CN101407764A - 用于梨形四膜虫的培养、保存的液体培养基和方法 - Google Patents
用于梨形四膜虫的培养、保存的液体培养基和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101407764A CN101407764A CNA2007101758365A CN200710175836A CN101407764A CN 101407764 A CN101407764 A CN 101407764A CN A2007101758365 A CNA2007101758365 A CN A2007101758365A CN 200710175836 A CN200710175836 A CN 200710175836A CN 101407764 A CN101407764 A CN 101407764A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pyriformis
- tetrahymona
- tetrahymona pyriformis
- nutrient medium
- liquid nutrient
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种用于梨形四膜虫的培养的液体培养基，其为将10.0～15.0g眎蛋白胨、1.0～3.0g葡萄糖和2.0～5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节pH为7.0～7.5而得。本发明将纯种梨形四膜虫以1.0～2.0％接种于该液体培养基中，补充10.0～20.0mg/L链霉素，保证给氧空间，25～30℃下恒温静置培养，可以简便、快捷地获得大量纯种四膜虫。本发明还涉及一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基，其为将4.0～6.0g眎蛋白胨、40.0～60.0g葡萄糖和3.0～5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节pH值为7.0～7.5。本发明将纯种梨形四膜虫以5.0～20.0％接种于该液体培养基中，保证给氧空间，15～25℃下恒温静置保存，可将梨形四膜虫保存0.5～1.0年，有效地解决了其在非冻融状态下长期保存而不受污染的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于梨形四膜虫(Tetrahymena priformis)的无菌纯种培养的液体培养基和方法，本发明还涉及一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基和方法。
背景技术
梨形四膜虫(Tetrahymena priformis)属于原生动物门寡膜纲膜口目四膜科四膜虫属的一种。该属目前已知有10余种，世界性分布，主要产自淡水，也有的生活于咸水或温泉中。体长40～60微米，成倒卵形或梨形。口位于腹面前方正中，体表被以纵纤毛带，口后纤毛带一般为2条。胞肛和2个伸缩泡孔均位于细胞后端。无性生殖为横分裂。有性生殖为接合生殖。合子核分裂分化产生新的大小核，两细胞分开、分裂。
四膜虫，作为一种外面覆盖有类似头发的纤毛的单细胞生物，虽然并非是最为耀眼的真核生物，但它自身所具有的一系列生理特性却使其在生化研究领域逐渐被公认为一种功能强大的模式生物。具体而言，四膜虫在无菌培养基中生长繁殖迅速(2.5小时/代)，耐受温度范围较宽；由于对一种嘌呤、一种嘧啶以及一些氨基酸的绝对需求，所以易于进行放射性标记；大量培养时，其生活周期中的有性生殖阶段——接合，易于诱导同步性；营养细胞大(30μm×50μm)，可以进行显微注射以及光学显微镜分析。此外，最新的研究发现，由于四膜虫具有一个相对于大肠杆菌而言更为巨大的膜系统，可以管理大肠杆菌所无法管理的蛋白，所以其在真核生物蛋白的过度表达这一生物技术领域也表现出较为优势的应用前景。
以上这些在结构和行为方面所具有的优势特征，使得四膜虫成为真核细胞基因工程研究的理想材料。但现有技术在培养四膜虫时，所采用的培养基成分复杂，培养条件苛刻。例如，梨形四膜虫的培养基通常包括葡萄糖、麦芽糖、胰蛋白胨、钳合蛋白、牛肉浸膏、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸亚铁多种营养成分，并需要使用恒温水浴摇床进行摇瓶通气振荡培养，操作复杂。而四膜虫的长期保存则需要在-80℃超低温冷冻条件下进行，不仅操作复杂，而且在使用之前必需将其融化复壮，这一过程往往导致四膜虫大量死亡，存活的四膜虫的细胞活性也大大降低，需要较长时间的恢复才能用于试验研究。因此如何简便、快捷地获得大量纯种四膜虫并将其在非冻融状态下长期保存而不受污染，常常成为影响相关试验研究进度的关键技术问题之一。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术在培养四膜虫时所采用的培养基成分复杂，培养条件苛刻的缺陷，从而提供一种成分简单的用于梨形四膜虫的培养的液体培养基，并且提供一种使用这种培养基的培养方法，该方法可以简便、快捷地获得大量纯种四膜虫。
本发明的另一目的在于克服现有技术在长期保存四膜虫时，需要超低温冷冻，导致操作复杂，且在使用前融化复壮时使得四膜虫的存活率和细胞活性大大降低的缺陷，从而提供一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基，并且提供一种使用这种培养基的保存方法，该方法可以在非冻融状态下长期保存四膜虫且不受污染，也避免了由此而导致的融化复壮操作，使得该方法操作简便，保存的四膜虫的死亡率降低，又同时保存了活性。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：
