CN101444491A - 奥扎格雷钠微球冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种奥扎格雷钠微球冻干制剂及其制备方法，按重量份数计，本发明的奥扎格雷钠微球冻干制剂主要包含奥扎格雷钠20－80份、壳聚糖50－150份、聚乙烯醇40－100份及冻干保护剂50－300份。本发明的奥扎格雷钠微球冻干剂具有稳定性和溶解性好、水合后脂质体的粒径小、靶向性强、生产成本低等优点。

Description

奥扎格雷钠微球冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种奥扎格雷钠微球冻干剂及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

奥扎格雷(英文名：ozagrel)为一种高效、选择性血栓素合成酶抑制剂，通过抑制血栓烷A2(TXA₂)的合成及促进前列环素(PGI₂)的生成，从而具有抗血小板聚集、降低血液粘度、促进血栓分解和扩张血管作用等作用。因而，其特别适用于抑制大脑血管痉挛，增加大脑血流量，改善大脑内微循环障碍和能量代谢异常，改善蛛网膜下腔出血术后患者的大脑局部缺血症状和脑血栓(急性期)患者的运动失调。临床上将其广泛用于治疗急性血栓性脑梗塞和脑梗塞所伴随的运动障碍。

但是奥扎格雷在水中的溶解度较小，因此，本领域通常将其制成钠盐(即，奥扎格雷钠，英文名：sodium ozagrel)，以提高其水溶性，但是，当将其制成钠盐后，其在水溶液中的稳定性下降(参见JP2001316265)。目前，奥扎格雷在市场上销售的主要是奥扎格雷钠的注射液，但由于钠盐的稳定性问题及注射剂本身的特征，这种钠盐制剂在贮存过程中可部分异构化，转为顺式咪唑甲基肉桂酸，或者出现奥扎格雷二聚体以及其他不溶性物质，不仅贮存时间较短，运输上很不方便，还有可能给临床用药带来其它潜在的问题。

而目前对于奥扎格雷(钠)冻干技术的研究仅仅停留在将奥扎格雷钠直接冻干或直接加入冻干保护剂冷冻干燥，存在的最大缺点就是复溶后的澄明度问题，复溶后溶液中存在色点、色块现象、溶液浑浊、澄清度较差、且有悬浮颗粒的现象。这些问题一直没有得到很好的解决。

本发明人经过长期认真的研究，意想不到的发现将靶向给药系统的一种新剂型微球(由生物可降解的高分子材料组成的封闭性小球状体)应用于奥扎格雷冻干技术中，既可解决奥扎格雷奥扎格雷钠的稳定性问题，又能解决按照常规技术制成冻干剂的复溶性差等问题，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种奥扎格雷钠微球冻干剂，其中按重量份数计，其包含奥扎格雷钠20-80份，壳聚糖50-150份，聚乙烯醇40-100份，冻干保护剂50-300份。

在本发明的优选的实施方案中，所述奥扎格雷钠微球冻干剂还包含表面活性剂30-120份。

在本发明的一个技术方案中，所述奥扎格雷钠微球冻干剂包含(按按重量份数计)奥扎格雷钠40-60份，壳聚糖80-120份，聚乙烯醇60-80份，冻干保护剂120-200份，任选地还可包含表面活性剂60-90份。

在本发明的另一个技术方案中，所述奥扎格雷钠微球冻干剂包含(按按重量份数计)奥扎格雷钠45-55份，壳聚糖90-110份，聚乙烯醇65-75份，冻干保护剂150-180份，任选地还可包含表面活性剂70-80份。

本发明的另一个目的在于提供一种奥扎格雷钠微球冻干剂的制备方法，其包括步骤：

1)水相的制备：将聚乙烯醇和表面活性剂溶解于蒸馏水中，或者首先将聚乙烯醇溶于蒸馏水中，再加入表面活性剂，搅拌溶解完全，得到水相；

2)油相的制备：将奥扎格雷钠和壳聚糖共溶于有机溶剂中，搅拌均匀，即可；

3)乳剂的制备：将上述油相缓慢加入水相中，并持续搅拌，得到乳剂；

4)微球冻干剂的制备：加热搅拌上述乳剂除去有机溶剂，加入冻干保护剂，冷冻干燥，得到冻干剂。

在本发明的一个实施方案中，在上述制备方法的步骤1)水相的制备中，所采用的聚乙烯醇与蒸馏水按重量/体积比，可以为1：5-18，优选1：7-15，更优选1：10-13。

