CN101410139A - 施陶丁格连接在生物活性化合物的体内组装中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供药物体内自组装的方法和工具。本发明使减少与缺乏选择性、溶解度降低和其它完整药物的缺点相关的问题成为可能。

Description

施陶丁格连接在生物活性化合物的体内组装中的用途
发明领域
本发明涉及生物活性化合物和用于递送生物活性化合物的方法，它们使通过作为允许体内再组装的单独组分给药完整化合物以防止完整化合物的缺点或毒性作用变得可能。
发明背景
全身给药缺乏选择性是主要的问题。有效浓度的长期给药可被剂量限制性全身毒性阻碍。而且，在非靶组织经常观察到强烈的副作用。因此，已在实现药物在靶部位选择性释放的药物递送系统中投入了大量的努力。已经提出的一个概念是在靶部位原位组装药物而不是全身性的给药活性药物[Rideout(1986)Science，233，561-563；Rideout(1994)Cancer Investigation12，189-202]。在这个概念中，给药单独的、相对无活性的药物组分。活性药物通过两种组分在二者都被吸收的部位发生选择性反应来形成。由于单独的组分相对无活性，毒性局限在靶部位，从而最小化剂量限制性副作用。而且，已经发现，与由单一分子作用引起的生物效应相比，生物效应所需的双分子作用可以导致更陡峭的的剂量-反应曲线。该对浓度的敏感性增加可以导致治疗窗的增大，提供更为有效、更小副作用的药物。
为了在靶细胞上或靶细胞内完成两种药物组分间的反应且不与其它生物分子发生副反应，必须利用非常有选择性的化学反应。这种化学反应的成功应用的一个条件是两种参与反应的官能团必须具有精确的反应性，从而避免对共存官能团的干扰。理想地，反应配偶子(reaction partners)在生理条件下是生物性、反应性的，并且仅识别彼此而忽视它们的细胞/生理环境(生物正交的)。生物环境所强加的选择性要求排除使用大多数常规的反应，而且迄今仅将肼-醛席夫碱(腙)形成成功地用于体外原位药物组装。羰基化合物(即酮类和醛类)可以与伯胺形成可逆席夫碱，但在水中的平衡有利于羰基。但是，酰肼或氨基氧基与羰基的产物(分别提供腙类和肟类)在水中是有利的，且在生理条件下是相当稳定的。在一份报告中表明，癸醛和辛基氨基胍原位反应形成含腙的细胞裂解洗涤剂[Rideout(1994)Cancer Investigation 12，189-202]。并且，使用相同的反应，由两种无活性单阳离子鏻盐原位组装双阳离子蛋白激酶C抑制剂[Rotenberg等人，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.88，2490-2494；Rideout等人，(1990)Biopolymers 29，247-262]。在这种情况下，获得某些癌症选择性，因为由于较高的跨膜电位，与健康细胞相比，单阳离子四苯基鏻盐在癌细胞中的吸收增加。
不幸的是，席夫反应中的腙或肟形成没有满足所有上述的体内药物组装的条件。最为重要的是，醛类和酮类不是完全非生物的。含有这些官能团的生物分子和代谢产物存在于细胞内。因此，该反应不是完全生物正交的。而且，这些反应的最佳pH为大约5-6，其不完全是生理学相关的范围。
肼-醛席夫系统的另外的缺点是反应产物为腙或肟。这意味着组装成的活性药物将总是含有这种基团。虽然获得含有这些官能团的活性分子是可能的，但大部分已知的药物或类似药物的分子不含有这些基团。因此，腙/肟系统并不直接适合普遍应用于可以受益于原位组装方法的已知药物。
而且，肼-醛席夫系统不促进一种或两种药物组分的活性靶向作用。充其量设计单独的组分使它们在靶组织中的(被动)吸收增加(如关于鏻药物所示，Rotenberg等人，1991，上述)。虽然组分中的一种与例如受体-靶向肽的缀合是可能的，但这种靶向部件在药物组装之后仍将连接在药物上。虽然这并不必然排除这种方法在靶向药物的原位组装中的应用，但它不是一种用于当前已知未改性药物的组装的选择。
施陶丁格(Staudinger)反应是一种可供选择的生物相容的、非生物的和生物正交的化学反应。在施陶丁格反应(图1A)中-膦和叠氮化物相互作用产生氮叶立德(aza-ylide)。在存在水的情况下，这种中间产物自发地水解产生伯胺和对应的氧化膦[Kohn&Breinbauer 2004)Angew.Chem.Int.Ed.43，3106-3116]。Bertozzi和合作者基于经典的施陶丁格反应，开发了一种新的化学选择性连接反应，施陶丁格连接(图1B)[Saxon&Bertozzi(2000)Science 287，2007-2010]。已开发了所述连接反应的第二代变体(“无痕”施陶丁格连接)以由叠氮化物和膦试剂产生酰胺键(图1C)。
施陶丁格连接已成功地用于多种应用，例如肽连接、内酰胺合成、生物结合物(bioconjugates)、细胞内标记、代谢细胞工程和微阵列。已表明施陶丁格连接甚至在体内(大鼠)也有效，而且证实叠氮化物和膦衍生物在体外和体内均无毒性[Prescher等人，(2004)Nature，430，873-877]。InstitutCurie的JC Florent已提出靶向递送前药。根据这个概念，向患者给药含有一个(或多个)叠氮化物官能团的单克隆抗体。在第二步中，给药含有三苯基膦基的无毒前药。据推测，当前药到达在体内局部结合的抗体时，这两种官能团之间会发生施陶丁格反应，将叠氮基还原成胺，并随后释放药物[关于进一步的细节，参见http://www.curie.fr/upload/recherche/unites/unit 43/umr176cnrs ic 2001 gb.p df，第2页]。但是，考虑到前药在细胞培养基中的不稳定性，这种概念未曾实现过。
施陶丁格连接用于药物组分的体内组装的普遍有效性仍未被被揭示。
发明概述
