CN101418332B - 一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法 - Google Patents

一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101418332B
CN101418332B CN2008102336435A CN200810233643A CN101418332B CN 101418332 B CN101418332 B CN 101418332B CN 2008102336435 A CN2008102336435 A CN 2008102336435A CN 200810233643 A CN200810233643 A CN 200810233643A CN 101418332 B CN101418332 B CN 101418332B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pathogenic
scab
inoculation
rice
length
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2008102336435A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101418332A (zh
Inventor
苏源
李成云
朱有勇
杨静
刘林
王云月
孔垂思
常明
蔡永占
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Agricultural University
Original Assignee
Yunnan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Agricultural University filed Critical Yunnan Agricultural University
Priority to CN2008102336435A priority Critical patent/CN101418332B/zh
Publication of CN101418332A publication Critical patent/CN101418332A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101418332B publication Critical patent/CN101418332B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法。水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将稻瘟病菌氮饥饿培养后或致病基因重组表达后得到的蛋白在致伤处接种，蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值，该值是比较不同蛋白致病力大小的依据。其分类标准为：病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性。该方法对于研究稻瘟病菌致病相关基因和蛋白的功能具有重要意义。

Description

一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法，属于植物保护领域。
背景技术：
以稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)为病原菌侵染水稻而引发的稻瘟病是世界范围内危害水稻生产最严重的病害之一。在稻瘟病菌对水稻致病性的研究中，通常用不同生理小种稻瘟病菌的孢子在不同品系水稻叶片接种并观察产生症状的方法来确定二者之间相互作用的结果是致病还是抗病。孢子在水稻叶片上接种后产生的病斑大小已经成为目前鉴定不同稻瘟病菌菌株致病力差异检测的主要手段。近年来的研究表明，病原菌产生的蛋白与寄主抗性基因蛋白产物的分子互作是病原菌与寄主互作机制的核心。与孢子接种的目的类似，这些蛋白的功能也要通过在寄主植物上接种后观察致病的症状来进行检测。目前对稻瘟病菌致病蛋白的研究还甚少，实验中稻瘟病菌致病蛋白主要来源于其菌丝体产生的蛋白或是稻瘟病菌致病相关基因的表达蛋白产物。对稻瘟病菌进行氮饥饿培养和重组表达稻瘟病菌致病基因是获得致病蛋白的主要方法。但其致病性检测方法并不完善，还未见到专门用于稻瘟病菌致病蛋白在水稻叶片上致病性检测方法的文献和专利报道。这导致了无法像孢子接种那样通过测量病斑长度来对稻瘟病菌产生的不同致病性蛋白进行致病力差异的定量分析，也难以准确地判定稻瘟病菌产生的不同致病蛋白致病力差异及其与不同水稻品系互作的结果，限制了对稻瘟病菌致病蛋白及其致病相关基因功能和致病机制的研究。
发明内容：
本发明克服了不能定量检测稻瘟病菌致病蛋白致病性大小的不足，提供了一种在水稻叶片上检测稻瘟病菌致病蛋白致病性的方法。
本发明的技术方案为：(1)水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。(2)选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将稻瘟病菌在完全培养基中培养后转入到不含有氮源的培养基中，进行氮饥饿培养而获得的致病蛋白或致病基因在大肠杆菌中表达后得到的蛋白在致伤处接种，蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。(3)接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值。(4)将稻瘟病菌致病蛋白致病性大小按病斑长度值划分的标准进行致病性弱、中等和强的分类。其分类标准为：病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性。
本发明的有益效果是解决了稻瘟病菌蛋白致病性检测的方法问题，与其它方法比较，具有如下优点和积极效果：本发明能够在水稻叶片上形成规则的接种点而对其组织没有明显的伤害，接种稻瘟病菌的致病蛋白后形成的病斑为椭圆性与孢子接种的症状一致，沿叶脉方向延伸的病斑长度即可作为不同致病蛋白致病力大小比较的依据。本发明提供的方法具有有效和简便地区分不同蛋白致病力大小的优点。
具体实施方案：
通过对不同稻瘟病菌菌株的氮饥饿的培养及接种后的水稻抗性反应水平的比较研究，获得了具有不同致病性的稻瘟病菌致病蛋白；通过对接种后稻瘟病菌不同基因在水稻组织内的表达及相应水稻抗性反应水平的比较研究，获得了具有不同致病性的稻瘟病菌致病基因并将这些基因在大肠杆菌中表达获得其蛋白产物。以上两种蛋白即可作为检测的对象。
实施例一：
水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将在完全培养基中培养后转入到不含有氮源的培养基中，进行氮饥饿培养后得到弱致病力稻瘟病菌蛋白在致伤处接种，用去离子水接种作为对照。蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值。按照病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性的分类标准，对该蛋白的致病性进行检测，结果见表1。
实施例二：
水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将在完全培养基中培养后转入到不含有氮源的培养基中，进行氮饥饿培养后得到的中等致病力稻瘟病菌蛋白在致伤处接种，用去离子水接种作为对照。蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值。按照病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性的分类标准，对该蛋白的致病性进行检测，结果见表1。
实施例三：
水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将在完全培养基中培养后转入到不含有氮源的培养基中，进行氮饥饿培养后得到的强致病力稻瘟病菌蛋白在致伤处接种，用去离子水接种作为对照。蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值。按照病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性的分类标准，对该蛋白的致病性进行检测，结果见表1。
表1 稻瘟病菌氮饥饿培养后获得的致病蛋白在丽江新团黑谷接种后病斑的长度
 
