CN101370813A - 用作抗癌药物的6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶类的二聚体和加合物 - Google Patents
用作抗癌药物的6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶类的二聚体和加合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101370813A CN101370813A CNA2006800527348A CN200680052734A CN101370813A CN 101370813 A CN101370813 A CN 101370813A CN A2006800527348 A CNA2006800527348 A CN A2006800527348A CN 200680052734 A CN200680052734 A CN 200680052734A CN 101370813 A CN101370813 A CN 101370813A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- pharmaceutically acceptable
- mammals
- tubulin
- acceptable salt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
公开了某些6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶化合物的加合物和二聚体或其可药用盐,以及包含所述化合物或其可药用盐的组合物,其中所述化合物是用于治疗哺乳动物癌症的抗癌药物。还公开了在需要此种治疗的哺乳动物中治疗或抑制哺乳动物中癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法以及治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的癌性肿瘤的方法,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的所述化合物或其可药用盐。还公开了在需要此种治疗的哺乳动物中通过促进微管聚合来治疗或抑制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的所述化合物及其可药用盐。
Description
发明领域
本发明涉及某些6-[(取代的)苯基]-三唑并嘧啶化合物的加合物和二聚体或其可药用盐,以及包含所述化合物或其可药用盐的组合物,其中所述化合物是用于治疗哺乳动物癌症、治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或者由于MDR而抗药的癌性肿瘤的抗癌药物,还涉及在需要这类治疗的哺乳动物中通过促进微管聚合来治疗或抑制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法,以及通过施用有效量的本发明化合物或其可药用盐来治疗或抑制对化疗中所用的化疗药物并且特别是抗有丝分裂药物具有遗传性或获得性抗药性的哺乳动物中癌性肿瘤生长的方法。
发明背景
由于DNA是开发化疗药物的首要靶点,因此目前所用的多数细胞抑制剂抑制DNA生物合成的必要前体的形成或者阻断DNA多聚酶或者干扰DNA的模板功能。不幸的是,抑制DNA生物合成的重要前体的形成或者阻断DNA多聚酶或者干扰DNA的模板功能也对正常组织有效。
抗微管药物是一类重要的抗癌药物(Rowinsky,E.K.,和Tolcher,A.W.Antimicrotubule agents.In:V.T.Devita,Jr.,S.Hellman,以及S.A.Rosenberg(编辑),Cancer Principles and Practice,第6版,pp.431-452.Philadelphia:Lippincott Williams and Wilkins,2001)。它们通过干扰细胞微管、特别是有丝分裂纺锤体的功能来起作用。正常纺锤体功能的中断导致细胞凋亡。
目前,共有三种主要类型的抗微管药理学药物。其各自在β-微管蛋白上具有不同的结合位点并对微管功能具有不同作用。这些类型是:1)促进微管形成和稳定微管的紫杉烷-位点药物;2)长春花生物碱/肽-位点药物,其使微管不稳定并且经常诱导异常聚合物的形成或在高浓度下聚集;和3)秋水仙素-位点药物,其同样使微管不稳定并且通常不诱导形成其它聚合物(Hamel,E.Antimitotic natural products and their interactions withtubulin.Med.Res.Rev.,16:207-231,1996)。这三类位点的大多数配体都是天然产物或天然产物的半合成衍生物。
紫杉醇及其半合成衍生物多西紫杉醇干扰微管形成并稳定微管。紫杉醇是从太平洋红豆杉(Western(Pacific)yew),即短叶红豆杉(Taxus brevifolia)的树皮中分离出的二萜,是具有紫杉烷环系统的新一类治疗药物的代表。此外还发现在红豆杉科的其它成员包括在加拿大东部的Gaspesia发现的加拿大红豆杉(Taxus canadensis)以及在欧洲发现的欧洲红豆杉(Taxus baccata)的针叶中包含紫杉醇及类似物,因此提供了紫杉醇及其衍生物的新来源。在20世纪60年代中第一次检测了该粗提取物的活性,于1971年分离出其有效成分并鉴定化学结构(M.C.Wani等人,J.Am.Chem.Soc.,93,2325(1971))。此外,通过其他试验显示出对黑色素瘤细胞、白血病、多种癌、肉瘤和非霍奇金淋巴瘤以及大量的动物实体瘤广泛的活性。紫杉醇及其类似物通过从红豆杉针叶和小枝中获得的前体10-去乙酰浆果赤霉素III的半合成和通过全合成(Holton等人,J.Am.Chem.Soc.116:1597-1601(1994)和Nicolaou等人,Nature 367:630-634(1994))来制备。已经证实紫杉醇具有抗肿瘤活性。近来,已发现紫杉醇的抗肿瘤活性源于对微管聚合的促进作用(Kumar,N.,J.Biol.Chem.56:10435-10441(1981);Rowinsky等人,J.Natl.Cancer Inst.,82:1247-1259(1990);和Schiff等人,Nature,277:665-667(1979))。现在在临床试验中已经证实紫杉醇对多种人类肿瘤有效(McGuire等人,Ann.Int.Med.,111:273-279(1989);Holmes等人,J.Natl.Cancer Inst.,83:1797-1805(1991);Kohn等人,J.Natl.Cancer Inst.,86:18-24(1994);和A.Bicker等人,Anti-Cancer Drugs,4,141-148(1993))。
两种紫杉烷-位点药物(紫杉醇和多西紫杉醇)以及三种长春花生物碱/肽-位点药物(长春碱、长春新碱和长春瑞滨)在临床上用于治疗多种人类癌症。已经证实紫杉烷类比长春花生物碱更多地用于对抗实体瘤(例如肺、乳腺、卵巢肿瘤),说明促进微管形成的药物可能在临床上强于那些使微管不稳定的药物。秋水仙素-位点的药物没有用在治疗上。
尽管紫杉醇和多西紫杉醇在临床上广泛应用,但这些药物具有一些局限性,从而产生了改良药物的需要。首先,许多肿瘤是遗传性抗药的(例如结肠肿瘤)或在多个治疗疗程后变为抗药的,至少部分原因是由于位于癌细胞膜上将药物泵出胞外的药物转运蛋白的表达,从而降低了它们的效能(Gottesman,M.M.Mechanisms of cancer drug resistance.Annu.Rev.Med.,53:615-627,2002)。这些转运蛋白中最熟知的就是P-糖蛋白。因此需要这类新药,其对微管聚合具有紫杉烷样(taxane-like)的作用,而且又不是P-糖蛋白或其它这类泵的底物,由此克服患者对紫杉烷抗药的这种成因。
其次,紫杉醇和多西紫杉醇水溶性差,并且紫杉醇必须在聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)中配制,Cremophor EL是导致严重超敏反应的溶媒(Li,C.L.,Newman,R.A.,和Wallace,S.Reformulating paclitaxel.Science & Medicine,Jan/Feb:38-47,1999)。患者通常在施用紫杉醇之前先施用皮质激素类和抗组胺药物以使这些毒性最小化。因此,需要对微管聚合具有紫杉烷样的作用并且可以在生理盐水或其它合适无毒溶媒中进行给药的高水溶性的新药。
第三,紫杉醇是具有高度复杂结构的天然产物,多西紫杉醇是密切相关的半合成衍生物。因此,需要容易通过合成获得的、与紫杉烷类在结构上不同并且对微管聚合具有紫杉烷样作用的化合物。
因此,在本领域中仍然需要用于癌症治疗的细胞毒药物。具体而言,需要抑制或治疗肿瘤生长的细胞毒药物,其具有与紫杉醇类似的作用并且干扰微管形成的过程。此外,本领域中需要加速微管蛋白聚合并且稳定已聚合微管的药物。
因此,提供新化合物是有利的,其通过施用具有紫杉醇样抗癌活性的化合物来提供治疗或抑制哺乳动物中细胞增殖、肿瘤生长和恶性肿瘤生长的方法。
另外,提供新化合物是有利的,其提供了治疗或抑制表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的癌性肿瘤生长的方法。
此外,提供新化合物是有利的,其提供了治疗或抑制对化疗药物和特别是抗有丝分裂药具有遗传性或获得性抗药性的哺乳动物中癌性肿瘤生长的方法。
