CN101449657A - 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法 - Google Patents

一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101449657A
CN101449657A CNA2008101547072A CN200810154707A CN101449657A CN 101449657 A CN101449657 A CN 101449657A CN A2008101547072 A CNA2008101547072 A CN A2008101547072A CN 200810154707 A CN200810154707 A CN 200810154707A CN 101449657 A CN101449657 A CN 101449657A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cauliflower
microspore
improvement
medium
cold
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2008101547072A
Other languages
English (en)
Inventor
孙德岭
文正华
姚星伟
佟志强
张宝珍
刘莉莉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kerun Agricultural Science & Technology Co Ltd Tianjin
Original Assignee
Kerun Agricultural Science & Technology Co Ltd Tianjin
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kerun Agricultural Science & Technology Co Ltd Tianjin filed Critical Kerun Agricultural Science & Technology Co Ltd Tianjin
Priority to CNA2008101547072A priority Critical patent/CN101449657A/zh
Publication of CN101449657A publication Critical patent/CN101449657A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH突变体的方法，包括如下步骤：(1)分离和纯化花椰菜游离小孢子；(2)花椰菜游离小孢子诱变；(3)秋水仙素进行花椰菜小孢子加倍；(4)加倍花椰菜游离小孢子培养和胚诱导；(5)抗寒性筛选；本发明利用EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒性突变体，丰富了花椰菜育种资源；建立的花椰菜游离小孢子诱变和抗寒突变体筛选技术，可以明显缩短获得新种质资源的年限；本发明同样适用于十字花科其他蔬菜的小孢子诱变和抗寒性突变体筛选；通过添加诱变剂EMS，可以明显提高小孢子突变频率和突变谱；为培育花椰菜抗寒新品种提供物质基础。

Description

一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH突变体的方法
技术领域
本发明属于植物细胞工程技术领域，具体涉及一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH(双单倍体)突变体的方法。
背景技术
花椰菜由于其营养丰富、质地柔嫩、味道鲜美深受广大消费者的喜爱。近年来栽培面积和消费量增长迅速，目前花椰菜已成为国内外蔬菜市场的重要蔬菜种类之一。我国不仅是世界上花椰菜种植面积最大、总产量最高，而且也是种植面积增长最快的国家，但我国花椰菜平均单产在世界上仅居第23位。我国远离花椰菜起源中心，资源匮乏在很大程度上限制了我国花椰菜育种研究水平的提高。因此利用高新育种技术，创造优异的花椰菜种质资源，拓宽我国花椰菜种质资源遗传背景，选育出多样性的花椰菜系列优良品种尤为重要。
