CN101338286A - 一种绿麦隆农药残留降解菌及其生产的菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种消除除草剂绿麦隆残留的降解菌剂，所用菌株为革兰氏染色反应阴性菌YBL3，经鉴定为鞘氨醇杆菌属(Sphingobium sp.)。2008年5月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC M 208076。生产菌剂的工艺为：斜面种—摇瓶种—种子罐—生产罐—产品(包装剂型为液体菌剂或固体吸附菌剂)。降解菌产品直接施用可使作物中农药残留量降低90％以上，解决了农业生产中农药残留超标问题，可生产出无毒无公害的绿色农产品。
Description
一、技术领域
本发明一种绿麦隆除草剂残留降解菌及其生产的菌剂，属于生物技术领域，是利用微生物的方法降解化学农药残留，适用于现代农业生产中绿色无公害农产品的生产与加工。
二、背景技术
除草剂的使用大大地促进了现代农业的发展，为农业生产挽回了大量因杂草或者残留药害等原因造成的损失，并极大地提高了农业生产的劳动效率和机械化程度，在农业生产的现代化进程中起了不可估量的作用。但同时农药都是一些有毒有害化学物质，当进入生态环境后，由于有些除草剂在土壤中残效时间长，残留农药对后茬作物敏感，造成不良影响。虽然控制了对农作物生长有害的杂草，同时也对生态系统和后茬作物造成了的危害。农药的大量使用引起农产品中农药残留超标，严重影响了人民的身体健康及农产品的出口创汇。随着人们生活水平的提高和环境保护意识的增强，全社会对农药残留带来的直接危害和潜在影响亦愈来愈关注，人们迫切需要无农药残留污染的清洁的绿色农产品。但从目前我国的农业生产形式和人口状况来看，以停止农药使用降低农业产量为代价的无公害生产模式是行不通的，农药作为控制杂草危害的有效手段还将继续在农业生产中发挥巨大的作用。如何能解决农业生产中的这个两难问题就成为各个学科的研究热点。实验室和实际应用研究都表明利用微生物来降解消除土壤中的农药残留“库”容量，从而降低粮食、蔬菜、茶叶等农产品中的农药残留，提高农产品的品质和经济价值是可行的。现有技术中本课题组已拥有降解菌的发明专利(ZL96106317.3，公开号：CN1145408A，公开日：1997年3月19日)，该专利是一株芽胞杆菌J5，能有效地降解甲胺磷，但该菌株降解谱窄，仅能降解甲胺磷一种农药，从而使用受到限制。
三、发明内容
技术问题本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，开发研制出一种新型的农药残留降解菌剂，使用本菌剂可以使绿麦隆的残留量降低95％以上，生产和使用成本较低。使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行杂草防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求，消除绿麦隆残留引起的除草剂对非靶标作物的药害。
技术方案 下面为本发明的主要内容：
本发明提供一种消除绿麦隆农药残留的降解菌，其菌株是革兰氏染色反应阴性菌YBL3(2008年5月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO：M208076)，经鉴定为鞘氨醇杆菌属(Sphingobium sp.)。主要生物学特性为革兰氏反应阴性，菌体为无芽孢的直杆状，菌体大小0.6-0.7×1.5-1.6μm，不发酵乳糖发酵阳性，伏-普反应阴性，甲基红反应阴性，不产生吲哚，硫化氢产生阴性，硝酸盐还原反应阳性。该菌株16S rDNA的Genbank登陆号为EU159273。使用上述绿麦隆农药残留降解菌生产菌剂的工艺为：斜面种-摇瓶种-种子罐-生产罐-产品(包装剂型为液体菌剂或固体吸附菌剂)。
本发明的详细实施步骤为：
(1)将绿麦隆除草剂残留的降解菌的试管种接种于LB培养基摇瓶中，振荡培养至对数期；
(2)将上述培养好的菌种按10％的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期。种子罐所用的培养基配方为：麦芽糖0.8％，(NH4)2SO4 1％，K2HPO4 0.2％，MgSO4 0.05％，NaCl 0.01％，CaCO3 0.3％，酵母膏0.02％，pH值7.0-7.2。
(3)将种子液按10％的接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同。
(4)在种子罐和生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1∶0.6-1.2，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，整个工艺流程培养时间为48-60小时。发酵完成后培养液即为菌剂。
有益效果使用该发明生产的农药残留降解菌剂具有生产使用成本低，使用方便，去除效果好的优点，适合在全国粮油蔬菜生产出口基地或有绿色食品商标标志的地方大面积推广使用。本发明对于保护生态环境，保护人民的身体健康，提高农产品的附加值具有重要的意义。降解菌YBL3能使绿麦隆这种苯基取代脲类除草剂的残留量降低90％以上，而且还能降解敌草隆和异丙隆等，大大降低了生产和使用过程中的工作量，降低了生产和使用成本(表1)。使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行杂草防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求。并且该菌为革兰氏阴性菌，在田间的存活时间适当不会影响以后农药使用的效果。