取代的三唑并嘧啶化合物的制备方法及其作为杀真菌剂在农业方面的用途在本领域中已有描述,如美国专利号:5,593,996;5,756,509;5,948,783;5,981,534;5,612,345;5,994,360;6,020,338;5,985,883;5,854,252;5,808,066;5,817,663;5,955,252;5,965,561;5,986,135;5,750,766;6,117,865;6,117,876;6,124,301;6,204,269;6,255,309;6,268,371;6,277,856;6,284,762;6,297,251;6,387,848;美国专利申请号US2002/0045631A1;US2002/0061882A1;US20030055069A1和国际或欧洲公布号:WO98/46607;WO98/46608;WO99/48893;WO99/41255;WO00/18227;WO01/35738A2;WO02/46195A1;WO02/067679A1;WO02/083676A1;EPO 834513A2;EPO 782997A2;EPO550113B1;FR2784381A1;EPO 989130A1;WO98/41496;WO94/20501;EPO 945453A1;EPO 562615A1;EPO562615B1;EP 550113A2;EP 943241B1;EP 988790B1,其具有以下通式:
在国际公布号WO 02/02563中公开了三唑并嘧啶化合物作为抗癌药物的用途。
本发明化合物是满足上文所述需要的新一类紫杉烷样作用的药物,并且其与之前已知的几类抗微管化合物具有显著差异。本发明化合物结合在β-微管蛋白的长春花生物碱位点上,然而它们具有类似紫杉烷而不同于长春花生物碱-位点药物的特性。具体而言,本发明化合物以类似于紫杉醇和多西紫杉醇的方式,在GTP的存在下以化合物:微管蛋白的低摩尔比值增强富含微管相关蛋白(MAP)的微管蛋白的聚合。在合适的实验条件下,在GTP存在下,本发明化合物还导致高纯度的微管蛋白的聚合,这种活性是紫杉烷类药物的标志。
本发明化合物对许多培养的人类癌细胞系(包括过表达膜转运蛋白MDR(P-糖蛋白)、MRP和MXR的细胞系)具有有效的细胞毒作用,因此其对于抗紫杉醇和长春新碱的细胞系有活性。具体而言,本发明的代表性实例具有高水溶性,并且可以在盐水中进行配制。本发明的代表性实例作为抗肿瘤药物对生长着人类肺癌和结肠癌、黑素瘤和胶质母细胞瘤的肿瘤异种移植物的无胸腺小鼠进行静脉或口服给药时有效。
例如,本发明化合物已经显示出对人类非小细胞肺癌(NSCLC)、结肠癌、乳腺癌、黑素瘤和胶质母细胞瘤的体内异种移植物模型(包括抗紫杉烷类或其它微管活性化合物的抗药模型)具有广泛的抗肿瘤活性。例如,当通过静脉或口服途径按每周一次的方案给药时,这些化合物是有效的。
在2004年9月24日提交的美国申请号10/950,543中公开了6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶化合物,其在2005年4月28号以美国专利公布号US2005/0090508A1公布,在2005年4月7号以国际专利公布号WO2005/030775公布。在已公布的申请中对这些化合物的描述以及制备和使用它们的方法均整体引入本文作为参考。
对于本发明,已经发现在特定条件下可以形成6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶的酸加合物和二聚体。此类化合物也用于在GTP存在下、以化合物:微管蛋白的低摩尔比值增强富含微管相关蛋白(MAP)的微管蛋白的聚合,并且用于在合适的实验条件下、在GTP存在下引发高纯度的微管蛋白的聚合。这些化合物还对许多培养的人类癌细胞系具有有效的细胞毒作用,所述细胞系包括过表达膜转运蛋白MDR(P-糖蛋白)、MRP和MXR的细胞系,而且对人类非小细胞肺癌(NSCLC)、结肠癌、乳腺癌、黑素瘤和胶质母细胞瘤的体内异种移植物模型(包括抗紫杉烷类或其它微管活性化合物的抗药模型)具有广泛的抗肿瘤活性。
发明简述
本发明提供了式(I)所表示的化合物,或其可药用盐或立体异构体,
其中
R1是
或任选地被R8取代的-(C6-C8)-环烷基;
n是2、3或4的整数;
X是-Cl、-F或-Br;
Y是-O-、-S-、-CH2-或-NR4-;
L1和L2各自独立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3;
R3是-CF3或-C2F5;
R4、R5和R6各自独立地是-H或-(C1-C3)-烷基;
R7是-ZR9,其中Z是-CO-、-NO-、-SO2-或-PO2H-;并且R9是-H、-OH、-(C1-C5)-烷基或-(C2-C5)-链烯基,所述烷基或链烯基任选地被一个或多个下述基团所取代:-O-、卤素、-OH、-NH2或者五或六元饱和、部分饱和或不饱和的环烷基,其中1-3个环碳原子任选地独立地被N、O或S原子所代替并且所述环烷基任选地被-CH3、-OH或卤素所取代;且R8是(C1-C3)-烷基。
本发明还提供了式(II)的化合物及其可药用盐或立体异构体,
其中
R1是
或任选地被R8取代的-(C6-C8)-环烷基;
n是2、3或4的整数;
X是-Cl、-F或-Br;
Y是-O-、-S-、-CH2-或-NR4-;
L1和L2各自独立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3;
R3是-CF3或-C2F5;
R2、R4、R5、R6和R9各自独立地是-H或-(C1-C3)-烷基;
R8是-(C1-C3)-烷基。
本发明还提供了在需要这类治疗的哺乳动物中通过施用有效量的式(I)化合物及其可药用盐来治疗或抑制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法。
本发明还提供了在需要这类治疗的哺乳动物中通过与微管蛋白和微管的相互作用促进微管聚合来治疗或预防癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的式(I)或(II)的化合物或其可药用盐。
还提供了在需要这类治疗的哺乳动物中治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的肿瘤的方法,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的这类化合物或其可药用盐。
本发明还提供了通过将所述包含微管蛋白的系统与有效量的式(I)或(II)化合物或其可药用盐接触来促进包含微管蛋白的系统中微管蛋白聚合的方法。
另外,本发明提供了通过将所述包含微管蛋白的系统与有效量的式(I)或(II)化合物或其可药用盐接触而在包含微管蛋白的系统中稳定微管的方法。
还提供了在需要这种治疗的哺乳动物中治疗、抑制肿瘤生长或根除肿瘤的方法,其中所述肿瘤对至少一种化疗药物抗药,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的式(I)或(II)的化合物或其可药用盐。
在另一方面,本发明提供了与可药用载体组合或混合的式(I)化合物。具体而言,本发明提供了包含有效量的式(I)化合物与可药用载体的药物组合物。
本发明的说明性实施方案详述
(a)定义
术语“烷基”是指直链或支链的烃链基团,优选1-3个碳原子。
如本文所用的术语“t-BOC”是指叔丁氧基羰基。
术语“氨基烷氧基”是指下式的基团
术语“氨基烷基”是指下式的基团
术语“氨基烷硫基”是指下式的基团
术语“氨基烷基氨基”是指下式的基团
术语“羟基烷氧基”是指下式的基团
术语“碱金属氢氧化物”包括氢氧化锂、氢氧化钾或氢氧化钠。
术语“碱金属碳酸盐”包括碳酸锂、碳酸钾或碳酸钠。
术语“碱金属氢化物”包括氢化锂、氢化钾或氢化钠。
术语“强碱”是指碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐和碱金属氢化物(例如氢化钠)。
如本文所用的术语“(C1-C5)-烷基”是指具有1-5个碳原子、优选1-3个碳原子的直链或支链的饱和烃。代表性的(C1-C5)-烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基和新戊基。
在一个实施方案中,(C1-C5)-烷基被一个或多个下列基团所取代:
卤素、-N3、-NO2、-CN、-OR’、-SR’、-SO2R’、-SO2N(R’)2、-N(R’)2、-COR’、-CO2R’、-NR’CO2R’、-NR’COR’、-NR’CONR’或-CON(R’)2,其中R’各自独立地是氢或未取代的(C1-C5)-烷基。
如本文所用的术语“(C2-C5)-链烯基”是指具有2-5个碳原子并且具有至少一个碳碳双键的直链或支链的烃。在一个实施方案中,(C2-C5)-链烯基具有一个或两个双键。(C2-C5)-链烯基基团可以以E或Z的构象存在并且本发明化合物包括这两种构象。代表性的(C2-C5)-链烯基基团包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、仲丁烯基、叔丁烯基、戊烯基、异戊烯基和新戊烯基。在一个实施方案中,(C2-C5)-链烯基基团被一个或多个下述基团所取代:
卤素、-N3、-NO2、-CN、-OR’、-SR’、-SO2R’、-SO2N(R’)2、-N(R’)2、-COR’、-CO2R’、-NR’CO2R’、-NR’COR’、-NR’CONR’或-CON(R’)2,其中R’各自独立地是氢或未取代的(C1-C5)-烷基。
如本文所用的术语“给药”或“施用”是指直接向动物施用化合物或其可药用盐或组合物,或者向动物施用该化合物的前药衍生物或类似物或所述化合物的可药用盐或组合物,其可以在动物体内形成等量的活性化合物。
如本文所用的术语“动物”包括但不限于人类、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪、猴、猩猩、狒狒或恒河猴。在一个实施方案中,所述动物是哺乳动物。在另一个实施方案中,所述动物是人类。
如本文所用的术语“芳基”是指包含1-3个稠合或键合的芳环的芳香基团。在一个实施方案中,芳基基团被一个或多个下述基团所取代:
-V’-卤素、-V’-N3、-V’-NO2、-V’-CN、-V’-OR’、-V’-SR’、-V’-SO2R’、-V’-SO2N(R’)2、-V’-N(R’)2、-V’-COR’、-V’-CO2R’、-V’-NR’CO2R’、-V’-NR’COR’、-V’-NR’CONR’或-V’-CON(R’)2,其中R’各自独立地是氢或未取代的(C1-C6)-烷基;并且其中V’独立地是键或(C1-C6)-烷基。
如本文所用的术语“有效的条件”是指对合成有机化学领域技术人员显而易见的合成反应条件。
