CN101361774B - 一种含有褐藻多糖硫酸酯和人参的组合物和其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种组合物，该组合物含有褐藻多糖硫酸酯和人参。本发明公开了该组合物在防治化学性肝损伤、调节免疫力药品和保健品中的应用。发明人的研究表明，本发明组合物应用于药品或者保健品长期服用对调节人体免疫系统平衡、增强对疾病抵御能力、治疗化学性肝损伤均有良好的效果。本发明同时公开了组合物的制备工艺。

Description

一种含有褐藻多糖硫酸酯和人参的组合物和其应用

技术领域

本发明公开了一种组合物，特别公开了一种以褐藻多糖硫酸酯和人参或其有效成分为活性成分的药物组合物或保健品。进一步的，本发明公开了组合物在化学性肝损伤、免疫力调节的应用。

背景技术

化学性肝损伤主要来自于工作环境、食物、药品和大量饮酒带来的有害物质，这些物质类型涵盖无机毒物(重金属、氯化物等)、农药、药品和酒精等。作为人体重要解毒器官的肝脏，具有肝动脉和肝静脉两个渠道血液供应，化学物质可通过胃肠道门静脉或者体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到这些物质中化学毒物的损害。自工业革命以来，大自然和工业生产中存在一些对肝脏有毒性的物质，研究人员称之为“亲肝毒物”，这些物质在人体中易导致患病，潜伏期短，病变过程与吸入剂量或者感染剂量呈现正相关，可引起肝脏细胞不同程度的坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。工业生产中的原料、中间产物和最终产品均可能具有肝毒性，因此需要十分警惕化学性肝损伤的发生。同时这也要求研究人员能够研究一些有效的防治肝损伤的药品和保健品。

肝脏是人体的重要器官，目前人类肝脏疾病患者越来越多，但是迄今为止尚缺乏疗效明显兼具副作用小的药物。一般认为，肝细胞损伤是多种作用的结果。化学物质(比如氯化碳、酒精等)所致肝损伤的病理机制多认为与肝内脂肪酸代谢障碍和自由基及其引发的过氧化有关。

研究认为，化学毒物可能通过如下病理机制侵染肝脏：

1.脂肪变性、四氯化碳、黄磷等干扰脂质蛋白的合成转运路径，最后形成脂肪肝。

2.脂质过氧化反应，这是一种毒性肝损伤的特定表现形式，例如四氯化碳等在体内代谢时产生一种氧化能力很强的中间产物，这种中间产物作用于生物细胞膜上的脂质形成过氧化，从而破坏膜的磷脂层空间结构，导致细胞的结构和功能发生病理性改变。

3.胆汁郁积反应，主要源于肝脏细胞膜和微绒毛受损，引起胆汁酸排泄障碍。

化学物质导致的肝损伤可由其在肝细胞内的物质代谢引起。比如细胞内的酒精能够通过升高NADH/NAD的值抑制线粒体三羧酸循环，导致肝内脂肪酸代谢障碍，氧化减弱以及NADH增多，促进了脂肪酸的合成，使得中性脂肪在肝细胞内堆积发生脂肪变性，严重的脂肪变性甚至导致肝细胞坏死和肝内纤维组织增生。肝损伤疾病，尤其是脂肪肝和肝功能异常多伴随血脂水平增高，这揭示脂肪酸代谢紊乱与脂肪肝和肝损伤有一定关系。

近年来的研究证实脂质过氧化是一个重要的化学性肝损伤路径，体内过氧化反应增强可引起机体抗氧化能力下降，从而自由基的生成增加。随之而来的自由基不仅氧化细胞膜脂质，更重要的是会氧化细胞膜蛋白，从而导致肝细胞功能和结构失常。SOD和CAT等自由基清除剂可分别清除脂质过氧化作用中产生的具备高度反应活性的超氧阴离子和羟自由基，防治脂质过氧化导致的细胞损伤。

免疫系统是人体内最重要的生物系统之一，其功能对人体至关重要。一旦出现免疫系统功能失调，将会导致人体对疾病体康能力弱化。近年来免疫失调、免疫功能低下人群比例越来越大，长期以往导致免疫系统疾病患者急剧增多。免疫系统是人体抵御病原菌侵犯最重要的保卫系统，这个系统由免疫器官(骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾等)、免疫细胞(淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、血小板等)，以及免疫分子(补体、免疫球蛋白、细胞因子等)组成。它是机体防卫病原体入侵最有效的武器，但其功能的亢进会对自身器官或组织产生伤害。在很多自身疾病中，免疫系统功能失常往往是一个重要致病原因。免疫系统各组分功能的正常是维持机体免疫功能相对稳定的保证，任何组分的缺陷或功能的亢进都会给机体带来损害。

免疫系统各组分广布全身，错综复杂，特别是免疫细胞和免疫分子在机体内不断地产生、循环和更新。免疫系统具有高度的辨别力，能精确识别自己和非己物质，以维持机体的相对稳定性；同时还能接受、传递、扩大、储存和记忆有关免疫的信息，针对免疫信息发生正和负的应答并不断调整其应答性，因此免疫系统功能的失调也会对人体极为不利：人体的识别能力异常容易导致过敏现象的发生(使用某种食物、注射药物出现过敏反应，甚至导致休克)，反之则会引起反复感染；人体的自我稳定能力异常，会使免疫系统对自身的细胞作出反应，引发自身免疫疾病。由此可见，人体免疫系统对人类的健康起着举足轻重的作用，如果它的功能不稳定，人类很有可能会被病毒、细菌这些病原体侵害、折磨。

海藻是海洋水产资源的重要组成部分，海藻门褐子纲海带目海带科海带属的海带(Lam/nar/ajaponica aresch)是产量最高的海藻，我国的海带产量位居世界首位。海带又称海洋蔬菜，含有丰富的功能性物质，如碘、甘露醇、维生素(A、B、C、F)、牛磺酸以及人体所需要的微量元素硒、钴、铬，是一种既有食用价值，又有药用、保健、工业、农业价值的大型藻类产品。

褐藻多糖硫酸酯是一类硫酸化的多糖，存在于褐藻中，根据国际命名原则统一称为fucoidan(褐藻糖胶或褐藻聚糖，岩藻聚糖，褐藻多糖硫酸酯)。现在人们对褐藻多糖硫酸酯的组成有了较为清晰地了解，它是一类化学组成和结构非常复杂的多糖，以岩藻糖和硫酸基为主，随着藻类的不同还含有半乳糖，木糖，糖醛酸等其他成分。海带Fucoidan由岩藻糖。半乳糖，木糖，糖醛酸，阿拉伯糖等单糖组成。以岩藻糖和半乳糖为主，二者比例大约为3：1。

研究证实褐藻多糖硫酸酯能增加某些抗氧化酶的活性，减少自由基的产生，从而减轻自由基对肝脏、肾脏组织的攻击。因此，通过清除自由基及抗氧化作用，褐藻多糖硫酸酯可发挥肝保护作用。另外，褐藻多糖硫酸酯在体外能直接清除超氧阴离子自由基和羟基自由基(·0H)，是一种很好的抗氧化剂；在体内也有较强的清除活性氧自由基的能力，能显著降低血清和组织中高脂质过氧化物(LPO)的含量，显著增强血清和组织中SOD活性。

海带硫酸多糖对小鼠腹腔巨噬细胞激活及细胞毒作用的影响(聊城大学学报，2004.17(2)56-57)研究认为海带硫酸多糖能激活小鼠腹腔巨噬细胞，增强其免疫机能，对抵抗和杀死肿瘤细胞具有积极作用。

海带硫酸多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用(中国免疫学，2000.2(16))研究了一种包含L-岩藻糖、D-半乳糖等平均分子量为15000D的海带多糖对小鼠吞噬细胞的激活作用。以肿瘤抑制率衡量，抑制肿瘤细胞病变有效率达到了86.5％。说明海带多糖可以有效激活巨噬细胞，分泌细胞毒效应分子，提高巨噬细胞过氧化物酶活性以及吞噬功能。