本发明的目的在于提供可供选择的或改良的生物活性化合物，例如药物或前药，和用于递送生物活性化合物的方法。本发明的优势在于它使在保持完整的生物活性化合物在原位的预期效应的同时防止所述完整的生物活性化合物的缺点或毒性作用成为可能。这是通过作为单独的组分给药所述生物活性化合物来实现的，所述单独的组分确保所述生物活性化合物在体内(再)组装。
因此本发明的第一方面提供完整的生物活性化合物的两种或更多种组分的组合，其中这些组分基本上无生物活性，并且其中这些组分用施陶丁格连接的相容性官能团官能化，从而在彼此接触时导致所述生物活性化合物或具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的生物活性化合物的(再)组装。
根据特定的实施方案，所述组合包含生物活性化合物的两种组分。
根据本发明的另外的特定实施方案，两种或更多种组分的组合中至少一种组分是靶向性的，从而保证所述组分在期望的靶部位的再组装。所述靶向性组分可以是固有地靶向性的。附加地或可供选择地，它们可包含保证所述化合物靶向到体内期望的靶部位的靶向部分。
根据本发明的另外的特定实施方案，两种或更多种组分的组合中至少一种组分具有可探测的标记物，从而允许追踪所述组分。
本发明的特定实施方案提供根据本发明的完整的生物活性化合物的组分的组合，其中所述生物活性化合物具有酰胺基，且所述组分的再组装导致该酰胺基的产生。
根据本发明的生物活性化合物的组分的组合是供单独给药所述组分使用的，从而保证所述组分在体内的(再)组装。但是，可以设想本发明的组合中的组分可以作为单独的药物组合物提供，所述组合物各自与药学上可接受的载体或赋形剂混合；或者作为一种药物组合物提供，条件是所述化合物是物理上彼此分开的。
本发明提供生物活性化合物的组分的组合，所述组分被官能化从而基于无痕或非无痕施陶丁格连接(再)组装成完整的生物活性化合物或具有与所述生物活性化合物基本上相同的活性的化合物。
更为具体而言，本发明提供完整的生物活性化合物的至少两种组分的组合，其中所述组分上提供的官能团代表相等数目的选自(a)和(b)的官能团；其中(a)为被烷氧基羰基邻位取代的三芳基膦基，借此所述组分通过非活性连接在其中一个芳基的一个其余的位置上连接到所述三芳基膦上，或为三芳基膦基，借此所述组分以这样的方式连接：所述三芳基膦被所述组分通过羰基氧(-CO-O-)或羰基硫(-CO-S-)连接邻位取代；和其中(b)为叠氮基。
在另外的特定实施方案中，本发明的组合中的至少一种含膦组分通过靶向部分具有靶向性，所述靶向部分连接到所述三芳基膦的芳基上。
根据可供选择的实施方案，本发明的组合中的至少一种含膦组分包含被烷氧基羰基邻位取代的三芳基膦基，并且包含连接到所述烷氧基羰基的烷基上的靶向部分。
作为组分的组合而不是完整的生物活性化合物提供生物活性化合物使防止所述完整的生物活性化合物的某些缺点成为可能。因此，根据一个实施方案，本发明的组合中的组分的溶解度与对应的完整的生物活性化合物相比得到改善。
更特别地，本发明的组合中的含膦组分的溶解度可以通过修饰膦得到提高。
附加地或可供选择地，本发明的组合中的组分的稳定性和/或毒性与对应的完整的生物活性化合物的溶解度相比得到改善。
本发明的特定实施方案涉及药物甲氨蝶呤的组分的组合，其中所述组分对应于在酰胺基各侧的甲氨蝶呤分子部分。
本发明的另一特定实施方案涉及药物博来霉素的组分的组合，更特别地涉及第一种和第二种组分的组合，其中所述第一种组分对应于博来霉素的金属结合区域，而所述第二种组分对应于博来霉素的DNA结合区域。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含与根据本发明的完整的生物活性化合物的一种组分混合的药用载体或赋形剂，所述组分是基本上无生物活性且被在施陶丁格连接中具有反应性的基团官能化的组分。
在再一个方面，本发明提供完整的生物活性化合物的第一组分，所述第一组分基本上无生物活性且其进一步的特征在于其被在施陶丁格连接中具有反应性的基团官能化，使得与第二组分接触时导致所述完整的生物活性化合物或具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的化合物的(再)组装，并且其中所述组分进一步的特征在于其包含靶向部分。
本发明的再一方面提供制备根据本发明的生物活性化合物的组分的方法。本发明的这方面的具体实施方案涉及制备博来霉素的组分的方法，所述组分彼此接触时能够再组装成完整的博来霉素。所述方法包括以下步骤：(a)提供博来霉素的金属结合区域；(b)提供博来霉素的DNA结合区域；和(c)在博来霉素的每个这些区域上，在完整药物中连接这些区域的位置，提供能够在施陶丁格连接中相互作用的各个官能团。
本发明的再一方面涉及增加完整的生物活性化合物的吸收的方法，所述方法包括以下步骤：(a)提供所述完整的生物活性化合物的两种组分，所述组分在再组装时产生所述完整的生物活性化合物或具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的化合物；和(b)给每一种所述组分提供能够在施陶丁格连接中一起反应的三芳基膦或叠氮化物官能团，以允许所述(完整的)生物活性化合物的(再)组装；更特别地，所述两种组分中更具疏水性的组分用三芳基膦基修饰。任选地，所述三芳基膦基进一步由增加所述组分的水溶性的附加基团修饰。
再一方面，本发明提供对用完整的生物活性化合物治疗易感的疾病的治疗方法，所述方法包括向患有这种疾病的患者给药根据本发明的完整的生物活性化合物的组分的组合。
本发明防止目前所用的席夫反应的上述局限性，并且通过使用选择性生物正交的施陶丁格连接扩大了药物组装方法的范围。施陶丁格连接的反应配偶子，膦和有机叠氮化物，是完全非生物的，基本上对细胞内或细胞表面上的生物分子不起反应，并在生理条件下反应。而且，这种反应是唯一已被证明在细胞环境和大鼠中有效的连接反应。
