CN101397274B

CN101397274B - 一种天然咪唑甲酸衍生物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN101397274B
Application number: CN 200810155974
Authority: CN
Inventors: 陈荣; 杨飞; 王冬春; 邵凤
Original assignee: Jiangsu Simcere Pharmaceutical R&D Co Ltd
Current assignee: Hainan Simcere Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2008-10-22
Filing date: 2008-10-22
Publication date: 2012-06-27
Anticipated expiration: 2028-10-22
Also published as: CN101397274A

Abstract

本发明公开了一种新的天然咪唑甲酸衍生物及其制备方法和用途。该衍生物是式(I)所示的化合物、光学异构体、药用盐、溶剂合物。该化合物的制备方法包括采用溶剂提取，采用柱层析分离纯化而得。该化合物及其光学异构体、药用盐、溶剂合物可用于制备抗肿瘤药物。该化合物是一种新的天然咪唑甲酸衍生物，制备方法简单、易行。

Description

一种天然咪唑甲酸衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种新的天然咪唑甲酸衍生物及其制备方法和该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

近年来，以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶作为药物筛选靶点，发现选择性作用于特定靶点的高效、低毒、特异性强的新型抗癌药物已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向。蛋白酪氨酸激酶(Protein Tyrosine Kinases，PTKs)是一种能选择性地使不同底物的酪氨酸残基磷酸化的一种酶，在许多细胞调节过程中起着重要作用。但是，如基因突变、基因融合、自分泌和旁分泌循环等病理机制，会导致PTKs的持续活化，从而阻断了其对细胞分化、生长和凋亡等的调节功能，诱发肿瘤。已有的资料表明，超过50％的原癌基因和癌基因产物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它们的异常表达将导致细胞增殖调节发生紊乱，进而导致肿瘤发生。因而抑制酪氨酸激酶的活性，恢复生理平衡可以作为一种新的治疗手段。目前，已有超过20多种酪氨酸激酶靶点被应用于抗肿瘤药物的研究中(science 2004，305，1163-1167.；science 2004，303，1800-1805.)。

从自然界寻找具有抑制酪氨酸激酶活性的化合物，将为新药的设计提供更多的功能模版，为药物合成研究和药物作用机理研究提供很好的先导化合物，从而为肿瘤治疗药物的开发提供广阔的空间(The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 2007，39，1416-1431.)。骆驼蒿(Peganum nigellastrum Bunge)是蒺藜科骆驼蓬属多年生草本植物，该属植物我国共有三种，主要分布于我国西北部地区的干旱及半干旱地区。继1975年报道了骆驼蓬中的生物碱对消化道恶性肿瘤有疗效以来，国内相继报道了骆驼蓬的化学成分及抗肿瘤的体内体外实验结果，结果表明骆驼蓬中的生物碱在治疗癌症方面有很好的开发前景(Cancer Biol Ther2007，6，(8)，e1-e7.；Arch Pharm Res 2007，30，(7)，844-9.)。

目前，国内外对骆驼蓬化学成分和药理作用研究较多，在我国传统中药中应用较多，也有许多的发明专利。但是，对于骆驼蒿的化学成分研究较少。近年来，有学者从骆驼蒿中发现了一类具有喹唑啉母核的生物碱，具有和喜树碱近似的结构特征，也表现出了较好的抗肿瘤活性(J.AM.CHEM.SOC.2003，125，(45)，13628-13629.；Bioorganic & Medicinal Chemistry2007，15，(12)，4237-4246.；Heterocycles 2005，65，(9)，2203-2219.)。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的天然咪唑甲酸衍生物。

本发明的另一个目的是提供该化合物的制备方法。

本发明的第三个目的是提供该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

本发明提供了一种式(I)所示的化合物，中文名1H-咪唑-4-甲酸-(2′-乙基庚基)酯，英文名2-ethylheptyl 1H-imidazole-4-carboxylate，分子式C₁₃H₂₂N₂O₂，分子量238，无色油状物。 ¹H-NMR和¹³C-NMR数据见表1。本化合物是唯一具有2-乙基庚基的咪唑甲酸酯。该化合物易溶于有机溶剂。

表1式(I)化合物的¹H-NMR和¹³C-NMR数据(300MHz，500/4MHz，CD₃Cl)

式(I)所示的化合物可以以光学异构体的形式存在，因此其光学异构体及混合物也构成本发明的一个方面。同时，它们的药用盐、溶剂合物也是本发明的一部分。

本发明还提供了该化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)骆驼蒿地上部位用溶剂提取得浸膏；

(2)将浸膏与大孔树脂拌样，上样于大孔树脂柱上，用溶剂洗脱，得到洗脱物；

(3)低极性溶剂洗脱物以石油醚-醋酸乙酯为洗脱系统进行硅胶层析，然后进行SephadexLH-20和ODS柱层析，得到该化合物。

步骤(1)中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、水中的一种或多种。

步骤(2)中所述的洗脱溶剂为石油醚、环己烷、甲苯、二氯甲烷中的一种或多种。

根据本领域内技术人员熟知的成熟的筛选酶水平对酪氨酸激酶EGFR活性有抑制作用的化合物的方法，研究人员发现式(I)所示的化合物、光学异构体、药用盐、溶剂合物对EGFR活性有一定的抑制活性，在10μmol/L时抑制率为33.06％。