在本发明的一个实施方案中，在上述制备方法的步骤2)油相的制备中，所采用的奥扎格雷钠与有机溶剂按重量/体积比，可以为1：10-30，优选1：12.5-25，更优选1：15-20。

在本发明的一个实施方案中，在上述制备方法的步骤3)乳剂的制备中，将温度保持在55-70℃，得到了O/W或W/O型乳剂。

在本发明的一个实施方案中，在上述制备方法的步骤4)微球冻干剂的制备包括：4-1)首先加热搅拌上述乳剂除去有机溶剂，得到混悬液，接着离心并洗涤，得到微球沉淀物，4-2)然后，再用蒸馏水溶解该微球沉淀物，加入冻干保护剂，搅拌20-30分钟，真空冷冻干燥，即可得到微球冻干剂。

在本发明的实施方案中，得到的微球冻干剂为白色疏松块状物。

在本发明的实施方案中，所述壳聚糖(chitosan)又称脱乙酰几丁质、聚氨基葡萄糖、可溶性甲壳素，化学名为2-氨基-β-1，4-葡聚糖，分子式为：(C₆H₁₁O₄N)n，是由甲壳素经脱乙酰化反应转化变成的分子量为12-59万的生物大分子，可溶于酸或酸性水溶液，无毒，无抗原性，在体内能被葡萄糖苷酶或溶菌酶等酶解，具有优良的生物降解性和成囊或成球性，在体内可溶胀成水凝胶。本发明选用壳聚糖作为微球的载体，可以很好的包埋奥扎格雷钠，大大提高了有效成分的稳定性和靶向性。

在本发明的实施方案中，所述聚乙烯醇，简称PVA，分子式为[C₂H₄O]n，为水溶性聚合物，在冷水中溶胀，随水温的升高而逐渐溶解，一般指聚合度为1500-2000完全醇解型，其微球可溶胀成网状骨架而对药物呈零级释放，从而达到缓释的目的。本发明选用聚合度为1500-2000的聚乙烯醇，优选聚合度为1500的聚乙烯醇。

在本发明中，所述冻干保护剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖、氨基乙酸、甘氨酸、水解明胶中的一种或几种，优选甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇，更优选葡萄糖。

在本发明中，所述表面活性剂选自聚山梨酯类、泊洛沙姆类、司盘类、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、卵磷脂中的一种或几种，优选聚山梨酯80、泊洛沙姆188，最优选聚山梨酯80。

在本发明中，有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、丙酮、甲醇、正己烷中的任一种或多种。

在本说明书中，如果没有特别地说明，所采用的装置、仪器、技术、工艺、原料、方法、步骤等都是本领域技术已知的，或者本领域技术人员按照公知技术可以获得的。

本发明提供的奥扎格雷钠微球冻干剂主要具有如下优点或效果：

1.稳定性好：经实验证实，本发明提供的奥扎格雷钠微球冻干剂能够保持长期稳定而不会发生分解或变质。

2.溶解性良好：将本发明的奥扎格雷钠微球冻干剂用0.9％生理盐水溶解后，则立即分散成均匀的奥扎格雷钠微球水溶液。

3.水合后脂质体的粒径小：扫描电镜测得，其溶于水后的平均粒径小于1μm，90％粒子粒径在150-300nm之间，粒径小会有利于奥扎格雷钠在肝组织中的积累，提高了奥扎格雷钠的治疗作用。

