CN101451114A - 发酵高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法，包括采用编号ATCC39920为兽疫链球菌，其特征是对编号为ATCC39920的兽疫链球菌进行菌种培养和发酵培养，重复上述步骤，如此反复试验200次，获得待发酵菌种；再在发酵培养剂中进行透明质酸钠发酵培养，发酵培养基在121摄氏度小灭菌20分钟，冷却后在36－37摄氏度，pH6.8－7.1下培养，通气量无限制，培养30小时进入后处理步骤，得到高稳定性透明质酸钠，在同样条件下用原来没有优化处理的菌种来发酵生产透明质酸钠，两者进行稳定性对照考察，本发明提供的透明质酸钠成品稳定性明显高于外来透明质酸钠样品。

Description

发酵高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法

技术领域

本发明涉及一种透明质酸钠的发酵生产所采用菌种的培育优化技术，特别是一种发酵高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法。

背景技术

人体内所有组织中都存在透明质酸，由此可见不能低估透明质酸的重要性。透明质酸最重要的生物学功能之一是它的保水性。其次发现透明质酸能够给不能直接获得血液供给的细胞如软骨细胞提供养分并清除这些细胞中的废物。当透明质酸含量低于适宜数量时，养分不能进入这些细胞，废物不能从这些细胞中排出。透明质酸简写为HA。

科学研究证明，在关节滑液、眼睛玻璃体、软骨、血管、胞外基质、皮肤以及脐带中都发现有透明质酸。在化妆品里透明质酸钠的应用也范围十分广阔，膏、霜、露里都可以添加。

透明质酸钠在眼药里的应用也十分广泛，多数眼药都添加使用！

透明质酸钠是一种稳定性差的产品，主要表现在容易降解，分子量在液体状态下，极易变小，运动粘度下降，热不稳定。作为保湿因子的透明质酸钠在化妆品应用中，就是用它大分子高保湿性的特性。容易降解的透明质酸钠在应用中保湿和成膜效果会受到影响！在药品的应用中也希望它相对的稳定。

目前发酵培养出的透明质酸钠往往稳定性不好，严重影响了透明质酸钠的有效使用，如何培养出高稳定性的透明质酸钠显得十分必要。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述技术的不足而提供一种具有高稳定性的发酵高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法。

为了达到上述目的，本发明所提供的高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法，包括采用编号ATCC39920为兽疫链球菌，其特征是对编号为ATCC39920的兽疫链球菌进行菌种培养和发酵培养：

第一：生产透明质酸钠的兽疫链球菌，在下述条件下进行长期培养优化；

条件如下：高糖培育——单菌挑选——发酵试验

步骤：日常生产用斜面菌种——摇瓶培养15小时——发酵培养30小时发酵时的糖浓度在10％，正常发酵的糖浓度在5％左右。

配方如下：

              斜面和摇瓶％                发酵配方％

牛肉膏            1                            1

酵母粉            0.5                          0.5

谷氨酸钠          0.2                          0.3

蚕蛹氨基酸        0                            0.2

葡萄糖            0.5                          6

磷酸二氢钾        0.15                         0.2

氯化镁            0.05                         0.05

纯化水            100                          100

消泡剂            0.01                         0.01

培养基在121摄氏度小灭菌20分钟，冷却后在36-37摄氏度，PH6.8-7.1下培养，通气量无限制。

发酵培养20小时后，在无菌操作下取样，在超净工作台划线，培养单菌落。

再重复上述步骤，如此反复试验200次，获得待发酵菌种；

第二：对所获得的待发酵菌种进行发酵，获得发酵的透明质酸钠，发酵生产条件如下：

                斜面和摇瓶％                 发酵配方％

牛肉膏               1                           1

酵母粉               0.5                         0.5

谷氨酸钠           0.2                  0.3

蚕蛹氨基酸         0                    0.2

葡萄糖             0.5                  10

磷酸二氢钾         0.15                 0.2

氯化镁             0.05                 0.05

纯化水             100                  100

消泡剂             0.01                 0.01

培养基在121摄氏度小灭菌20分钟，冷却后在36-37摄氏度，PH6.8-7.1下培养，通气量无限制，培养30小时进入后处理步骤。

按本发明提供的发酵高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法所得到的透明质酸钠，在同样条件下用原来没有优化处理的菌种来发酵生产透明质酸钠，两者进行稳定性对照考察。本发明提供的透明质酸钠成品稳定性明显高于外来透明质酸钠样品。如下表所示：

 