本发明成功地解决了农业生产中农药残留超标问题，既充分发挥了化学农药在农作物杂草防治中的高效快速的作用，又可以生产出无毒无公害的绿色农产品。
四、具体实施方式
以下叙述本发明的实施例。
本发明提供一种消除绿麦隆农药残留的降解菌，其菌株YBL3(2008年5月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO：M 208076)是专利申请人分离于采自农药厂的土壤样品，属革兰氏染色反应阴性菌，经鉴定为鞘氨醇杆菌属(Sphingobium sp.)。主要生物学特性为革兰氏反应阴性，菌体为无芽孢的直杆状，菌体大小0.6-0.7×1.5-1.6μm，不发酵乳糖发酵阳性，伏-普反应阴性，甲基红反应阴性，不产生吲哚，硫化氢产生阴性，硝酸盐还原反应阳性。该菌株16S rDNA的Genbank登陆号为EU159273。
无机盐液体培养基((NH4)2SO4 1.0g，K2HPO4 1.5g，KH2PO4 0.5g，NaCl 1.0g，MgSO47H2O 0.05g，水1000mL，pH7.0～7.2.)中降解菌YBL3降解特性测定：
挑取YBL3单菌落于5ml LB液体培养基中，30℃、165r/min振荡培养24h，获得新鲜菌液。在100ml的50mg/L绿麦隆无机盐液体培养基中，接入5ml离心悬浮后的菌液，于30℃摇床培养(170r/min)，定时取样测定，测定绿麦隆的含量，结果见表1，无机盐液体培养基中降解菌YBL3降解绿麦隆达到95％。
表1：菌株YBL3在无机盐培养基中对绿麦隆的降解特性
土壤中降解菌绿麦隆降解特性测定：
称取1000g土壤，加入绿麦隆，使土壤中含药浓度为30mg/kg，加入YBL3菌液，混匀，置于30℃培养箱中黑暗条件下恒温培养，定时取样测定绿麦隆在土壤中的残留量，结果见表1，土壤中降解菌YBL3降解绿麦隆达到90％。
使用上述绿麦隆农药残留降解菌生产菌剂的工艺为：斜面种-摇瓶种-种子罐-生产罐-产品(包装剂型为液体菌剂或固体吸附菌剂)。
将本发明的微生物苯基取代脲类除草剂绿麦隆农药残留的降解菌YBL3的原种在培养皿上活化，并测定降解性能，接种于试管斜面上备用。试管种接种于含200ml肉汤培养基1000ml摇瓶中，恒温振荡培养至对数期，准备接种种子罐。种子罐500升，投料量400升，培养基配方为：麦芽糖0.8％，(NH4)2SO4 1％，K2HPO4 0.2％，MgSO4 0.05％，NaCl 0.01％，CaCO3 0.3％，酵母膏0.02％，pH值7.0-7.2。投料完毕后121℃高压湿热灭菌，冷却至33℃后，将上述培养好的摇瓶菌种按10％的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，搅拌速度为220转/分，无菌空气通入量为1∶0.8。将到达对数期的种子液按10％的接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基成分与种子罐培养基相同。生产罐容量5吨，投料量4.5吨。投料后的生产罐1.1kg/cm2的压力下，121℃高压湿热灭菌，灭菌后冷却至35℃以下，通无菌空气保持无菌状态备用。接种后的生产罐温度控制在30-35℃，生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1∶0.8-1.0，搅拌速度为240转/分，整个工艺流程培养时间为48-60小时。发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上。
发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。
Claims (2)
1.一种农药残留降解菌，其特征在于，该微生物是革兰氏染色阴性的鞘氨醇杆菌属(Sphingobium sp.)的菌株YBL3，2008年5月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO：M 208076。
2.一种用权利要求1所述的农药残留降解菌生产的农药残留降解菌剂，是通过以下方法生产而成：
1〕将权利要求1所述的菌株YBL3试管种接种于LB培养基摇瓶中，振荡培养至对数期；
2〕将上述培养好的菌种按体积比10％的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，种子罐所用的培养基质量比配方为：麦芽糖0.8％，(NH4)2SO4 1％，K2HPO4 0.2％，MgSO40.05％，NaCl 0.01％，CaCO3 0.3％，酵母膏0.02％，pH值7.0-7.2；
3〕将种子液按体积比10％的接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同；
4〕在种子罐和生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1∶0.6-1.2，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，全流程培养时间为48-60小时，发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上，发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。
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