CN101347129B

CN101347129B - 一种用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂

Info

Publication number: CN101347129B
Application number: CN2008101982223A
Authority: CN
Inventors: 谭志坚
Original assignee: FOSHAN ZHENGDIAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: FOSHAN ZHENGDIAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2008-09-01
Filing date: 2008-09-01
Publication date: 2011-12-14
Anticipated expiration: 2028-09-01
Also published as: CN101347129A

Abstract

本发明公开了一种用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂，其特征在于，它是以苏云金杆菌为有效成分，经生物发酵的发酵液，测定效价后，配制而成的一定浓度的混悬液，该混悬液的苏云金杆菌百分比浓度为0.25～1.5％。本发明是一种高科技生物杀蚊制剂，达到快速简便杀灭蚊幼虫、有效保护环境和畜群、保障食品安全的控蚊效果，解决养殖场中蚊患流行的困扰。

Description

一种用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂

技术领域

本发明涉及生物源性杀虫剂技术领域，更具体地说是涉及一种能有效控制蚊虫的危害，且对环境无污染，对人、畜、禽、鱼等均无毒性的兽用高科技生物杀蚊制剂。

背景技术

蚊虫是重要的医学昆虫，与人畜疾病的关系极为密切。在集约化养殖场，蚊虫不仅骚扰和叮刺人畜，出现瘙痒、皮疹、皮炎，影响动物休息外，还能影响公畜精液质量，并能传播各种严重蚊媒疾病，被称为畜牧场“三害”之一，对人类和动物健康危害很大。长期以来，应用化学药物进行防制是主要的蚊虫控制措施。但随着化学杀虫剂的种类不断增多，应用范围逐渐扩大，致使蚊虫发生抗性的程度与范围亦逐年发展。长期大量使用化学杀虫剂，不仅导致蚊虫抗药性的出现和扩散，还威胁非目标生物的生存，破坏生态平衡，严重污染养殖场环境，威胁到畜产品安全。随着人们对自身生存环境质量的要求越来越高，高毒、高残留、易产生抗性、易污染环境的化学杀虫剂正逐渐被更新或淘汰，探讨有效的蚊虫防制措施尤其是生物防制措施日渐受到世界各国的高度重视。

蚊虫生物控制是指人为地增加蚊虫天敌的种类和数量，包括细菌、捕食性天敌和寄生物等，以打破自然界中蚊虫与自然天敌之间的相对平衡，从而有效地控制蚊虫的孳生，其特点包括：作用特异性强、对非目标生物和有益生物无害、不造成环境污染、不易产生抗性、药物持续时间较长、大量节约施药所需的人力物力。生物防制蚊虫措施在医学昆虫方面的研究和应用较多，并取得了一定的成效，但在集约化养殖场的应用尚未有报道。

苏云金杆菌（bacillus thuringiensis, Bt），是包括许多变种的一类产菌体的芽孢杆菌，是一种生物源性杀虫剂，在自然界水体和土壤中广泛存在，从自然界即可分离到对不同蚊类幼虫有效的菌株，是单基因表达的产物，能产生内毒素伴孢晶体，通过胃毒作用，可用于防治直翅目、鞘翅目、膜翅目，特别是鳞翅目的多种幼虫。为此，如何将苏云金杆菌与对各类蚊幼虫速杀和持效作用相结合，提供一种无刺激性，对人、畜禽、鱼类安全的灭蚊药剂已成为人们所探讨的课题。

发明内容

本发明的目的就是为了解决现有技术之不足而提供的一种不仅杀蚊谱广、安全高效、使用便捷，而且对环境友好的用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂。

本发明是采用如下技术解决方案来实现上述目的：一种用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂，其特征在于，它是以苏云金杆菌为有效成分，经生物发酵的发酵液，测定效价后，配制而成的一定浓度的混悬液，该混悬液的苏云金杆菌百分比浓度为0.25~1.5%。

作为上述方案的进一步说明，所述苏云金杆菌的发酵培养基采用下列重量百分比的各组分配置而成：玉米淀粉3~4%、黄豆饼粉3.5~4.5%，酵母粉0.7~0.8%，蛋白胨0.3~0.5%，鱼粉1.0~1.2%，其余为水。

所述苏云金杆菌的发酵温度为26~33℃,通风量为1：1.2~1.6，压强为0.02~0.06pa/cm²，搅拌速度为18~22转/分，发酵时间为30~45小时。

苏云金杆菌细菌原液用于防治蚊虫的幼虫及蛹，该蚊虫包括淡色库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊，苏云金芽孢杆菌细菌原液中活菌数为8×10⁶ CFU/ml。