本发明提供一种用于梨形四膜虫的培养的液体培养基，其为按照下述比例配制而得：将10.0～15.0g眎蛋白胨(proteose peptone)、1.0～3.0g葡萄糖(glucose)和2.0～5.0g酵母浸粉(yeast extract)溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.0～7.5。
优选的，本发明提供的用于梨形四膜虫的培养的液体培养基，其为将12.0g眎蛋白胨(proteose peptone)、2.0g葡萄糖(glucose)和3.5g酵母浸粉(yeast extract)溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.2。
本发明提供一种采用上述液体培养基对梨形四膜虫进行纯种培养的方法，其包括：将纯种梨形四膜虫以1.0～2.0％(体积比)接种于如前所述的液体培养基中，补充10.0～20.0mg/L链霉素，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，25～30℃下恒温静置培养72～96小时。
在上述培养方法中，优选的接种比例为2.0％。
在上述培养方法中，优选的链霉素的剂量为20.0mg/L。
在上述培养方法中，优选的培养温度为30℃。
本发明所提供的用于梨形四膜虫的培养的液体培养基和方法可以简便、快捷地获得大量纯种四膜虫，为真核细胞基因工程等相关生物技术领域的研究提供理想的试验材料。
本发明提供一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基，其为按照下述比例配制而得：将4.0～6.0g眎蛋白胨(proteose peptone)、40.0～60.0g葡萄糖(glucose)和3.0～5.0g酵母浸粉(yeast extract)溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.0～7.5。
优选的，本发明提供的用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基，其为将5.0g眎蛋白胨(proteose peptone)、50.0g葡萄糖(glucose)和4.0g酵母浸粉(yeast extract)溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.2。
本发明提供一种采用上述用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基对梨形四膜虫进行保存的方法，其包括：将纯种梨形四膜虫以5.0～20.0％(体积比)接种于如前所述的用于保存的液体培养基中，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，15～25℃下恒温静置保存，每一年转种细胞一次。
在上述培养方法中，优选的接种比例为10.0％。
在上述培养方法中，优选的培养温度为20℃。
本发明所提供的用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基和方法可将梨形四膜虫保存0.5～1.0年，有效地解决了其在非冻融状态下长期保存而不受污染的问题，且操作简便、高效快捷、成本低廉，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明技术方案做进一步说明。下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所有培养基中的溶剂均为水。
实施例1、制备一种用于梨形四膜虫的培养的液体培养基I
将12.0g眎蛋白胨、2.0g葡萄糖和3.5g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.2，得到本发明的用于梨形四膜虫的培养的液体培养基I。
实施例2、制备一种用于梨形四膜虫的培养的液体培养基II
将10.0g眎蛋白胨、1.0g葡萄糖和2.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.0，得到本发明的用于梨形四膜虫的培养的液体培养基II。
实施例3、制备一种用于梨形四膜虫的培养的液体培养基III
将15.0g眎蛋白胨、3.0g葡萄糖和5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.5，得到本发明的用于梨形四膜虫的培养的液体培养基III。
实施例4、梨形四膜虫的无菌扩大纯培养
取城市生活污水处理厂曝气池中的活性污泥作为试验样品，轻轻摇晃使其混合均匀。取一无菌培养皿，将少量活性污泥样品倒入其中，置于解剖镜下观察。待发现所需梨形四膜虫(Tetrahymena priformis)，用移液枪将其吸出后注入另一装有专用扩大纯培养液体培养基的培养皿中备用。
取上述得到的纯种梨形四膜虫(Tetrahymena priformis)接种于含实施例1制备的液体培养基I的无菌三角瓶中，接种比例为2.0％(体积比)，补充20.0mg/L链霉素，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，30℃下恒温静置培养96小时。将此扩大纯培养后的样品置显微镜下镜检计数，健康细胞数量达106cell/ml。
实施例5、梨形四膜虫的无菌扩大纯培养
将纯种梨形四膜虫接种于含实施例2制备的液体培养基II的无菌三角瓶中，接种比例为1.0％(体积比)，补充10.0mg/L链霉素，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，25℃下恒温静置培养72小时。将此扩大纯培养后的样品置显微镜下镜检计数，健康细胞数量达105cell/ml。
实施例6、梨形四膜虫的无菌扩大纯培养
