CN101328500A - 中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种动物DNA分子遗传标记技术，具体为一种中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法，解决未见有关于中国地鼠微卫星标记的报道，以及筛选微卫星标记的方法中采用酶切法将DNA基因组打碎，存在很多问题，本发明提取中国地鼠基因组DNA，利用超声波打断DNA，电泳回收DNA片段；构建中国地鼠基因组微卫星富集文库，从中挑取阳性克隆质粒进行测序，筛选得到17个微卫星标记，根据微卫星重复序列设计引物，筛选出17对引物用于遗传检测。具体应用时，使用该17对引物对中国地鼠不同群体或群体内的不同个体的基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，根据检测数据及图谱确定每个个体的基因型；本发明所述方法稳定性好，重复性高，可比性强，操作简单。

Description

中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法

技术领域

本发明涉及一种动物DNA分子遗传标记技术，具体为一种中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法。

背景技术

微卫星(Microsatellite)又称简单序列重复(Simple sequence repeats，SSR)，是指以少数几个核苷酸(一般为1-6个)经多次重复单位组成的简单多次串联重复序列，如(CA)_n、(TG)_n等，又被称为短串联重复序列，简单序列重复其长度大多在100bp以内，广泛分布在真核基因组中。微卫星序列两侧有保守的DNA序列，根据其两侧的保守序列涉及引物，可用PCR扩增出微卫星位点的序列。由于微卫星重复单元的重复的次数不同，因而扩增出的微卫星序列的长度呈现多态性。由于微卫星序列具有多态性丰富、重复性高、共显性遗传等优点，被广泛应用于遗传图谱的构件、基因定位、遗传关系分析、品种鉴定等领域。

中国地鼠是源于中国的实验动物。20世纪40年代末，Schwentker从我国取十对野生原种，仅数年，其后裔即遍及欧、美、日等国的一些主要实验室。1919年，我国学者谢恩增首次将中国地鼠引入实验室进行医学研究，用于肺炎球菌的检定。其后，科学工作者相继发现中国地鼠对黑热病和许多致病性细菌以及病毒都有高度感受性，并且发现中国地鼠有自发性糖尿病遗传倾向，可以建立成糖尿病模型。目前，中国地鼠已为细胞遗传学、辐射遗传学、实验肿瘤和分子生物学等许多领域所应用，在医学和生物学等实验研究中，占有重要的地位。

常用的实验动物遗传检测的方法有形态学方法、免疫学方法、生物化学标记方法等，如在国家标准中大小鼠遗传检测近交系用生化位点标记基因的方法。随着分子生物学的迅速发展，分子遗传标记技术在实验动物的遗传检测中得以广泛应用，其中包括限制性酶切片段多态性标记(RFLPs)、随机扩增多态性DNA标记(RAPD)、扩增片段长度多态性标记(AFLP)、微卫星DNA标记(Microsatellite DNA)、单核苷酸多态性标记(SNPs)等。其中微卫星DNA标记多态性丰富，均匀分布于哺乳动物基因组，检测技术成熟，稳定性好，重复性高，可比性强，已成为目前动物遗传多样性评估和遗传监测研究的首选标记，但是这一源于我国的实验动物资源——中国地鼠的基因组等基础资料报道甚少，其微卫星标记以及微卫星标记在中国地鼠分子遗传学分析中的应用尚属空白，成为影响中国地鼠作为疾病模型进一步深入研究的因素之一。开发微卫星遗传标记，为纯系中国地鼠遗传检测及种质资源保护、基因流动、群体变异和遗传连锁图谱构建等许多工作提供研究手段；且将加速我国实验用中国地鼠的标准化建设。

而且现有关于筛选微卫星标记的方法中，在提取出物种的基因组DNA后，需要将其打碎成各个基因片段进行研究，目前通常的采用的方法是酶切法，其缺陷是对温度和时间有一定要求，需要查找适当的酶切位点。当物种的全序列未知时，如果酶切位点不单一，酶切片段大小就很难控制，并且很难辨别所切割片段是否是自己所需片段；如果酶切位点处于某一类微卫星的中间部分，则可能根本钓不出该类微卫星。

发明内容

本发明为了解决现在未见有关于中国地鼠微卫星标记的报道，以及现有筛选微卫星标记的方法中大都采用酶切法将物种DNA基因组打碎，存在上述缺陷的问题，提供一种中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法。

本发明是采用如下技术方案实现的：中国地鼠微卫星遗传标记，所述微卫星标记的编号分别为Chm35、Chm93、Chm147、Chm79、Chm120、Chm162、Chm10、Chm108、Chm115、Chm124、Chm134、Chm14、Chm140、Chm48、Chm54、Chm9、Chm91，上述17个微卫星核苷酸序列及其两端的引物序列如序列表所记载；

微卫星核苷酸序列两端的引物的退火温度分别为51℃、58℃、58℃、51℃、58℃、58℃、59℃、59℃、59℃、59℃、59℃、59℃、60℃、60℃、59℃、59℃、59℃。引物的退火温度对PCR扩增的结果有很大影响，如果退火温度选择不合理，可能出现假阴性结果。在本发明所述的退火温度下，PCR扩增产物经电泳检测后的数据能为中国地鼠遗传性的判定提供精确依据。

筛选所述的中国地鼠微卫星遗传标记的方法，包括提取中国地鼠的DNA基因组，本发明的创新是对中国地鼠的DNA基因组采用超声波进行打碎，使得超声后的片段大小在500bp-1000bp之间。该方法只需要很少的时间，对温度没有特定要求，不用查阅酶切位点，而且由于是随机切割，不会完全损害某一类微卫星，只要控制功率和时间，片段大小就基本确定。

本发明首先提取中国地鼠的基因组DNA，4℃冰箱保存备用；然后利用超声波打断DNA，电泳回收500-1000bp的DNA片段；构建中国地鼠基因组微卫星富集文库，从构建的微卫星文库中挑取阳性克隆提取质粒进行测序，后经筛选得到17个多态性丰富的微卫星标记，根据微卫星重复序列两侧的保守侧翼序列设计引物，筛选出17对引物用于遗传检测。具体应用时，使用该17对引物中的任意一种或几种对中国地鼠不同群体或群体内的不同个体的基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，根据检测数据及图谱确定每个个体的基因型；当采用多对引物来检测中国地鼠的遗传性时，数据更可靠、系统更稳定，避免了采用一对引物检测时，不能完全反映物种遗传性的缺陷。本发明所述的中国地鼠微卫星遗传标记及筛选方法稳定性好，重复性高，可比性强，操作简单，为中国地鼠遗传检测及种质资源保护、基因流动、群体变异和遗传连锁图谱构建等许多工作提供了研究手段，且将加速我国实验用中国地鼠的标准化建设。

具体实施方式

一、构建中国地鼠基因组微卫星富集文库

1、DNA提取

(1)取中国地鼠尾巴组织，用剪刀剪碎，加入500μl裂解缓冲液，混匀，加入蛋白酶K至终浓度100L，混匀，于50℃缓慢摇床消化过夜。

(2)将溶液冷却至室温，加入等体积的Tris饱和酚，缓慢颠转直至两相混合成乳浊液。4℃13200/rpm离心10min，用1ml枪头缓慢将上清液移至另一离心管。

(3)加入等体积的Tris饱和酚和氯仿，摇匀后4℃13200/rpm离心10min，将上清液移至另一离心管。

(4)加入等体积的氯仿摇匀后4℃13200/rpm离心10min，将上清液移至另一离心管。

(5)加入1/10倍体积的醋酸钠(PH 5.2)及2倍体积的一20℃无水乙醇，缓慢颠转离心管，可见白色絮状沉淀，用枪头将DNA钩出转移到另一EP管。

(6)剩余没有沉淀的DNA放入-20℃冰箱中静止2-3小时。

(7)70％乙醇洗涤DNA沉淀2次，最后100％乙醇洗涤，于室温下风干DNA(尽量避免完全风干，否则很难溶解)。加入TE缓冲液或ddH₂O后，于4℃缓慢摇动溶解储存于4℃或-20℃备用。

2、超声波打碎基因组DNA

(1)用纯水清洗变幅竿头，把离心管放入冰水混合物中，先用1％的盐酸，再用0.1M的NaOH，接着用纯水分别超声一次2s，20％的功率，超声2s，间隔1s。

(2)准备多个样品备份以做梯度，分别超声6s、8s、10s、12s把探头伸入上述提取出的中国地鼠DNA溶液中，探头应在整个管子的中心，以使每个点的超声波强度相等，从而使超声后的DNA片段长度更集中。

(3)电泳，看超声后片段大小是否在500bp-1000bp之间。

(4)将超声后DNA放入65℃的温水浴中，逐渐冷却。

3、DNA末端补平

将超声后的中国地鼠DNA溶液放入65℃水浴中缓慢冷却，以使超声过程中分开的双链复性。由于超声会造成DNA链的断裂而形成粘末端，为了不影响DNA与接头的连接，需要对其进行末端补平从而形成平末端。把盛有上述混合液的EP管放入37℃水浴中温浴1h。所用的补平体系如下表1所示，

4、沉淀浓缩DNA和胶回收

(1)向上述体系中加入40μl 3M的NaAc和1ml-20℃的无水乙醇，放入-20℃冰箱中静置30min；

(2)离心，13000rpm，10min，(室温，有利于DNA沉淀)，弃上清；

(3)向沉淀中加入70％的乙醇，颠倒数次；

(4)13000rpm，4℃离心5min；

(5)弃上清，离心机甩一下，吸去上清，室温静置15min，以使酒精挥发干净；

(6)向管中加入60μl ddH₂O溶解，3μl上样电泳；

(7)配置2％的琼脂糖凝胶；

(8)4℃恒温电泳3h；

(9)紫外下切500bp～1kbp的片段，称重；

(10)QIAquick试剂盒回收DNA。

5、定量加linker

关于linker与insert比例的计算方法

$\frac{500x}{30\mathrm{bp}}:\frac{120}{2.5k}=100:1$

在Mg²⁺和ATP存在下，T4DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端连接成重组DNA分子。

按照接头与回收DNA100∶1的比例，在10μl的反应体系中加入回收DNA片段；将碱基互补的寡核苷酸A和磷酸化的寡核苷酸B等摩尔混合，98℃变性1min，60℃退火结合2min，冷却至室温形成具有平末端的接头。采用双链接头2μl(50μM)、10×T4DNA连接缓冲液1μl、T4连接酶(3u/μl)(购自Promega公司)1μl、总体积10μ的体系，在14℃条件下连接16小时，70℃灭活15min。

接头序列为：

SNX Forward  5’-CTAAGGCCTTGCTAGCAGAAGC-3’

SNX Reverse 3’-AAAAGATTCCGGAACGATCGTCTTCGp-5’

正向链的5’端带生物素标记，反向链的5’端带磷酸根。

6、杂交

考虑到碱基互补配对和重复序列拷贝数起始碱基顺序的差异，将同类重复兼并为一种重复代表，2-3碱基重复可以兼并为以下14种类型，14种探针如下表2：

把上述DNA在96℃变性10min，迅速冰浴5min，分装，分别加入Tm值相近的探针，以DNA16μl；HB缓冲液52μl(20×SSC)；探针(1uM)各2μl，ddH₂O 24μl；总体积100μl的杂交体系，分别放入低于Tm值2℃的水浴中杂交6h以上，间隔摇动；降低2℃重复杂交一次。

7、富集

(1)把上述杂交过的100μl DNA加入到盛磁珠的管中，加入200μl HB杂交缓冲液，43℃摇床上摇动3h，间隔震动；

(2)将离心管放在磁力架上1min，用移液器吸弃HB buffer；

(3)加入200μl 2×SSC和0.1％的SDS溶液，室温下静置5min，然后放在磁力架上1min，弃上清；

按照上述步骤并依次在45℃、60℃、90℃重复三次。

8、PCR扩增

把两次杂交富集洗脱下来的单链DNA做PCR，采用50μl反应体系。

PCR反应体系如下：

DNA            34μl

dNTP(10mM)     5μl

10×Taq聚合酶缓冲液          5μl

Taq DNA聚合酶(5u/μl)        1μl

MgCl₂(25mM)                  4μl

上游引物(10pM)               0.4μl

ddH₂O                        0.6μl

扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环后72℃补齐7min，获得双链目的片段。PCR反应结束后取3μl反应液在2％琼脂糖凝胶中电泳检测。QIA Gen试剂盒切胶回收纯化PCR产物。电泳检测结果。Qiaquick试剂盒胶回收，步骤同上。

9、插入片段与载体的连接

(1)外源DNA与载体的比例：根据外源片段和载体的分子量大小，计算连接体系中需要加入的各DNA片段的含量，一般插入片段DNA分子摩尔数∶载体DNA分子摩尔数＝3～8∶1，

(2)连接反应体系(10μl)如下表3所示，

(3)在PCR仪中4℃连接过夜，然后70℃酶灭活15min。

10、电转化与涂板

(1)从-80℃冰箱中取出感受态大肠杆菌放在冰上解冻；

(2)将30μl解冻的感受态大肠杆菌转入1.5ml离心管中，小心混匀和洗净的电击杯一起放在冰上预冷；

(3)取3μl纯化后的质粒于预冷过的离心管中，小心混匀，冰上放置；

(4)打开转化仪，调至Manual，电压调至2.1kv；

(5)将上述混合物转移至预冷过的电击杯中，轻轻混匀，使混合物均匀进入电击杯底部，一定要避免气泡产生；

(6)将电击杯推入电转化仪，按下pμlse键，听到短暂的蜂鸣声，转化时间为4.9ms，然后向电击杯中迅速加入1ml的SOC液体培养基，重悬细胞混匀后转移到一灭过菌的EP管中；

(7)37℃，120rpm复苏1h(保菌见详细)；

(8)在超净台中取20μl复苏后的菌液与180μl的SOC混合，在超净台中把涂布器用酒精灯烧一下，将上述混合物均匀涂布在涂有80μl X-Gal，80μl SOC，20μl IPTG的培养基上；

(9)37℃温箱中培养14h；

(10)克隆培养到适当大小后，挑取2×96个克隆于2个96孔板中，230rpm 37℃培养过夜。

二、含微卫星序列的阳性克隆的筛选、测序及微卫星引物的设计

1、质粒提取

(1)将菌液转入深孔板中，室温1000g离心1min，弃上清；

(2)向沉淀中加入200μl冰预冷的溶液I(溶液中已经加入Rnase)重悬沉淀，室温放置10min；

(3)然后加入新鲜制备的溶液II200μl(0.4MNaOH，2％的SDS比例是1比1)轻轻颠倒混匀数次室温下不超过5min；

(4)然后各加入200μl冰预冷的溶液III，轻轻颠倒数次混匀，冰浴30min，4℃1300g离心20min收集上清；

(5)向上清液中加入80％体积160μl的异丙醇，摇匀，离心1300rpm，20℃离心20min；

(6)加入75％的酒精200μl，混匀，13000rpm，4℃，5min，弃上清，室温下蒸发掉痕量酒精，用40μl ddH₂O溶解沉淀。

2、测序

(1)将上述准备好的模板和384MIX按适当比例混合在一起，封上胶垫，用滚轴压紧，漩涡震荡器上混匀，1000rpm 4℃离心1分钟。

(2)PCR仪上进行测序反应。扩增程序如下：94℃预变性5min；95℃变性15s，50℃退火15s，60℃延伸1min 30s，共35个循环。

(3)在热循环后，待温度降到10℃以下时，将PCR板取出，4℃离心，近1000rpm时停止，将PCR板取出甩一下；

(4)向每孔中加入15μl的95％乙醇乙酸铵混合液；

(5)封胶膜，在旋涡震荡器上震荡混匀，然后放入-20℃冰箱中静置20min；

(6)将PCR板取出，配平放入离心机，4℃，4300rpm离心30min；

(7)离心后甩出孔中液体倒扣在吸水纸上，倒甩(待离心机转到300rpm时按下STOP键，转速不能过大，时间不能过长)；

(8)将384PCR板取出，用连续加样器向每孔加入75％的乙醇33μl；

(9)封白膜，4℃，4300rpm，离心15min；

(10)离心后将384PCR板取出，甩出孔中液体，倒扣在吸水纸上，倒甩，(待离心机转到300rpm时，按下STOP键，时间不能过长，转速不能太大)；

(11)将PCR板取出，放入抽屉中避光静置30min，至乙醇挥发干净；

(12)向每孔中加入甲酰胺溶液8μl，封胶膜；

(13)放入离心机离心，等DNA完全溶解于甲酰胺后，上机测序，用phred/phrep/consed等软件进行拼接处理，筛选出135个含有微卫星序列，然后又随机挑选出40个含有微卫星序列，用primer3.0设计引物。

3、筛选具有多态性的微卫星引物：先用单个个体进行PCR，后用混合DNA的PCR，用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)观察多态性；根据PAGE结果，选取多态性好的引物并在正向链的5’端进行蓝色(FAM)荧光标记。随机选取48个个体，提取DNA并进行定量，模板浓度稀释为10ng/μl做PCR，上机荧光扫描，经过数据处理最终筛选出17对引物。