遗传育种单位和科学家，纷纷把种质资源创新作为育种工作的核心，探索先进、高效的种质资源创新技术，在短时间内创造大量的优异育种材料一直是植物遗传育种家努力求索的目标。游离小孢子培养技术的出现使植物育种学家多年的梦想成为现实。随着游离小孢子培养技术的日益成熟，诱变技术与游离小孢子培养技术相结合，是近年来新兴的一项很有应用前景的研究项目。诱变技术与游离小孢子培养技术相结合有许多优点：游离小孢子数量大、体积小(20μm)、诱变剂容易吸收；突变类型丰富，提高了变异频率和扩大了变异谱；隐性基因能于DH(双单倍体)植株直接表达，M1世代就可以进行性状选择，缩短育种时间；筛选程序易于操作，提高选择效率。目前使用的诱变剂主要分为物理诱变剂和化学诱变剂两类，化学诱变剂中EMS(甲基磺酸乙酯)的应用最为广泛，效果最好。与其他诱变剂相比，EMS诱变后产生的突变频率高，且多为显性突变体，易于进行突变体的筛选。EMS诱导突变的原理是使G不再与C配对而与T配对，从而造成G：C-A：T转换，造成点突变。目前这种诱变剂已被广泛应用于农作物诱变育种当中，现已育成2,250个品种。
Swanson(1989)用乙基亚硝基脉诱导甘蓝型油菜小孢子，分别获得耐Chlrosulfuron(CS，一种除草剂)株“M-37”和“P-26”，其自交后代仍保持较高水平的CS耐性，比对照品种高10-1000倍；Barro(2001)用EMS诱变埃塞俄比亚芥小孢子，使芥酸含量发生了广泛变异；和江明(2003)用EMS诱变甘蓝型油菜小孢子获得高油酸突变体。陆柳英(2007)以EMS为诱变剂获得了木薯抗寒突变体。
花椰菜属于喜温性蔬菜，抗寒能力较弱，培育抗寒能力强的花椰菜新品种，可以推迟花椰菜的采收时间，实现花椰菜的周年供应。本研究利用花椰菜游离小孢子为试验材料，利用EMS诱变剂进行诱变，筛选抗寒性突变体，为花椰菜种质资源创新和抗寒性新品种选育提供物质基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH突变体的方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH突变体的方法，包括如下步骤：
(1)分离和纯化花椰菜游离小孢子：
选取长度为2.5mm～3.0mm花椰菜花蕾，水冲洗20～40min，用体积百分浓度为60％～80％的乙醇水溶液消毒20～40sec，再用质量百分浓度为0.1％　HgCl2水溶液灭菌8～10min，无菌水洗涤3～4次，沥干水分后，加入所述花椰菜花蕾质量2～4倍的改良B5培养基，碾压10～20sec，过50μm的筛，收集滤液，在700～1500rpm下离心2～3min，弃上清液，按1g与2.5～10ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，400～700rpm下离心2～5min，再按1g与2.5～10ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，400～700rpm下离心2～5min，弃上清液，沉淀物即为纯净花椰菜游离小孢子；
(2)花椰菜游离小孢子诱变：
将所述花椰菜游离小孢子添加到改良NLN培养基中，再加入甲基磺酸乙酯，使甲基磺酸乙酯在所述改良NLN培养基中的质量百分浓度为0.25％～0.5％，在30～34℃暗处理4～10h，800～1200rpm，离心2～4min，用改良NLN培养基洗涤2～4次，弃上清，所述甲基磺酸乙酯简写为EMS；
(3)秋水仙素进行花椰菜小孢子加倍：
将经步骤(2)处理的花椰菜游离小孢子悬浮在添加有秋水仙碱的改良NLN培养基中，使花椰菜游离小孢子浓度为1×106～2×106个/ml，30～34℃暗培养10～12h，进行小孢子加倍，所述秋水仙碱在所述改良NLN培养基中的浓度为200～500mg/L；
(4)加倍花椰菜游离小孢子培养和胚诱导：
将经步骤(3)处理的加倍花椰菜游离小孢子离心弃上清，放入添加有活性炭的改良NLN培养基中进行悬浮培养，使加倍花椰菜游离小孢子浓度为1×105～2×105个/ml，密封后置于25～32℃暗培养16～30h，移至20～30℃黑暗条件下静止培养，当肉眼可见胚状体时，转移至20～30℃，30～70rpm振荡暗培养，当胚状体3～4mm时停止震荡，将获得的胚状体转移至5000～10000lx，16h·d-1光照下进行培养，胚转绿后转移至MS培养基中诱导不定芽的形成，培养至真叶形成时，转移至MS培养基上生根，当植株幼苗真叶完全展开时，进行抗寒性筛选，所述活性炭在改良NLN培养基中的浓度为250-600mg/L；
(5)抗寒性筛选：
在3℃，72h条件筛选出花椰菜抗寒DH突变体。
所述改良B5培养基的组份为：NaH2PO4·H2O 150mg/L，KNO3 2500mg/L，CaCl2·2H2O150mg/L，MgSO4·7H2O 250mg/L，(NH4)2SO4 130mg/L，KI 0.9mg/L，H3BO4 3.0mg/L，MnSO4·4H2O 10mg/L，ZnSO4·7H2O 2.0mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CoCL2·6H2O 0.025mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，Na2-EDTA 40mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫铵10mg/L，110mg/L蔗糖，余量为水。