如本文所用的术语“环基团”包括环烷基基团和杂环基团。环基团的任何合适的环位置都可以共价连接到所定义的化学结构上。在一个实施方案中,环基团被一个或多个下述基团所取代:
-V’-卤素、-V’-N3、-V’-NO2、-V’-CN、-V’-OR’、-V’-SR’、-V’-SO2R’、-V’-SO2N(R’)2、-V’-N(R’)2、-V’-COR’、-V’-CO2R’、-V’-NR’CO2R’、-V’-NR’COR’、-V’-NR’CONR’或-V’-CON(R’)2,其中R’各自独立地是氢或未取代的(C1-C6)-烷基;并且其中V’独立地是键或(C1-C6)-烷基。
如本文所用的术语“环烷基”是指3-7元饱和或部分不饱和的碳环。环烷基基团的任何合适的环位置都可以共价连接到所定义的化学结构上。示例性的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。在一个实施方案中,环烷基基团被一个或多个下述基团所取代:
-V’-卤素、-V’-N3、-V’-NO2、-V’-CN、-V’-OR’、-V’-SR’、-V’-SO2R’、-V’-SO2N(R’)2、-V’-N(R’)2、-V’-COR’、-V’-CO2R’、-V’-NR’CO2R’、-V’-NR’COR’、-V’-NR’CONR’或-V’-CON(R’)2,其中R’各自独立地是氢或未取代的(C1-C6)-烷基;并且其中V’独立地是键或(C1-C6)-烷基。
如本文所用的术语“苯基”是指取代或未取代的苯基基团。在一个实施方案中,苯基基团被一个或多个下述基团所取代:
-V’-卤素、-V’-N3、-V’-NO2、-V’-CN、-V’-OR’、-V’-SR’、-V’-SO2R’、-V’-SO2N(R’)2、-V’-N(R’)2、-V’-COR’、-V’-CO2R’、-V’-NR’CO2R’、-V’-NR’COR’、-V’-NR’CONR’或-V’-CON(R’)2,其中R’各自独立地是氢或未取代的(C1-C6)-烷基;并且其中V’独立地是键或(C1-C6)-烷基。
如本文所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
如本文所用的术语“杂环基”是指3-7元饱和、部分饱和或不饱和的环烷基,其中1-4个环碳原子独立地被N、O或S原子所代替。杂环基基团的任何合适的环位置都可以共价连接到所定义的化学结构上。示例性的杂环基基团包括但不限于氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、氮丙啶基、呋喃基、呋咱基、高哌嗪基、咪唑烷基、咪唑啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁二唑、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、噻二嗪基、噻二唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、硫吗啉基、噻吩基、三嗪基和三唑基。在一个实施方案中,杂环基基团被一个或多个下述基团所取代:
-V’-卤素、-V’-N3、-V’-NO2、-V’-CN、-V’-OR’、-V’-SR’、-V’-SO2R’、-V’-SO2N(R’)2、-V’-N(R’)2、-V’-COR’、-V’-CO2R’、-V’-NR’CO2R’、-V’-NR’COR’、-V’-NR’CONR’或-V’-CON(R’)2,其中R’各自独立地是氢或未取代的(C1-C6)-烷基;并且其中V’独立地是键或(C1-C6)-烷基。
本文所用的术语“有效量”是指当对动物给药时,对于预防、至少部分地改善或治愈动物罹患或者怀疑罹患的病症有效的化合物或化合物的可药用盐的量。
如本文所用的术语“载体”包括载体、赋形剂和稀释剂。
如本文所用的术语“前药”是指在体内可通过代谢途径(例如通过水解)转化为式(I)或式(II)化合物的化合物。
如本文所用的术语“分离并纯化”是指将一种组分从反应混合物或天然来源的其它组分中分离。在某些实施方案中,所述分离物包含占分离物重量的至少约50%、至少约55%、至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%或至少约98%的所述化合物或其可药用盐。
本文所用的术语“可药用盐”是指酸与本发明化合物的碱性氮原子的盐。示例性的盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、盐酸化物、溴化物、氢溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐、萘磺酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、苹果酸盐、邻苯二甲酸盐和扑酸盐。如本文所用的术语“可药用盐”还指具有酸性官能团如羧酸官能团的本发明的化合物与碱形成的盐。示例性的碱包括但不限于碱金属包括钠、钾和锂的氢氧化物;碱土金属如钙和镁的氢氧化物;其它金属如铝和锌的氢氧化物;氨、有机胺例如未取代的或羟基取代的单-、二-或三烷基胺、二环己基胺;三丁基胺;吡啶;N-甲基、N-乙基胺;二乙胺;三乙胺;单-、二-或三-(2-OH-(C1-C6)-烷基胺),例如N,N-二甲基-N-(2-羟基乙基)胺或三-(2-羟基乙基)胺;N-甲基-D-葡萄糖胺;吗啉;硫吗啉;哌啶;吡咯烷;以及氨基酸例如精氨酸、赖氨酸等。术语“可药用盐”还包括本发明化合物的水合物。
如本文所用的术语“基本上不含其相反的对映异构体”是指化合物包含不超过约10%重量的其相反的对映异构体。在其它实施方案中,基本上不含其相反的对映异构体的所述化合物包含不超过约5%、不超过约1%、不超过约0.5%或不超过约0.1%重量的其相反的对映异构体。基本上不含其相反的对映异构体的对映异构体包括已经进行了分离纯化的化合物或者已经制备为基本上不含其相反的对映异构体的化合物。
(b)本发明的化合物及其可药用盐
本发明提供了由式(I)表示的化合物及其可药用盐或立体异构体:
其中
R1是
或任选地被R8取代的-(C6-C8)-环烷基;
X是-Cl、-F或-Br;
Y是-O-、-S-、-CH2-或-NR4-;
L1和L2各自独立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3;
R3是-CF3或-C2F5;
R4、R5和R6各自独立地是-H或-(C1-C3)-烷基;
R7是-ZR9,其中Z是-CO-、-NO-、-SO2-或-PO2H-;并且R9是-H、-OH、-(C1-C5)-烷基或-(C2-C5)-链烯基,所述烷基或链烯基任选地被一个或多个下述基团所取代:-O-、卤素、-OH、-NH2或者五或六元饱和、部分饱和或不饱和的环烷基,其中1-3个环碳原子任选地独立地被N、O或S原子所代替并且所述环烷基任选地被-CH3、-OH或卤素取代;且R8是(C1-C3)-烷基。
本发明还提供了式(II)的化合物或其可药用盐或立体异构体:
其中
R1是
或任选地被R8取代的-(C6-C8)-环烷基;
n是2、3或4的整数;
X是-Cl、-F或-Br;
Y是-O-、-S-、-CH2-或-NR4-;
L1和L2各自独立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3;
R3是-CF3或-C2F5;
R2、R4、R5、R6和R9各自独立地是-H或-(C1-C3)-烷基;
R8是-(C1-C3)-烷基。
在式(I)和(II)的化合物中,R6优选是-(C1-C3)-烷基,甚至更优选是-CH3。
在式(I)化合物中,R7优选是-ZR9,其中Z是-CO-或-NO-;且R9是-(C1-C5)-烷基或-(C2-C5)-链烯基,其任选地被一个或多个下述基团所取代:O、卤素、-OH、-NH2或者五或六元饱和、部分饱和或不饱和的环烷基,其中1-3个环碳原子任选地独立地被N、O或S原子所代替并且所述环烷基任选地被-CH3、-OH或卤素取代。更优选的是,Z是-CO-并且R9是具有CO2H基团的-C2-C4烷基或-(C2-C4)-链烯基。
特别优选的式(I)化合物,其中R1是R3R5CH-NH-(其中R3和R5如上文所定义),并且R7是包含共3-6个碳原子的羧基烷基羰基或包含共4-6个碳原子的羧基链烯基羰基(优选包含共3-6个碳原子的羧基烷基羰基,例如-CO-(CH2)2-CO2H)并且Y是-O-。
还优选式(I)或(II)的化合物,其中R1是R3R5CH-NH-(其中R3和R5如上文所定义),X是-Cl,L1和L2是-F,n是3,R2是H或-(C1-C3)烷基,R6是-(C1-C3)烷基(优选-CH3),且Y是-O-。对于式(I)化合物而言,这些化合物优选R7为包含共3-6个碳原子的羧基烷基羰基或包含共4-6个碳原子的羧基链烯基羰基(优选包含共3-6个碳原子的羧基烷基羰基,例如-CO-(CH2)2-CO2H)。
在优选的式(I)和式(II)化合物中,R1是
优选的式(I)和式(II)的化合物包括R3为-CF3和/或R5为-C1-C3烷基。
优选的L1和L2取代基各自独立地是-F、-Cl或-Br。更优选地是,L1和L2各自是-F。
在式(I)和式(II)的化合物中,Y优选是-O-,n优选是3和/或X优选是-Cl。
特别优选的式(I)化合物是:
进一步优选的本发明的式(I)化合物是:
进一步优选的式(I)化合物还包括:
其中r是0-5的整数,包括端值。
优选的式(II)化合物包括:
更特别优选的式(II)化合物是:
从这些化合物中显而易见,本发明化合物可以包含不对称碳原子,本发明的一些化合物可以包含一个或多个不对称中心并且可以由此形成立体异构体,例如对映异构体和非对映异构体。本发明的立体异构体根据Cahn-Ingold-Prelog系统来命名。尽管没有对立体化学方面进行展示,但是本发明包含所有单个的可能的立体异构体;以及外消旋混合物和其它R和S立体异构体的混合物(比例混合物(scalemic mixture),其为不等量的对映异构体的混合物)及其可药用盐。包括在本发明范围内的是具有手性中心的通式(I)和(II)化合物的(R)和(S)异构体及其外消旋物。本发明包括所述化合物的全部立体异构体,无论其是不含其它立体异构体的还是与其它立体异构体以任何比例混合的,并因此包括例如对映异构体的外消旋混合物和异构体的非对映异构的混合物。任何化合物的绝对构型可以通过常规的X-射线晶体学方法来确定。
