CN101424682B - 一种生物芯片片基处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物材料领域，本要解决的技术问题是：提供一种能降低芯片片基边框效应，精密度能满足临床使用要求，生物样品与片基结合量高，固定样品活性降低慢的生物芯片片基处理方法，技术方案是：配芯片片基处理液；将芯片片基浸入片基处理液中，室温处理；纯化水超声洗涤；风干；浸入KOH溶液，室温反应；用纯化水冲洗；60摄氏度烘干；冷却至室温；浸入硅化溶液中，室温避光反应超纯水漂洗干燥：冷却至室温；将硅化片基进入醛化溶液，30-45摄氏度反应；超纯水漂洗6次；110摄氏度干燥10-40分钟；冷却至室温。制出的生物芯片片基，边框效应低，精密度高，固定样品活性降低慢，生物样品与片基结合量高。

Description

一种生物芯片片基处理方法
技术领域
本发明属于生物材料领域。
背景技术
目前，硬质基片形式的生物芯片的制作，主要是将玻璃片或硅片等硬质基片经表面化学处理后，直接在基片上合成探针，或者将合成好的探针、抗体、抗原等生物样品点加到基片上，通过化学结合反应，将生物样品固定在硬质基片上，它的优点在于样品固定牢固，精密度好，但它的缺点在于玻璃片片基边框效应明显，精密度仍未能满足临床使用要求，生物样品与片基结合量低，固定样品活性降低快等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种能降低芯片片基边框效应，精密度能满足临床使用要求，生物样品与片基结合量高，固定样品活性降低慢的生物芯片片基处理方法。
本发明的技术方案是：
(1)将H2SO4与H2O2按体积比50％-80％∶20％-50％搅拌混匀，配成芯片片基处理液；
(2)将芯片片基浸入片基处理液中，室温处理12-36小时；
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次；
(4)风干；
(5)浸入5％-30％KOH溶液，室温反应30-120分钟；
(6)取出用纯化水冲洗3次；
(7)60摄氏度烘干；
(8)冷却至室温；
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成1％-12％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液；
(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟；
(11)取出用超纯水漂洗2次；
(12)120-180摄氏度干燥30分钟；
(13)冷却至室温；
(14)将戊二醛配成1％-10％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至8.0-10，制成醛化溶液；
(15)将硅化片基进入醛化溶液，30-45摄氏度反应10-90分钟；
(16)超纯水漂洗6次；
(17)110摄氏度干燥10-40分钟；
(18)冷却至室温。
有益效果：本发明的生物芯片片基处理方法，通过在片基前处理中加入H2SO4与H2O2以及KOH对表面进行预处理，在表面活化过程中加入果糖和适当的硅烷浓度、戊二醛浓度以及适度的高温烘烤，制出的生物芯片片基，边框效应低，精密度高，固定样品活性降低慢，生物样品与片基结合量高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
(1)将H2SO4与H2O2按体积比50％∶50％搅拌混匀，配成片基处理液
(2)浸入片基处理液中，室温处理12小时
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4)风干
(5)浸入5％KOH溶液，室温反应30分钟
(6)取出用纯化水冲洗3次
(7)60摄氏度烘干
(8)冷却至室温
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成1％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液
(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11)取出用超纯水漂洗2次
(12)120摄氏度干燥30分钟
(13)冷却至室温
(14)将戊二醛配成1％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至8.0，制成醛化溶液
(15)将硅化片基进入醛化溶液，30摄氏度反应10分钟
(16)超纯水漂洗6次
(17)110摄氏度干燥10分钟
(18)冷却至室温
实施例2
(1)将H2SO4与H2O2按体积比55％∶45％搅拌混匀，配成片基处理液
(2)浸入片基处理液中，室温处理16小时
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4)风干
(5)浸入10％KOH溶液，室温反应50分钟
(6)取出用纯化水冲洗3次
(7)60摄氏度烘干
(8)冷却至室温
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成3％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液
(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11)取出用超纯水漂洗2次
(12)130摄氏度干燥30分钟
(13)冷却至室温
(14)将戊二醛配成2％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至8.2，制成醛化溶液
(15)将硅化片基进入醛化溶液，34摄氏度反应20分钟
(16)超纯水漂洗6次
(17)110摄氏度干燥15分钟
(18)冷却至室温
实施例3
(1)将H2SO4与H2O2按体积比60％∶40％搅拌混匀，配成片基处理液
(2)浸入片基处理液中，室温处理20小时
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4)风干
(5)浸入15％KOH溶液，室温反应70分钟
(6)取出用纯化水冲洗3次
(7)60摄氏度烘干
(8)冷却至室温
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成5％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液