将纯种梨形四膜虫接种于含实施例3制备的液体培养基III的无菌三角瓶中，接种比例为1.5％(体积比)，补充15.0mg/L链霉素，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，28℃下恒温静置培养84小时。将此扩大纯培养后的样品置显微镜下镜检计数，健康细胞数量达105cell/ml。
实施例7、制备一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基IV
将5.0g眎蛋白胨、50.0g葡萄糖和4.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.2，得到本发明的用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基IV。
实施例8、制备一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基V
将4.0g眎蛋白胨、40.0g葡萄糖和3.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.0，得到本发明的用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基V。
实施例9、制备一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基VI
将6.0g眎蛋白胨、60.0g葡萄糖和5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.5，得到本发明的用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基VI。
实施例10、梨形四膜虫的无菌长期保存
将纯种梨形四膜虫以10.0％(体积比)接种于实施例7制备的用于保存的液体培养基IV中，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，20℃下恒温静置保存90天后，取培养物复壮72小时。将此复壮后的样品置显微镜下镜检计数，健康细胞数量达105cell/ml。
实施例11、梨形四膜虫的无菌长期保存
将纯种梨形四膜虫以5.0％(体积比)接种于实施例8制备的用于保存的液体培养基V中，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，15℃下恒温静置保存90天后，取培养物复壮72小时。将此复壮后的样品置显微镜下镜检计数，健康细胞数量达105cell/ml。
实施例12、梨形四膜虫的无菌长期保存
将纯种梨形四膜虫以20.0％(体积比)接种于实施例9制备的用于保存的液体培养基VI中，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，25℃下恒温静置保存90天后，取培养物复壮72小时。将此复壮后的样品置显微镜下镜检计数，健康细胞数量达105cell/ml。
Claims (11)
1、一种用于梨形四膜虫的培养的液体培养基，其为按照下述比例配制而得：将10.0～15.0g眎蛋白胨、1.0～3.0g葡萄糖和2.0～5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.0～7.5。
2、如权利要求1所述的用于梨形四膜虫的培养的液体培养基，其特征在于：其为将12.0g眎蛋白胨、2.0g葡萄糖和3.5g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.2。
3、一种对梨形四膜虫进行纯种培养的方法，其包括：将纯种梨形四膜虫以1.0～2.0％体积比接种于权利要求1所述的液体培养基中，补充10.0～20.0mg/L链霉素，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，25～30℃下恒温静置培养72～96小时。
4、如权利要求3所述的对梨形四膜虫进行纯种培养的方法，其特征在于：所述的接种比例为2.0％。
5、如权利要求3所述的对梨形四膜虫进行纯种培养的方法，其特征在于：所述的链霉素的剂量为20.0mg/L。
6、如权利要求3所述的对梨形四膜虫进行纯种培养的方法，其特征在于：所述的培养温度为30℃。
7、一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基，其为按照下述比例配制而得：将4.0～6.0g眎蛋白胨、40.0～60.0g葡萄糖和3.0～5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.0～7.5。
8、如权利要求7所述的用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基，其特征在于：其为将5.0g眎蛋白胨、50.0g葡萄糖和4.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节溶液的pH值为7.2。
9、一种对梨形四膜虫进行保存的方法，其包括：将纯种梨形四膜虫以5.0～20.0％体积比接种于权利要求7所述的用于保存的液体培养基中，保证至少占培养容器空间2/3的给氧空间，15～25℃下恒温静置保存，每一年转种细胞一次。
10、如权利要求9所述的对梨形四膜虫进行保存的方法，其特征在于：所述的接种比例为10.0％。