本发明采用上述技术解决方案所能达到的有益效果是：

1、本发明采用把苏云金芽孢杆菌制成细菌原液，通过对不同龄期的几种蚊虫幼虫进行敏感性测定表明此种Bt细菌原液对各类蚊幼虫有着较好的速杀和持效作用，无刺激性，对人、畜禽、鱼类安全，成本较低，操作方法简单，节省人力物力。

2、Bt适合工厂化规模生产，使用安全，不污染环境和对非靶标生物无毒，与集约化养殖场现用防蚊制剂相比，它是一种杀蚊谱广、安全高效、使用便捷、环境友好的高科技生物杀蚊制剂。

具体实施方式

本发明一种用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂，它是以苏云金杆菌为有效成分，经生物发酵的发酵液，测定效价后，配制成一定浓度的混悬液，是一种纯生物农药，苏云金杆菌的发酵培养基包括淀粉、植物蛋白、植物脂肪、粗纤维。其中，培养基采用下列重量百分比的各组分配置而成：玉米淀粉3~4%、黄豆饼粉3.5~4.5%，酵母粉0.7~0.8%，蛋白胨0.3~0.5%，鱼粉1.0~1.2%，其余为水。一般优选玉米淀粉3.3%、黄豆饼粉4%，酵母粉0.725%，蛋白胨0.4%，鱼粉1.05%，其余为水。苏云金杆菌的发酵温度为26~33℃,通风量为1：1.2~1.6，压强为0.02~0.06pa/cm²，搅拌速度为18~22转/分，发酵时间为30~45小时。

以下是苏云金芽孢杆菌细菌原液对蚊幼虫和蛹的敏感性测定：

1、准备供试蚊虫和药剂

蚊卵、幼虫和蛹均采集自自然环境积水中，室温条件下在非专业实验室中分类饲养，饲以酵母片，适应生长环境后随机分组进行试验；而白纹伊蚊则采用黑色具粗糙面的容器盛放一定量自来水放置在蚊虫出没较多的草丛中，进行诱蚊，每天观察一次，当出现幼虫时，吸取幼虫至白瓷盆中饲养，喂给酵母粉，从形态学方面鉴定幼虫为白纹伊蚊幼虫，备用。供试药物为苏云金芽孢杆菌细菌原液，活菌数为8×10⁶ CFU/ml。

2、对蚊卵孵化影响的情况观察

将洁净自来水在户外放置24h后去氯，加入Bt细菌原液配制成不同浓度的药液，然后将所采集的卵筏（包括淡色库蚊卵筏、三带喙库蚊卵筏和褐尾库蚊卵筏）置于药液中，观察制剂对卵筏孵化情况的影响。

用电动吸蚊器捕捉已经吸血的骚扰阿蚊和白纹伊蚊分别放入50 cm×33cm×30 cm成蚊吸血笼中，用平皿盛少量的10%葡萄糖水放入笼中，并放入灭菌的纱布，供成蚊吸取水份，在另一个平皿中放置湿润的灭菌纱布，供雌蚊产卵。同时设立空白对照组，提供新鲜的10%葡萄糖水和产卵平皿。

3、对白纹伊蚊诱蚊诱卵效果观察

将3个黑色具粗糙内面的容器盛放相同量自来水放置于较阴凉地方，其中2个容器中分别加入0.1%、0.05%药液，另外1个容器中不加入任何东西，进行诱蚊，每天观察一次。设立空白对照组。

4、对不同发育龄期蚊幼虫和蛹敏感性测定

用去氯水将Bt细菌原液稀释成一系列浓度，然后将100 ml药液倒入透明胶杯中，再用小网兜分别随机捞取发育情况基本相同的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ龄幼虫或蛹放入其中，每组20头。共设3个浓度，分别为1.0%、0.5%、0.25%，同时设立空白对照组，每隔12h检查幼虫或蛹死亡情况。每个处理设4～6个重复，取其平均死亡率。

5、测定结果与分析

a、Bt细菌原液对蚊卵的孵化影响结果

测定结果表明，在药液中淡色库蚊、三带喙库蚊和褐尾库蚊卵筏均不能正常孵化出幼虫，药液在液面形成一层吹不散的混浊的膜，水质变差，有发酵酸味，而在清水中卵筏均能正常孵化出Ⅰ龄幼虫。