已有多篇文献公开了褐藻多糖硫酸酯的制备方法。日本专利昭46-2248采用十六烷氯化吡啶或十六烷三甲基溴化铵与褐藻多糖硫酸酯反应成季胺盐复合物，再利用该复合物对盐的溶解度差异，用乙醇、甲醇和离子交换树脂处理，纯化除去褐藻胶、中性多糖和其它杂质，而得到比较纯化的褐藻多糖硫酸酸酯。CN1129109A则公开了由干海带浸泡、数次过滤、二次乙醇提取、一次乙醇洗涤、配合调节PH范围等的碱凝析法。CN1344565A则公开了另一种制备方法，包括原料预处理、控温搅拌浸提、离心、浓缩、乙醇沉淀、无水乙醇脱水等步骤。CN1517356A则将岩藻聚糖硫酸酯配制成水溶液，加入过氧化氢、次氯酸或亚硝酸及其盐，将所得混合溶液加热，用截留分子量3000-5000的膜超滤，得到岩藻聚糖硫酸酯低聚糖。CN1616494A以天然海藻硫酸多糖为原料，将海藻硫酸糖溶液中加入抗坏血酸和过氧化氢，控制反应温度，恒温降解时间为0.5-3hr，再透析或超滤，减压浓缩，制得4-100KDa的低分子量海藻硫酸多糖产物。另外，CN1670028A、CN1392160A、CN1197674A也分别公开了采用絮凝等方法制备海藻多糖。在本发明中，以上发明公开的技术方案均可被引入获得本发明所用的褐藻多糖硫酸酯。

人参是一种常见的中药材，本发明所述的人参是指植物分类学上五加科人参属的植物，包括人参、西洋参、三七、苦参、党参、太子参等。人参是一种名贵中药，《神农本草经》将其列为上品，言其“补五脏、安精神、定魂魄、祛邪气、明目、开心益智”。人参在临床上一直以治疗慢性虚损而著称，人参中含有人参皂苷、多种氨基酸、多糖类、低分子肽类、维生素等成分，单体有人参皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1等，人参皂苷是其增强免疫功能的活性成分。

人参对物理、化学、生物等各种有害刺激因素有非特异性的抵抗能力，可以使紊乱的人体机能恢复正常，主要表现在血压、肾上腺、甲状腺机能和血糖方面的双向调节作用。现有的动物实验证明，人参皂苷对小鼠的体液免疫和细胞免疫均有刺激作用，能促进周围血液中的白细胞增加。在白细胞减少时，这种作用尤为明显。还能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高对血液中惰性胶体颗粒、金黄色葡萄球菌、鸡血细胞等吞噬能力。剂量增大，给药次数越多，作用越强。业已证实人参皂苷具有刺激体液免疫和细胞免疫的作用，能增强机体免疫功能，防止多种原因引起的白细胞下降。人参皂苷能增强网状内皮细胞和巨噬细胞的吞噬功能。即使停药后激活状态也可保持一周左右。人参还可促进抗体的生成，增加血清免疫球蛋白IgG，IgA，IgM的含量。人参皂苷Rg1能选择性地增强老年大鼠免疫功能。

目前针对人参皂苷防治化学性肝损伤的文献报道和实际应用并不多。人参皂苷CK对CCl₄致慢性肝损伤的影响(时珍国医国药，2006.17(1)38-39)用CCl4致大鼠慢性肝损伤模型，观察人参皂苷CK(0.3，1，3mg/kg)对大鼠血清天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase，ALT)、丙氨酸转氨酶(alanine transaminase，AST)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及透明质酸(hyaluronic acid，HA)、III型前胶原(pre-collagen III，PCIII)的影响，并对肝脏组织进行病理学观察证实了人参皂苷对肝损伤的防治效果。

由于人参被认为是一种珍贵的中药，多年来研究人员提出了多种提纯人参皂苷的技术方案。不同提取方法对人参皂苷提取率的影响(吉林农业大学学报，2003.25(1)71-72)研究了采用甲醇、乙醇、超声波等提取方法对人参皂苷提取率的影响。中国专利申请CN200410010936.9、CN200610093608.9、CN200610093612.5、CN200610201364.1等均研究了从人参中提取皂苷的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种的组合物、制剂，同时本发明也公开了该组合物、制剂的制备方法、应用。

申请人研究发现通过将褐藻多糖硫酸酯、人参组合，本发明组合物防治化学性肝损伤、调节免疫力具有协同的效果。安全研究发现，本发明制剂没有明显的毒性反应，适合长期服用。

本发明在本领域第一次引入褐藻多糖硫酸酯和人参或其有效成分进行组合用于作为防治化学性肝损伤的组合物。本发明申请人通过大量实验研究首次确定了将褐藻多糖硫酸酯和人参或其有效成分组成的组合物用于防治化学性肝损伤的可行性。

本发明在本领域第一次引入褐藻多糖硫酸酯和人参组合物用于调节人体免疫力。本发明申请人通过大量实验研究首次确定了将褐藻多糖硫酸酯和人参组合物用于调节人体免疫力的可行性。

