温倒置培养48h。
(7)计算对照回收菌量及样品回收菌量，得出杀灭率。
4实验结果
表1杀菌湿巾体外杀菌试验杀灭率结果
实验证明它对一些主要的致病菌：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的抑菌效果十分理想，抑菌率均超过99％。
本发明的含林蛙抗菌肽的消毒剂的抗病毒活性试验是经如下步骤完成的：
在96孔细胞培养板上，将该洗剂用完全培养基进行2倍倍比稀释，共6个稀释度，每孔100vl，同时设置正常细胞对照，病毒感染细胞对照。每实验孔滴加3×103个C8166细胞和200TCID50的病毒，每孔的总体积为200vL。置37℃，5％CO2培养箱内培养。感染后第三天观察待测化合物对合胞体形成的影响。在100倍的倒置显微镜下，选取5个不重叠的视野，计数病毒诱导C8166细胞形成的合胞体数。IC50为抑制合胞体形成达50％时的药物浓度。EC50是对50％宿主细胞产生细胞毒作用时的药物浓度，治疗指数(SI)为IC50/EC50的比值。
实验表明：抗菌肽在高效杀菌的同时也能作用于高等有机体包括人体细胞，抗菌肽的作用方式都是在细胞膜上穿孔使得细胞发生渗漏凋亡。本发明检测了林蛙抗菌肽对正常人体红细胞的溶血活性，即根据4％的新鲜红细胞悬液在414nm下血红蛋白的释放来检测的。检测步骤如下：人红细胞经PBS(35mM磷酸盐缓冲溶液/0.15M NaCl，pH7.0)洗涤，取100μl的8％人红细胞悬液于96孔板中，每孔加入100μl抗菌肽溶液，37℃一小时后，1500rpm离心5min，转移100μl上清于新的96孔板中，通过酶标仪检测414nm下的吸收，阴性对照用PBS，阳性对照用0.1％TritonX-100检测，结果见附表。实验表明，抗菌肽溶血率值很低，证明本发明涉及的林蛙抗菌肽的溶血毒性极小。
表2：本发明消毒剂的抗病毒活性
表3：添加了多肽保护剂的消毒剂与未加多肽保护剂的消毒剂的抑菌活性比较
注：I：添加了多肽保护剂的消毒剂
II：未加多肽保护剂的消毒剂
表4本发明溶血活性检测结果
| 抗菌肽浓度(mg/ml) | 12.5 | 25 | 50 | 100 | 200 |
| 溶血率(％)实施例1 | 0 | 0 | 0 | 0.2 | 1.1 |
| 溶血率(％)实施例2 | 0 | 0 | 0 | 0.1 | 0.9 |
| 溶血率(％)实施例3 | 0 | 0 | 0 | 0.2 | 1.0 |
| 溶血率(％)实施例4 | 0 | 0 | 0 | 0.1 | 1.2 |
从以上数据可以看出，本发明的积极效果在于涉及的消毒剂中加入了多肽保护剂，使其抑菌活性能在较长时间内维持在较高的水平。
本发明的积极效果在于：该消毒制剂具有明显的灭菌消毒作用，制成的卫生巾、湿巾、喷雾剂等卫生消毒制品，有效地消毒灭菌又不会产生刺激和毒副作用，可广泛的用于日常生活中的卫生消毒。
具体实施例：
通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1：
消毒制剂的制备
按照各物质比例，林蛙抗菌肽0.005kg，聚乙二醇0.15kg，润肤剂10kg，聚山梨醇酯2.0kg，白蛋白0.0kg，加水至1000kg配制消毒制剂。
实施例2
消毒制剂的制备
按照各物质比例，林蛙抗菌肽0.015kg，聚乙二醇1.5kg，润肤剂50kg，聚山梨醇酯5.0kg，白蛋白0.15kg，加水至1000kg配制消毒制剂。
实施例3
消毒制剂的制备
按照各物质比例，林蛙抗菌肽0.10kg，聚乙二醇5.0kg，润肤剂80kg，聚山梨醇酯20.0kg，白蛋白0.25kg，加水至1000kg配制消毒制剂。
实施例4
消毒制剂的制备
按照各物质比例，林蛙抗菌肽0.20kg，聚乙二醇10.0kg，润肤剂90kg，聚山梨醇酯22.0kg，白蛋白0.50kg，加水至1000kg配制消毒制剂。
实施例5
消毒湿巾的制备
将无纺布剪裁成8cm×8cm，经过紫外消毒20分钟后，浸入实施例1~4制备的消毒制剂溶液中，待浸透后捞出，滴去多余溶液，即获得本发明的湿巾；
实施例6
利用卫生巾的常规生产方法通过在卫生巾的载体上浸透本发明消毒制剂溶液制成消毒卫生巾。
Claims (4)
1.一种含林蛙抗菌肽的消毒制剂，其特征在于由以下原料按重量比制成：
林蛙抗菌肽0.00002-0.02wt％，白蛋白0.005-0.05wt％，
去污剂0.015-2.4wt％，润肤剂0.15-15.6wt％，
稳定剂0.003-0.4wt％，余量为水。
2.权利要求1所述的消毒制剂在制备用于杀灭细菌、真菌的卫生消毒制品中的用途，其特征在于，所述细菌和真菌为革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及临床耐药菌中的一种或多种，其中所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌、绿脓杆菌，所述革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌，所述临床耐药菌为克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌、酵母菌。
3.权利要求1所述的消毒制剂在制备用于杀灭病毒的卫生消毒制品中的用途，其特征在于，所述病毒为艾滋病病毒、乙型肝炎病毒、流感病毒中的一种或多种。
4.如权利要求3或4所述的用途，其特征在于所述卫生消毒制品为卫生巾、湿巾、喷雾剂。
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