(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11)取出用超纯水漂洗2次
(12)140摄氏度干燥30分钟
(13)冷却至室温
(14)将戊二醛配成3％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至8.5，制成醛化溶液
(15)将硅化片基进入醛化溶液，38摄氏度反应30分钟
(16)超纯水漂洗6次
(17)110摄氏度干燥20分钟
(18)冷却至室温
实施例4
(1)将H2SO4与H2O2按体积比65％∶35％搅拌混匀，配成片基处理液
(2)浸入片基处理液中，室温处理24小时
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4)风干
(5)浸入20％KOH溶液，室温反应90分钟
(6)取出用纯化水冲洗3次
(7)60摄氏度烘干
(8)冷却至室温
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成7％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液
(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11)取出用超纯水漂洗2次
(12)150摄氏度干燥30分钟
(13)冷却至室温
(14)将戊二醛配成5％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至9.0，制成醛化溶液
(15)将硅化片基进入醛化溶液，40摄氏度反应50分钟
(16)超纯水漂洗6次
(17)110摄氏度干燥30分钟
(18)冷却至室温
实施例5
(1)将H2SO4与H2O2按体积比70％∶30％搅拌混匀，配成片基处理液
(2)浸入片基处理液中，室温处理28小时
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4)风干
(5)浸入25％KOH溶液，室温反应110分钟
(6)取出用纯化水冲洗3次
(7)60摄氏度烘干
(8)冷却至室温
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成9％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液
(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11)取出用超纯水漂洗2次
(12)160摄氏度干燥30分钟
(13)冷却至室温
(14)将戊二醛配成7％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至9.5，制成醛化溶液
(15)将硅化片基进入醛化溶液，42摄氏度反应70分钟
(16)超纯水漂洗6次
(17)110摄氏度干燥35分钟
(18)冷却至室温
实施例6
(1)将H2SO4与H2O2按体积比80％∶20％搅拌混匀，配成片基处理液
(2)浸入片基处理液中，室温处理36小时
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4)风干
(5)浸入30％KOH溶液，室温反应120分钟
(6)取出用纯化水冲洗3次
(7)60摄氏度烘干
(8)冷却至室温
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成12％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液
(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11)取出用超纯水漂洗2次
(12)180摄氏度干燥30分钟
(13)冷却至室温
(14)将戊二醛配成10％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至10.0，制成醛化溶液
(15)将硅化片基进入醛化溶液，45摄氏度反应90分钟
(16)超纯水漂洗6次
(17)110摄氏度干燥40分钟
(18)冷却至室温
表1是本发明实施例1-6的测试部分结果
表1中用于测试的原料分别为：
固定蛋白：AFP(Alpha-Fetoprotein)抗体(河南博赛生物生产)
信号抗体：辣根过氧化物酶标记AFP抗体(河南博赛生物生产)
封闭剂：小牛血清(上海普龙生物生产)
反应洗液：0.1mol/l Tris-Hcl(上海美季生物生产)
发光底物：SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate(美国pierce生产)
测试时用美国biodot公司的喷点点样机器人将固定蛋白按4*12阵列方式点于玻片表面后，经反应读取信号，进行分析。
表1：测试结果
Figure S2007101344779D00091

Claims (1)

1.一种生物芯片片基处理方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将H2SO4与H2O2按体积比50％-80％∶20％-50％搅拌混匀，配成片基处理液；
(2)将芯片片基浸入片基处理液中，室温处理12-36小时；
(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次；
(4)风干；
(5)浸入5％-30％KOH溶液，室温反应30-120分钟；
(6)取出用纯化水冲洗3次；
(7)60摄氏度烘干；
(8)冷却至室温；
(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成1％-12％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液；
(10)将经步骤8处理的生物芯片片基浸入按步骤9配制硅化溶液中，室温避光反应30分钟；
(11)取出用超纯水漂洗2次；
(12)120摄氏度干燥30分钟；
(13)冷却至室温；
(14)将戊二醛配成1％-10％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至8.0-10，制成醛化溶液；
(15)将硅化片基浸入醛化溶液，30-45摄氏度反应10-90分钟；
(16)超纯水漂洗6次；
(17)110摄氏度干燥分10-40分钟；
(18)冷却至室温。
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