CN101475918B - 一种具有降低牛乳中β-乳球蛋白抗原性能力的干酪乳杆菌与用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种能发酵降低牛乳中β-乳球蛋白抗原性能力的干酪乳杆菌及其培养方法与用途。

Description

一种具有降低牛乳中β-乳球蛋白抗原性能力的干酪乳杆菌与用途

【技术领域】

本发明涉及微生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种能发酵降低牛乳中β-乳球蛋白抗原性能力的干酪乳杆菌，还涉及所述干酪乳杆菌的用途。

【背景技术】

乳酸菌(Lactic acid bacteria，LAB)是一类能够发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称，广泛存在于自然发酵乳制品、发酵植物食品如泡菜、酸菜、青贮饲料以及人肠道中。乳酸菌是食品工业上的常用菌种，与人类关系密切。乳酸菌不仅能够提高食品营养价值，改善食品风味，延长保存时间，还可以改善食品的功能性质。近年来，乳酸菌以其特殊的生理活性和营养功能而成为益生菌的主要来源，正日益引起人们的重视。乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生，从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和突然的应激反应等产生有益的影响。

乳及乳制品是FAO/WHO认定的导致人类食物过敏的八大类食品之一，也是美国及欧盟新食品标签法中规定必须标示的过敏原成分之一。牛乳过敏严重影响了部分人群的生活质量，儿童的发生率为0.3％-7.5％，成年人则小于1％。牛乳过敏是由乳及乳制品中的过敏原蛋白引起的一种变态反应。从理论而言，牛乳中任何一种蛋白质都有可能是过敏原，但目前普遍认为酪蛋白、α-乳白蛋白及β-乳球蛋白是主要的过敏原。并且在超过80％的乳制品过敏案例中，β-乳球蛋白是引起婴幼儿过敏的主要过敏原蛋白。β-乳球蛋白是牛乳的主要乳清蛋白，并且它是唯一牛乳中含有而人乳中没有的乳蛋白。

如前所述β-乳球蛋白是婴幼儿牛乳过敏的主要致敏原。牛乳过敏症在婴儿期的发病率达到1.9％-5.2％，3月内的发病率为2.3％-2.8％。如何减少β-乳球蛋白所致婴儿牛乳过敏症是婴儿配方奶粉生产中急待解决的问题，对牛奶中主要致敏原β-乳球蛋白过敏原的改性以降低其过敏原性已成为国际乳制品加工技术研究的热点之一。

根据国内外研究可以主要通过对牛乳蛋白进行热处理、糖基化、蛋白水解和发酵等改性技术降低牛乳β-乳球蛋白过敏性。前三种方法研究得比较多，对牛乳加热可相应地降低其过敏性，却会影响牛乳的营养和感官特性，例如，使一些营养成分变性，还会产生“蒸煮味”，这是由于β-乳球蛋白和其它一些含硫蛋白质受热释放出一些含硫化合物造成的；蛋白酶解是一种常用的蛋白质改性方法，但是，如何选择合理的酶、有效控制酶解条件及酶解过程中各产物对其过敏性及风味的影响机制均未明了。因此，这三种方法虽然均能部分降低牛乳过敏性，但存在不可避免的缺陷。

随着乳酸菌生物学功能的不断探索和深入研究，最近发现了乳酸菌的一个特殊功能，即可以通过发酵降低牛乳中β-乳球蛋白的过敏原性，目前这方面的研究不多，但由于过敏性疾病的普遍存在，乳酸菌发酵改性牛乳β-乳球蛋白过敏原的研究对开发无过敏或低过敏的乳制品具有一定指导作用。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的在于提供一种能发酵降低牛乳中β-乳球蛋白抗原性能力的干酪乳杆菌菌株。

本发明的另一个目的在于提供一种所述干酪乳杆菌菌株的用途。

[技术方案]

本发明人从生牛乳中筛选出一株乳酸菌WPC09，利用形态特征、培养性状和生理生化特征等微生物学特性对该乳酸菌WPC09鉴定为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)WPC09，该菌株已于2008年11月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号CCTCC No：M208200。