接种蛋白 病斑长度(毫米) 致病性检测结果
弱致病力稻瘟病菌菌蛋白 1.88±0.54 弱致病性
中等致病力稻瘟病菌蛋白 2.65±0.38 中等致病性
强致病力稻瘟病菌蛋白 3.27±0.22 强致病性
 
去离子水(对照) 1.10±0.32 无致病性
实施例四：
水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将弱致病力的稻瘟病菌致病相关基因MGG_01210转化至大肠杆菌的表达蛋白在致伤处接种，用空白载体作为对照。蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值。按照病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性的分类标准，对该蛋白的致病性进行检测，结果见表2。
实施例五：
水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将中等致病力的稻瘟病菌致病相关基因MGS_0997转化至大肠杆菌的表达蛋白在致伤处接种，用空白载体作为对照。蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值。按照病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性的分类标准，对该蛋白的致病性进行检测，结果见表2。
实施例六：
水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将强致病力的稻瘟病菌致病相关基因MGG_14621转化至大肠杆菌的表达蛋白在致伤处接种，用空白载体作为对照。蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值。按照病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性的分类标准，对该蛋白的致病性进行检测，结果见表2。
表2稻瘟病菌致病相关基因在大肠杆菌的表达蛋白在丽江新团黑谷接种后病斑的长度
 
接种基因表达产物 病斑长度(毫米) 致病性检测结果
MGG_01210 1.73±0.33 弱致病性
MGS_0997 2.52±0.29 中等致病性
MGG_14621 3.83±0.17 强致病性
空白载体(对照) 1.21±0.18 无致病性
结果表明不同致病力的稻瘟病菌的致病蛋白和致病相关基因的表达产物在感病品种丽江新团黑谷叶片上形成的病斑长度有明显差异，说明本发明提供的方法能有效地检测和区分稻瘟病菌不同的致病蛋白和致病相关基因表达产物的致病力差异。这对于研究稻瘟病菌致病蛋白和致病相关基因的功能及其与寄主水稻的互作有着重要的作用。

Claims (1)

1.一种检测稻瘟病菌致病蛋白致病性大小的方法，其步骤为：
(1)水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种；
(2)选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，在致伤处接种致病蛋白，该致病蛋白为将稻瘟病菌在完全培养基中培养后转入到不含有氮源的培养基中进行氮饥饿培养而获得的致病蛋白，或致病基因在大肠杆菌中表达后得到的蛋白，蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl；
(3)接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值；
(4)将稻瘟病菌致病蛋白致病性大小按病斑长度值划分的标准进行致病性弱、中等和强的分类；其分类标准为：病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性。
CN2008102336435A 2008-11-25 2008-11-25 一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法 Expired - Fee Related CN101418332B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2008102336435A CN101418332B (zh) 2008-11-25 2008-11-25 一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2008102336435A CN101418332B (zh) 2008-11-25 2008-11-25 一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101418332A CN101418332A (zh) 2009-04-29
CN101418332B true CN101418332B (zh) 2011-04-20