在吸血笼内的已吸血的骚扰阿蚊和白纹伊蚊在纱布上产卵后，将卵粒放入清水中孵化，结果表明沾有药液的纱布上卵粒较少，放入水中后不能孵化成幼虫，而空白对照组纱布上所产卵粒较多，放入水中后第二天即孵化出幼虫。

b、Bt细菌原液对白纹伊蚊诱蚊诱卵效果影响

经观察，用药组容器内可见死亡成蚊，容器壁可见卵粒，但卵粒无法正常孵化出幼虫，而不加药组容器内诱到大量的蚊幼虫。另外，加药组容器继续放置长时间，均无蚊幼虫孳生现象。

c、不同蚊种Ⅰ龄幼虫对Bt细菌原液的敏感性

详细结果如表1所示。从表1可以看出，在Bt细菌原液药液中处理12h后各类蚊幼虫的半数致死浓度（LC50）均为0.25%。处理12h后蚊幼虫对0.25% Bt药物的敏感性为：中华按蚊＞淡色库蚊＞三带喙库蚊＞白纹伊蚊。测定结果表明，Bt细菌原液对中华按蚊Ⅰ龄幼虫的敏感性最强，在给药1h后即开始出现幼虫死亡。

表1 不同浓度Bt（细菌原液）处理后不同时间内各类蚊Ⅰ龄幼虫平均死亡率

d、从表2可以看出，在Bt细菌原液药液中处理12h后淡色库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊幼虫的半数致死浓度（LC50）均为0.25%，而三带喙库蚊幼虫的半数致死浓度则为1.0%。在0.5%药物浓度下处理12h后三带喙库蚊幼虫的平均死亡率较低，但随着处理时间的延长，幼虫的平均死亡率逐渐升高。测定结果表明，在处理12h后幼虫对Bt细菌原液的敏感性为中华按蚊＞淡色库蚊＞三带喙库蚊＞白纹伊蚊。

表2 不同浓度Bt（细菌原液）处理后不同时间内各类蚊Ⅱ龄幼虫平均死亡率

e、不同蚊种Ⅲ龄幼虫对Bt细菌原液的敏感性

从表3可以看出，随着幼虫龄期的增大，对同样浓度药物的敏感性逐渐下降。测定结果表明，中华按蚊Ⅲ龄幼虫对Bt很敏感，处理12h后中华按蚊幼虫的半数致死浓度为0.25%，平均死亡率达到100%。淡色库蚊幼虫的半数致死浓度（LC50）为0.5%，而三带喙库蚊和白纹伊蚊幼虫对药物的敏感性降低，半数致死浓度为1.0%，幼虫平均死亡率较低，但随着处理时间的延长，幼虫的平均死亡率逐渐升高。

表3 不同浓度Bt（细菌原液）处理后不同时间内各类蚊Ⅲ龄幼虫平均死亡率

f、不同蚊种Ⅳ龄幼虫对Bt细菌原液的敏感性

从表4测定结果表明，随着幼虫龄期的增长，在同样的浓度作用下，除中华按蚊幼虫外，其余Ⅳ龄幼虫对同样浓度药物的敏感性降低。Bt细菌原液对中华按蚊幼虫的半数致死浓度为0.25%。淡色库蚊幼虫的半数致死浓度为0.5%，三带喙库蚊和白纹伊蚊幼虫的半数致死浓度为1.0%。随着处理时间的延长，幼虫的平均死亡率逐渐升高。

表4 不同浓度Bt（细菌原液）处理后不同时间内各类蚊Ⅳ龄幼虫平均死亡率

g、不同蚊种蛹对Bt细菌原液的敏感性

从表5测定结果表明，三带喙库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊蛹对药物的敏感性较淡色库蚊蛹高；在处理12h后三带喙库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊蛹半数致死浓度均为0.25%，而淡色库蚊蛹则为0.5%。随着处理时间的延长，蛹的死亡率逐渐升高。

表5 各类蚊蛹处理24h后对Bt细菌原液的敏感性

注：以上数据为6次重复的平均值。

本发明并不局限于上述实施例，以上所显示的仅为本发明的较佳实施例而已，不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明申请专利范围所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims

1.一种用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂，其特征在于，它是以苏云金杆菌细菌为有效成分，经生物发酵的发酵液，测定效价后，配制而成的一定浓度的混悬液，该混悬液的苏云金杆菌重量百分比浓度为0.25~1.5%；苏云金杆菌细菌原液的活菌数为（7~9）×10⁶ CFU/ml；所述苏云金杆菌的发酵培养基采用下列重量百分比的各组分配置而成：玉米淀粉3~4%、黄豆饼粉3.5~4.5%，酵母粉0.7~0.8%，蛋白胨0.3~0.5%，鱼粉1.0~1.2%，其余为水。

2.根据权利要求1所述的一种用于杀灭蚊虫的苏云金杆菌悬浮剂，其特征在于，它用于防治蚊虫的幼虫及蛹，该蚊虫包括淡色库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊。