CN100339473C - 一种多菌灵农药残留降解菌及其生产的菌剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种消除多菌灵农药残留的降解菌及其降解菌剂，属于生物高技术领域。所用的菌株DJL-6，经鉴定其为红球菌属(Rhodococcus sp.)。主要生物学特性为：G+，菌体为球杆状，没有鞭毛；接触酶和V-P反应为阳性；氧化酶反应阴性；能够利用麦芽糖、甘露糖、柠檬酸盐、乙酰胺和天冬酰胺为唯一碳或氮源进行生长，不能以乳糖、苦杏仁酸为唯一碳源进行生长；在LB培养基上培养时菌落呈橙色。降解菌产品直接施用可使作物中农药残留量降低95%上，解决了农业生产中农药残留超标问题，可生产出无毒无公害的绿色农产品。

Description

一种多菌灵农药残留降解菌及其生产的菌剂
一、技术领域
本发明一种多菌灵农药残留降解菌及其生产的菌剂，属于生物高技术领域，是利用微生物的方法降解化学农药残留，适用于现代农业生产中绿色无公害农产品的生产与加工。
二、技术背景
化学农药的使用大大地促进了现代农业的发展，为农业生产挽回了大量因病虫害等原因造成的损失，并极大地提高了农业生产的劳动效率和机械化程度，在农业生产的现代化进程中起了不可估量的作用。但同时农药都是一些有毒有害化学物质，它们进入生态环境后，不仅杀死了对人类有害的生物，同时也对生态系统造成了严重的危害。农药的大量使用引起农产品中农药残留超标，严重影响了人民的身体健康及农产品的出口创汇。随着人们生活水平的提高和环境保护意识的增强，全社会对农药残留带来的直接危害和潜在影响亦愈来愈关注，人们迫切需要无农药残留污染的清洁的绿色农产品。但从目前我国的农业生产形式和人口状况来看，以停止农药使用降低农业产量为代价的无公害生产模式是行不通的，农药作为控制病虫害的有效手段还将继续在农业生产中发挥巨大的作用。如何能解决农业生产中的这个两难问题就成为各个学科的研究热点。实验室和实际应用研究都表明利用微生物来降解消除土壤中的农药残留“库”容量，从而降低粮食、蔬菜、茶叶等农产品中的农药残留，提高农产品的品质和经济价值是可行的。
三、发明内容
技术问题  本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，开发研制出一种新型的农药残留降解菌剂，使用本菌剂可以使多菌灵的残留量降低90％以上。
技术方案  下面为本发明的主要内容：
本发明提供一种消除多菌灵农药残留的降解菌，其菌株是一株革兰氏染色反应阳性菌DJL-6(2005年10月12日寄存于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.1478)，经鉴定为红球菌属(Rhodococcus sp.)。主要生物学特性为：G+，菌体为球杆状，没有鞭毛；接触酶和V-P反应为阳性；氧化酶反应阴性；能够利用麦芽糖、甘露糖、柠檬酸盐、乙酰胺和天冬酰胺为唯一碳或氮源进行生长，不能以乳糖、苦杏仁酸为唯一碳源进行生长；在LB培养基上培养时菌落呈橙色，不能够利用苯甲酸钠为唯一碳源进行生长。它的16S rDNA的Genbank登陆号为DQ090961。
使用上述多菌灵农药残留降解菌生产菌剂的工艺为：斜面种—摇瓶种—种子罐—生产罐—产品(包装剂型为液体菌剂或固体吸附菌剂)。
本发明的详细实施步骤为：
1)将多菌灵农药残留降解菌DJL-6的试管种接种于LB培养基中，振荡培养至对数期；
2)将上述培养好的菌种按种子罐培养基的10％接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，种子罐所用的培养基配方为：葡萄糖0.8％，(NH4)2SO41％，K2HPO40.2％，MgSO40.05％，NaCl0.01％，CaCO30.3％，酵母膏0.02％，pH值7.2-7.5；
3)将种子液按生产罐培养基的10％接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同；
在种子罐和生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1∶0.6-1.2，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，全流程培养时间为48-60小时，发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上，发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。
有益效果
使用该发明生产的农药残留降解菌剂具有生产使用成本低，使用方便，去除效果好的优点，适合在全国粮油蔬菜生产出口基地或有绿色食品商标标志的地方大面积推广使用。
本发明对于保护生态环境，保护人民的身体健康，提高农产品的附加值具有重要的意义。使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行病虫害防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求降解菌DJL-6具有较高的降解效率，能使多菌灵农药的残留量降解90％以上，大大降低了生产和使用过程中的工作量，降低了生产和使用成本。
使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行病虫害防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求。并且该菌为革兰氏阳性菌，在田间的存活时间适当不会影响以后农药使用的效果。
本发明成功地解决了农业生产中多菌灵农药残留超标问题，既充分发挥了化学农药在植物病虫害防治中的高效快速的作用，又可以生产出无毒无公害的绿色农产品。
四、具体实施方式
以下叙述本发明的实施例。
将本发明的降解菌DJL-6的原种在培养皿上活化，并测定降解性能，接种于试管斜面上备用。试管种接种于1000ml摇瓶中，里面添加200ml的LB培养基，恒温振荡培养至对数期，准备接种种子罐。种子罐500升，投料量400升，培养基配方为：葡萄糖0.8％，(NH4)2SO41％，K2HPO40.2％，MgSO40.05％，NaCl0.01％，CaCO30.3％，酵母膏0.02％，pH值7.2-7.5。投料完毕后121℃高压湿热灭菌，冷却至33℃后，将上述培养好的摇瓶菌种按10％的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，搅拌速度为220转/分，无菌空气通入量为1∶0.8。将到达对数期的种子液按10％的接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基成分与种子罐培养基相同。生产罐容量5吨，投料量4.5吨。投料后的生产罐1.1kg/cm2的压力下，121℃高压湿热灭菌，灭菌后冷却至35℃以下，通无菌空气保持无菌状态备用。接种后的生产罐温度控制在30-35℃，生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1∶0.8-1.0，搅拌速度为240转/分，整个工艺流程培养时间为48-60小时。发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上。
发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。
用上述方法所得的产品进行土壤、水体等农药残留降解试验示范。在土壤或水体施用过多菌灵农药后，将上述菌剂按使用方法要求在土壤或水体中保留3天后，取适量土壤或水体经提取后，用液相色谱法测定土壤或蔬菜中多菌灵残留的含量(由山西省农药重点实验室(太原)测定)，从结果中看出经降解菌处理后能大大降低土壤和水体中的残留农药(表1)。
         表1菌株DJL-6降解土壤和水体中的多菌灵残留检测结果
  样品名称 样品原编号     多菌灵含量(mg kg-1)   检出限   去除率(％)
  水体 DJL-6   对照     5.57   1.0   100％
  处理     未检出   1.0   100％
  土壤 DJL-6   对照     20.48   0.5   100％
  处理     未检出   0.5   100％
                                          检测报告
检测报告编号：0415
委托单位   南京农业大学生命科学学院微生物系 委托人及地址 许敬亮
  受检单位   ——   联系人及地址     ——
  来样日期   2004.9.21，9月24日深冻   委托协议书编号     0415
  来样方式   邮寄   检测日期     11.11-11.22
样品状态 水样，土样 检测方法     多菌灵在土壤及培养基中的残留分析
                                          样品检测结果
样品名称 样品原编号 检测项目     检测结果(mg/kg)     检出限(mg/kg)
水 DJL-6处理 多菌灵 未检出 1.0
  土   DJL-6处理1     多菌灵     未检出     0.5
  土   DJL-6处理2     多菌灵     未检出     0.5
  土   DJL-6处理3     多菌灵     未检出     0.5
  水   DJL-6-2处理     多菌灵     未检出     1.0
  土   DJL-6-2处理1     多菌灵     未检出     0.5
  土   DJL-6-2处理2     多菌灵     未检出     0.5
  土   DJL-6-2处理3     多菌灵     未检出     0.5
  水   CK     多菌灵     5.57     1.0
  土   CK对照1     多菌灵     20.48     0.5
  土   CK对照2     多菌灵     19.15     0.5
  备注：
编制：秦曙    审核：王霞    签发人(职务、签字)：实验室主任 乔雄梧
                                    签发日期：2004年11月26日
                                        山西省农药重点实验室