干酪乳杆菌WPC09 CCTCC No：M208200的形态学特征：

菌体特征：呈革兰氏染色阳性，细胞短杆状，菌体约0.5-1.0μm宽，2-4μm长，成单、成对或者成链，不形成芽孢，两端圆形。

菌落特征：在MRS培养基上形成明显的菌落，直径在0.4-2.0mm之间，圆形，边缘整齐，乳白色，不透明，表面湿润光滑，不产生色素，参见附图1和2。

本发明干酪乳杆菌WPC09 CCTCC No：M208200的培养特征：

干酪乳杆菌WPC09的最低生长温度为20℃，最高生长温度为45℃，在35-37℃生长温度最佳，最高和最低初始生长pH为9.0和4.0，最适生长初始pH为6.4-6.5；WPC09菌株的延迟期相对较短，6h进入对数生长期，16h达到稳定期。

本发明干酪乳杆菌WPC09 CCTCC No：M208200的液体培养特征：

干酪乳杆菌WPC09在MRS液体培养基中生长良好，5h左右培养液开始混浊，10h左右开始有菌体细胞沉淀，轻轻摇动没有气泡产生，18h后有大量菌体沉淀，培养24h乳白色菌体沉淀明显增加。

本发明的干酪乳杆菌WPC09来源于传统发酵食品，属公认安全(Generally Recognized As Safe，GRAS)菌种，可用于发酵食品中。

所述的发酵食品是乳酸菌奶饮料、乳粉、胶囊制品或发酵乳。

下面分别描述所述发酵食品的制备方法。

所述的乳酸菌奶饮料是按照下述步骤制备得到的：

首先，所述干酪乳杆菌WPC09原始菌种在温度-75℃下以30重量％甘油悬液形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用。

然后，可以采用两种方法制备本发明的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂：

第一种方法是将上述干酪乳杆菌WPC09原始菌种接种于12重量％在110℃灭菌10min的脱脂乳中，在37℃条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；将所述母发酵剂按3-5体积％接种于灭菌脱脂乳中，培养14-16h至凝乳，此时该凝乳中的活菌数达到10⁹cfu/mL，得到所述的工作发酵剂。

可以直接将如此得到的这种工作发酵剂添加到食品中，或者与可共生的制备发酵乳的商业发酵剂如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌一起使用制备发酵乳。

第二种方法是将上述干酪乳杆菌WPC09原始菌种接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4体积％接种于MRS培养基中，培养16-18h，在4℃条件下4000r/min离心15min，去除上清夜，得到细胞沉淀，将沉淀用一定量的无菌脱脂乳制成悬浮液，得到工作发酵剂备用。

然后，原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到4℃，再加入前面所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，使其浓度达到10⁶cfu/ml以上，在4℃冷藏保存即得到含干酪乳杆菌WPC09活菌的乳酸菌奶饮料。

在本发明中，所述的MRS液体培养基是本技术领域的技术人员熟知的，是BD Difco公司以商品名Bacto

 Lactobacilli MRS Broth销售的用于乳杆菌培养的培养基(参考文献：deMan，J.C.，M.Rogosa，and M.E.Sharpe.1960.A medium for the cultivation of lactobacilli.J.Appl.Bacteriol.23：130.)。

所述的加热杀菌是例如使用新加坡APV公司销售的145C型杀菌机进行的。

所述的高温热杀菌是例如使用日本Powerpoint International有限公司销售的PT-20C-R型管板式组合式超高温杀菌机进行的。

另外，所述含干酪乳杆菌WPC09的乳粉是按照下述步骤制备得到的：

首先按照上述方法制备本发明的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，按照上述乳酸菌奶饮料的制备方法进行制备，只是原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再以原料乳体积的4％接菌量接种前面所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，再在37℃下发酵16h，得到干酪乳杆菌WPC09发酵乳；然后所述的干酪乳杆菌WPC09发酵乳按照1:3(V/V)加到上述灭菌原料乳中，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得到含干酪乳杆菌WPC09的乳粉。

所述的均质是例如使用上海东华高压均质机厂销售的GYB40-10S型高压均质机进行的。

所述的浓缩是例如使用扬州市食品机械厂销售的真空浓缩锅进行的。

所述的喷雾干燥是例如使用上海沃迪科技有限公司销售的实验型喷雾干燥机进行的。

另外，所述的胶囊制品是按照下述步骤制备得到的：

按照上述含干酪乳杆菌WPC09的乳粉的制备方法制备，只是把该乳粉装入胶囊，制成胶囊制品。

此外，所述的发酵乳是按照下述步骤制备得到的：

按照上述乳酸菌奶饮料的制备方法制备，只是原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再按照3-5体积％加入前面所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，再加入3-5体积％可共生的制备发酵乳商品发酵剂保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，混匀后在37℃下混菌发酵至滴定酸度以乳酸计0.6-0.7％，然后冷却至4℃，再进行冷藏保存得到所述的发酵乳。