所述改良NLN培养基的组份为：KNO3 125mg/L，MgSO4·7H2O 125mg/L，KH2PO4125mg/L，Ca(N O3)2·4H2O 500mg/L，Na2 EDTA 37.3mg/L，FeSO4.7H2O 0.3mg/L，MnSO4.4H2O 25mg/L，KI 8.3mg/L，H3BO3 10mg/L，ZnSO4·4H2O 10mg/L，Na2 MoO4·2H2O 0.25mg/L，CoCI2·6H2O 0.025mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，肌醇100mg/L，烟酸5.0mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，叶酸0.5mg/L，生物素0.05mg/L，甘氨酸2.0mg/L，谷胱甘肽30mg/L，谷氨酞胺600mg/L，丝氨酸100mg/L脯氨酸200mg/L；蔗糖130mg/L，余量为水。
本发明的优点：
1本发明利用EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒性突变体，丰富了花椰菜育种资源；
2本发明建立的花椰菜游离小孢子诱变和抗寒突变体筛选技术，可以明显缩短获得新种质资源的年限；
3本发明建立的花椰菜游离小孢子诱变和抗寒突变体筛选技术，同样适用于十字花科其他蔬菜的小孢子诱变和抗寒性突变体筛选；
4通过添加诱变剂EMS，可以明显提高小孢子突变频率和突变谱；
5为培育花椰菜抗寒新品种提供物质基础。
附图说明
图1为加倍花椰菜游离小孢子培养获得的胚状体。
图2用本发明的方法获得的抗寒DH突变体的植株。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明：
实施例1
(1)分离和纯化花椰菜游离小孢子：
选取长度为2.5mm～3.0mm花椰菜花蕾，此时小孢子多数处于单核靠边期，水冲洗30min，用体积百分浓度为70％的乙醇水溶液消毒30sec，再用质量百分浓度为0.1％ HgCl2水溶液灭菌8min，无菌水洗涤3次，沥干水分后，加入所述花椰菜花蕾质量3倍的改良B5培养基，在研钵中用玻棒碾压10sec挤出小孢子，过50μm的筛，收集滤液，在1000rpm下离心3min，弃上清液，按1g与5ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，500rpm下离心3min，再按1g与5ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，500rpm下离心3min，弃上清液，沉淀物即为纯净花椰菜游离小孢子；
(2)花椰菜游离小孢子诱变：
将步骤(1)制备的花椰菜游离小孢子添加到改良NLN培养基中，再加入甲基磺酸乙酯(简写为EMS)，使甲基磺酸乙酯在所述改良NLN培养基中的质量百分浓度为0.35％，在32℃暗处理8h，1000rpm，离心3min，用改良NLN培养基洗涤3次，弃上清；
(3)秋水仙素进行花椰菜小孢子加倍：
将经步骤(2)处理的花椰菜游离小孢子悬浮在添加有秋水仙碱的改良NLN培养基中，使花椰菜游离小孢子浓度为1.5×106个/ml，32℃暗培养11h，进行小孢子加倍，所述秋水仙碱在所述改良NLN培养基中的浓度为300mg/L；
(4)加倍花椰菜游离小孢子培养和胚诱导：
将经步骤(3)处理的加倍花椰菜游离小孢子离心弃上清，放入添加有活性炭的改良NLN培养基中进行悬浮培养，使加倍花椰菜游离小孢子浓度为1.5×105个/ml，密封后置于30℃暗培养24h，移至25℃黑暗条件下静止培养，当肉眼可见胚状体时，转移至25℃，50rpm振荡暗培养，当胚状体3～4mm时停止震荡，将获得的胚状体转移至8000lx，16h·d-1光照下进行培养，胚转绿后转移至MS培养基中诱导不定芽的形成，培养至真叶形成时，转移至MS培养基上生根，当植株幼苗真叶完全展开时，进行抗寒性筛选，所述活性炭在改良NLN培养基中的浓度为400mg/L；
(5)抗寒性筛选：
在3℃，72h条件筛选出花椰菜抗寒DH突变体。
实施例2
(1)分离和纯化花椰菜游离小孢子：
选取长度为2.5mm～3.0mm花椰菜花蕾，此时小孢子多数处于单核靠边期，水冲洗20min，用体积百分浓度为80％的乙醇水溶液消毒20sec，再用质量百分浓度为0.1％ HgCl2水溶液灭菌9min，无菌水洗涤4次，沥干水分后，加入所述花椰菜花蕾质量2倍的改良B5培养基，在研钵中用玻棒碾压15sec挤出小孢子，过50μm的筛，收集滤液，在700rpm下离心3min，弃上清液，按1g与2.5ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，400rpm下离心5min，再按1g与2.5ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，400rpm下离心5min，弃上清液，沉淀物即为纯净花椰菜游离小孢子；