11、如权利要求9所述的对梨形四膜虫进行保存的方法，其特征在于：所述的培养温度为20℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2007101758365A CN101407764A (zh) | 2007-10-12 | 2007-10-12 | 用于梨形四膜虫的培养、保存的液体培养基和方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2007101758365A CN101407764A (zh) | 2007-10-12 | 2007-10-12 | 用于梨形四膜虫的培养、保存的液体培养基和方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101407764A true CN101407764A (zh) | 2009-04-15 |
Family
ID=40570978
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2007101758365A Pending CN101407764A (zh) | 2007-10-12 | 2007-10-12 | 用于梨形四膜虫的培养、保存的液体培养基和方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101407764A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103756906A (zh) * | 2014-01-20 | 2014-04-30 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种嗜热四膜虫的高密度发酵方法 |
| CN108333132A (zh) * | 2018-02-22 | 2018-07-27 | 哈尔滨工业大学 | 一种煤化工废水的生物毒性检测方法 |
-
2007
- 2007-10-12 CN CNA2007101758365A patent/CN101407764A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103756906A (zh) * | 2014-01-20 | 2014-04-30 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种嗜热四膜虫的高密度发酵方法 |
| CN103756906B (zh) * | 2014-01-20 | 2016-05-25 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种嗜热四膜虫的高密度发酵方法 |
| CN108333132A (zh) * | 2018-02-22 | 2018-07-27 | 哈尔滨工业大学 | 一种煤化工废水的生物毒性检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101407774B (zh) | 一种光合细菌制剂的制备工艺 | |
| CN106282044B (zh) | 一种生丝微菌和吡咯喹啉醌的制备方法 | |
| CN103695353A (zh) | 一株具有氨氮降解能力的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN105886403A (zh) | 微藻藻种的保藏方法 | |
| CN101407761B (zh) | 酵母融合菌、白地霉菌和根霉菌液体菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN102311920A (zh) | 一种小球藻的培养方法 | |
| Davis | Autocatalytic growth of a mutant due to accumulation of an unstable phenylalanine precursor | |
| CN107094752A (zh) | 一种肿瘤组织体外保存液及其制备方法 | |
| Rouf et al. | An overview of microbial cell culture | |
| CN107325971A (zh) | 一种淡水微藻常温液态保存配方和制作方法 | |
| CN108865924A (zh) | 异养硝化-有氧反硝化假单胞菌菌剂及其制备方法、应用 | |
| CN101407764A (zh) | 用于梨形四膜虫的培养、保存的液体培养基和方法 | |
| CN110184188A (zh) | 一种微生物复合菌剂的生产工艺 | |
| CN100400642C (zh) | 三角褐指藻的一种开放式培养方法及其专用培养基 | |
| CN106520559B (zh) | 一种小球藻高效率光自养培养方法 | |
| CN113005054A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌ss-zc-26及其制备方法和应用 | |
| CN103773691B (zh) | 一种封闭式快速培养微藻的方法 | |
| CN217052249U (zh) | 一种浅液层准静态的微藻培养系统 | |
| WO2023173493A1 (zh) | 一种深海原位环境的单菌落分离装置及分离方法 | |
| CN100402641C (zh) | 分泌溶藻物质的产气肠杆菌及其在蓝藻水华控制中的应用 | |
| CN116179356A (zh) | 高密度异养培养莱茵衣藻的方法及其应用 | |
| CN108102986A (zh) | 促进沙漠藻生长培养基及其培养沙漠藻生长的方法 | |
| CN103588304B (zh) | 一种用于养殖池塘水体微型生物群落调控碳源及其应用 | |
| CN1063224C (zh) | 气升式周期浸没光照植物细胞组织器官培养方法及培养反应器 | |
| CN1257852C (zh) | 一种去除水产养殖中亚硝酸盐和氨氮的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20090415 |