本发明技术方案提供了一种褐藻多糖硫酸酯和人参的组合物，包含活性成分褐藻多糖硫酸酯和具有明显协同作用活性的人参。将本发明组合物用于药物制剂时，还可选择性的包括药学上可接受的载体。相应的，本发明提供了将该组合物用于防治化学性肝损伤的用途。

在本发明提供的技术方案中，提供了本发明组合物的口服制剂，其中含有本发明组合物和药学上可接受的载体。褐藻多糖硫酸酯和人参或其有效成分重量份数比可以是1：100-100：1，优选为1：30-30：1，最优选为1：10-10：1。

本发明所用的褐藻多糖硫酸酯取材于海藻类生物，包括任何可以提供褐藻多糖硫酸酯的植物，包括马尾藻、裙带菜、羊栖菜、鼠尾藻、海黍子、昆布、泡叶藻或墨角藻等，优选的植物为海带，无论是人工养殖的还是天然生长的。从这些植物中获得的褐藻多糖硫酸酯方法可以引用背景技术中所述的技术方法，所获得的分子量在十万数量级水平上。从海带、马尾藻、海黍子中获得的褐藻多糖硫酸酯平均分子量分别为350KD、550KD、980KD。本发明应用时，可以使用这些分子量比较高的褐藻多糖硫酸酯，优先选用分子量在5000D-200KD之间的低分子量的褐藻多糖硫酸酯，所用低分子量褐藻多糖硫酸酯可以从海藻中提取也可以从高分子量褐藻多糖硫酸酯解聚而来。需要指出的是，随着技术的持续进步，可供本发明应用的褐藻多糖硫酸酯分子量变化是落在本发明范围内的。所用的褐藻多糖硫酸酯的纯度不小于50％，优选为不小于70％，更优选为不小于90％，最佳是不小于95％。

根据所用藻类种类不同，所获得的褐藻多糖硫酸酯主要的基团岩藻糖、硫酸基含量存在一定的差异，但这种差异不影响本发明应用于防治化学性肝损伤，所带来的只是保健效果的强化或者弱化，这是属于本发明范围之内的。本发明所指的褐藻多糖硫酸酯涵盖化学上所普遍接受的褐藻多糖硫酸酯定义的一类化学物质。

本发明所用人参有效成分不受提取工艺的限制，可以引用多种方法来获得。本发明背景技术中公开的技术方案均可以用来获得本发明所述的人参。

本发明应用的人参有效成分是人参中的皂苷，因此本发明所应用的人参可以是人参药材进行粉碎后的药粉、或将人参提取后采用其提取物、或者可以直接采用人参的活性成分人参皂苷。这些人参皂苷单体包括Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg₁、Rh₂、Rg₃、R1等的一种或多种的组合。具体到人参属下面的植物，比如人参、三七、西洋参等上述各成分类别和含量会有所区别。人参属人参主要含有Rg，三七主要含有Re、R1，西洋参主要含有Rb1、Rb2、Rd、Re、Rg₁。在结构和功效上人参属植物提取的皂苷单体是相似的，因此本发明所指人参涵盖了五加科人参属植物可获得的所有人参皂苷单体。本发明所用人参优选人参提取物，更优选采用人参的水溶性或脂溶性提取物，最优选的人参提取物为人参的醇或/和水提取物。

在本发明中，一个优选的提取工艺可以是：将人参叶用水煎煮后获得的煎煮液过吸附柱，用乙醇洗脱，优选浓度为50％-95％乙醇，用量为5-10倍量，温度4-30℃，1-5小时，回流提取3-8次即可得人参提取物。

本发明发明人同时研究了将褐藻多糖硫酸酯人参组合物加入维生素C所带来的效果改善，申请人的实验显示维生素C可以在本发明组合的基础上进一步对本发明效果有所提高，因此本发明还包括着这样一个技术方案：在本发明组合物的基础上，加入适量维生素C来改善本发明的实施效果。

本发明组合物可以直接制成制剂，也可以选择性地加入药学载体然后制成口服制剂。本发明组合物对防治人体化学性肝损伤、调节免疫力具有积极作用，因此可以适用于亚健康人群做保健品。本发明所述的保健品泛指可以提高和保护人体健康状态的产品，包括食物和饮料。所指的食物包括但不限于小麦制品、淀粉制品、肉类制品、植物提取物、奶乳、保健糖等；所指的饮料包括所有人体可饮用的液体制品包括普通的饮用饮料和用于提高特定机能的功能饮料，比如运动饮料。

本发明在应用于保健品时，还可以在最终制备为产品时加入其他营养成分使用，这些营养物质包括淀粉、葡萄糖、乳糖、甘露糖、蔗糖、糖浆、蜂蜜、多种氨基酸、钙铁锌、维生素等。

本发明保健品具体生产时，可以与辅料结合使用。辅料可包括赋形剂、抗氧剂、PH调节剂、防腐剂、等渗剂等任何营养学上可接受的、安全性有保证的辅料。

本发明的组合物可以制备为多种类型，包括胶囊、片剂、粉剂、颗粒剂、口服液或糖浆等，优选为胶囊和口服液。改变产品的外表存在形式属于本领域技术人员可以联想到的技术方案，因此改变最终产品的形状属于本发明的覆盖范围。

申请人对本发明组合物功能进行了研究，发现与褐藻多糖硫酸酯或人参单独应用相比，本发明组合物应用可显著降低肝脏、脑组织和血液中的过氧化物含量、提高体内抗氧化剂活性、清除自由基和脂质过氧化作用，具有协同的疗效。长期服用本发明产品具有护肝作用，并对预防和/或治疗化学性肝损伤有积极作用。本发明应用可显著提高调节人体免疫力的效果，并且能同时调节体液、淋巴、细胞等多个免疫系统，具有协同的疗效。

具体实施方式

如下实施例旨在说明本发明具体实施方案，并不限定本发明保护范围。需要特别指出的是，以下制备实施例中所述的人参提取物，是人参的醇提取物，优选采用本发明说明书第6页中优选的提取方法提取获得，其中含有多种人参皂苷成分。当然，组合物中还可直接采用人参药材或市售的人参提取物或人参皂苷或人参单体皂苷，这些均在本申请的保护范围之内。

制备实施例1

褐藻多糖硫酸酯     2mg

人参提取物         20mg

淀粉               18mg

葡萄糖             15mg

微晶纤维素         10mg

硅胶               2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

制备实施例2

褐藻多糖硫酸酯     20mg

人参提取物         8mg

淀粉               20mg

甘露醇             22mg

葡萄糖             15mg

微晶纤维素         10mg

硅胶               2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

制备实施例3

褐藻多糖硫酸酯     50mg

人参提取物         6mg

淀粉               24mg

甘露醇             24mg

葡萄糖             15mg

微晶纤维素         10mg

硅胶               3mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

制备实施例4

褐藻多糖硫酸酯     40mg

人参提取物          10mg

血红素铁            7mg

维生素C             8ug

叶酸                300ug

将上述成分混匀研磨成粉末溶解于去离子水至1000ml，进行密封、灭菌和分装，制备为符合特定规格的口服液。

在大规模生产中本发明制备口服液可以在用量上进行放大，充分溶解后进行罐装然后密封、灭菌和分装为符合规格的口服液，比如500ml，1L等。

对比实施例1

褐藻多糖硫酸酯    20mg

淀粉              20mg

甘露醇            24mg

葡萄糖            16mg

微晶纤维素        10mg

硅胶              2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

对比实施例2

人参提取物       8mg

淀粉             20mg

甘露醇           20mg

葡萄糖           16mg

微晶纤维素       10mg

硅胶             2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

实验例1

实验材料：小白鼠，健康状况良好。本发明组合物，褐藻多糖硫酸酯:人参提取物4:1，溶于水制为混悬液。

实验项目：急性毒性试验，30天喂养试验

实验方法：

1.急毒性试验：选择小白鼠40只，雌雄各20只，体重为18-22g。雌雄小鼠各随机分成四个剂量组16.00，7.27，3.31，1.50g/KG(bw)，小鼠灌胃后连续观察15d，记录毒性表现和死亡情况。

2.30d喂养试验：采用的样品同急毒性试验，选用体重为55-70g的Wistar大鼠，将大鼠分为对照组和三个剂量组，高剂量B组采用4.50g/kg(bw)，中剂量C组0.90g/kg(bw)，低剂量D组0.16g/kg(bw)，每组十只大鼠，对照A组喂食正常基础饲料，饲料摄入量按照大鼠体重10％计算。连续观察三十天。观察指标包括：

(1)临床观察：动物的一般表现、行为、中毒症状、死亡症状，每周称取一次体重和摄入量，计算食物总利用率。

(2)血常规及生化指标：在试验第三十一天微静脉取血，测定血红蛋白HGB、红细胞RBC、白细胞WBC。

试验结果：

1.表1：小鼠急毒性试验结果

假定生产的保健品以成人60kg体重日摄入量0.05g/kg.bw，对照我们采用的最高对照组，相当于成人摄入量的320倍。试验观察十四天未见中毒症状，死亡数为零。受试物对两种性别的小鼠急毒性LD₅₀均大于15.00g/kg.bw.根据现行的毒性分级，属于无毒级别。

2.30天喂养试验结果

(1)对大鼠体重的影响

表2对大鼠体重的影响

由上表可知，各组动物生长正常。与对照组比较，各剂量组与之不存在统计学差异(P>0.05).

(2)对大鼠食物吸收率的影响

表3对大鼠食物吸收率的影响

动物喂食30天，动物未出现拒食现象。各剂量组动物与对照组动物食物吸收率不存在统计学差异(P>0.05)

(3)血清学检查结果

表4血清学检查结果

由此可见，剂量组与对照组没有显著的统计学差异(P>0.05)。

经过上述实验分析，可以认为本品无副作用

实验例2

材料与方法：Wistar大鼠，188-212g；本发明组合物，褐藻多糖硫酸酯:人参提取物4:1，溶于水制为混悬液；四氯化碳；谷丙转氨酶ALT；谷草转氨酶AST；甘油三酯TG。

剂量分组：设置三个剂量组：500，250，120mg/kd.bw.d，受试物稀释至所需要的浓度，另外设置褐藻多糖硫酸酯对照组(简写为A对照组)、人参提取物对照组(B对照组)和四氯化碳模型组、阴性对照组。褐藻多糖硫酸酯对照组给与褐藻多糖硫酸酯250mg/kd.bw.d，人参提取物对照组给与人参提取物250mg/kg.bw.d，四氯化碳模型组，阴性对照组给与蒸馏水。实验方法：以2％四氯化碳造急性化学肝脏损伤模型:各剂量组依据设定剂量给予本发明组合物(灌胃量5.00ml/kg.bw)，A，B对照组分别给予褐藻多糖硫酸酯、人参提取物。空白对照组、模型组给予蒸馏水，连续三十天。第30天将各组动物隔夜禁食16小时，然后将模型组、组合物剂量组、A，B对照组一次性灌胃给予四氯化碳(2％浓度、5ml/kg.Bw).剂量组、A、B对照组继续给与受试物至24小时后结束试验，处死动物。，取血分离血清，测定ALT、AST以及肝组织中TG含量，并取肝脏作病理切片。病理组织学观察肝细胞以变性、坏死等为技术指标，试验结果：

表5肝损伤模型治疗效果

由上表可见，本发明组合物高剂量组的ALT低于四氯化碳模型组，差异显著；中、高剂量组的AST低于四氯化碳模型组，差异显著。同时还可以看出，在同等剂量250mg/kg.bw.d下，本发明效果明显优于单独的褐藻多糖硫酸酯、人参提取物，以(ALT、AST、TG)指标评价，分别取得了相对于褐藻多糖硫酸酯、人参提取物(26.6％，8％，4.8％)、(28.7％，9.5％，8.7％)的改善。同时我们注意到，在高剂量下本发明组合物相对于中剂量改善效果并没有明显改进。肝脏组织病理学检查结果如下表(病理改变程度采用平均打分法)：

表6肝脏病理学检查结果

*p<0.05，**p<0.01

由上可见，在病理改变程度上，本发明组合物明显优于褐藻多糖硫酸酯、人参提取物的单独应用，以同等剂量下病理改变程度评价，相对于褐藻多糖硫酸酯、人参提取物取得了11.4％、12.8％的改善。

综合上述结果，可以看到本发明组合物应用防治化学性肝损伤药物或者保健品是一种无毒性、长期服用安全的组合物，并且防治效果非常明显。对比文献中记载的现有的防治化学性肝损伤的效果，本发明应用效果更好。

实验例3

材料与方法：选用雌性小鼠，随机分为四组，体重18-22g。本发明组合物，其中褐藻多糖硫酸酯：人参提取物3：1，溶解于去离子水制成混悬液。注射用环磷酰胺(cyclophospha—mide，Cy)，用于免疫力低下模型构建。绵羊红细胞(sheep e-rythrocyte，SRBC)。