(2)将步骤(1)制备的花椰菜游离小孢子添加到改良NLN培养基中，再加入甲基磺酸乙酯，使甲基磺酸乙酯在所述改良NLN培养基中的质量百分浓度为0.25％，在30℃暗处理10h，800rpm，离心4min，用改良NLN培养基洗涤4次，弃上清；
(3)秋水仙素进行花椰菜小孢子加倍：
将经步骤(2)处理的花椰菜游离小孢子悬浮在添加有秋水仙碱的改良NLN培养基中，使花椰菜游离小孢子浓度为1×106个/ml，30℃暗培养12h，进行小孢子加倍，所述秋水仙碱在所述改良NLN培养基中的浓度为200mg/L；
(4)加倍花椰菜游离小孢子培养和胚诱导：
将经步骤(3)处理的加倍花椰菜游离小孢子离心弃上清，放入添加有活性炭的改良NLN培养基中进行悬浮培养，使加倍花椰菜游离小孢子浓度为1×105个/ml，密封后置于32℃暗培养16h，移至30℃黑暗条件下静止培养，当肉眼可见胚状体时，转移至30℃，30rpm振荡暗培养，当胚状体3～4mm时停止震荡，将获得的胚状体转移至5000lx，16h·d-1光照下进行培养，胚转绿后转移至MS培养基中诱导不定芽的形成，培养至真叶形成时，转移至MS培养基上生根，当植株幼苗真叶完全展开时，进行抗寒性筛选，所述活性炭在改良NLN培养基中的浓度为600mg/L；
(5)抗寒性筛选：
在3℃，72h条件筛选出花椰菜抗寒DH突变体。
实施例3
(1)分离和纯化花椰菜游离小孢子：
选取长度为2.5mm～3.0mm花椰菜花蕾，此时小孢子多数处于单核靠边期，水冲洗40min，用体积百分浓度为60％的乙醇水溶液消毒40sec，再用质量百分浓度为0.1％ HgCl2水溶液灭菌10min，无菌水洗涤3次，沥干水分后，加入所述花椰菜花蕾质量4倍的改良B5培养基，在研钵中用玻棒碾压20sec挤出小孢子，过50μm的筛，收集滤液，在1500rpm下离心2min，弃上清液，按1g与10ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，700rpm下离心2min，再按1g与10ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，700rpm下离心2min，弃上清液，沉淀物即为纯净花椰菜游离小孢子；
(2)花椰菜游离小孢子诱变：
将步骤(1)制备的花椰菜游离小孢子添加到改良NLN培养基中，再加入甲基磺酸乙酯，使甲基磺酸乙酯在所述改良NLN培养基中的质量百分浓度为0.5％，在34℃暗处理4h，1200rpm，离心2min，用改良NLN培养基洗涤2次，弃上清，所述甲基磺酸乙酯简写为EMS；
(3)秋水仙素进行花椰菜小孢子加倍：
将经步骤(2)处理的花椰菜游离小孢子悬浮在添加有秋水仙碱的改良NLN培养基中，使花椰菜游离小孢子浓度为2×106个/ml，34℃暗培养10h，进行小孢子加倍，所述秋水仙碱在所述改良NLN培养基中的浓度为500mg/L；
(4)加倍花椰菜游离小孢子培养和胚诱导：
将经步骤(3)处理的加倍花椰菜游离小孢子离心弃上清，放入添加有活性炭的改良NLN培养基中进行悬浮培养，使加倍花椰菜游离小孢子浓度为2×105个/ml，密封后置于25℃暗培养30h，移至20℃黑暗条件下静止培养，当肉眼可见胚状体时，转移至20℃，70rpm振荡暗培养，当胚状体3～4mm时停止震荡，将获得的胚状体转移至10000lx，16h·d-1光照下进行培养，胚转绿后转移至MS培养基中诱导不定芽的形成，培养至真叶形成时，转移至MS培养基上生根，当植株幼苗真叶完全展开时，进行抗寒性筛选，所述活性炭在改良NLN培养基中的浓度为250mg/L；
(5)抗寒性筛选：
在3℃，72h条件筛选出花椰菜抗寒DH突变体。
抗寒性筛选和游离脯氨酸含量测定
依据花椰菜在低于5℃气候条件下受冻害的特点，以3℃，72d低温条件筛选经诱变剂处理而获得的DH植株，共筛选出4份抗寒DH突变体。对筛选到的DH抗寒突变植株采用酸性茚三酮法测定游离脯氨酸含量，实验结果发现，突变体游离脯氨酸的含量介于20-33％之间，
与不抗寒花椰菜资源游离脯氨酸含量差异显著。
实施例4
改良B5培养基的组份为：NaH2PO4·H2O 150mg/L，KNO3 2500mg/L，CaCl2·2H2O 150mg/L，MgSO4·7H2O 250mg/L，(NH4)2SO4 130mg/L，KI 0.9mg/L，H3BO4 3.0mg/L，MnSO4·4H2O 10mg/L，ZnSO4·7H2O 2.0mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CoCL2·6H2O 0.025mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，Na2-EDTA 40mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫铵10mg/L，110mg/L蔗糖，余量为水。