	HJSW01号菌种	原生产用菌种	外来样品
				热稳定性干粉加热100摄氏度1小时	检测运动粘度下降10％	检测运动粘度下降30％	检测运动粘度下降30％
微生物稳定性1％溶液	48小时不浑浊	24小时溶液浑浊	24小时溶液浑浊
				长期存放稳定性(常温)	1个月内粘度不变	1个月内粘度下降10％	一个月内粘度下降10％
液态稳定性1％，37摄氏度，防腐剂存在下放置	10天内粘度不下降，溶液不浑浊	10天内粘度下降10％，溶液不浑浊	10天内粘度下降10％，溶液不浑浊

本发明培育出高稳定的透明质酸钠的发酵用菌种，能生产出高稳定性的透明质酸钠，使之在应用中增加了使用的效果。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步的描述。

实施例1

本实施例所提供的高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法，包括采用编号ATCC39920为兽疫链球菌，其特征是对编号为ATCC39920的兽疫链球菌进行菌种培养和发酵培养：

第一：生产透明质酸钠的兽疫链球菌，在下述条件下进行长期培养优化；

条件如下：高糖培育——单菌挑选——发酵试验

步骤：日常生产用斜面菌种——摇瓶培养15小时——发酵培养30小时发酵时的糖浓度在10％，正常发酵的糖浓度在5％左右。

配方如下：

            斜面和摇瓶％               发酵配方％

牛肉膏           1                         1

酵母粉           0.5                       0.5

谷氨酸钠         0.2                       0.3

蚕蛹氨基酸       0                         0.2

葡萄糖           0.5                       6

磷酸二氢钾       0.15                      0.2

氯化镁           0.05                      0.05

纯化水           100                       100

消泡剂           0.01                      0.01

培养基在121摄氏度小灭菌20分钟，冷却后在36-37摄氏度，PH6.8-7.1下培养，通气量无限制。

发酵培养20小时后，在无菌操作下取样，在超净工作台划线，培养单菌落。

再重复上述步骤，如此反复试验200次，获得待发酵菌种；

第二：对所获得的待发酵菌种进行发酵，获得发酵的透明质酸钠，发酵生产条件如下：

               斜面和摇瓶％                  发酵配方％

牛肉膏             1                              1

酵母粉             0.5                            0.5

谷氨酸钠           0.2                            0.3

蚕蛹氨基酸         0                              0.2

葡萄糖             0.5                            10

磷酸二氢钾         0.15                           0.2

氯化镁             0.05                           0.05

纯化水             100                            100

消泡剂             0.01                           0.01

培养基在121摄氏度  小灭菌20分钟，冷却后在36-37摄氏度，PH6.8-7.1下培养，通气量无限制，培养30小时进入后处理步骤，从而得到本发明的高稳定性透明质酸钠。

Claims (1)

1、一种高稳定性透明质酸钠菌种的培育方法，包括采用编号ATCC39920为兽疫链球菌，其特征是对编号为ATCC39920的兽疫链球菌进行菌种培养和发酵培养：

第一：生产透明质酸钠的兽疫链球菌，在下述条件下进行长期培养优化；

条件如下：高糖培育——单菌挑选——发酵试验

步骤：日常生产用斜面菌种——摇瓶培养15小时——发酵培养30小时发酵时的糖浓度在10％，正常发酵的糖浓度在5％左右。

配方如下：

         斜面和摇瓶％                 发酵配方％

牛肉膏         1                          1

酵母粉         0.5                        0.5

谷氨酸钠       0.2                        0.3

蚕蛹氨基酸     0                          0.2

葡萄糖         0.5                        6

磷酸二氢钾     0.15                       0.2

氯化镁         0.05                       0.05

纯化水         100                        100

消泡剂         0.01                       0.01

培养基在121摄氏度小灭菌20分钟，冷却后在36-37摄氏度，PH6.8-7.1下培养，通气量无限制。

发酵培养20小时后，在无菌操作下取样，在超净工作台划线，培养单菌落。

再重复上述步骤，如此反复试验200次，获得待发酵菌种；

第二：对所获得的待发酵菌种进行发酵，获得发酵的透明质酸钠，发酵生产条件如下：

          斜面和摇瓶％                发酵配方％

牛肉膏           1                        1

酵母粉           0.5                      0.5

谷氨酸钠         0.2                      0.3

蚕蛹氨基酸       0                        0.2

葡萄糖           0.5                      10

磷酸二氢钾       0.15                     0.2

氯化镁           0.05                     0.05

纯化水           100                      100

消泡剂           0.01                     0.01

培养基在121摄氏度小灭菌20分钟，冷却后在36-37摄氏度，PH6.8-7.1下培养，通气量无限制，培养30小时进入后处理步骤。