Claims (2)

1.一种多菌灵农药残留降解菌，其特征在于，该微生物是革兰氏染色阳性的红球菌属(Rhodococcus sp.)的菌株DJL-6，2005年10月12日保藏于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.1478，主要生物学特性为：G+，菌体为球杆状，没有鞭毛；接触酶和V-P反应为阳性；氧化酶反应阴性；能够利用麦芽糖、甘露糖、柠檬酸盐、乙酰胺和天冬酰胺为唯一碳或氮源进行生长，不能以乳糖、苦杏仁酸为唯一碳源进行生长；在LB培养基上培养时菌落呈橙色，不能够利用苯甲酸钠为唯一碳源进行生长，它的16S rDNA的Genbank登陆号为DQ090961。
2.一种用权利要求1所述的多菌灵农药残留降解菌生产的农药残留降解菌剂，是通过以下方法生产而成：
1)将多菌灵农药残留降解菌DJL-6的试管种接种于LB培养基中，振荡培养至对数期；
2)将上述培养好的菌种按种子罐培养基的10％接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，种子罐所用的培养基配方为：葡萄糖0.8％，(NH4)2SO4 1％，K2HPO4 0.2％，MgSO4 0.05％，NaCl 0.01％，CaCO3 0.3％，酵母膏0.02％，pH值7.2-7.5；
3)将种子液按生产罐培养基的10％接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同；
4)在种子罐和生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1∶0.6-1.2，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，全流程培养时间为48-60小时，发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上，发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。
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