光学异构体可以通过标准分离技术或对映异构体的特异性合成方法以纯形式获得。因此可以获得基本上不含其相反的对映异构体的式(I)或式(II)的化合物。
本发明化合物的多晶型物、水合物和溶剂合物也包括在本发明的范围之内。
应当理解,本发明包括式(I)和(II)的化合物及其可药用盐的所有晶体和水合形式。本发明化合物的可药用盐衍生自下述的形成可药用盐的有机或无机酸:乳酸、柠檬酸、醋酸、酒石酸、富马酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、苯磺酸、L-天冬氨酸、R或S-扁桃酸、棕榈酸以及类似的已知的可药用酸。另外的盐是三氟乙酸盐(TFA)。具体而言,优选盐酸盐、富马酸盐和琥珀酸盐。
将式(I)或(II)化合物与适宜形成可药用盐的酸反应以形成所述的盐。作为形成可药用盐的代表性实例,将5-氯-6-{2,6-二氟-4-[3-(甲基氨基)丙氧基]苯基}-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]]1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺的盐酸盐用碱金属氢氧化物水溶液或碱金属碳酸盐水溶液中和,并进一步与上文所述的适宜形成可药用盐的酸在适宜溶剂中反应。可以使用的适宜溶剂包括:水、甲醇、乙醇、异丙醇或其组合等。优选的溶剂是水。
可以优选在适宜的溶剂中、在约30-100℃、优选约65-75℃下通过加热式(I)或(II)的化合物直至形成澄清溶液来形成可药用盐。一旦冷却,可以收集并干燥该化合物。
可以通过在室温下进一步与约80-100%相对湿度的水汽接触约24小时来形成二水合物。
本发明化合物可以通过以下材料来制备:(a)市售的原料;(b)可以按照文献所述方法制备的已知原料或(c)在本文的反应流程和实验方法中所述的新中间体。
反应在适合于所用的反应物和材料并且适合于完成转化的溶剂中进行。有机合成领域的技术人员可以理解,存在于分子上的多种官能团必须符合计划进行的化学转化。这使得对于合成步骤的次序判断成为必需。必须对反应性官能团的保护进行适当的考虑以避免不期望的副反应。原料中的取代基可能与一些反应条件不相容。与反应条件相容的取代基的这类限制对本领域技术人员而言是显而易见的。在适宜情况下,反应在惰性气体中进行。
制备式(I)和(II)化合物的原料包括式(III)化合物:
其中取代基如上文所定义,并且R2优选是-H。
按照于2004年9月24日提交的美国申请号10/950,543、2005年4月28日公布的美国专利公布号US2005/0090508A1和2005年4月7日公布的国际专利公布号WO2005/030775中所公开的方法来制备所述化合物,所述文献中化合物及制备方法的内容整体引入本文作为参考。
第二种原料是式HOZR9的化合物,其中Z是-CO-、-NO-、-SO2-或-PO2H-;且R9是-H、-OH、-(C1-C5)-烷基或-(C2-C5)-链烯基,所述烷基或链烯基任选地被一个或多个下述基团所取代:O、卤素、-OH、-NH2或者五或六元饱和、部分饱和或不饱和的环烷基,其中1-3个环碳原子任选地独立地被N、O或S原子所代替并且所述环烷基任选地被-CH3、-OH或卤素取代。
制备具体的式(I)化合物的反应例子如下:
其中r是0-5的整数。
或者,第二种原料是下式的化合物:
其中p是1或2;q是0或1;x是1、2或3;Z1和Z2各自独立地是-CH2-、-CO-、-NO-、-SO2-或-PO2H-;且A是-O-、-S-或-N-原子。
例如,具体的式(I)化合物可以通过下述反应进行制备:
为了制备式(I)的化合物,将两种原料在醚溶剂(包括但不限于四氢呋喃(THF)、乙醚、甲基叔丁基醚和二噁烷)存在下、在适宜条件下混合。将原料混合持续足以生成式(I)化合物的时间。在必要时可以加热该混合物以促进反应。
式(II)化合物通过以下方法制备,包括在适宜的溶剂系统中加热含有式(III)化合物的混合物至某一温度,并持续足以生成式(II)化合物的时间:
例如,式(II)的化合物可以按以下方法制备:
(c)药物组合物
本发明相应地提供了包含本发明化合物与可药用载体组合或混合的药物组合物。具体而言,本发明提供了包含有效量的本发明化合物和可药用载体的药物组合物。
根据本文所述的标准药理学实验方法的结果,本发明的化合物作为在需要这类治疗的哺乳动物中治疗、抑制或控制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的药物是有效的。本发明化合物作为在需要这类治疗的哺乳动物中通过与微管蛋白和微管相互作用并促进微管聚合来治疗、抑制或控制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的药物是有效的。本发明化合物还用于治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的癌性肿瘤。
具体而言,当将包含微管蛋白的系统与有效量的式(I)或(II)化合物接触时,导致促进微管聚合并进一步稳定微管,并且所述式(I)和(II)化合物通过促进微管聚合和稳定微管,用作治疗、抑制或控制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的药物是有效的。包含微管蛋白的系统可以存在于肿瘤细胞中,因而通过施用有效量的本发明中所述的化合物来抑制肿瘤性疾病。可以对哺乳动物并且特别是人类进行治疗。此外,所述包含微管蛋白的系统也可以存在于患者体内。在癌症治疗的情况中,可以相信的是许多肿瘤例如白血病、肺癌、结肠癌、甲状腺癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌和乳腺癌可以通过有效地施用有效量的式(I)或(II)化合物来治疗。此外,式(I)和(II)化合物用于治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的癌性肿瘤。如本文所用,癌症是指所有类型的癌症或肿瘤或者良性或恶性肿瘤。使用本文所提供方法进行治疗的优选的癌症包括癌瘤、肉瘤、淋巴瘤或白血病。癌瘤是指良性或恶性上皮细胞瘤,包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、黑色素瘤、卵巢癌或肾癌。优选的宿主是人类。
所用活性成分的有效剂量可以根据所用的具体化合物、给药模式和所治疗病症的严重性而变化。但是,一般来说每天以约0.10至约100mg/kg体重的量施用本发明化合物时获得满意的结果。最佳结果的优选方案是每天约1mg至约20mg/kg体重,并且使用这类剂量单位,其对于约70kg体重的个体而言在24小时内的总量为约70mg至约1400mg的活性化合物。
用于治疗哺乳动物的剂量方案可以进行调整以提供最佳的治疗效应。例如,可以每天施用几个分份剂量,或者可以根据治疗状况的紧迫性所示按比例地减少剂量。一种明确的实用优势是这些活性化合物可以以任何方便的方式来给药,例如通过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。
本发明的活性化合物可以优选口服给药,例如与惰性稀释剂或与可同化的食用载体一起口服,或者可以将它们封装在硬或软壳的明胶胶囊中、或将它们压制成片剂、或将其直接掺入饮食的食物中进行给药。对于口服治疗给药,这些活性化合物可以与赋形剂掺合,并以可摄取的片剂、含片、糖锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、华夫饼等形式使用。所述组合物和制剂应当包含至少0.1%的活性化合物。当然,组合物和制剂的百分比可以是不同的,可以方便地为约2%至约60%的单位重量之间。在这类治疗有效的组合物中活性化合物的量是能获得合适剂量的量。本发明优选的组合物或制剂制备为包含10-1000mg的活性化合物的口服剂量单位形式。
所述片剂、糖锭剂、丸剂、胶囊剂等还可以包含以下成分:粘合剂,例如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶;赋形剂,如磷酸二钙;崩解剂,例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等;润滑剂,如硬脂酸镁;并且可以加入甜味剂如蔗糖、乳糖或糖精,或者矫味剂如薄荷、冬青油或樱桃调味料。当剂量单位是胶囊时,除上述类型的材料之外,其还可以包含液体载体。可以存在多种其它材料,例如包衣或其它改变剂量单位的物理形式的材料。例如,片剂、丸剂或胶囊剂可以用紫胶、糖或两者共同来包衣。糖浆剂或酏剂可以包含活性化合物、蔗糖(作为甜味剂)、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯(作为防腐剂)、着色剂和矫味剂如樱桃或橙调味料。当然,用于制备任何剂量单位形式的任何材料都应该是药学上纯的并且在所用量上基本无毒。此外,可以将这些活性化合物掺入缓释制剂或剂型中。
这些活性化合物还可以经胃肠外或腹膜内给药。这些游离碱或可药用盐形式的活性化合物的溶液剂或混悬剂可以在水中适宜地与表面活性剂如羟丙基纤维素混合来制备。还可以在甘油、液态聚乙二醇及它们在油中的混合物中制备分散液。在普通条件下贮存和使用时,这些制剂包含防止微生物生长的防腐剂。
适合于注射使用的药物形式包括无菌的水溶液或分散液以及用于临时制备无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。在所有情况下,该药物形式必须是无菌的并且必须有易于注射程度的流动性。其在制备和贮存条件下必须稳定,并且必须制备成抵抗微生物如细菌或真菌的污染作用的药物形式。载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、其合适的混合物和植物油的溶剂或分散介质。