经过富集文库构建与对引物多态性的筛选，得到17对多态性较高的微卫星引物，现对其引物序列，退火温度，观察杂合度与期望杂合度，多态信息含量等参数总结如下表4所示：

三、利用上述得到的中国地鼠微卫星DNA标记分析中国地鼠SYB1的遗传相似性

1、材料与方法

1.1实验动物

山西医科大学实验动物中心培育的中国地鼠SYB1群体，随机取24只地鼠作为研究对象，取尾巴组织作为实验材料。

1.2基因组DNA的提取

用常规酚氯仿方法提取中国地鼠基因组DNA，提取方法同前。

1.3微卫星PCR反应

所用微卫星引物序列和退火温度见表5。

PCR反应总体积为10μl，其中模板DNA 1.0μl，上下游引物各1.0μl，10×buffer 0.8μl，dNTP0.7μl，rTaq酶0.08μl，ddH₂O 5.42μl。PCR扩增程序为94℃5min，94℃30s，退火45s(根据不同引物采用不同的退火温度，具体温度见表24)，72℃45s，共35个循环，最后72℃20min。在每次PCR扩增时，均设一个阴性对照，以ddH₂O为模板，其他条件均相同，以确定每次PCR过程中均不存在由于外源性DNA污染所产生的不真实的电泳条带。

取2μl的PCR扩增产物加2μl上样缓冲液混匀后，在2％的琼脂糖凝胶上进行电泳分离，电泳缓冲液为1×TBE，电压180V，电泳时间约为15min。

1.4毛细管电泳

取水平电泳有条带的PCR产物进行纯化，进行STR扫描，即毛细管电泳。

纯化的步骤如下：

(1)根据水平电泳的结果，移取3～5μlPCR反应产物至一新的384孔板中；

(2)每孔加入95％的乙醇乙酸铵混合液(30∶1)，乙醇乙酸铵混合物与PCR产物的比例约为3∶1，使乙醇的终浓度为70％，混匀放在-20℃冰箱中冷却20min；

(3)4300rpm，4℃，离心30min；弃上清，倒扣在吸水纸上放入离心机倒甩至500rpm；

(4)每孔加入33μl 70％的乙醇，混匀，4300rpm，4℃离心15min，倒扣在吸水纸上放入离心机倒甩至500rpm；

(5)避光晾干，约20min。加入有内标GeneScanTM-500LIZTM(Applied Biosystems，Inc.)的loading buffer(去离子甲酰铵)8μl，上机荧光扫描。

表5

1.5数据处理

1、荧光扫描结果用GeneMarker V1.6(Applied Biosystems，Inc.)进行基因型判读，用microchecker(Van Ooseterhautet al.2004)，MStools(Park，S.D.E.，2001)检查数据的准确性，用popgene计算SYB1个体间遗传相似性。

2、中国地鼠SYB1的遗传相似性分析

用popgene软件计算SYB124个样本间的Nei氏遗传相似性，详见表6，由表可知，24个样本间的平均遗传相似性为0.9195，遗传距离为0.0805，进一步说明该群体的遗传形状得到纯化。

此外，用上述方法还可以进行中国地鼠品种分析、遗传关系分析及标记辅助育种等，重复性好，是一种比较可靠有效的分子标记。

序列表

<110>山西医科大学

<120>中国地鼠微卫星遗传标记及其筛选方法

<160>17

<210>1

<211>903

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>354…391

<400>1

gctctcttgt gcatgaattt accaaaactc aaaaaaattt ctccaacacc gtcataccca  60

ttttctggag gtatagactg atctccacaa aaagtgagga ggtttgcctc tttctagata 120

ggacaatgaa gcttgctgtt gcaacgggga tgatgatgac caaaaaaggg gagagccagt 180

tggtgaatat gtaagaaaag tgtgaagggg cagccagaga gggatgggct ggagtgttca 240

ggctaaatat caatttaggc aggctgcttc ctaaacccat ggctagtgtt ttatcactct 300

cctacctgtt ggcttgctgt cccctcctga actctggtag caaaatcaaa aaagtgtgtg 360

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tatgtgtgta acaaatgcat gtggaggtca 420