实施例5
改良NLN培养基的组份为：KNO31 25mg/L，MgSO4·7H2O 125mg/L，KH2PO4125mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 500mg/L，Na2 EDTA 37.3mg/L，FeSO4.7H2O 0.3mg/L，MnSO4.4H2O 25mg/L，KI 8.3mg/L，H3BO3 10mg/L，ZnSO4·4H2O 10mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CoCI2·6H2O 0.025mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，肌醇100mg/L，烟酸5.0mg/L，维生素B10.5mg/L，维生素B60.5mg/L，叶酸0.5mg/L，生物素0.05mg/L，甘氨酸2.0mg/L，谷胱甘肽30mg/L，谷氨酞胺600mg/L，丝氨酸100mg/L脯氨酸200mg/L；蔗糖130mg/L，余量为水。

Claims (3)

1.一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH突变体的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)分离和纯化花椰菜游离小孢子：
选取长度为2.5mm～3.0mm花椰菜花蕾，水冲洗20～40min，用体积百分浓度为60％～80％的乙醇水溶液消毒20～40sec，再用质量百分浓度为0.1％HgCl2水溶液灭菌8～10min，无菌水洗涤3～4次，沥干水分后，加入所述花椰菜花蕾质量2～4倍的改良B5培养基，碾压10～20sec，过50μm的筛，收集滤液，在700～1500rpm下离心2～3min，弃上清液，按1g与2.5～10ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，400～700rpm下离心2～5min，再按1g与2.5～10ml的比例，向沉淀物中加入改良B5培养基，400～700rpm下离心2～5min，弃上清液，沉淀物即为纯净花椰菜游离小孢子；
(2)花椰菜游离小孢子诱变：
将所述花椰菜游离小孢子添加到改良NLN培养基中，再加入甲基磺酸乙酯，使甲基磺酸乙酯在所述改良NLN培养基中的质量百分浓度为0.25％～0.5％，在30～34℃暗处理4～10h，800～1200rpm，离心2～4min，用改良NLN培养基洗涤2～4次，弃上清，所述甲基磺酸乙酯简写为EMS；
(3)秋水仙素进行花椰菜小孢子加倍：
将经步骤(2)处理的花椰菜游离小孢子悬浮在添加有秋水仙碱的改良NLN培养基中，使花椰菜游离小孢子浓度为1×106～2×106个/ml，30～34℃暗培养10～12h，进行小孢子加倍，所述秋水仙碱在所述改良NLN培养基中的浓度为200～500mg/L；
(4)加倍花椰菜游离小孢子培养和胚诱导：
将经步骤(3)处理的加倍花椰菜游离小孢子离心弃上清，放入添加有活性炭的改良NLN培养基中进行悬浮培养，使加倍花椰菜游离小孢子浓度为1×105～2×105个/ml，密封后置于25～32℃暗培养16～30h，移至20～30℃黑暗条件下静止培养，当肉眼可见胚状体时，转移至20～30℃，30～70rpm振荡暗培养，当胚状体3～4mm时停止震荡，将获得的胚状体转移至5000～100001x，16h·d-1光照下进行培养，胚转绿后转移至MS培养基中诱导不定芽的形成，培养至真叶形成时，转移至MS培养基上生根，当植株幼苗真叶完全展开时，进行抗寒性筛选，所述活性炭在改良NLN培养基中的浓度为250-600mg/L；
(5)抗寒性筛选：
在3℃，72h条件筛选出花椰菜抗寒DH突变体。
2.根据权利要求1所述的一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH突变体的方法，其特征是所述改良B5培养基的组份为：NaH2PO4·H2O 150mg/L，KNO3 2500mg/L，CaCl2·2H2O 150mg/L，MgSO4·7H2O 250mg/L，(NH4)2SO4 130mg/L，KI 0.9mg/L，H3BO4 3.0mg/L，MnSO4·4H2O 10mg/L，ZnSO4·7H2O 2.0mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CoCL2·6H2O 0.025mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，Na2-EDTA 40mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫铵10mg/L，110mg/L蔗糖，余量为水。