使用施陶丁格连接的化合物的自组装，例如生物活性化合物或可被活化成生物活性化合物的化合物的体内组装，与其它声称的生物正交反应相比具有许多优点：1)它是真正地生物正交的和生物相容的反应，并且也可以在细胞内使用，2)无痕连接允许已知的含酰胺生物活性化合物的无痕组装，3)无痕连接允许一种组分的无痕靶向作用，所述无痕靶向作用增加生物活性化合物的有效性并减少对健康组织的损害。换句话说，与基于目前已知的肼-醛席夫系统的双组分系统相比，可以增加剂量-反应曲线的斜率(并因此增加治疗窗)。
根据以下的详细说明，并结合以举例的方式阐述本发明原理的附图，可以明显看出本发明的上述和其它特征、特点和优点。提供这些说明仅用于例证而不限制本发明的范围。以下引证的参考图指附图。
附图的简要说明
图1为施陶丁格反应(A)、施陶丁格连接(B)和无痕施陶丁格连接(C)的示意图。
图2为根据本发明的实施方案，用膦和叠氮化物官能化的生物活性化合物的两种组分的反应的示意图。
图3显示非无痕施陶丁格连接。
图4显示根据本发明的特定实施方案，官能化的博来霉素的DNA结合区域与根据本发明的实施方案的官能化的博来霉素的金属结合区域的反应。
图5显示根据本发明的特定实施方案，根据本发明的实施方案的官能化的甲氨蝶呤的组分的反应。
图6显示可以与多种抗癌药联合使用的靶向部件。
图7显示根据本发明的特定实施方案，根据本发明的实施方案的官能化的吡罗昔康的组分的反应。
图8图示蝶啶膦的形成。
优选实施方案的详述
根据特定的实施方案并参考某些附图描述本发明，但本发明不受这些描述限制，而仅受权利要求的限制。权利要求中的任何参考标记不应被解释为限定范围。所述的附图仅是示意性的，而非限制性的。在附图中，为说明的目的，某些成分的尺寸可能被夸大，而不是按照比例绘制。其中本说明书和权利要求书所用的术语“包含”不排除其它的成分或步骤。在指代单数名词时所用的不定冠词或定冠词，例如″a″或″an″、″the″，也包括该名词的复数，除非另外具体说明。
而且，说明书和权利要求书中的术语第一、第二、第三和类似用语是用于区分类似成分而不必然用于描述先后顺序或时间顺序。应该理解为，所用的术语在适当的情形下是可以互换的，并且本文描述的本发明的实施方案能够以非本文所描述或图示的顺序操作。
本文所用的术语或定义仅用于帮助理解本发明。
本发明提供施陶丁格连接的新用途，更具体而言提供施陶丁格连接在药物递送领域内的新用途。本申请所指的“施陶丁格连接”指施陶丁格反应的改良，其导致两个分子连接。在“施陶丁格反应”中，膦和叠氮化物之间发生反应，产生氮叶立德(图1A)。在存在水的情况下，这种中间产物自发地水解成伯胺和对应的氧化膦。在室温下，膦和叠氮化物在水中容易彼此发生反应。
在施陶丁格连接中，将施陶丁格反应改良以防止氮叶立德中间产物的水解。这可以通过使用两种常规方法实现。在第一种方法中，将含有例如甲酯的亲电子阱的膦设计成能使不稳定的亲核的氮叶立德中间产物在有机会水解之前发生分子内重排以形成稳定的加合物。因此，在这种方法中，通过这种改良的和生物缀合的三芳基膦与叠氮化物缀合物反应进行施陶丁格连接，之后进行分子内环化得到酰胺键和氧化膦。这种连接称为“非无痕”施陶丁格连接(图1B)，因为连接产物包含附加的三苯基氧化膦残基。
已开发出“无痕”施陶丁格连接以由叠氮化物和膦试剂产生简单的酰胺键(图1C)。该反应利用含可转移的酰基的膦。与叠氮化物的反应，在中间产物氮叶立德重排和水解之后，产生酰胺连接的的产物和释放的氧化膦。
“非无痕”和“无痕”施陶丁格连接的使用都被认为在本发明的范围之内。
本文所用的术语“生物活性化合物”通常指在给药于患者时具有潜在生物活性的分子。因此，它包括所有的药物、药用化合物、治疗性酶和蛋白，等等。本身具有活性的化合物，和在与体内的特定分子接触时被活化，例如通过内源性酶活化的化合物，都包括在此术语的范围内。
本发明中所用的术语“生物活性化合物的组分”或“BAC组分”涉及生物活性化合物的一部分，其对化合物的活性非常重要，但其本身不具有生物活性。因此，生物活性化合物的组分根据定义仅指完整的生物活性化合物的部分，不包括完全或完整的生物活性化合物。根据本发明的生物活性化合物的组分的(再)组装可以产生与所述完整的生物活性化合物相同的化合物，或者具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的化合物。
在提及生物活性化合物时本文所用的术语“完整的”用于指代原始开发的和在适用时商品化的生物活性化合物。
本文所用的术语“官能化”和“官能化的”指加入或存在官能团，它在本发明的范围内指在非无痕或无痕施陶丁格连接中相互作用的官能团。当本文描述特定实施方案的时候，通常含有膦或叠氮化物官能团的所述生物活性化合物的组分分别称为“含膦组分”和“含叠氮化物组分”。由于连接总是需要至少一对组分，在这一对中，这些组分通常也分别称为“第一”和“第二”组分，尽管可能考虑使用多于一种的含膦组分和多于一种的含叠氮化物组分。
本文所用的术语“降低的药学活性”或“基本上无生物活性”指生物活性化合物的组分，指示经过标准测定法确定的，与完整的生物活性化合物的活性或治疗效果相比，活性或治疗效果降低或可忽略不计。BAC组分的降低的活性可以是低于所述完整的生物活性化合物的活性的5％、1％、0.1％或0.01％的活性。
当提及在本发明的组分在体内(再)组装之后得到的化合物时，术语“与完整的生物活性化合物基本相同的活性”指所述(再)组装之后的生物活性化合物的药理或生物活性为所述完整的生物活性化合物的至少70％，更具体地为至少80％，进一步更具体地为至少90％，最具体为95-100％。
本文所用的与药物组合物相关的术语“药学上可接受的载体或赋形剂”意指可以与本发明的组分配制，例如通过溶解、分散或扩散所述组分以促进它们应用或散布至待治疗的部位，和/或以促进它们的储存、运输或装卸，且不损及它们再组装成生物活性化合物的能力的任何材料或物质。所述药学上可接受的载体可以是固体或液体或已被压缩成液体的气体，即本发明的组合物可以适于用作浓缩物、乳剂、溶液剂、粒剂、粉剂、喷雾剂、气雾剂、丸剂或散剂。用于所述药物组合物和它们的制剂的适合的药用载体对本领域技术人员来说是已知的。