所述的商品发酵剂优选的是保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。

在本发明的意义上，所述的原料乳是一种或多种选自脱脂奶、鲜奶、复原奶的原料乳。

[有益效果]

干酪乳杆菌WPC09具有良好的β-乳球蛋白抗原性降低率，达到87％，且能保持较好的稳定性。干酪乳杆菌WPC09能够耐受胆盐的浓度为0.09％，能够耐受的氯化钠浓度为10％。

【附图说明】

图1干酪乳杆菌WPC09的菌落形态

图2干酪乳杆菌WPC09的菌体形态(1000×)

图3干酪乳杆菌WPC09最适生长pH

图4干酪乳杆菌WPC09的生长曲线

本发明的干酪乳杆菌WPC09于2008年11月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，编号为CCTCC No：M208200。

实施例1、本发明干酪乳杆菌WPC09的培养方式

(i)菌种活化：将干酪乳杆菌WPC09原始菌种接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代。

(ii)种子培养：干酪乳杆菌WPC09经活化后，接种于11％(w/v)在110℃灭菌10min的脱脂乳中，在37℃条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂。

(iii)发酵培养：将干酪乳杆菌WPC09以1％(V/V)的接种量接种于11％脱脂乳中，在37℃下培养24h。

实施例2、本发明干酪乳杆菌WPC09的生理生化特征与菌种鉴定

将干酪乳杆菌WPC09接种于MRS液体培养基(BD Difco公司，商品名

Lactobacilli MRS Broth)，在37℃厌氧培养18h，离心取菌体，以PBS缓冲液(例如上海水源生物科技有限公司生产的GNB10010 PBS缓冲液，每升含0.144g KH₂PO₄、9.0g NaCl、0.795g Na₂HPO₄7H₂O，pH7.4)洗涤2次，接入API 50 CHL液体培养基(生物梅里埃中国有限公司，API 50 CHLMedium)中制成菌悬液，接入API 50 CH鉴定试剂条(生物梅里埃中国有限公司)，37℃厌氧培养24h-48h，记录菌株对49种碳水化合物的发酵结果，将其输入梅里埃公司的鉴定软件API LAB PLUS，这些反应结果如表1所示。经数据库查询，本发明的WPC09与干酪乳杆菌Lactobacillus casei具有99.9％的同源性，因此，将本发明的干酪乳杆菌WPC09菌株鉴定为干酪乳杆菌，命名为Lactobacillus casei WPC09，于2008年11月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，编号为CCTCC No：M208200。

         表1  干酪乳杆菌WPC09的API 50 CHL反应结果

注：+为发酵，-为不发酵

实施例3、干酪乳杆菌WPC09的微生物学特性

将干酪乳杆菌WPC09按1％(V/V)接入MRS液体培养基，分别于12、20、30、40、45和50℃下静置培养12h、24h和48h，观察生长状况，其结果列于表2中。干酪乳杆菌WPC09的最低生长温度为20℃，最高生长温度为45℃，在室温时可生长，12℃下不生长。

         表2  干酪乳杆菌WPC09菌株在不同温度下的生长情况

注：+为生长，-为不生长

将干酪乳杆菌WPC09菌株按1％(V/V)接入不同pH值的MRS液体培养基中，在37℃静置培养12h，使用由尤尼柯(上海)仪器有限公司生产的UV2100紫外分光光度计在600nm测定菌液的OD值(光密度值)，观察菌株的最适生长pH，其结果如图3所示。干酪乳杆菌WPC09在pH3.0时几乎不生长，在pH4.0-9.0的范围均可生长，最适宜生长pH为6.4-6.5。

将干酪乳杆菌WPC09按1％(V/V)接种量接入MRS液体培养基中，调节到最适宜的pH值，然后每隔2h在600nm测定一次培养液的OD值。以OD值对时间作图得到干酪乳杆菌WPC09在MRS培养基中的生长曲线，其结果如图4所示。在MRS培养基中，干酪乳杆菌WPC09在6h进入对数生长期，16h进入稳定期。