剂量分组：按照人体正常使用量成人60kg体重日摄入量0.05g/kg.Bw，涉及分成高中低三个剂量组(剂量分别相当于正常人使用量的5，2，1倍)，每组十只。另外设置褐藻多糖硫酸酯对照组、人参提取物对照组、模型组、对照组，分别给予正常人体用量2倍的褐藻多糖硫酸酯、人参提取物、蒸馏水、蒸馏水，分别记为A对照组、B对照组、模型组。采用灌胃给药，每日一次。20天后测定各项免疫指标。其中在第十五天时除对照组外每只小鼠腹腔注射Cy50mg/kg(对照组给予等容量生理盐水)连续2d，制备免疫功能低下的动物模型.第二十天每鼠尾静脉注入离心后50％的印度墨汁(0.10.1ml/10g)，2min和10min后分别从眼球取血401，并将其加到4ml0.1％NaHCO₃溶液中，600nm波长测定吸光度值，按文献方法测定吞噬指数。记录小鼠体重，活杀取胸腺并称湿重，以小鼠胸腺重/体重(mg/g)作为胸腺指数。半数溶血值、淋巴细胞转化率的测定方法采用常规的文献方法，比如文献淮山药多糖免疫调节作用研究(时珍国医国药，2007.18(5))所采用的方案。DTH测试方法如下：制备DTH模型，第十五天每鼠腹部涂1％DNFB丙酮麻油溶液50ml致敏，次日同剂量强化1次，同时除对照组外制备免疫低下模型，该模型构建方法参考上述用于测试胸腺指数、吞噬指数的模型构建方法。致敏后三天，将1％DNFB溶液均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击。攻击24h，引颈处死小鼠，剪下左右耳壳，用直径9mm打孔器打下圆耳片称重，左右耳片之差为肿胀度。抗疲劳能力测试无关于免疫力，因此没有模型组，也无需采用免疫力低下模型构建，只需对照组即可。

结果1表7对小鼠迟发型变态反应DTH的影响

结果2：表8对正常小鼠免疫器官胸腺指数的影响

结果3：表9对小鼠巨噬细胞功能的影响

结果4：表10对小鼠淋巴细胞转化率的影响

结果5：表11对小鼠体液免疫能力的影响

结果6：表12对小鼠抗疲劳能力的影响

上述试验结果显示，本发明所公开的组合物用途有效提高了人体免疫能力。对比对照实验组的的数据，本发明提高免疫力的效果优于使用单一成分。本发明调节免疫功能涵盖了调节体液系统和吞噬细胞及淋巴系统，能够全方位的增强人体免疫力。表现在：1.在正常剂量下全方位的增强免疫功能，包括体液免疫、吞噬细胞、淋巴免疫。2.把组合物单位浓度提高一定剂量(比如5倍量)，可以抑制人体免疫机能的增强，或者降低人体免疫机能。说明本发明用途可以双向调节免疫机能，高剂量下对免疫力亢奋有一定抑制作用。

Claims (11)

1.一种口服的组合物，含有褐藻多糖硫酸酯和人参或其有效成分，其中，人参为五加科人参属植物的药材，人参有效成分选自人参提取物或人参皂苷，所述人参提取物为水提取物、醇提取物，人参皂苷选自人参皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg₁、Rh₂、Rg₃、R1的一种或多种。

2.根据权利要求1的组合物，其含有褐藻多糖硫酸酯和人参提取物。

3.根据权利要求1的组合物，其含有褐藻多糖硫酸酯和人参药材。

4.根据权利要求1的组合物，其含有褐藻多糖硫酸酯和人参皂苷。

5.根据权利要求1的组合物，其中褐藻多糖硫酸酯和人参或其有效成分的重量比为1∶100-100∶1。

6.根据权利要求1的组合物，其中的组合物可以是药物或保健品的形式。

7.根据权利要求1的组合物，所述组合物中还含有药学可接受的载体或保健品可接受的添加剂。

8.根据权利要求1的组合物，所述组合物为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、口服液或糖浆。

9.权利要求1～8的组合物在制备保肝药物或保健品中的用途。

10.权利要求1～8的组合物在制备治疗或预防化学性肝损伤的药物或保健品中的用途。

11.权利要求1～8的组合物在制备调节免疫力的药品或保健品中的用途。