Family

ID=40629333

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008102336435A Expired - Fee Related CN101418332B (zh) 2008-11-25 2008-11-25 一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101418332B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103026910A (zh) * 2012-12-27 2013-04-10 昆明学院 一种检测石榴枯萎病菌致病蛋白的方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102559575A (zh) * 2011-12-31 2012-07-11 云南农业大学 用原核表达产物处理水稻根组织诱导其产生胼胝质的方法
CN106929571A (zh) * 2017-02-14 2017-07-07 云南农业大学 一种检测稻瘟病菌与水稻互作时pwl2基因的上调表达的方法
CN107012197A (zh) * 2017-03-07 2017-08-04 广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所 一种测定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1807586A (zh) * 2005-12-22 2006-07-26 云南农业大学 诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法
CN101240346A (zh) * 2008-03-13 2008-08-13 云南农业大学 一种分析水稻抗稻瘟病基因的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1807586A (zh) * 2005-12-22 2006-07-26 云南农业大学 诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法
CN101240346A (zh) * 2008-03-13 2008-08-13 云南农业大学 一种分析水稻抗稻瘟病基因的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
曾千春 等.云南稻瘟病菌系谱与致病型的关系.《遗传学报》.2004,第31卷(第6期),609-615.
曾千春等.云南稻瘟病菌系谱与致病型的关系.《遗传学报》.2004,第31卷(第6期),609-615. *
李成云 等.稻瘟病菌的研究进展.《西南农业学报》.1995,第8卷(第3期),107-111.
李成云等.稻瘟病菌的研究进展.《西南农业学报》.1995,第8卷(第3期),107-111. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103026910A (zh) * 2012-12-27 2013-04-10 昆明学院 一种检测石榴枯萎病菌致病蛋白的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN101418332A (zh) 2009-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wu et al. Comparative pathogenicity of Fusarium graminearum isolates from China revealed by wheat coleoptile and floret inoculations
CN101205558B (zh) 香蕉枯萎病菌分子检测基因及其检测方法
CN101418332B (zh) 一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法
Litholdo Júnior et al. Genetic diversity and mycelial compatibility groups of the plant-pathogenic fungus Sclerotinia sclerotiorum in Brazil.
Zhu et al. Identification and characterization of Fusarium species associated with wilt of Eleocharis dulcis (Chinese water chestnut) in China
CN102534010A (zh) 稻瘟病菌无毒基因分子检测引物及其应用
CN102586469A (zh) 用于检测辣椒疫霉的lamp引物及含有该引物的试剂盒
CN108893557A (zh) 一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法
CN101580872B (zh) 一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法
Mishra et al. Molecular detection and genotyping of Fusarium oxysporum f. sp. psidii isolates from different agro-ecological regions of India
CN104232748B (zh) 一种杨梅苗木是否携带凋萎病菌的快速分子检测方法
CN105400890A (zh) 薏苡黑穗病菌检测的方法
CN103421900A (zh) 用于检测瓜类蔓枯病的特异性引物及试剂盒
CN101475991B (zh) 一种鉴定黑木耳菌株185的方法及用于鉴定黑木耳菌株185的基因序列
CN102643903B (zh) 辣椒疫霉的pcr检测引物、含有该引物的试剂盒及应用
CN109825628A (zh) 一种基于rpa-侧流层析技术检测茄腐镰孢菌的引物和探针组合及其应用
Zhang et al. Identification of a specific SCAR marker for detection of Tilletia foetida (Wall) Liro pathogen of wheat
Sajeesh et al. Molecular detection, transmission and histopathological studies of seed-borne fungal infection of soybean (Glycine max (L) Merill)
Teviotdale et al. First report of Alternaria leaf spot of almond caused by species in the Alternaria alternata complex in California
CN101985653A (zh) 禾谷镰孢菌对多菌灵的中等抗性水平菌株的分子检测方法
CN103409526B (zh) 用于检测立枯丝核菌的特异性引物及试剂盒
CN106978505B (zh) 检测茄匍柄霉菌的引物对及其应用
CN101514364B (zh) 松杉灵芝菌株或其子实体分子标记及其获得方法与应用
CN106191047B (zh) 用于检测黄瓜细菌性角斑病菌的核酸试纸条法及其应用
CN104946767A (zh) As-pcr法检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的引物对和方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20110420

Termination date: 20131125