4.靶向性强：本发明提供的奥扎格雷钠微球冻干剂具有能识别变异细胞的特点，其对肝、脾组织有良好的靶向性。

5.生产成本低：本发明生产的奥扎格雷钠微球冻干剂的方法工艺比较简单，无需特殊设备，因而生产成本低，适合于大规模的工业化生产。

具体实施方式

下面将参照具体实施例进一步阐述本发明。

实施例1

冻干剂的组成：

组分            含量

奥扎格雷钠       20g

壳聚糖           50g

聚乙烯醇1500     40g

聚山梨酯80       30g

葡萄糖           50g

制备方法：

(1)将40g聚乙烯醇1500溶于500ml蒸馏水中，再加入30g聚山梨酯80，搅拌溶解完全，得到水相；

(2)将20g奥扎格雷钠和50g壳聚糖一起溶于500ml乙醇中，搅拌均匀，得到油相；

(3)将油相缓慢加入水相中，并持续搅拌，溶液温度保持在55℃，油相迅速扩散到水相，形成O/W或W/O型乳剂；

(4)将得到的乳剂在磁力搅拌下加热至80℃，除去乙醇，得混悬液，离心15～30min，用蒸馏水洗涤以除去有机溶剂和表面活性剂残留物，得微球沉淀物；

(5)将得到的微球固体沉淀物用蒸馏水溶解，加入50g葡萄糖，搅拌30分钟，真空冷冻干燥，得白色疏松块状物。

实施例2

冻干剂的组成：

组分            含量

奥扎格雷钠       80g

壳聚糖           150g

聚乙烯醇1500     100g

泊洛沙姆188      120g

甘露醇           300g

制备方法：

(1)将100g聚乙烯醇1500溶于1000ml蒸馏水中，再加入120g泊洛沙姆188，搅拌溶解完全，得到水相；

(2)将80g奥扎格雷钠和150g壳聚糖共溶于1000ml正己烷中，搅拌均匀，得到油相；

(3)将油相缓慢加入水相中，并持续搅拌，溶液温度维持在70℃，油相迅速扩散到水相，形成O/W或W/O型乳剂；

(4)将得到的乳剂在磁力搅拌下加热至80℃，除去正己烷，得混悬液，离心15～30min，用蒸馏水洗涤以除去有机溶剂和表面活性剂残留物，得微球沉淀物；

(5)将得到的微球固体沉淀物用蒸馏水溶解，加入300g甘露醇，搅拌20分钟，真空冷冻干燥，得白色疏松块状物。

实施例3

冻干剂的组成：

组分             含量

奥扎格雷钠       40g

壳聚糖           100g

聚乙烯醇2000     60g

聚山梨酯80       100g

山梨醇           180g

制备方法：

(1)将60g聚乙烯醇2000溶于800ml蒸馏水中，再加入100g聚山梨酯80，搅拌溶解完全，得到水相；

(2)将40g奥扎格雷钠和100g壳聚糖共溶于600ml乙醇中，搅拌均匀，为油相；

(3)将油相缓慢加入水相中，并持续搅拌，溶液温度维持在60℃，油相迅速扩散到水相，形成O/W或W/O型乳剂；

(4)将得到的乳剂在磁力搅拌下加热至80℃，除去乙醇，得混悬液，离心15～30min，用蒸馏水洗涤以除去有机溶剂和表面活性剂残留物，得微球沉淀物；

(5)将得到的微球固体沉淀物用蒸馏水溶解，加入180g山梨醇，搅拌25分钟，真空冷冻干燥，得白色疏松块状物。

本发明的奥扎格雷钠微球冻干剂的粒径测定：

称取实施例1制备的奥扎格雷钠微球，双蒸水溶解，用电位粒径仪观察。电位粒径仪测定本发明奥扎格雷钠微球水合后脂质体的平均粒径小于1μm，90％的粒子粒径在150-300nm之间。

稳定性试验：

分别将实施例1-3所制得的奥扎格雷钠微球冻干制剂在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，所得数据如表1-3所示：

表1 0天质量检测结果

表2 加速试验结果

表3 长期试验结果

注：以上表格中的“Y1”表示黄色1号标准比色液，“<Y1”表示不深于黄色1号标准比色液。

由以上数据结果可以看出，本发明制得的样品质量符合标准要求，而且加速6月和长期18月后各项质量指标无明显变化，均符合质量标准，说明了本发明的制备的冻干剂具有良好的质量稳定性。