caggataaca cccaaggtca gttctctcta ggatctgggg cttgagttca gccttcccag 480

actgcacagg cacctctatc ctatccacta agccataacg ttggtctcta gttactagtt 540

ttagtgtaac cctaagttcc cctcccagaa taacataatt ctcaaataga gaccacacct 600

atattttaga gagatacttc acaacaaatt ttatatttaa attgaattag acaaaatgcc 660

ttctagaatg caaaatttaa gaattgctta attacatggc accactttaa aatatatatt 720

aagaatagat acataaatgc ttgctaggta ttggcagcag ggatcctagc tcacatagat 780

ttaattagtt cttatgaaag gagccaagag tccagaagac tttaataaag gaaacgaacc 840

ggggtagaag gatgcttctg ctagcaaagc cttagaagca ctagtgcggc cgcctgcagg 900

tcg                                                               903

<210>2

<211>652

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>242…299

<400>2

ggatctaagg ccttgctagc agaagccaat cgaattcaga tgctctggag gctactttta  60

accactaagc caatccagta gcccttaatt ctttttagtt atatttattc ttttgtgtat 120

gcctggtgtg tgtgtatatg cctggtgtgt gtgtctgcga gtgtgtatgt atgtggtgtg 180

tgtgtctgtg tgtctgtgaa tgcgtatgtc tgtagatgtg aatatgtgtg gtgtgtatgt 240

ggtgtgtgtg tgtggggggt gtgtgtgtat gtctgtggat gtatgcagtg tgtgtgtgtc 300

tgtgtgtgtg tccatgccac cgaacacatt ggagatcaca ggacaacctc agctttaatg 360

aatgagtttt ctccacccac cctgtgaatc ccgggggtca aacttgagta gttaggcgtg 420

acttcagata ccttgacctt cggagccatc ttacatcctc ttcttcctcc tcctgcctct 480

ccctccctcc ctctctccaa ataagacaag gtcttgttat gactttttgc ctcagcctct 540

tgagttctat ggtttcaaga gtaaaccaca ccaaaggaaa aaaaattaaa tgtgcttcat 600

gccagatttg ggaatttcac caaatatatg cttctgctag caaggcctta ga         652

<210>3

<211>787

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>233…292

<400>3

tcgacctgca ggcggccgca ctagtgattc taaggccttg ctagcagaag ctgttaaatc  60

agtccacaaa gatcaagtca tgaagtccat tgtgcaattt agacataatg aaccattctt 120

tttagattga tggtaggggc tttcctcaat tcaaatttga gccaatgagc caatatagtc 180

atctgggctt tcaatggata gctgtcaagt ggctattttt ttaaagactt attgtgtgtg 240

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtaggtgcc 300

tgtggttgct agaagagggc atcaggttcc ctggacctga agttgtaggt tgttgtaagc 360

acataacatg agaggtgaga accaaactcc agtcttttgc aagaatactg agtcctctta 420

actcttgaac tgtagttggg ggttatttag ggagcaccac tgaactccca aataaataca 480

tggagcctga ttcccactta tgaatgcctg acttagcttg acttatttct agccagcttt 540

tataaaatta tctcatctac tttttgcctc tggaatttta tctttctcca ttctatatac 600

ttttctttct tattctgttg caggttgtgt acctgggtgg ctaccccctg atgtccacct 660

cgccttcttt tgcactcccc tctcctcttt ttctccttct atttattctc tttgcctgtc 720

agccccacct agctagtggc cattcaactc tttattagac gcttctgcta gcaaggcctt 780

agatccc                                                           787

<210>4

<211>811

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>270…355

<400>4

gatctaaggc cttgctagca gaagcggaac cacatctcaa cttctccaac aaccaccacg  60

atcaacatgc ctggagagat ctcccagcct gatcatgtgg tctggtccat gttcaatatt 120

ctcttcatga acttctgctg cctgggtttc atagcatatg cctactctgt gaaggtattg 180

tatgtgaacc tcaagtttta cttgctccag tggtacctgg ggtgcagggg agatcttggg 240

tcagtgtgag agtttatatg tattatctcg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 300

tgtgtgtgtg agtgtgtgtg tgtgtgagtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgctcc 360

tatgtggtat aagcatgtgt gtataggttt gtgctcctcc atgttagttg tcttcctcaa 420

ttacttcacc ttattttttg agacaacgtc tcacttcact tgaagtgtgc agtttcattt 480

agattagacc aacttgccta caacaactca ggattggtca atctctgtgc cccagcatgg 540

ggactagcat ggtctgcctg gtccccatct cctgagttac agagtgaaaa gctgtatgtg 600

gatttgatgt gtatgctgag gaggtgaact caggttctca tgtttgcata gcaagccctg 660

taccgagtaa tccatgcccc aaactctaag atgatttaaa gaaacatatg tagttatctt 720

cagtgatgat ttgatttaat ttgtgtaggc taattttgtg cttgaagatt tattactgct 780

catgatctgc ttctgctagc aaggccttag a                                811

<210>5

<211>931

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>376…432

<400>5

gatctaaggc cttgctagca gaagctgggc cacgtgtacc ctggaaggtt agctattctt  60

caaaagccac tggaatcagc aaatgccatc agcatttccc cctagcaatt ctgatagacc 120

tttggtcttg agtcttagaa ataaggggtg gtagcactga ctgctgagga gctctgtccc 180

tcgcctgttg tttagcttga actgtgctgg atgtgtcaat ttaatagcct cccagctata 240

aacaacagac tagggcagtg cttcagtccg gaaaacaaaa gagctcacct gcaactaata 300

gaatattaat tacttcaaga gaagctggga taggagggag caaaaggggc aagagaatga 360

aggcatgggg aaggctgtgt gtgtgtgagt gtgtgtatga gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 420

gtgtgtgtgt gtgaacatgt taatcaagtt gttcagacag tgttgaggat gcatgacttt 480

aagggtaaag acaagtcagg ataaagggaa gttacaaaac caccgaacac tatcccctga 540

ctgctctgag gctctcaggg aatggacact caggcacctg gattcttggg agtactgggg 600

cttctgcgca ggggccattg attacaggca catcaaacct ctttgctggg gcagtgaaca 660

tgtctctgag ggactccaga ccacaggccc tctgggttca ggtcccattt ccacccatga 720

ctctttcatc tccaacagcc gtgagtgtgc taaatgtctt gatagaggag gtcatatttg 780

ggaatattct tgggatcaat aggactctgg acaataagtt ttcccctcat tgctccccgg 840

tagatgactt caatcaaatc catgaagtct tgtttggttt tgcttctgct agcaaagcct 900

tagaagcact agtgcggccg cctgcaggtc g                                931

<210>6

<211>606

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>167…214

<400>6

gcctttctgg ctattacaaa tagtgccagc attttcctct tgattttgac tattggttct  60

gaaatcaaca ctcagaatct tcccttcaca acccaagcac tgctgtttct gaaaagaact 120

gccattccat aaataaatat gtcctagagt caatcaatat ccaacagtgt gtgtgtgtgt 180

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtacttta agggccctct gagtgctgga 240