静脉内给药是本发明化合物优选的给药方式。静脉内给药的非限定性的适宜载体的实例包括生理盐水、抑制细菌的水、Cremophor ELTM(巴斯夫公司(BASF),Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲液(PBS)。该组合物必须是无菌的并且必须有易于注射程度的流动性。其在制备和贮存条件下必须稳定,并且必须制备成抵抗微生物如细菌或真菌的污染作用的药物形式。载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。防止微生物作用可以通过多种抗菌剂和抗真菌剂来完成,例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。在许多情况下,该组合物中优选包含等渗试剂,例如糖类、多元醇例如甘露醇和山梨醇以及氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶,可以实现可注射组合物的延长吸收。
如本发明所用的术语“提供有效量的化合物”是指直接施用所述化合物或施用在体内将形成有效量的所述化合物的前药、衍生物或类似物。
除上述用途之外,本发明的一些化合物用于制备本发明的其它化合物。
(d)标准的药理学实验方法
在一些标准的药理学实验方法中对本发明的实施例进行了评价,其显示出本发明化合物作为微管聚合的促进剂具有显著活性并且是抗肿瘤药。根据下述的标准药理学实验方法中的活性,本发明化合物因此用作抗癌药物。相关的癌症选自乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、黑色素瘤、上皮癌、白血病、肾癌、膀胱癌、口腔癌、喉癌、食道癌、胃癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、皮肤癌和脑癌。具体而言,本发明的化合物具有类似于紫杉醇的作用。
材料与方法
细胞培养基和试剂
培养基是含有L-谷氨酰胺的RPMI-1640,补充了10%热灭活的胎牛血清、100U/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素(基比克公司(Gibco),GrandIsland,NY)。富含微管相关蛋白(MAP)的微管蛋白,其包含约70%微管蛋白和30%的MAP(#ML113),以及高纯度的微管蛋白(纯度>99%,#TL238),两者均来自牛脑,购自细胞骨架公司(Cytoskeleton,Inc.),Denver,CO。PEM缓冲液(80mM的哌嗪-N,N’-二[2-乙磺酸],pH 6.9,1mM的乙二醇-二(β-氨基乙基醚)-N,N,N’,N’-四乙酸,1mM氯化镁)和5’-三磷酸鸟苷(GTP)也购自细胞骨架公司。[3H]紫杉醇(比活性14.7Ci/mmol)购自莫拉瑞克生物化学公司(Moravek Biochemicals)(Brea,CA)。[3H]长春碱(比活性9.60Ci/mmol)和MicroSpin G-50柱购自安玛西亚公司(Amersham Biosciences)(Piscataway,NJ)。[3H]秋水仙素(比活性76.5Ci/mmol)购自新英格兰核公司(New England Nuclear)(Boston,MA)。其它试剂购自西格玛公司(Sigma)(St.Louis,MO)。
1.细胞系
除非另有说明,人类癌细胞系均获自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(Rockville,MD)。下述对药物敏感的亲代细胞系及其衍生的抗药副本都获自发明者,列举如下:(a)S1(来自人类结肠癌细胞系LS174T的亚克隆的亲代细胞系)和衍生的表达MXR药物转运蛋白的S1-M1-3.2(本文称为S1-M1),由惠氏研究所(Wyeth Research)的L.Greenberger博士提供(Rabindran,S.K.,He,H.,Singh,M.,Brown,E.,Collins,K.I.,Annable,T.和Greenberger,L.M.Reversal of a novelmultidrug resistance mechanism in human colon carcinoma cells byfumitremorgin C.Cancer Res.,58:5850-5858,1998);(b)HL-60人类前髓细胞性白血病亲代细胞系和衍生的表达MRP1药物转运蛋白的HL-60/ADR,由堪萨斯大学的M.Center博士(McGrath,T.和Center,M.S.Adriamycin resistance in HL60 cells in the absence of detectableP-glycoprotein.Biochem.Biophys.Res.Commun.,145:1171-1176,1987)经由惠氏研究所的L.Greenberger博士提供;和(c)亲代KB-3-1(本文称为KB,从人类表皮样癌克隆)和衍生的细胞系KB-8-5和KB-V1,其分别表达中等和极高水平的MDR1(P-糖蛋白)药物转运蛋白,由国家癌症研究所(National Cancer Institute)的M.Gottesman博士(Shen,D.W.,Cardarelli,C.,Hwang,J.,Cornwell,M.,Richert,N.,Ishii,S.,Pastan,I.和Gottesman,M.M.Multiple drug-resistant human KB carcinoma cells independentlyselected for high-level resistance to cholchicine,adriamycin,or vinblastineshow changes in expression of specific proteins.J.Biol.Chem.,261:7762-7770,1986)经由惠氏研究所的L.Greenberger博士提供。
2.细胞毒性的标准药理学实验方法
该试验采用由普洛麦格公司(Promega)出售的非放射性细胞增殖检验试剂盒(Madison,WI;CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive CellProliferation Assay),是根据活细胞而非死细胞将四唑鎓盐MTS(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-甲酸基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑鎓盐,内盐)转化为水溶性的有色的甲,其可以通过分光光度法检测。将化合物在九个浓度下检测以测定IC50值。在试验方法中,将细胞通过胰蛋白酶消化(或者对于非贴壁细胞通过简单的重悬浮)来收集,洗涤,计数并以每孔200μL培养基中1000个细胞分配在96孔平底微量滴定板的孔中。此外,在单独的板上的一排孔内按上述加入细胞(“0时”板)。所有的板在37℃下于潮湿的5%CO2的空气中孵育约24小时。
第二天,将待测化合物稀释并加入各孔中。化合物以10mg/mL的浓度溶于DMSO中。在DMSO中制备每个化合物的九个系列的2倍稀释液。将10μL在DMDO中的各稀释液移至100μL培养基中,混合均匀,然后将5μL该稀释液、一式四份转移至含细胞的孔中。最终每个化合物的高浓度通常为5μM。将板子放回培养箱中孵育三天。
在将药物加入实验板时,MTS试验在“0时”板上开始进行。这就产生了“0时的MTS值”,其与药物加入时每孔的活细胞数有关。
与实验化合物一起培养三天后(共5天),完成实验板的所有孔中的MTS实验。将四份重复的样品孔的吸收值平均后除以“0时”值的平均值。将没有药物的对照孔的平均值除以“0时”值的平均值,得到由于最后三天培养期间细胞生长的MTS生色量的最大相对升高值。具有高药物浓度的对照孔的平均值除以“0时”值,得到由于细胞被全部杀死的最小相对生色量。将每个化合物的九个值对浓度绘图,产生最大和最小相对生色量之间一半的浓度作为IC50值。最有效的化合物具有最低的IC50值。
3.微管蛋白聚合的标准药理学实验方法
进行了该方法的两种不同实验,一种使用富含MAP的微管蛋白而另一种使用纯的微管蛋白。
将富含MAP微管蛋白以1.3mg/mL的浓度溶于含1mM GTP(GPEM缓冲液)的冰冷的PEM中。在使用前立即在4℃将该溶液以最高转速在Eppendorf型5415C微量离心机(布林克曼仪器公司(BrinkmannInstruments),Westbury,NY)中离心10分钟。将微管蛋白溶液加入到含有目的化合物的1/2面积的96孔板(Costar No.3696,科宁公司(Corning,Inc.),Corning,NY)的孔中。每个化合物在0.3μM终浓度下以每孔110μL的体积、一式两份进行检测。所有孔中最终的DMSO浓度是0.3%。仅接受化合物溶剂的对照反应以一式四份来进行。将板子放入在24℃恒温的SpectraMaxPlus读板器(分子设备公司(Molecular Devices Corp.),Sunnyvale,CA)中,在340nm下每分钟对每孔的吸光度(测量由于形成微管蛋白聚合物所出现的浑浊)进行测定,共测量60分钟。从各孔随后的吸光度读数减去各孔在0时的吸光度,然后将两次重复实验的数据平均。
除以下改变之外,使用纯微管蛋白的实验方法与上述方法类似。将纯的微管蛋白以1.5-1.8mg/mL(15-18μM)的浓度溶于含10%甘油且不加GTP的冰冷的PEM缓冲液中。将离心后的上清分配到含有化合物的96孔板中。每个化合物从24.3μM开始以六个系列的3倍稀释液进行检测,一式两份。将读板器在35℃下恒温。
4.竞争性结合的标准药理学实验方法
通过竞争性抑制方法来研究本发明实施例与高纯度的微管蛋白的结合。αβ-微管蛋白的异源二聚体包含三个主要类型的微管活性药物(紫杉烷、长春花生物碱/肽-位点药物和秋水仙素-位点药物)的结合位点。由于长春碱和秋水仙素优选与非聚合的异源二聚体结合,因此为了研究长春花生物碱/肽和秋水仙素位点的可能的竞争,在不适于聚合的条件下进行孵育。在另一方面,由于紫杉醇优选与微管结合,因此为了研究紫杉烷位点的可能的竞争,使用聚合的微管蛋白(微管)进行实验。
将高纯度的微管蛋白溶于不含GTP的PEM缓冲液中,以1.0-1.3mg/ml(10-13μM)的终浓度使用。将最高浓度为100μM的不同浓度的本发明实施例和终浓度为100nM或50nM的[3H]长春碱或[3H]秋水仙素分别加入所述微管蛋白溶液中。将这些溶液在24℃孵育1小时后加入MicroSpin G-50柱中,将其在Eppendorf 5415C微量离心机中以3000rpm离心2分钟。将各柱的流出液(包含微管蛋白和结合的放射性配体)的等分试样与闪烁液混合,并在液体闪烁分光光度计中计数。对照包括不含竞争剂的样品和含有未标记的长春新碱、秋水仙素或紫杉醇的样品。竞争剂抑制放射性配体结合的能力以不含任何竞争剂的对照的结合作用的百分比表示。