3.根据权利要求1所述的一种EMS诱变花椰菜小孢子获得抗寒DH突变体的方法，其特征是所述改良NLN培养基的组份为：KNO3 1 25mg/L，MgSO4·7H2O 125mg/L，KH2PO4 125mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 500mg/L，Na2 EDTA 37.3mg/L，FeSO4.7H2O 0.3mg/L，MnSO4.4H2O 25mg/L，KI 8.3mg/L，H3BO3 10mg/L，ZnSO4·4H2O 10mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CoCI2·6H2O 0.025mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，肌醇100mg/L，烟酸5.0mg/L，维生素B10.5mg/L，维生素B60.5mg/L，叶酸0.5mg/L，生物素0.05mg/L，甘氨酸2.0mg/L，谷胱甘肽30mg/L，谷氨酞胺600mg/L，丝氨酸100mg/L脯氨酸200mg/L；蔗糖130mg/L，余量为水。
CNA2008101547072A 2008-12-30 2008-12-30 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法 Pending CN101449657A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2008101547072A CN101449657A (zh) 2008-12-30 2008-12-30 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2008101547072A CN101449657A (zh) 2008-12-30 2008-12-30 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101449657A true CN101449657A (zh) 2009-06-10

Family

ID=40732289

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2008101547072A Pending CN101449657A (zh) 2008-12-30 2008-12-30 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101449657A (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101617631B (zh) * 2009-08-13 2011-09-07 浙江省农业科学院 花椰菜高二倍体率小孢子再生植株的培养方法
CN102177778A (zh) * 2011-04-12 2011-09-14 中国科学院植物研究所 通过增厚糊粉层来提高水稻营养成分含量的方法
CN103782902A (zh) * 2014-01-21 2014-05-14 沈阳农业大学 一种借助60Co-γ射线诱变和小孢子培养创制大白菜突变体的方法
CN104145811A (zh) * 2014-08-18 2014-11-19 安徽农业大学 一种拟南芥Mo敏感变异株筛选培养基及筛选方法
CN104782481A (zh) * 2014-12-29 2015-07-22 沈阳农业大学 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法
CN107372103A (zh) * 2017-07-05 2017-11-24 张家港市松田创新农业科技有限公司 一种松花菜植株加倍方法
CN108522267A (zh) * 2018-03-29 2018-09-14 湖南省蔬菜研究所 一种采用ems诱变剂创制冬瓜耐涝突变体的方法
CN110663551A (zh) * 2019-11-05 2020-01-10 天津农学院 一种抗逆性花椰菜新品种的培育方法
CN113875589A (zh) * 2021-10-15 2022-01-04 天津农学院 一种抗寒花椰菜种质的制备方法及应用

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101617631B (zh) * 2009-08-13 2011-09-07 浙江省农业科学院 花椰菜高二倍体率小孢子再生植株的培养方法
CN102177778A (zh) * 2011-04-12 2011-09-14 中国科学院植物研究所 通过增厚糊粉层来提高水稻营养成分含量的方法
CN103782902A (zh) * 2014-01-21 2014-05-14 沈阳农业大学 一种借助60Co-γ射线诱变和小孢子培养创制大白菜突变体的方法
CN104145811A (zh) * 2014-08-18 2014-11-19 安徽农业大学 一种拟南芥Mo敏感变异株筛选培养基及筛选方法
CN104782481A (zh) * 2014-12-29 2015-07-22 沈阳农业大学 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法
CN104782481B (zh) * 2014-12-29 2017-03-08 沈阳农业大学 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法
CN107372103A (zh) * 2017-07-05 2017-11-24 张家港市松田创新农业科技有限公司 一种松花菜植株加倍方法
CN108522267A (zh) * 2018-03-29 2018-09-14 湖南省蔬菜研究所 一种采用ems诱变剂创制冬瓜耐涝突变体的方法
CN110663551A (zh) * 2019-11-05 2020-01-10 天津农学院 一种抗逆性花椰菜新品种的培育方法
CN113875589A (zh) * 2021-10-15 2022-01-04 天津农学院 一种抗寒花椰菜种质的制备方法及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101449657A (zh) 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法
CN101513170B (zh) 一种高油酸高产花生的育种方法
CN101595837B (zh) 油菜特高油种质及其高油杂交种的选育方法
CN102144562B (zh) 魔芋高效快速组培繁殖方法
CN102224801A (zh) 一种油菜多目标性状的快速聚合育种方法
Swaraz et al. Bioethanol production potential in Bangladesh from wild date palm (Phoenix sylvestris Roxb.): An experimental proof
CN102177806B (zh) 苦草快速定植的方法
He et al. Leaf development and energy yield of hydroponic sweetpotato seedlings using single-node cutting as influenced by light intensity and LED spectrum
CN103340150B (zh) 一种甲基磺酸乙酯诱变处理麻疯树种子的方法
CN101473791B (zh) 一种春结球甘蓝育种保持自交系春性的繁殖方法
Tang et al. A potential bioenergy tree: Pistacia chinensis Bunge
JP2013042695A (ja) 根部エンドファイト（ＤＳＥ）Ｐｈｉａｌｏｃｅｐｈａｌａｆｏｒｔｉｎｉｉを利用したアスパラガス苗の生産方法
CN105145337B (zh) 一种油菜优异种质资源的培育方法
CN106434524A (zh) 一种大白菜游离小孢子诱导培养基配方
CN101361467A (zh) 常见滩涂贝类育成杂交方法
CN106489728A (zh) 一种大麦花药诱导培养基配方
CN204194289U (zh) 一种茉莉花茶筛分机
CN102986440A (zh) 一种提高菊芋单产的种植方法
CN101218889A (zh) 一种提高制种繁殖系数的杂交稻种子生产方法
Ahmed et al. Combining ability and heterosis in line x tester crosses of summer squash (Cucurbita pepo L.)
CN102265784A (zh) 山区旱作品种商麦5226的繁育方法
CN103548439A (zh) 苗带紧行间松松紧兼备的耕地合理耕层耕作方法
CN104719131A (zh) 一种盘型株型高产高油酸花生品种的培育方法
CN102668972A (zh) 一种抗赤斑病蚕豆的育种方法
CN110506624A (zh) 一种水稻品种的选育方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20090610