刺激性试验

1、小白鼠静脉注射法

试验方法：选择健康小白鼠10只，体重21.2-25.4g，随机分成两组。一组5只小白鼠，尾静脉注射0.4ml实施例1制备的奥扎格雷钠微球冻干剂注射液(浓度为0.16mg/ml)，对照组5只小白鼠，尾静脉注射同剂量0.9％生理盐水。给药后一小时内，观察到给药小鼠无任何异常行为，无刺激性反应，小鼠活动和饮食不受影响，所注射的奥扎格雷钠微球冻干剂注射液对血管无刺激性；给小鼠尾静脉注射后，对小鼠血管静脉组织无刺激损伤作用。

2、小白鼠腹腔注射法

试验方法：选择健康小白鼠10只，体重21.2-25.4g，随机分成两组。一组5只小白鼠，腹腔注射0.2ml实施例1制备的奥扎格雷钠微球冻干剂注射液(浓度为0.16mg/ml)，对照组5只小白鼠，腹腔注射同剂量0.9％生理盐水。给药后一小时内，观察到给药小鼠无任何异常行为，无刺激性反应，小鼠活动和饮食不受影响，所注射的奥扎格雷钠微球冻干剂注射液对无刺激性。

同时本试验对所制备样品进行了安全性考察，包括刺激性试验和溶血性试验，结果表明奥扎格雷钠微球冻干剂安全、可靠，无刺激性，并且没有溶血反应。在上述各试验中，试验动物均未见有刺激性异常反应。试验结果表明，奥扎格雷钠微球冻干剂安全可靠。

应当理解，这些实施例仅仅是对本发明优选方案的说明，而并不以任何方式限制本发明的保护范围。本领域技术人员在本发明所公开内容的教导下，在不背离本发明精神和主旨的前提下，可以对本发明进行适当的修饰和改进，这些都将落入本发明的范围之内。

Claims (10)

1、一种奥扎格雷钠微球冻干剂，其中按重量份数计，其包含奥扎格雷钠20-80份，壳聚糖50-150份，聚乙烯醇40-100份，冻干保护剂50-300份。

2、权利要求1的奥扎格雷钠微球冻干剂，其还包含表面活性剂30-120份。

3、根据权利要求1或2的奥扎格雷钠微球冻干剂，其中所述冻干保护剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖、氨基乙酸、甘氨酸、水解明胶中的一种或多种，优选葡萄糖和甘露醇。

4、根据权利要求1或2的奥扎格雷钠微球冻干剂，其中所述表面活性剂选自聚山梨酯类、泊洛沙姆类、司盘类、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、卵磷脂中的一种或多种，优选聚山梨酯类和泊洛沙姆类。

5、权利要求1至4中任一项权利要求所述的奥扎格雷钠微球冻干剂的制备方法，其包括步骤：

1)水相的制备：将聚乙烯醇和表面活性剂溶解于蒸馏水中，或者首先将聚乙烯醇溶于蒸馏水中，再加入表面活性剂，搅拌溶解完全，得到水相；

2)油相的制备：将奥扎格雷钠和壳聚糖共溶于有机溶剂中，搅拌均匀，即可；

3)乳剂的制备：将上述油相缓慢加入水相中，并持续搅拌，得到乳剂；

4)微球冻干剂的制备：加热搅拌上述乳剂除去有机溶剂，加入冻干保护剂，冷冻干燥，得到冻干剂。

6、权利要求5的制备方法，其中在步骤3)乳剂的制备中，保持温度在55-70℃，得到了O/W或W/O型乳剂。

7、权利要求5的制备方法，其中在步骤4)微球冻干剂的制备中，首先加热搅拌上述乳剂除去有机溶剂，得到混悬液，接着离心并洗涤，得到微球沉淀物，然后，再用蒸馏水溶解该微球沉淀物，加入冻干保护剂，搅拌20-30分钟，真空冷冻干燥，即可得到白色微球冻干剂。

8、权利要求5-7中任一项的制备方法，其中步骤2)中的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、丙酮、甲醇、正己烷中的任一种或多种。

9、权利要求5-7中任一项的制备方法，其中表面活性剂为聚山梨酯80。

10、权利要求5-7中任一项的制备方法，其特征在于冻干保护剂为葡萄糖。