在一方面，本发明基于这样的概念：以其基本上无活性组分的形式给药生物活性化合物可以具有许多优点，例如降低副作用、改善吸收、降低全身毒性等。而且，本发明提供，通过使用施陶丁格连接以在体内重组BAC组分，所述组分的在体内的有效再组装能够得到保证。最后，本发明提供，通过使用无痕施陶丁格连接，无痕靶向作用也能够得到保证。
通常，被考虑在本发明范围之内的生物活性化合物的性质不是关键。因此，适于在本发明范围内使用的生物活性化合物包括但不限于抗增殖/抗肿瘤药、抗生素、抗炎药、抗病毒药、抗高血压药和化学敏化剂。然而，可以想象，基于结构和结构-活性关系，某些生物活性化合物可能比其它化合物更容易顺应本发明。这在下文作更为详细的描述。
根据本发明的第一方面，提供生物活性化合物的基本上无活性且被官能化的组分，从而能够(再)组装成所述完整的生物活性化合物或者具有与所述完整的生物活性化合物基本相同的活性的化合物。
生物活性化合物的基本上无活性的组分通过所述组分的直接合成或将完整的生物活性化合物分解成组分来获得。所述组分的性质的选择主要由以下条件决定：所述生物活性化合物的所有组分基本上无活性和/或所述组分不表现出(或者可以被修饰以避免)所述完整的生物活性化合物的固有的缺点。此外，所述组分的性质的选择受不同参数影响，包括但不限于对根据本发明的官能化的顺应性、所述组分的大小和稳定性、溶解度和附加例如靶向部分(参见下述)等的其他部分的能力。根据特定的实施方案，本发明提供生物活性化合物的两种组分的用途，其中在所述两种组分(再)组装时，获得所述完整的生物活性化合物或具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的化合物。可供选择地，可以考虑使用多于两种的组分(例如3或4)，只要能够保证它们适当地(再)组装成所述完整的生物活性化合物或具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的化合物。为了实现这个目的，本发明规定所述的组分具有(偶数个)能够在施陶丁格连接中，在所述完整的生物活性化合物中连接各组分的(那些)位置相互作用的官能团。
如以下详述，本发明的一个实施方案提供生物活性化合物的组分，所述化合物的完整形式包含酰胺键。可以这样产生所述化合物的组分，以致于在(再)组装时由连接得到的酰胺键对应于所述完整的生物活性化合物中的酰胺键。然后修饰所述组分以分别包括例如三芳基膦基和叠氮基，从而允许在所述组分间无痕连接。
根据本发明的一个实施方案，生物活性化合物的组分基本上无活性，即使是在它们被官能化之前。在另一个实施方案中，所述生物活性化合物的组分由于它们的官能化变得基本上无活性。
本发明提供生物活性化合物的组分的基于非无痕或无痕施陶丁格连接的组装。用于官能化与第二组分的叠氮化物基团相互作用的第一组分的膦基的性质会随所考虑的连接的类型而变。更具体而言，对于非无痕施陶丁格连接，第一组分具有被烷氧基羰基邻位取代的三芳基膦基(参见图1B)。所述生物活性化合物的第一组分通过非活性连接在其中一个芳基的一个其余的位置上连接到三芳基膦。对于无痕连接，第一组分具有三芳基膦基，其方式使得产生被所述生物活性分子的第一组分通过羰基氧(-CO-O-)或羰基硫(-CO-S-)连接邻位取代的三芳基膦(参见图1C)。更为具体而言，在这两个实施方案中，三芳基膦为任选地被取代的三苯基膦基。因此，根据所考虑的连接，所述完整的生物活性化合物在基于这些连接的(再)组装之后包含与三芳基氧化膦缀合的的酰胺键(非无痕施陶丁格连接)或酰胺键(无痕施陶丁格连接)。
本发明所依赖的连接的选择，部分地由所述完整的生物活性化合物的性质决定。例如，对于那些已知包括酰胺键的药用化合物，或者已知酰胺键的存在基本上不影响其活性的情况(即产生具有与所述完整的生物活性化合物基本相同的活性的化合物)，本发明优选依赖无痕施陶丁格连接。因此，本发明的特定实施方案涉及提供天然地包含酰胺键的生物活性化合物的基本上无活性的组分，其中所述组分用含有可转移的酰基的膦基和叠氮化物官能化。根据这个实施方案，所述生物活性化合物的组分的再组装将产生药用化合物或与所述完整的药用化合物相同或几乎相同的基本上完整的药用化合物。具有酰胺键的药用化合物的非穷举的名单包括生物活性(多)肽，例如肽类激素和酶、受体结合物和衍生自氨基酸样化合物的药物；寡核苷酸类；碳水化合物；但也包括某些种类的无机化合物，例如缩聚物如杀微生物剂SAMMA。在实施例部分说明根据本发明的官能化的博来霉素和甲氨蝶呤的组分的用途。
图2表示根据本发明的无痕施陶丁格连接在生物活性化合物的组装中的用途的一般概念的实施方案。将例如含有酰胺键的药物的生物活性化合物分成对应于原始药物的酰胺官能团两侧的残基的两种组分(A和B)。用无痕施陶丁格膦探针官能化组分A，并用叠氮化物官能化组分B。当两种组分在体内彼此相遇时，这两种组分间产生的无痕连接提供所述完整的含酰胺的药物。
根据另一个实施方案，本发明提供生物活性化合物的基本上无活性的组分，所述生物活性化合物天然地包含与氧化膦缀合的酰胺键，或者已知(或已确定)该生物活性化合物中与氧化膦缀合的酰胺键的存在不显著地影响所述生物活性化合物的生物或治疗活性，例如产生具有与所述完整的生物活性化合物基本相同的生物活性的生物活性化合物。根据这个实施方案，本发明提供生物活性化合物的基本上无活性的组分，其中第一组分用三芳基膦，或通过芳基上磷的邻位的酯或硫酯连接(无痕)，或通过被烷氧基羰基或烷基硫羰基邻位取代的三芳基膦的芳基上的非活性连接(非无痕)官能化第一组分，并且第二组分用叠氮化物官能化。
根据特定的实施方案，一种或多种官能化的本发明的生物活性化合物的组分可以是靶向组分。更为具体而言，该组分可固有地具有靶向性，所述靶向性基于其选择性吸收或分布于一个或多个特定器官，任选与特定的给药途径结合。