gcagaagttt ctttgcaatg gcatcacagg tgaatttctc tattcagatg atgtttcaaa 300

gggcactgct cattgaaatc ctctatgtaa acactccaga acctttttcc taaagagttg 360

aatctagaat tatcatccga tgcaaaggtc ccagagaagg agcctactgt gtgtatgagg 420

atcagtgagg aggttggagt ggcctgcata gagtaagtga gggatgaaga taagaatctg 480

ggaatggaag ggtttgacct cttgccctga gggaggcaag acgcactgga ggaattgtgg 540

gcatatgagt ggcatgcccc aactaggatt gaacaggtca tttgcttctg ctagcaaggc 600

cttaga                                                            606

<210>7

<211>530

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>217…280

<221>重复单元

<222>337…357

<400>7

tctaaggcct tgctagcaga agccaccaga gtccaccttc tcttccatgt ttatctattt  60

cctgagtctt tgctcagggc aagttttcag cctaactggg caatgggctt tcccaccgag 120

atcctcagag cagatgcccc acattgtcct gttaaacaga gtttgggaca tattttccct 180

ccaatagttg taggctggtg atttcaatgg ttaggagtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 240

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gcatgtacat acagagacca 300

gaagtcaatg tcagttcctc tattattctc tctaggtttt tttttttttt tttttttgag 360

acagggtctc tccctgaacc cgggcttgct gtttcggccg gactgggtgg cgggtggcta 420

atgtggtccc agggtagatc catttctccc ctttcccaga tgtacccatc tgtgcacaac 480

tcttccatag gggctaggga tccaaactca gggtgtgtgc ttgcacacca            530

<210>8

<211>642

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>392…430

<220>

<221>重复单元

<222>431…472

<400>8

tgctagcaga agctgataat caaaattctg tgccaggata tctcatttta acattttcca  60

aacgttggct ctccacacta ttaatatctc catttaagaa gaaactgatg ctttgagagc 120

tctgagtcta tgaaatctca acaataccat cacctaaaca agacctgcac attggcaaca 180

ctaactaaca tatcaacaca gatggaagaa atctcccagg gtcttagatg aagaaccata 240

ggttatcaat ggctgctaag agagggagag tcagtcgttc ccagggacaa ggtgatctaa 300

tcccaagaag tctaccctaa acacatatgc ataggatcaa aactaaatgg actccgtagg 360

ttgtatttat ctatgcatat atgtgcctgt atgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 420

gtgtgtgtgt gagagagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga gaattaaaga 480

attggccatt attttgaggg gtacacaagg aaaattgtga gtgggagaga agagatggaa 540

ttgctgtaaa tatagtactc aagtatgaaa ttctcaaaat gagtttaaat ttttaaaata 600

aaaaaaacaa atagcttatg cttctgctag caaggcctta ga                    642

<210>9

<211>902

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>171…220

<400>9

catgctccgg cgccatggcc gtaggatcta aggccttgct agcagaagcg atatgtacat  60

caggctggcc atgaactccc taggtaacca aggatgatac tcctgtctcc acctcccaaa 120

ccctgagatg atagatacaa gccaacactc tggatttttt tttacgtgtg gtgtgtgtgt 180

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gcttgtgccc tgtgtatgtc 240

ctatgtgtgc aggtacctgc agagacaaga agagagcata catcccccag agctggagtt 300

acaggcagct acaaaacacc ccagctataa aacaccccac caaacctggg tcctccagaa 360

gagaactgag ctctcctaaa caaccagcca cctctccagc ctgagactat ttttaaggaa 420

taagttccca tccagaggtc tacctccaca ctgggctcca gcgtcctgct gtgcggagtg 480

cctgaaggca aggctgtctt cccactttcc ctttcacaag cagtgccgga aaggcatctc 540

ctgctcaact gaattttact actcactgcc ctgaggaatg aaatctgcag tggtcaaagg 600

gacaacctgg caattctttt aataagcata ccacaagggc tacacccttc tttcacaata 660

tcattgatgg acatatttcc aataaaactg tactacataa ctggactcac gtcttggcag 720

ctgtgcattt caagcctgaa agggttccag acccagacac tgggctctgt ggaaagcaga 780

gaacctctcc tagagtgcac tcccatcccc ctgcacggaa ggaagctagg tgtctgggga 840

tatcaatgaa gagtgtgcta ccaggtatct ggcctcttcg cttctgctag caaggcctta 900

ga                                                                902

<210>10

<211>771

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>355…404

<400>10

gatctaaggc cttgctagca gaagcattgt ctgtgtccta aggcagtgtt cttcaaattt  60

cctttagacg atagaatctc ttataaataa aaactaacac agaatcccaa agcaagaagt 120

cgacacagga agggtgcttg tttcatagta agggtggtgg ctcaaacccc tcctaagcag 180

ttcccctggc ccttaagtca cagaagtgaa gacttgggac tctgagagat ctggtatgaa 240

acacagatgc ccaaactctc tccacggggc aggaagcagt aactgtgagt ttcactcatc 300

aggaaaaaca gggatgcatt ttctaaagac ttatttttag taattttgag tgtggtgtgt 360

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtaaatgc aggtgctgtg 420

caggccagag gtgtcggatc ccctaagaac catagttaga gcctgttgtg aaccacaaca 480

ggtgctgcca tgaaaagtgg tgtagtccat ggggtgactt ccaagattag aactaaagca 540

tactatctcg ggttcattac tgtgttctag aatcgagctt tgtgcccttt ccatgtctgc 600

cattgctact gtcctcactc atctgagaga cttaacatga aaatacctta gttttagtat 660

tttgagtcca taaaacttag tgtgttgtca gcttccacac ttgaccatta tagactcata 720

ggcttctgct agcaagacct tagaatgact agtgcggccg cctgcaggtc g          771

<210>11

<211>657

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>383…428

<400>11

ggattctaag gccttgctag cagaagcgct cttgagaagc tgagatagga ggattcccga  60

ctaaacagac aagtagggca gtgaggtggc cggagcttgg cctcacccct ccccagagcc 120

cacatggtga gagaagagaa cagactccca caaattatcc tccaatttcc acaatacacc 180

acaacatggt gtacatgtgc ccacatacat gacacaaaat aaatgacaca aaataaatgt 240

taagaaaaag acgagtaatg gtgaaaagta gaaaaaggac atttattcaa tgtgaccaca 300

ttgggaagag aaacagaaaa agagacccag agatccctga attgtgaggg ttaggtttaa 360

agatttgttt tatgttttca attgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 420