对于与[3H]紫杉醇竞争,将高纯度的微管蛋白溶于含0.75M谷氨酸盐和25μM双脱氧-GTP的PEM缓冲液中;蛋白终浓度为0.25-0.35mg/mL(2.5-3.5μM)。这些条件造成短的稳定的微管聚合物快速形成(Hamel,E.,delCampo,A.A.和Lin,C.M.Stability of tubulin polymers formed withdideoxyguanosine nucleotides in the presence and absence ofmicrotubule-associated proteins.J.Biol.Chem.,259:2501-2508,1984)。将该溶液在37℃孵育30分钟以使微管形成。然后将[3H]紫杉醇(终浓度2.1μM,1.2 Ci/mmol)和竞争剂(除未标记的紫杉醇为5μM以外,终浓度为20μM)加入到聚合的微管蛋白溶液的小份试样中,并在37℃继续孵育30分钟。对照包括不含竞争剂的样品和含有未标记的长春新碱、秋水仙素或紫杉醇的样品。然后将反应物于室温下在Eppendorf 5415C微量离心机中用最高转速离心20分钟以沉淀微管蛋白。将各上清的一式三份的等分试样与闪烁液混合并在液体闪烁分光光度计中计数。通过上清的放射性强度以及所测定的总起始放射性强度的数值,计算出与沉淀的微管蛋白结合的[3H]紫杉醇的量。各竞争剂抑制放射性配体与沉淀蛋白结合的能力以不含任何竞争剂的对照结合作用的百分比来表示。
5.细胞周期分析的标准药理学实验方法
通过胰蛋白酶消化来收集HeLa细胞,洗涤,计数并以每孔2mL培养基中125,000个细胞分配在12孔板的孔中。将细胞培养过夜。在DMSO中制备化合物的稀释液,并以10μL的等分试样加入每个孔中,从而产生所需终浓度。加入化合物后将细胞继续培养18小时,然后收集每孔的细胞(注意回收贴壁和未贴壁的细胞)并用CycleTEST PLUSTM试剂盒(BectonDickinson Immunocytometry Systems,San Jose,CA)处理。用FACSortTM仪器(BD公司(Becton Dickinson))进行流式细胞计量。
6.在具有人类肿瘤异种移植物的无胸腺小鼠中抗肿瘤活性的标准药理学实验方法
在无胸腺小鼠的异种移植的标准药理学实验中研究本发明化合物抑制动物肿瘤生长的活性。具有白化病背景远亲后代的雌性裸鼠来自查尔斯河实验室公司(Charles River Laboratories)(Wilmington,MA)。在动物侧腹部皮下注射目的肿瘤细胞的混悬液。几天后,从那些注射过的(已分期的)小鼠中选出肿瘤体积约150mm3的小鼠,并随机分成5-10组。将分期的当天称为第0天。将通常在盐水中配制(例外情况在表中注明)的本发明化合物以多种方案从第0或1天开始通过静脉注射或管饲口服给药,如表中所示。每个实验中的对照组按照相同方案用溶剂进行给药。每3-7天用测径器在两个正交的维度上测量肿瘤大小,并通过公式来计算肿瘤体积:体积=[(长度×宽度2)/2]。
通过将各测量日的治疗组的平均肿瘤体积除以对照组的平均肿瘤体积来获得肿瘤/对照比(T/C)。如果产生了统计学上显著的0.50或更低的T/C值,则将该治疗剂量定义为有效剂量。经单侧的学生t检验确定p值≤0.05,是达到统计学意义所必需的。如果超过10%的动物死于与化合物相关的毒性,则将该治疗剂量定义为中毒剂量。
结果
1.细胞毒性的标准药理学实验方法
1.1 使用COLO 205细胞
COLO 205是人类结肠癌细胞系,其用于本发明实施例与几种参照化合物的比较试验。该细胞系对紫杉醇和长春新碱敏感。例如,在两次独立测定中各自发现式(Ia)的化合物具有1.9μM的IC50值。以相同的实验方法,在20次独立试验中发现5-氯-6-{2,6-二氟-4-[3-(甲基氨基)丙氧基]苯基}-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基][1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺的琥珀酸盐具有17.5nM的IC50值,紫杉醇具有3.3±1.0nM(平均值±SD)的IC50值,其与文献的数值符合良好。
1.2 使用KB、KB-8-5和KB-V1细胞
KB细胞系表达不同量的P-糖蛋白(MDR1)膜泵,其造成对许多细胞毒药物包括紫杉醇和长春新碱的作用产生抵抗。亲代的KB细胞系不表达P-糖蛋白,KB-8-5表达中等水平的该蛋白,以及KB-V1表达极高水平的该蛋白。P糖蛋白识别并输出有效的细胞毒药物的能力可以通过对这些细胞系IC50值的改变来推断(Loganzo,F.,Discafani,C.M.,Annable,T.,Beyer,C.,Musto,S.,Hari,M.,Tan,X.,Hardy,C.,Hernandez,R.,Baxter,M.,Singanallore,T.,Khafizova,G.,Poruchynsky,M.S.,Fojo,T.,Nieman,J.A.,Ayral-Kaloustian,S.,Zask,A.,Andersen,R.J.,and Greenberger,L.M.HTI-286,a synthetic analogue of the tripeptide hemiasterlin,is a potentantimicrotubule agent that circumvents P-glycoprotein-mediatedresistance in vitro and in vivo.Cancer Res.,63:1838-1845,2003)。如果化合物被P糖蛋白识别,从KB到KB-8-5再到KB-V1,其IC50值将实质性地提高(数百倍);如果化合物未被识别,全部三种细胞系将具有类似的IC50值(三倍或更少的差异)。例如,如表2所示,KB-8-5细胞对紫杉醇(19倍)、长春新碱(11倍)、秋水仙素(3.4倍)和多柔比星(3.0倍)中度抗药。本发明的代表性实施例(编号1、2a、4a、20、25、30、32)显示出低于2倍的IC50值变化。
即使化合物与P糖蛋白微量的相互作用也可以用KB-V1细胞系来检测,该细胞系对此种蛋白的表达水平高于通常在来自多种肿瘤的临床样品中所发现的表达水平(Goldstein,L.J.,Galski,H.,Fojo,T.,Willingham,M.,Lai,S.L.,Gazdar,A.,Pirker,R.,Green,A.,Crist,W.,Brodeur,G.M.,Lieber,M.,Cossman,J.,Gottesman,M.M.和Pastan,I.Expression of amultidrug resistance gene in human cells.J.Natl.Cancer Inst.(Bethesda),81:116-124,1989)。KB-V1细胞对紫杉醇(>345倍)、长春新碱(>156倍)、秋水仙素(116倍)、米托蒽醌(77倍)和多柔比星(>130倍)高度抵抗。本发明的代表性实施例显示出与亲代KB细胞系相比少于3倍的IC50值变化。这表明这些化合物未被P糖蛋白识别,因此这些化合物完全克服了由P糖蛋白介导的对于杀细胞的抵抗作用。
1.3(使用HL-60和HL-60/ADR细胞)
HL-60/ADR细胞过表达多药抗药蛋白MRP1,该蛋白介导了对一些化疗药物的抵抗(Gottesman,M.M.,Fojo,T.和Bates,S.E.Multidrugresistance in cancer:role of ATP-dependent transporters.Nature Rev.Cancer,2:48-58,2002)。将本发明的代表性实施例以及参照化合物对HL-60/ADR的IC50值与敏感的亲代HL-60细胞系进行比较。结果表明本发明化合物未被MRP1识别,因此克服了由该转运蛋白介导的细胞抗药性。
1.4使用S1和S1-M1细胞
S1-M1细胞过表达MXR转运蛋白,该蛋白介导对一些化疗药物的抵抗(Gottesman,M.M.,Fojo,T.和Bates,S.E.Miltidrug resistance in cancer:role of ATP-dependent transporters.Nature Rev.Cancer,2:48-58,2002)。将本发明的代表性化合物以及参照化合物对S1-M1的IC50值与敏感的亲代S1细胞系进行比较。如果细胞未显示抵抗,这就表明化合物未被MXR识别,由此克服了由该转运蛋白介导的细胞抗药性。
2.体外实验中化合物对富含MAP的微管蛋白和纯的微管蛋白聚合的作用
在该实验中,与富含MAP的微管蛋白的对照反应显示S形吸收曲线,其特征在于三个时相:第一,停滞期,其间未发生吸光度变化;第二,聚合期,其间吸光度升高;第三,平台期,其间吸光度到达最大并发生少量变化或不再变化。聚合促进剂如紫杉醇和多西紫杉醇缩短或去除了停滞期,增加聚合期的速率,并且通常升高平台期的高度。聚合抑制剂如长春新碱或秋水仙素减少或阻止吸光度的升高。本发明化合物对聚合反应具有紫杉烷样的作用。
不加GTP的纯微管蛋白在对照反应中不显示聚合。多西紫杉醇,以及在更小的范围内而言,紫杉醇可以在这些条件下诱导纯微管蛋白聚合。本发明的几个实施例也以类似于多西紫杉醇的方式诱导不含GTP的纯微管蛋白的聚合。
3.化合物与微管蛋白的结合
通过与放射性配体[3H]长春碱、[3H]秋水仙素和[3H]紫杉醇的竞争性抑制研究来测定本发明化合物在高纯度牛脑微管蛋白中的结合位点。如果待测化合物抑制[3H]长春碱与微管蛋白异源二聚体的结合,但不抑制[3H]秋水仙素与微管蛋白异源二聚体的结合或者[3H]紫杉醇与微管的结合,则有力地证明这些化合物结合在微管蛋白的长春花生物碱/肽位点上,而不是结合秋水仙素或紫杉烷位点。如果待测化合物增强[3H]秋水仙素的结合高于对照水平,说明这些化合物与长春花生物碱/肽位点的结合可以诱导蛋白分子构象变化从而导致秋水仙素结合的增强。这种变化并不是由长春新碱自身所诱导。如果待测化合物没有减少[3H]紫杉醇与微管的结合,这说明它们既不与[3H]紫杉醇竞争结合位点也不对[3H]紫杉醇所结合的微管进行解聚。