可供选择地，所述生物活性化合物的本身不具有特定分布或亲合力的官能化的组分可以通过连接靶向部分而具有靶向作用。本发明范围内可考虑不同的靶向部分以保证所述生物活性化合物的一种或多种组分靶向到感兴趣的组织或器官。实例包括但不限于抗体或抗体片段(例如但不限于Fab2、Fab、scFV)，或其它能够特异性的结合到特定的细胞、组织或器官或被其特异性地吸收的化合物，例如但不限于奥曲肽和衍生物、VIP、MSH、LHRH、趋化肽、铃蟾肽、弹性蛋白、肽模拟物、碳水化合物、单糖、多糖、病毒、药物、化学治疗剂、受体配体、激动剂和拮抗剂、细胞因子、激素、甾类。适用作为本发明范围内所考虑的靶向部分的有机化合物的实例为或衍生自：雌激素，例如雌二醇，雄激素，孕酮，皮质类固醇，紫杉醇，依托泊苷，阿霉素(doxorubricin)，甲氨蝶呤，叶酸和胆固醇。
根据本发明的特定的实施方案，所述靶向部分能够特异性地结合受体，例如受体的配体或仍结合到受体的它的一部分，例如在受体结合蛋白配体的情况下为受体结合肽。
蛋白性质的靶向部分的其它实例包括：干扰素，例如α、β和γ干扰素，白细胞介素，和蛋白生长因子，例如肿瘤生长因子(如α、β肿瘤生长因子)、血小板源性生长因子(PDGF)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)靶向蛋白、载脂蛋白、低密度脂蛋白(LDL)、膜联蛋白V、内皮抑素和血管生成抑素。
可供选择的靶向部分的实例包括DNA、RNA、PNA和LNA，这些物质由其序列或其部分的性质能够特异性地与靶核苷酸杂交。
根据本发明的特定的实施方案，使用能够结合细胞内靶标的小的亲脂性主要部分。
根据本发明，将靶向部分连接到一种或多种所述生物活性化合物的组分上从而保证其在给药于身体时的靶向递送。仅一种组分的靶向作用就是足够的，其中含叠氮化物的药物组分或含膦组分可以是靶向性的。在某些实施方案中，在所述生物活性化合物的含叠氮化物组分和含膦组分上都提供靶向部分。
根据第一实施方案，通过所述生物活性化合物的组分自身的官能团连接靶向部分。使用这种方法，靶向部分在所述组分上的存在不受所述生物活性化合物的再组装的影响，因此所述靶向部分在再组装之后保持连接到所述生物活性化合物上。尽管如此，所述靶向部分可以通过其它因素，例如细胞代谢而被部分或全部除去。
根据另一个实施方案，在无痕施陶丁格连接中在所述生物活性化合物的含膦组分的三芳基膦基上提供该靶向部分(图2中的“T”)。更具体而言，所述靶向部分可连接到三苯基膦的一个苯基上。利用这种方法，所述靶向部分在所述两种组分之间发生施陶丁格连接时会从再组装的生物活性化合物上释放。
在非无痕施陶丁格连接中，可选择地在参与施陶丁格连接的烷氧基羰基的烷基上提供所述靶向部分。在此实施方案中，所述靶向部分在所述组分再组装时也不再存在于生物活性化合物中(图3)。
根据本发明的另一方面，生物活性化合物的官能化的组分各自分别地和单独地提供，各自任选地与药学上可接受的载体或赋形剂混合。所述官能化的组分可以作为组件试剂盒提供，用于联合的、序贯的或连续的给药于人或动物体。典型地，本发明的组分作为一种生物活性化合物的两种或更多种组分的组合提供。可以考虑不同类型的包装或制剂，条件是所述包装或制剂防止各组分在给药前彼此接触。
可以通过相同或不同的途径给药一种生物活性化合物的不同组分。本发明范围内考虑的用于所述生物活性化合物的组分的不同给药途径包括但不限于口服给药、局部给药(粘膜、皮肤)、注射(例如静脉内、皮下、肌内、腹膜内、乳房内注射)、呼吸(吸入、鼻内、气管内给药)或直肠给药。
因此，本发明的另一方面涉及治疗方法，所述方法包括向个体给药生物活性化合物的两种或更多种组分，其中所述生物活性化合物的组分被官能化以保证基于施陶丁格连接的所述生物活性化合物的再组装。
考虑不同的给药系统以使给药各组分之后所述生物活性化合物再组装的效率最佳化。最具体而言，如果一种官能化的组分(固有地或通过靶向部分)靶向于期望的器官或组织，可以在给药对所述期望的器官或组织没有或有较小靶向性的官能化的组分之前给药这部分。
因此，根据一个实施方案，所述给药方法一般包括两步：
-第一步，其中给药所述生物活性化合物的具有最大靶向特异性的官能化的组分于身体。
-第二步，其中给药所述生物活性化合物的另外的官能化的组分。
任选地，在步骤1和步骤2之间考虑有一段时间以允许所述生物活性化合物的第一组分到达其靶标和/或允许其余组分的清除。
根据本发明，所述生物活性化合物的再组装会仅在两种互补的官能化的组分彼此相遇的那些地方发生。
可以考虑上述组分和给药方法的不同变体和改变。例如，可以用可探测标记物进一步修饰所述生物活性化合物的一种或两种(或更多种)组分以允许追踪一种或两种(或更多种)组分的分布。这使基于追踪第一组分的结果来调整给药第二官能化组分的时间或者调整待给药的第二组分的用量成为可能。
成像探针的可探测标记物的特定实例为用于传统成像系统的造影剂，例如MRI可成像试剂、自旋标记物、光学标记物、超声反应试剂、X射线反应试剂、放射性核素、(生物)发光的和FRET型染料。本发明范围内考虑的例举性的可探测标记物包括但不一定限于荧光分子，例如自体荧光分子、与试剂接触时发荧光的分子等；放射性标记物；生物素，例如它通过生物素和抗生物素蛋白的反应而被检测出来；荧光标记物；包含顺磁性金属的用于MRI的显像剂；成像试剂，例如在美国专利4,741,900和5,326,856中所述的那些，等等。
所述MRI可成像试剂可以是顺磁性离子或超顺磁性粒子。
所述超声反应试剂可以包含微泡，其外壳由磷脂，和/或(可生物降解的)聚合物，和/或蛋白样人血清白蛋白组成。微泡可以填充氟化气体或液体。
所述X射线反应试剂包括但不限于碘、钡、硫酸钡、泛影葡胺，或者可包含填充碘化合物和/或硫酸钡的小囊、脂质体或聚合物胶囊。
此外，本发明的范围内考虑的可探测标记物还包括肽或多肽，所述肽或多肽可以通过抗体结合来探测，例如通过可探测的标记抗体的结合或者通过利用夹层式测定探测结合抗体来探测。
在一个实施方案中，所述可探测标记物为小尺寸的有机PET和SPECT标记物，例如18F、11C或123I。
上述的常规两步法可能要求给药高数量的所述非靶向性第二官能化组分，以保证两种组分在体内彼此相遇和足量的活性再组装生物活性化合物形成。为了处理这种潜在的不便，考虑特定的给药方法。