tgtgtgtgta catgagcgca ggtacccaca gaggtcagaa gagggtgttg ggattcctgg 480

agctggagtt acaggttagc ttattcctgg gttctgggaa ccaaacccgg gtcctctgaa 540

agacatcact ccagctccag agttggtgta tgtggactat ggggacctcc tggcccttcc 600

ctgaatgctt ctgctagcaa ggccttagaa tgactagtgc ggccgcctgc aggtcga    657

<210>12

<211>430

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>259…316

<400>12

tcgacctgca ggcggccgca ctagtgattc taaggccttg ctagcagaag ccttctgaag  60

acacacctac actgatagtt tttaggtact gccagatacc ttcctaagat aaatcatgtg 120

ctgggtctca ggatatcctg ctagttactg acccatgcta gatactgacc ccattcgtaa 180

accagagtgg aacattagga tctggagtgt tatgggtaat gtgagtttat ccctacctaa 240

caacaaaagt actcataaac acacacacac acacacacac acacacacgc acacacaaac 300

acacacacac acacacagag acagagacag agagaactgg ataggtgtca agtactacta 360

ggtatcctgt gtaatctgct taagaaagga gattcctttc agtacaccaa atatagggct 420

gactgtgggg                                                        430

<210>13

<211>724

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>168…205

<400>13

ggatctaagg ccttgctagc agaaccgagc tggatttgca gctggttttg agctacctgg  60

cttgagttct gggaatgaac tcaggtcctc tggaagagaa agcaagctag tgatcttagc 120

tgctgctttc tctccagcct cttataggtc tttcaattcc atttaaagtg tgtgtgtgtg 180

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgcata tggaggtcag aagacaacaa tttgtggaag 240

ttttctccta ctttatgggt tccagtgatc aaacaactca ggtcttcagc gttggcaaca 300

ggtgcctttg tggtgcagcc atttcactgg cttgattttt ttagaaaaac aataatctaa 360

aacaaaataa attcagatag ctctgccttc aatcttctat tctattcttc ctttccccag 420

gtaataattt atatttgttt gatttgtctc ttttggggtg gggttcatgc tgaaaatgga 480

atccacggcc tgcacctgtt agctcagcac taaactgcac cccccagccc ctcattggtg 540

tagacggagt ttctgtccca cctgattcca tagccgttta gccccaaata aacacacaga 600

ggcttacatt aattttataa actgtttgat ctatggctta ggcttcttac tggctagctc 660

cctcttaatt attaagcttc tgctagcaag gccttagaat gactagtgcg gccgcctgca 720

gtcg                                                              724

<210>14

<211>547

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>369…448

<400>14

agaagctcct ccttcccctc tccaggcatg ccatgaggtc atttcattgc taacgcttgt  60

ttgccattct tgtgccatct gccatgaggt aatgtagcca agggggttct tgccagagcc 120

tgagctacgg tgcttagact ttctgcctcc aaaaccgtaa gttaaataag cctcttttct 180

tcataagtac ccagtttggg gatattttat tataataaag aaaaccaggc taatcaaaag 240

tgagaaaaca ttaggtaaat gatagtcacc aaaacagtgt ttgtgtggct agactgaagg 300

ccaggccaaa ggccttgagg tggagttgga gtaggaggct tcagatgaac gtgaaccacc 360

tgaaccacct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctgtgt gtgtgtgtgt 420

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtcc acacatgtgg atgttagagg atagctgtca 480

gtccctgcct acctctttat tttggacttt cccactcagt ttccgcttct gctagcaagg 540

ccttaga                                                           547

<210>15

<211>799

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>326…367

<400>15

gatctaaggc cttgctagca gaagccgaat ttaataaatc tctccaaaag gccacttaca  60

ctcaaatcca ttcactctgg actgttttct caaatatttc ttcagcctct gtgttgagca 120

ccagctgtgc actaggcact gggccaggca cttttgtcct taagatctgt cttatggaag 180

gggcagcaag acagtgcagt gaggaaaggc acctggcacc aagcctgatg gcctgagttt 240

gatgatcccc agcacctaca tggtaggaga agataacaga ctcccacaag ttgttgtcct 300

ctgacctcca cacatgtcgt ggcctacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca 360