实施例4、干酪乳杆菌WPC09降低β-乳球蛋白抗原性能力的试验

将干酪乳杆菌WPC09以1％(V/V)的接种量接种于11％脱脂乳中，在37℃下培养24h，使用不含接种物的未发酵乳样品作为空白对照。乳样品经漩涡混匀，取样品50μl于5ml离心管中，加入试剂盒(德国R-Biopharm公司，β-乳球蛋白过敏原检测试剂盒)中的缓冲液按1:50进行稀释，冷冻离心10min(4℃，3000g)，取上清液备用。利用β-乳球蛋白过敏原检测试剂盒(竞争性ELISA，德国R-Biopharm公司)检测乳样品中的β-乳球蛋白抗原性，与空白样品进行对照。结果列于表3，干酪乳杆菌WPC09发酵脱脂乳中β-乳球蛋白抗原(396.91mg/kg)最多降低到了51.96mg/kg，与未发酵乳相比，β-乳球蛋白抗原降低百分率达到87.0％。

         表3  干酪乳杆菌WPC09对β-乳球蛋白抗原性的降低率

实施例5、干酪乳杆菌WPC09对胆汁的耐受性试验

在MRS液体管中加入牛胆汁粉(质量分数分别为0.0％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.10％、0.20％、0.30％)，灭菌后接种，37℃厌氧培养，以溴甲酚紫为指示剂，观察培养基颜色变化和菌体生长情况，干酪乳杆菌WPC09在不同胆汁浓度的MRS培养基中的生长情况见下表4。由表4可见，L.casei WPC09菌株的最高生长胆盐浓度为0.09％，其胆盐耐受性较低，所以在作为益生菌应用时会受到一定的限制。

表4  不同胆盐浓度培养基中干酪乳杆菌WPC09的生长情况

注：++为生长良好，+为生长，-为不生长

实施例6、干酪乳杆菌WPC09对NaCl的耐受性试验

在MRS液体培养基中加入NaCl，使其质量分数分别为0、2、4、6、8、9、10、11、12、13、15％，灭菌后接种，在37℃下厌氧培养，以溴钾酚紫为指示剂，接种干酪乳杆菌WPC09，观察对NaCl的耐受性，这些结果列于表5中。干酪乳杆菌WPC09在8％的NaCl浓度下生长良好，在9％的NaCl浓度下生长缓慢，11％以上不生长，说明WPC09能够耐受10％浓度的NaCl。

  表5干酪乳杆菌WPC09对NaCl的耐受性

注：++为生长良好，+为生长，-为不生长

实施例7、干酪乳杆菌WPC09的抗生素敏感性试验

将菌株按1％(V/V)接种量接入MRS液体培养基，在37℃培养至对数期，用pH7.4的PBS缓冲溶液(例如上海水源生物科技有限公司生产的GNB10010 PBS缓冲液，每升含0.144g KH₂PO₄、9.0g NaCl、0.795gNa₂HPO₄7H₂O)进行梯度稀释(0-10^-2)，得到不同菌浓度的菌液。无菌吸取培养液0.1mL涂布至MRS平板，涂布均匀，选用常见的24种抗生素进行药敏实验。无菌镊子将药敏纸片放至涂布菌液的MRS平板，在37℃厌氧培养48h，这些实验结果列于表6中。

          表6  干酪乳杆菌WPC09对常见抗生素的敏感性

在二十四种抗生素中，干酪乳杆菌WPC09对于红霉素、头孢三嗪、氯霉素、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢呋新、头孢唑啉、利福平、氧哌嗪青霉素、复合磺胺、卡那霉素11种抗生素敏感，对庆大霉素、四环素、链霉素3种抗生素具有耐受性，呋喃妥因、氟哌酸、氨苄青霉素、环丙氟哌酸、青霉素、丁胺卡那霉素、头孢他啶、苯唑青霉素、妥布霉素、万古霉素10种抗生素对干酪乳杆菌WPC09的生长没有任何影响。

应用实施例1：利用干酪乳杆菌WPC09制造乳酸菌奶饮料

首先，制备本发明的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂：

其次，将本发明的干酪乳杆菌WPC09原始菌种接种于12重量％在110℃灭菌10min的脱脂乳中，在37℃条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；将所述母发酵剂按4体积％接种于灭菌脱脂乳中，培养14-16h至凝乳，此时该凝乳中的活菌数达到10⁹cfu/mL，得到所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂。

然后，将原料乳脱脂奶在95℃热杀菌20min，然后冷却至4℃，再加入本发明的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，使其浓度达到10⁶cfu/ml以上，在4℃冷藏保存即得到含干酪乳杆菌WPC09活菌的乳酸菌奶饮料。