在一个实施方案中，两种互补的官能化组分被包埋在具有靶向部分的可降解基质中。该基质将所述组分彼此物理隔离。在靶向作用和随后的所述基质降解之后，官能化的组分处于彼此接近之处，并且可以有效地发生反应。
在另一个实施方案中，两种官能化组分作为在靶向小囊中的固体粒子存在。在小囊的靶向作用和破裂或分解之后，两种组分可以彼此发生反应。
在再一个实施方案中，两种官能化组分在不能发生施陶丁格连接的条件下(例如掩蔽一个或两个官能团)存在于小囊中的溶液中。在破裂或分解之后，所述化合物释放，并进一步释放所述官能团，可以发生反应。可供选择地，考虑这样的一个实施方案，其中所述小囊是可渗透的，小囊内的条件逐渐改变，而所述生物活性化合物在此微环境中形成。当小囊破裂或分解时，再组装的生物活性化合物形成。
在再一个实施方案中，所述互补的官能化生物活性化合物的组分(如果必要的话，一种或两种为靶向性的)通过可降解的连接基(例如肽、脂质或寡糖)连接。在靶向作用和通过体内酶降解连接基之后，两种组分可以反应并且形成所述生物活性化合物。
本发明使保证给药以完整形式给药时表现出某些缺点的生物活性化合物成为可能。更具体而言，认为对于作为完整化合物由于对非靶组织具有活性而通常具有毒性或具有副作用的生物活性化合物而言，作为非活性组分给药是显著的优势。根据本发明的生物活性化合物的体内组装提供生物活性化合物的优良的疾病选择性作用并减小了副作用。这种技术使增大一系列已知药物的治疗窗并保证增加基于这些药物的治疗成功率，因此增加其应用/处方范围成为可能。因此，本发明提供生物活性化合物的组分，所述组分对非靶细胞的毒性与所述完整的生物活性化合物的毒性相比是降低的。更具体而言，根据体外毒性研究，所述毒性降低20％，更特别地降低30％，最特别地降低至少50％。附加地或可供选择地，本发明使克服所述生物活性化合物的物理和/或化学缺点成为可能。例如，生物活性化合物在体内的有效分布通常受所述化合物在水中的有限的溶解度阻碍。现有的增加水溶性的药物最优化方法通常降低细胞吸收或膜扩散，因为亲水/亲脂平衡或效力发生变化。因此，使用提供高药物吸收的疏水隔室的例如脂质体或乳剂的药物递送系统来给药弱水溶性生物活性化合物。这些递送载体可以携带高有效载荷的疏水生物活性化合物并提供延长的血液半衰期。脂质体或乳剂药物递送的缺点是它们高的肝吸收，其导致肝毒性增加。使用本发明的概念可能增加生物活性化合物的水溶性。本发明的生物活性化合物的一种或多种官能化的组分的溶解度可以是固有的较高，或者可以通过加入官能团而得到改良。因此，本发明提供生物活性化合物的组分，所述组分的溶解度与完整的生物活性化合物的溶解度相比得到改善。更具体而言，所述溶解度改善至少20％，更特别地至少30％，最特别地至少50％或更多。根据特定的实施方案，最疏水的组分作为第一组分用磷基官能化，所述膦基上提供有影响所述组分的溶解度的官能团，例如(多)醇基和糖类(本文也称为“水溶性标记物”)。在施陶丁格连接中与第二组分反应时，除去所述膦基，所附加的基团不会影响再组装的生物活性化合物的活性。
实施例
实施例1.博来霉素的体内组装
博来霉素(抗肿瘤抗生素家族)的混合物用于癌症化学治疗(主要是A2和B2，图4)。当与金属离子辅因子结合时，博来霉素可以切割DNA。所述药物包括不同的基本区域，其中的两种为金属结合区域和DNA结合区域。在这个实施例中，博来霉素1作为分别包含所述金属结合区域或所述DNA结合区域的两种单独组分提供，产生两种DNA非活性组分(2和3)。用与癌选择性靶向部件缀合的无痕施陶丁格膦探针(方框，实线)官能化DNA切割化合物2。用叠氮化物(方框，虚线)官能化DNA结合化合物3。在全身给药2且其在癌部位蓄积之后，注射组分3。2和3之间在靶部位的选择性反应会导致组装的药物的同时释放和活化。
实施例2.甲氨蝶呤的体外和体内组装
将甲氨蝶呤(化合物4，图5)分成两种组分(化合物5，6)，各自对应于在酰胺键一侧的完整分子的一部分。这些组分以使这两种组分之间的反应导致甲氨蝶呤的再组装的方式用无痕施陶丁格连接反应配偶子官能化。
如下根据人肉瘤细胞系中的增殖减少来评价体外甲氨蝶呤化合物的再组装：
将人肉瘤细胞(HT-1080)接种于96-多孔平底微孔滴定平板中。在药物试验之前，在37℃，5％CO2下将平板孵育24-48小时以使细胞粘附。新鲜制备两种甲氨蝶呤组分5和6的原液，并在完全培养基中制备稀释液。所用的浓度范围为0.1nM-10uM。用加到100μl含细胞的完全培养基中的50μl/孔的组分5和50μl/孔的组分6以一式四份的方式测定各浓度。在对照组中，仅加入100μl完全培养基，或者50μl完全培养基与50μl组分5或6的混合物。将此平板孵育72小时，并通过MTT比色测定完成细胞增殖评价。
将甲氨蝶呤(化合物4，图5)用作抗癌化学治疗剂，并用于治疗关节炎和其它风湿性病症。它通过阻断酶二氢叶酸还原酶，从而干扰产生一种形式的对活跃生长的细胞重要的叶酸来起作用。与实施例1类似，通过应用靶向原位组装方法增加甲氨蝶呤治疗的治疗窗。为此，将甲氨蝶呤化合物分成如上述的两种组分。用靶向部分进一步官能化含三芳基膦的组分，保证该组分靶向至癌细胞。含三芳基膦组分(5)与含叠氮化物组分(6)的连接在靶细胞处发生，借此释放靶向部件。
实施例3.用代谢产物作为靶向部分的生物活性化合物的体内组装
许多抗癌药物可以使用葡萄糖途径的代谢产物而具有靶向性。细胞的葡萄糖代谢途径可以识别膦-葡萄糖缀合物7(图6)。在细胞吸收之后，这些被修饰的糖被捕获，并由于第一代谢磷酸化步骤而在细胞内蓄积。在全身给药之后，葡萄糖最佳地蓄积在具有高葡萄糖吸收的组织(例如肿瘤组织)，并会最佳地从其它非靶组织和血液中清除。然后给药第二组分(‘8’，图6)。组分8缀合到组分7上，通过无痕施陶丁格连接被捕获在细胞内。在发生连接时，活性含酰胺药物被再组装，同时从分子中清除膦-葡萄糖基团。
作为这种方法的延伸，所述含叠氮化物药物组分(8)还可以用葡萄糖部分官能化。通过这种方式，两种非活性药物组分特异性地靶向至肿瘤组织。但是，在此实施方案中的再组装的药物是葡萄糖-药物缀合物，它保持被捕获在细胞内。
实施例4.施陶丁格连接用于改善生物活性化合物水溶性的用途