因此，本发明涉及的式(I)所示的化合物、光学异构体、药用盐、溶剂合物具有制备抗肿瘤药物的用途，它们可以以其自身的形式施用，也可以和药学上可以接受的载体组成药物组合物而应用。

采用有效剂量的本发明所述的式(I)所示的化合物、光学异构体、药用盐、溶剂合物的一种或多种作为活性成分与常规药用载体制备成药物组合物，可以按常规方法制备成口服或注射用途的常规剂型。通常的，载体包括稀释剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂或其他常规添加剂中的一种或多种。

本发明的有益效果：

本发明公开了一种新的天然咪唑甲酸衍生物及其制备方法。本发明还提供了该化合物的药用盐、溶剂合物。这些化合物可用于制备抗肿瘤药物。本发明提供的制备方法简单易行，制备的化合物纯度高。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明做进一步的说明。

本发明中没有具体描述的提取、分离方法均为本领域普通技术人员熟知的方法，本领域普通技术人员可以根据说明书的提示采用药典规定的方法或其他操作规程限定的方法结合使用仪器的说明书进行操作，即可实现本发明。

实施例1：式(I)化合物的提取分离

骆驼蒿地上部分干燥后重量为70kg，用95％乙醇加热回流提取3小时×3次，提取液减压回收乙醇，得浸膏14kg。取其中的1kg浸膏与大孔树脂拌样，上样于大孔树脂柱上，依次用石油醚、氯仿、甲醇洗脱，得到石油醚洗脱物244g，以石油醚-醋酸乙酯-甲醇为洗脱系统进行硅胶层析，然后进行Sephadex LH-20和ODS柱层析。Sephadex LH-20柱层析以氯仿-甲醇(2：1)为洗脱系统，ODS柱层析以甲醇-水-氨水(60：20：1)为洗脱系统，分离得到该化合物65.5mg。

实施例2：测定式(I)化合物对酪氨酸激酶EGFR活性抑制作用

EGFR检测kit(含激酶、1.25M DTT、底物肽、ATP、P-Tyr-100及4×HTScan激酶缓冲液等)购于Cell Signaling Technology公司；辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体购于Protein Tech公司；TMB购于Pierce公司；Streptavidin包被酶标板购于Greiner Bio-one公司；Infinite M200检测仪购于Tecan公司。本次试验采用的阳性药物为埃罗替尼。

用DMSO将化合物配成10^-2M的母液，-20℃保存，临用前用无菌水稀释至所需浓度；酶活测定：立即将酶从—80℃移至冰上，待融化后在4℃短暂离心至管底，并迅速放回冰上；加10μl DTT(1.25M)到2.5ml的4×HTScan激酶缓冲液中(200mM HEPES，pH7.5，20mMMgCl₂，20mMMnCl₂，12μM Na₃VO₄)。取0.6mL加入上述酶管，取12.5μL，并加入12.5μL不同浓度的化合物，同时设立blank孔、无酶对照孔、阴性对照孔及阳性对照孔，在室温下孵育5分钟；加10μL mM ATP到1.25mL 6μM底物肽中，用dH₂O稀释至2.5mL，取25μL至上述体系中，室温下孵育30分钟；加50μL/孔终止液(50mM EDTA，pH8)终止反应，每孔取25μL，并加入75μL dH₂O至Streptavidin包被的酶标板中，室温下孵育60分钟。用200μL/孔PBS/T(1×PBS，0.05％Tween—20)洗三次；加100μL含1％BSA的PBS/T 1:500稀释的P-Tyr-100(Phospho-Tyrsine mAb)，室温下孵育60分钟。用200μL/孔PBS/T(1×PBS，0.05％Tween—20)洗三次；加100μL含1％BSA的PBS/T 1:500稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，室温下孵育30分钟。用200μL/孔PBS/T(1×PBS，0.05％Tween-20)洗五次；加100μL/孔TMB，显色1-10分钟，加50μL的2M H₂SO₄终止反应，用Infinite M200测定A₄₅₀-A₆₃₀值；

列公式求得抑制率：

得该化合物在10μmol/L时对EGFR的抑制率为33.06％，埃罗替尼为92.45％。

Claims

1.式（I）所示的化合物或其药用盐

Figure 2008101559741100001DEST_PATH_IMAGE001

（I）。

2.一种药物组合物，其特征在于，该组合物以权利要求1所述的式（I）所示的化合物或其药用盐的一种或多种作为活性成分，并含有常规药用载体。

3.权利要求1所述的式（I）所示的化合物或其药用盐在制备抑制EGFR活性药物中的应用。

4.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）骆驼蒿地上部位用溶剂提取得浸膏；

（2）将浸膏与大孔树脂拌样，上样于大孔树脂柱上，用溶剂洗脱，得到洗脱物；

（3）洗脱物以石油醚-醋酸乙酯为洗脱系统进行硅胶层析，然后进行Sephadex LH-20和ODS柱层析，得到该化合物。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、水中的一种或多种。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的洗脱溶剂为石油醚、环己烷、甲苯、二氯甲烷中的一种或多种。