4.化合物对细胞周期进展的作用
本方法测定了细胞群体在细胞周期的G1、S和G2/M相中的细胞百分比。其使用碘化丙啶对细胞核染色并用流式细胞仪进行分析。该方法还提供了通过测量出现具有亚-G1期DNA数量的微粒数来估计由药物治疗引起的细胞凋亡的方法。在高浓度下(即高于约5×IC50浓度),微管活性化合物特征性地捕捉细胞周期中G2/M相的细胞,原因在于其对构成有丝分裂纺锤体的微管的中断作用。然而,在较低浓度(接近IC50值)下、在一些细胞系如HeLa细胞系中,观察到紫杉烷类(例如紫杉醇和多西紫杉醇)在G2/M阻断前诱导大量细胞凋亡(Jordan,M.A.,Wendell,K.,Gardiner,S.,Derry,W.B.,Copp,H.和Wilson,L.Mitotic block induced in HeLa cells bylow concentrations of paclitaxel(Taxol)results in abnormal mitotic exitand apoptotic cell death.Cancer Res.,56:816-825,1996);这与微管解聚剂如长春新碱和秋水仙素不同。细胞在多种浓度下培养18小时后,将本发明的代表性实施例在本方法中进行试验,观察它们是否符合“稳定剂”(紫杉烷)或“去稳定剂”(长春新碱、秋水仙素)的曲线特征。本发明范围内的化合物符合“稳定剂”的曲线特征。
5.化合物在体内试验中的抗肿瘤活性
进行了大量无胸腺小鼠的人类肿瘤异种移植物实验,以评价本发明化合物在体内试验中抑制肿瘤生长的能力。
本发明化合物可以通过对抗LOX黑素瘤异种移植物、DLD1结肠癌、U-87 MG胶质母细胞瘤异种移植物、A549肺癌和LoVo人结肠癌异种移植物来进行检测。
本发明化合物显示出对多种培养的人类癌细胞系(包括由于药物转运蛋白过表达而对紫杉醇和长春新碱抗药的细胞系)有效的细胞毒活性。本发明化合物以类似紫杉烷的方式提高富含MAP微管蛋白聚合的起始速率,并且不同于解聚剂如长春花生物碱和秋水仙素的抑制作用。本发明化合物还诱导不含GTP的纯微管蛋白的聚合。作为紫杉烷类而非长春花生物碱或秋水仙素的特征,本发明化合物的另一特性是其在低浓度(大约为细胞毒的IC50值)下进一步诱导靶细胞凋亡,而没有细胞周期阻断。本发明的代表性化合物在无胸腺小鼠中抑制一些人类肿瘤异种移植物(包括抗紫杉烷类和长春花生物碱类的肿瘤)的生长。
实施例
下述实施例用来制备本发明化合物的代表性的非限定性实例,其用作微管聚合促进剂和抗癌药物。
实施例1
S-N-(3-{4-[5-氯-7-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基]-3,5-二氟-苯氧基}-丙基)-N-甲基-琥珀酰胺酸(化合物1)
Claims (59)
1.式(I)的化合物或其可药用盐或立体异构体:
其中
R1是
或任选地被R8取代的-(C6-C8)-环烷基;
X是-Cl、-F或-Br;
Y是-O-、-S-、-CH2-或-NR4-;
L1和L2各自独立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3;
R3是-CF3或-C2F5;
R4、R5和R6各自独立地是-H或-(C1-C3)-烷基;
R7是-ZR9,其中Z是-CO-、-NO-、-SO2-或-PO2H-;并且R9是-H、-OH、-(C1-C5)-烷基或-(C2-C5)-链烯基,所述烷基或链烯基任选地被一个或多个下述基团所取代:-O-、卤素、-OH、-NH2或者五或六元饱和、部分饱和或不饱和的环烷基,其中1-3个环碳原子任选地独立地被N、O或S原子所代替并且所述环烷基任选地被-CH3、-OH或卤素所取代;且R8是(C1-C3)-烷基。
2.如权利要求1所述的化合物,其中R6是-(C1-C3)烷基。
3.如权利要求2所述的化合物,其中R6是-CH3。
4.如权利要求1、2或3所述的化合物,其中R7是-ZR9,其中Z是-CO-或-NO-;且R9是-C1-C5烷基,其任选地被一个或多个下述基团所取代:O、卤素、-OH、-NH2或者五或六元饱和、部分饱和或不饱和的环烷基,其中1-3个环碳原子任选地独立地被N、O或S原子所代替并且所述环烷基任选地被-CH3、-OH或卤素所取代。
5.如权利要求4所述的化合物,其中Z是-CO-。
6.如权利要求5的化合物,其中R9是-(CH2)2COOH或-(CH)2COOH。
8.如权利要求7所述的化合物,其中R3是-CF3且R5是-C1-C3烷基。
9.如权利要求1-8中任意一项所述的化合物,其中L1和L2各自独立地是-F、-Cl或-Br。
10.如权利要求9所述的化合物,其中L1和L2各自是-F。
11.如权利要求1-10中任意一项所述的化合物,其中Y是O。
12.如权利要求1-11中任意一项所述的化合物,其中n是3。
13.如权利要求1-12中任意一项所述的化合物,其中X是-Cl。
18.如权利要求17所述的化合物,其中R6是-C1-C3烷基。
19.如权利要求18所述的化合物,其中R6是-CH3。
20.如权利要求17、18或19所述的化合物,其中R2是-H。
21.如权利要求17-20中任意一项所述的化合物,其中R2是-(C1-C3)烷基。
22.如权利要求17-21中任意一项所述的化合物,其中R1是
23.如权利要求22所述的化合物,其中R3是-CF3且R5是-C1-C3烷基。
24.如权利要求17-23中任意一项所述的化合物,其中L1和L2各自独立地是-F、-Cl或-Br。
25.如权利要求24所述的化合物,其中L1和L2是-F。
26.如权利要求17-25中任意一项所述的化合物,其中Y是-O-。
27.如权利要求17-26中任意一项所述的化合物,其中n是3。
28.如权利要求17-27所述的化合物,其中X是-Cl。
31.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗或抑制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法,该方法包括向需要其的哺乳动物施用有效量的如权利要求1-16中任意一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐。
32.在包含微管蛋白的系统中促进微管蛋白聚合的方法,该方法包括将所述包含微管蛋白的系统与有效量的如权利要求1-16中任意一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐接触。
33.在包含微管蛋白的系统中稳定微管的方法,该方法包括将所述包含微管蛋白的系统与有效量的如权利要求1-16中任意一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐接触。
34.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的肿瘤的方法,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的如权利要求1-16中任意一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐。
35.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗、抑制肿瘤生长或根除肿瘤的方法,其中所述肿瘤对至少一种化疗药物抗药,该方法包括向所述哺乳动物提供有效量的如权利要求1-16中任意一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐。
36.包含药学上有效量的如权利要求1-13中任意一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
37.包含药学上有效量的如权利要求14、15或16中所定义的式(I)化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
38.包含药学上有效量的如权利要求17-28中任意一项所定义的式(II)化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
39.包含药学上有效量的如权利要求29中所定义的式(II)化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
40.包含药学上有效量的如权利要求30中所定义的式(II)化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
41.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗或抑制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法,该方法包括向需要其的哺乳动物施用有效量的如权利要求17-30中任意一项所定义的式(II)化合物或其可药用盐。
42.在包含微管蛋白的系统中促进微管蛋白聚合的方法,该方法包括将所述包含微管蛋白的系统与有效量的如权利要求17-30中任意一项所定义的式(II)化合物或其可药用盐接触。
43.在包含微管蛋白的系统中稳定微管的方法,该方法包括将使所述包含微管蛋白的系统与有效量的如权利要求17-30中任意一项所定义的式(II)化合物或其可药用盐接触。
44.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的肿瘤的方法,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的如权利要求17-30中任意一项所定义的式(II)化合物或其可药用盐。
45.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗、抑制肿瘤生长或根除肿瘤的方法,其中所述肿瘤对至少一种化疗药物抗药,该方法包括向所述哺乳动物提供有效量的如权利要求17-30中任意一项所定义的式(II)化合物或其可药用盐。
46.如权利要求31所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