应用实施例2：利用干酪乳杆菌WPC09制造乳粉

与应用实施例1一样制备本发明的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂。

将鲜牛乳在140℃高温热杀菌2s，然后冷却至37℃，以原料乳体积的4％接菌量接种上述干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，在37℃发酵16h，得到干酪乳杆菌WPC09发酵乳。将干酪乳杆菌WPC09发酵乳以1:3(V/V)加入灭菌后的原料乳中，使用上海东华高压均质机厂销售的GYB40-10S型高压均质机进行均质，使用扬州市食品机械厂销售的真空浓缩锅进行真空浓缩、使用上海沃迪科技有限公司销售的实验型喷雾干燥机进行喷雾干燥处理后得到乳粉。

应用实施例3：利用干酪乳杆菌WPC09制造胶囊制品

使用应用实施例2制备的乳粉装到目前在市场上销售的食品级的胶囊中，制成胶囊制品。

应用实施例4：利用干酪乳杆菌WPC09制备发酵乳

首先，制备本发明的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂：

将所述的干酪乳杆菌WPC09原始菌种接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按3体积％接种于MRS培养基中，培养16-18h，在4℃条件下4000r/min离心15min，去除上清夜，得到细胞沉淀，将沉淀用无菌脱脂乳制成悬浮液，这样得到所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂

将原料乳在95℃热杀菌20min，然后冷却至37℃，以4体积％的量加入本发明的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，以及加入4体积％可共生的制备发酵乳的商业发酵剂保加利亚乳杆菌，在37℃下混菌发酵至滴定酸度为0.6％(以乳酸计)，冷藏至4℃并冷藏保存即得到发酵乳。

Claims (10)

1.一种具有降低牛乳中β-乳球蛋白抗原性能力的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)WPC09，其保藏编号为CCTCC No.M208200。

2.含有权利要求1所述干酪乳杆菌WPC09的乳酸菌奶饮料的制备方法，其特征在于该方法的步骤如下：

首先，将所述干酪乳杆菌WPC09原始菌种在温度-75℃下以30重量％甘油悬液形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；

其次，制备干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂：

将权利要求1所述的干酪乳杆菌WPC09原始菌种接种于12重量％在110℃灭菌10min的脱脂乳中，在37℃条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；将所述母发酵剂按3-5体积％接种于灭菌脱脂乳中，培养14-16h至凝乳，此时该凝乳中的活菌数达到109cfu/mL，这样得到所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂；

然后，原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到4℃，再加入所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，使其浓度达到10⁶cfu/ml以上，在4℃冷藏保存即得到含干酪乳杆菌WPC09活菌的乳酸菌奶饮料。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于制备干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂：将权利要求1所述的干酪乳杆菌WPC09原始菌种接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4体积％接种于MRS培养基中，培养16-18h，在4℃条件下4000r/min离心15min，去除上清夜，得到细胞沉淀，将沉淀用无菌脱脂乳制成悬浮液，这样得到所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于将所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂与可共生的制备发酵乳的商品发酵剂一起使用制备含干酪乳杆菌WPC09活菌的乳酸菌奶饮料。

5.含有权利要求1所述干酪乳杆菌WPC09的乳粉制备方法，其特征在于该方法的步骤如下：

首先，按照权利要求2或3所述制备方法制备所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂；

然后，原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃得到灭菌原料乳，再以原料乳体积的4％接菌量往所述灭菌原料乳中接种所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，再在37℃下发酵16h，得到干酪乳杆菌WPC09发酵乳；然后所述的干酪乳杆菌WPC09发酵乳按照1∶3(V/V)加到上述灭菌原料乳中，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得到含干酪乳杆菌WPC09的乳粉。

6.含有权利要求1所述干酪乳杆菌WPC09的胶囊制品制备方法，其特征在于该方法的步骤如下：

把权利要求5所述制备方法得到的含干酪乳杆菌WPC09的乳粉装入胶囊，制成胶囊制品。

7.含有权利要求1所述干酪乳杆菌WPC09的发酵乳制备方法，其特征在于该方法的步骤如下：

首先，按照权利要求2或3所述制备方法制备所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂；

然后，原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再按照3-5体积％加入所述的干酪乳杆菌WPC09工作发酵剂，再加入3-5体积％可共生的制备发酵乳商品发酵剂，混匀后在37℃下混菌发酵至滴定酸度以乳酸计0.6-0.7％，然后冷却至4℃，再进行冷藏保存得到所述的发酵乳。

8.根据权利要求2、3、5-7中任一项权利要求所述的制备方法，其特征在于所述的原料乳是一种或多种选自脱脂奶、鲜奶、复原奶的原料乳。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述的商品发酵剂是保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述的商品发酵剂是保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。

Images