根据本发明，以两种组分的形式提供弱水溶性生物活性化合物，所述组分的水溶性大于或者被修饰至大于完整的生物活性化合物。这对于携带酰胺官能团的生物活性化合物特别有意义。
吡罗昔康(化合物12，图7)是一种含酰胺官能团的化合物，它以两种组分(图7中的组分13和14)的形式提供，所述组分分别用叠氮化物和三苯基膦衍生物修饰。将后者连接到更具疏水性的药物部分，并携带附加的侧基以使得整个构成物具有水溶性。任选地，含叠氮化物的组分的性质也被调节以获得比完整的药物增加的水溶性。
在治疗疼痛患者时，共同给药所述两种吡罗昔康组分。所述生物活性化合物在体内通过施陶丁格连接再组装。
实施例5蝶啶膦
此实施例表示在图8中。
叠氮基-L-谷氨酸(6)，
将叠氮化钠(8.83g；136mmol)溶于水(25mL)，加入二氯甲烷(37.5mL)，并将混合物于0℃下剧烈搅拌。在数分钟内加入三氟甲磺酸酐(Triflicanhydride；7.89g；27.9mmol)，将反应混合物于0℃下搅拌30分钟，并在20℃下搅拌1小时。然后分离有机层，并用二氯甲烷萃取水层(2次15mL)。用饱和Na2CO3(10mL)洗涤含三氟甲磺酰基叠氮化物(triflyl azide)的合并的有机层。
将L-谷氨酸(2.06g；14.0mmol)、K2CO3(5.80g；42.0mmol)和Cu(II)SO4.5H2O(35mg；0.14mmol)溶于水(50mL)，加入甲醇(90mL)和所述三氟甲磺酰叠氮化物溶液。将反应混合物于20℃下搅拌20小时。真空蒸发挥发性溶剂，加入水(250mL)，用6M盐酸(大约80mL)中和溶液，并加入pH＝6.2的磷酸盐缓冲液(250mL)。用乙酸乙酯洗涤混合物(4次200mL)，并通过加入6M盐酸(大约6mL)调节pH至2。用乙酸乙酯萃取此混合物(3次200mL)，并用MgSO4干燥合并的有机层，过滤，并蒸发至干燥得到产物，为无色液体(1.98g；82％)。
1H-NMR(CDCl3)：δ4.13(t，1H，J＝6.5Hz)，2.4-2.7(br.m，2H)，2.22(m，2H)ppm.13C-NMR(CDCl3)：δ178.8，175.8，60.5，29.6，26.0ppm.FT-IR(ATR)：v 2927，2107，1704，1413，1208，1056，913，857，792cm-1。
4-[N-[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]-N-甲基氨基]苯甲酸(15)
将2，4-二氨基-6-(羟基甲基)蝶啶盐酸盐(4.40g；19.19mmol)溶于热水(150mL)，通过加入1M NaOH(大约20mL)中和溶液。将沉淀物过滤，用水洗涤，并用P2O5真空干燥。随后将此沉淀物悬浮在DMAc(25mL)中，并加入二溴化三苯基膦(triphenylphosphine dibromide；18.12g；42.92mmol)。将混浊的反应混合物于20℃下搅拌20小时。加入4-(甲基氨基)苯甲酸(2.95g；19.50mmol)和DIPEA(5.04g；39.00mmol)，并将混浊的反应混合物于20℃下搅拌3天。然后，将其倒入0.33M NaOH溶液(250mL)，并滤出沉淀物，并通过加入10％在水中的乙酸(大约2mL)中和滤液。将沉淀物过滤，用水洗涤，用甲醇(30mL)研磨，并用P2O5真空干燥，得到产物，为米黄色/橙色粉末(3.48g；56％)。
1H-NMR(DMSO)：δ8.59(s，1H)，7.53(d，2H，8.8Hz)，7.7(br.s，1H)，7.5(br.s，1H)，6.83(d，2H，8.8Hz)，4.79(s，2H)，3.23(s，3H)ppm.FT-IR(ATR)：v3335，3194，2964，1651，1597，1292，1187cm-1。
3-碘-4-羟基苯甲酸(16)
将3-氨基-4-羟基苯甲酸(10.00g；65.30mmol)溶于浓盐酸(100mL)，0℃下滴加在水(30mL)中的亚硝酸钠(4.73g；68.56mmol)溶液。将反应混合物于0℃下搅拌30分钟，然后在0℃下滴加在水(100mL)中的碘化钾(54.20g；326.5mmol)溶液。在0℃下搅拌30分钟后，将反应混合物加热到70℃，直至不再有逸出的气体(大约1小时)。用乙醚萃取混合物(3次250mL)，并用1M NaHSO3(100mL)洗涤合并的有机层。用乙醚(150mL)反萃取水层。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，并蒸发至干燥。用甲醇(30mL)和水(70mL)的混合物重结晶剩余固体，得到产物，为褐色晶体(8.95g；52％).1H-NMR(MeOD)：δ8.34(d，1H，J＝2.2Hz)，7.85(dd，1H，J＝2.2，8.6Hz)，6.86(d，1H，J＝8.6Hz)ppm.FT-IR(ATR)：v3271，1679，1574，1362，1288，1239，1195，767cm-1。
3-二苯基膦-4-羟基苯甲酸三乙铵(17)
将3-碘-4-羟基苯甲酸(4.00g；15.15mmol)悬浮在乙腈(90mL)中，并加入三乙胺(9.19g；90.9mmol)、乙酸钯(0.17g；0.76mmol)和二苯基膦(4.23g；22.73mmol)。在氩气氛下将反应混合物加热至90℃，持续20小时。过滤沉淀物，用乙腈洗涤，并干燥，得到产物，为米黄色固体(5.06g；79％)。
1H-NMR(DMSO)：δ7.78(dd，1H，J＝2.2，8.6Hz)，7.61(m，1H)，7.38(br.m，6H)，7.20(br.m，4H)，6.84(dd，1H，J＝4，8.6Hz)，2.60(q，6H，J＝7.0Hz)，1.00(t，9H，J＝7.0Hz)ppm.31P(DMSO)：-17.0ppm.FT-IR(ATR)：v 2409，1825，1584，1529，1390，1354，1339，1286，1123，791，743，700cm-1。