47.如权利要求34所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
48.如权利要求35所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
49.如权利要求41所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
50.如权利要求44所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
51.如权利要求45所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
52.如权利要求1-16或17-30中任意一项所述的化合物在制备治疗或抑制哺乳动物中癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的药物中的用途。
54.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗或抑制癌性肿瘤细胞生长和相关疾病的方法,该方法包括向需要其的哺乳动物施用有效量的如权利要求53中所定义的组合物。
55.在包含微管蛋白的系统中促进微管蛋白聚合的方法,该方法包括将所述包含微管蛋白的系统与有效量的如权利要求53中所定义的式(II)化合物接触。
56.在包含微管蛋白的系统中稳定微管的方法,该方法包括将使所述包含微管蛋白的系统与有效量的如权利要求53中所定义的式(II)化合物接触。
57.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗或预防表现出多药抗药性(MDR)或由于MDR而抗药的肿瘤的方法,该方法包括向所述哺乳动物施用有效量的如权利要求53中所定义的式(II)化合物。
58.在需要这类治疗的哺乳动物中治疗、抑制肿瘤生长或根除肿瘤的方法,其中所述肿瘤对至少一种化疗药物抗药,该方法包括向所述哺乳动物提供有效量的如权利要求53中所定义的式(II)化合物。
59.如权利要求54、57和58中任意一项所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US75116605P | 2005-12-16 | 2005-12-16 | |
US60/751,166 | 2005-12-16 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101370813A true CN101370813A (zh) | 2009-02-18 |
Family
ID=38006979
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA2006800527348A Pending CN101370813A (zh) | 2005-12-16 | 2006-12-15 | 用作抗癌药物的6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶类的二聚体和加合物 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1963330A1 (zh) |
JP (1) | JP2009519954A (zh) |
CN (1) | CN101370813A (zh) |
AU (1) | AU2006329862A1 (zh) |
BR (1) | BRPI0619918A2 (zh) |
CA (1) | CA2633962A1 (zh) |
WO (1) | WO2007075465A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11623927B2 (en) | 2018-03-02 | 2023-04-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Substituted [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidines for stabilizing microtubules |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CZ20024150A3 (cs) * | 2000-06-30 | 2003-09-17 | Wyeth | Substituované triazolopyrimidiny |
MXPA06003206A (es) * | 2003-09-24 | 2006-06-23 | Wyeth Corp | 6-[(sustituido)fenil]triazolopirimidinas como agentes anticancer. |
-
2006
- 2006-12-15 BR BRPI0619918-6A patent/BRPI0619918A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2006-12-15 CN CNA2006800527348A patent/CN101370813A/zh active Pending
- 2006-12-15 CA CA002633962A patent/CA2633962A1/en not_active Abandoned
- 2006-12-15 WO PCT/US2006/048013 patent/WO2007075465A1/en active Application Filing
- 2006-12-15 EP EP06845599A patent/EP1963330A1/en not_active Withdrawn
- 2006-12-15 JP JP2008545859A patent/JP2009519954A/ja active Pending
- 2006-12-15 AU AU2006329862A patent/AU2006329862A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1963330A1 (en) | 2008-09-03 |
CA2633962A1 (en) | 2007-07-05 |
JP2009519954A (ja) | 2009-05-21 |
AU2006329862A1 (en) | 2007-07-05 |
WO2007075465A1 (en) | 2007-07-05 |
BRPI0619918A2 (pt) | 2011-10-25 |
WO2007075465A8 (en) | 2008-05-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103097361B (zh) | 1-(芳基甲基)喹唑啉-2,4(1h,3h)-二酮作为parp抑制剂及其应用 | |
US20090214529A9 (en) | Kinesin inhibitors | |
CN104066723B (zh) | 1-(芳基甲基)-5,6,7,8-四氢喹唑啉-2,4-二酮和相关化合物及其应用 | |
JP2013519725A (ja) | 二環式化合物および二重c−SRC/JAK阻害剤としてのそれらの使用 | |
CN108707151B (zh) | 嘧啶并-哒嗪酮化合物及其用途 | |
IL218115A (en) | 2jak inhibitors and their use in the preparation of medicines for the treatment of myelin growth and cancer | |
CN116143776A (zh) | Parp1抑制剂及其应用 | |
CN103224496A (zh) | 三环类PI3K和/或mTOR抑制剂 | |
CN100519559C (zh) | 作为抗癌剂的6-[(经取代的)苯基]三唑并嘧啶 | |
CN101058573B (zh) | 2-腙代三嗪类化合物,其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物及其用途 | |
CN101370813A (zh) | 用作抗癌药物的6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶类的二聚体和加合物 | |
US7915266B2 (en) | 6-aryl-7-halo-imidazo[1,2-a]pyrimidines as anticancer agents | |
CN108358894B (zh) | 一种抑制组蛋白乙酰转移酶的化合物及其制备方法与应用 | |
CN117412973A (zh) | 含氮稠合杂芳双环化合物作为usp1抑制剂及其应用 | |
CN102731416A (zh) | 1-(芳基甲基)-喹唑啉-2,4-二酮作为parp抑制剂及其应用 | |
CN103582645B (zh) | 二氢氧茚吲哚类似物 | |
CN116041371B (zh) | 7-羰基星孢菌素衍生物及其制备方法和应用 | |
CN115124528B (zh) | 一种吡咯并吡啶类化合物及其制备方法和医药应用 | |
CN105732590B (zh) | 嘧啶并饱和脂肪环二胺类化合物及其用途 | |
CN100494177C (zh) | 具有抗肿瘤活性的双酰胺基杂环类衍生物及其制备方法和用途 | |
WO2024041634A1 (zh) | 三环类化合物及其应用 | |
WO2023033741A1 (en) | Compounds useful in modulation of ahr signalling | |
CN117065033A (zh) | 一种治疗三阴乳腺癌的联合用药物 | |
CN117447477A (zh) | 一种咪唑并四嗪类化合物、制备方法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20090218 |