蝶啶膦(5)，
将4-[N-[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]-N-甲基氨基]苯甲酸(15)(0.650g；2.00mmol)悬浮在DMAc(15mL)中。加入DIPEA(0.79g；6.14mmol)和HBTU(0.92g；2.43mmol)，并将反应混合物于20℃下搅拌20小时。过滤沉淀物，用DMAc和乙醚洗涤，并干燥得到中间产物HOBt-酯(0.668g；1.51mmol)。
将3-二苯基膦-4-羟基苯甲酸三乙铵(17)(0.639g；1.51mmol)悬浮在DMSO(5mL)中，并加入叔丁醇钾(0.339g；3.02mmol)。往此溶液加入在DMSO(5mL)中的所述中间产物HOBt-酯的溶液，并将反应混合物于20℃下搅拌20小时。随后，将其过滤，倒入水(100mL)中，用乙酸中和并离心。倾析母液，将沉淀在水(100mL)中搅拌，并再次离心和倾析。将残渣溶于丙酮(100mL)，并在-20℃下重结晶得到产物，为黄色粉末(0.360g；29％)。1H-NMR(DMSO)：δ8.60(s，1H)，8.01(dd，2H，J＝2，8.6Hz)，7.65(br.s，2H)，7.50(d，2H，J＝9.2Hz)，7.42(br.m，8H)，7.23(m，3H)，6.76(d，2H，J＝9.2Hz)，6.62(br.s，2H)，4.81(s，2H)，3.25(s，3H)ppm.31P-NMR(DMSO)：-16.6(产物)，+23.4(小，氧化膦)ppm.FT-IR(ATR)：v 3319，3182，3053，1717，1634，1600，1523，1435，1367，1272，1244，1172，1115，1063，1045，742，691cm-1.LC-MS(CH3CN/H2O)：tr＝8.9 min：m/z＝630.1(M+H)+；tr＝7.5min：m/z＝646.0(氧化膦)。

Claims (22)

1.完整的生物活性化合物的两种或更多种组分的组合，所述组分基本上无生物活性，其中所述组分用施陶丁格连接的相容性官能团官能化，从而在彼此接触时导致具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的生物活性化合物的再组装。
2.权利要求1的组合，其特征在于至少一种所述组分是靶向性的。
3.权利要求2的组合，其中所述靶向性组分包含靶向部分。
4.根据权利要求1的组合，其特征在于至少一种所述组分包含可探测的标记物。
5.权利要求1的组合，其中所述完整的生物活性化合物具有酰胺基，且所述组分的再组装导致所述酰胺基的产生。
6.权利要求1的组合，其中所述组分作为单独的药物组合物提供，所述组合物各自与药学上可接受的载体或赋形剂混合。
7.根据权利要求1的组合，其中所述官能团在无痕施陶丁格连接中具有反应性。
8.根据权利要求1的组合，其中所述官能团代表相等数目的选自(a)和(b)的官能团，其中：
a)被烷氧基羰基邻位取代的三芳基膦基，借此所述组分通过非活性连接在其中一个芳基的一个其余的位置上连接到所述三芳基膦上，或三芳基膦基，其方式使得所述三芳基膦被所述组分通过羰基氧(-CO-O-)或羰基硫(-CO-S-)连接邻位取代，和
b)叠氮基。
9.根据权利要求1的组合，其包含2种组分。
10.根据权利要求8的组合，其中至少一种所述含膦组分通过靶向部分具有靶向性。
11.根据权利要求10的组合，其中所述靶向部分连接到所述三芳基膦的芳基上。
12.根据权利要求10的组合，其中所述至少一种含膦组分包含被烷氧基羰基邻位取代的三芳基膦基，并且其中所述靶向部分连接到所述烷氧基羰基的烷基上。
13.根据权利要求1的组合，其中所述组分的溶解度与所述完整的生物活性化合物的溶解度相比得到改善。
14.根据权利要求13的组合，其中至少一种所述组分为含膦组分，且其中所述含膦组分的所述膦被修饰以增加所述含膦组分的溶解度。
15.根据权利要求1的组合，其中所述组分的稳定性和/或毒性与所述完整的生物活性化合物的稳定性相比得到改善。
16.根据权利要求1的组合，其包含甲氨蝶呤的两种组分，其中所述组分对应于酰胺基的各侧的甲氨蝶呤分子部分。
17.根据权利要求1的组合，所述组合包含博来霉素的两种组分，其中第一种所述组分对应于博来霉素的金属结合区域，且其中第二种所述组分由博来霉素的DNA结合区域组成。
18.包含与完整的生物活性化合物的组分混合的药用载体或赋形剂的药物组合物，其中所述组分基本上无生物活性，且其中所述组分被在施陶丁格连接中具有反应性的基团官能化。
19.完整的生物活性化合物的第一组分，所述第一组分基本上无生物活性，其特征在于所述组分被在施陶丁格连接中具有反应性的基团官能化，使得与第二组分接触时导致具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的生物活性化合物的再组装，且其进一步的特征在于其包含靶向部分。
20.制备博来霉素组分的方法，所述组分彼此接触时能够再组装成完整的博来霉素，所述方法包括：
a)提供博来霉素的金属结合区域，
b)提供博来霉素的DNA结合区域，
c)在博来霉素的每个所述区域上，在完整药物中连接这些区域的位置，提供能够在施陶丁格连接中相互作用的各个官能团。
21.增加完整的生物活性化合物的吸收的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供所述生物活性化合物的两种组分，所述组分在再组装时产生所述生物活性化合物或具有与所述完整的生物活性化合物基本上相同的活性的化合物，
b)给每一种所述组分提供能够在施陶丁格连接中一起反应的三芳基膦或叠氮化物官能团，以允许所述(再)组装；借此所述两种组分中更具疏水性的组分用三芳基膦修饰。
22.根据权利要求21的方法，其中所述三芳基膦基进一步用增加所述组分的水溶性的附加基团修饰。
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