cacacacaat tttaaatact aaaaaagacc ccatgaaaga tatttatctt tgcagagaag 420

tgaactcagt gccaacacag gttgctgaga ggggtagatt gaggtaaact tccaagtttc 480

ctgtgataat cacttcatgt cacatagagc acttctatgt taccagagac ttcacaacaa 540

gcactctgaa cagaagagca cgcctggctt cacagagtct gtagcgagga aggaaatgac 600

tacttgctat ggccgaagga ggttcataaa ttgatgcttc tgagcagagt acactggcgt 660

gcccctgtaa tcccagtaat ccagaggcag gtgcaggagg agcagatcct gagttttagc 720

cctcaaacca aaacagagcc taggagatga ctcagcagtt agagcactta ccatgcgctt 780

ctgctagcaa agccttaga                                              799

<210>16

<211>648

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>94…135

<400>16

tctaaggcct tgctagcaga agcttactaa gtcttcaagc agctttaaag gaccctggta  60

aagacagatc ccgacccatt taggccttat tattctctct ctctttccct ctctctctct 120

ctctctctct ctctctatct atctatctat ctctccaagt ctctcagaga cactctggcc 180

ttgtctttgc cgctgcaacc tggatgaatg gcagcagctc tggacttgct caggactgtt 240

ctctaccaaa tctgttcaat tgtctgtctg tttgcatgtg tatcccttgc tgtgtgtgtt 300

tctgtctctg tcagagtatt gaagagcatg ctaaaccact ctaaaatggc aaaattaagg 360

tgccttttat tgtcctgtag ataccattct ttttcaaaca tgtgaatgtt ttcagtcaag 420

ttgcttgtat caaaaaggca gctgatgtgt ctccaattta tgtttttggc aaacccaaag 480

ttttcatgta agtacaagtg agatgaatgg gacccatgca aaaaggtcca aagattcact 540

ccagataaac agtattcatc ctctcaacgt tcccacattc ctctcttcct catctggtac 600

ttccctggga aaacactccc tcatctgacc atgcaaccct ctgtcagc              648

<210>17

<211>614

<212>DNA

<213>中国地鼠(Cricetulus griseus)

<220>

<221>重复单元

<222>104…145

<400>17

taaggccttg ctagcagaag cacaaaccaa caaaaaaaat caacttttaa aataaaacca  60

gcaacaagtg gaaattttgg agatgaaaaa ctcaatgaat ccagtgtgtg tgtgtgtgtg 120

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtggcga ggggcgggta gtggacagta tcactaatat 180

actgaccaag cagaagacag aatatcaagg ttaaggacaa ggttgaggaa atactacatg 240

aaaatactaa tcaggaagag aagagcttgg cctcaatgtc taagaattct gagatataac 300

caagaggcaa aatagaagga tccaggggat agaagaggga cctgaaataa aaattaaagg 360

tataagaaat caaactgata tattgtagcc tattccccac ccccccacca ccaaatctga 420

agaaagaatg gtcatttaat gcaagagcat gatcacagaa gaagtgctct atgacatatg 480

atagttagga tgttgacaac ataaagcaaa gaagaaatat taaaaactgt aagaggccag 540

ctatggtggt tcaaactact catcatatga ccagaaggcc aagaggaaga ggaaggcaca 600

gtctgcttta aggaatgtcc cctctattga cctatggacc tcccactatc cgcttctgct 660

agcaaggcct taga                                                   614

Claims (4)

1、一种中国地鼠微卫星遗传标记，其特征是所述微卫星标记的编号分别为Chm35、Chm93、Chm147、Chm79、Chm120、Chm162、Chm10、Chm108、Chm115、Chm124、Chm134、Chm14、Chm140、Chm48、Chm54、Chm9、Chm91，其核苷酸序列分别如下：

Chm35

gctctcttgt gcatgaattt accaaaactc aaaaaaattt ctccaacacc gtcataccca  60

ttttctggag gtatagactg atctccacaa aaagtgagga ggtttgcctc tttctagata 120

ggacaatgaa gcttgctgtt gcaacgggga tgatgatgac caaaaaaggg gagagccagt 180

tggtgaatat gtaagaaaag tgtgaagggg cagccagaga gggatgggct ggagtgttca 240

ggctaaatat caatttaggc aggctgcttc ctaaacccat ggctagtgtt ttatcactct 300

cctacctgtt ggcttgctgt cccctcctga actctggtag caaaatcaaa aaagtgtgtg 360

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tatgtgtgta acaaatgcat gtggaggtca 420

caggataaca cccaaggtca gttctctcta ggatctgggg cttgagttca gccttcccag 480

actgcacagg cacctctatc ctatccacta agccataacg ttggtctcta gttactagtt 540

ttagtgtaac cctaagttcc cctcccagaa taacataatt ctcaaataga gaccacacct 600

atattttaga gagatacttc acaacaaatt ttatatttaa attgaattag acaaaatgcc 660

ttctagaatg caaaatttaa gaattgctta attacatggc accactttaa aatatatatt 720

aagaatagat acataaatgc ttgctaggta ttggcagcag ggatcctagc tcacatagat 780

ttaattagtt cttatgaaag gagccaagag tccagaagac tttaataaag gaaacgaacc 840

ggggtagaag gatgcttctg ctagcaaagc cttagaagca ctagtgcggc cgcctgcagg 900

tcg                                                               903

Chm93

ggatctaagg ccttgctagc agaagccaat cgaattcaga tgctctggag gctactttta  60

accactaagc caatccagta gcccttaatt ctttttagtt atatttattc ttttgtgtat 120

gcctggtgtg tgtgtatatg cctggtgtgt gtgtctgcga gtgtgtatgt atgtggtgtg 180

tgtgtctgtg tgtctgtgaa tgcgtatgtc tgtagatgtg aatatgtgtg gtgtgtatgt 240

ggtgtgtgtg tgtggggggt gtgtgtgtat gtctgtggat gtatgcagtg tgtgtgtgtc 300

tgtgtgtgtg tccatgccac cgaacacatt ggagatcaca ggacaacctc agctttaatg 360

aatgagtttt ctccacccac cctgtgaatc ccgggggtca aacttgagta gttaggcgtg 420

acttcagata ccttgacctt cggagccatc ttacatcctc ttcttcctcc tcctgcctct 480

ccctccctcc ctctctccaa ataagacaag gtcttgttat gactttttgc ctcagcctct 540

tgagttctat ggtttcaaga gtaaaccaca ccaaaggaaa aaaaattaaa tgtgcttcat 600

gccagatttg ggaatttcac caaatatatg cttctgctag caaggcctta ga         652

Chm147

tcgacctgca ggcggccgca ctagtgattc taaggccttg ctagcagaag ctgttaaatc  60

agtccacaaa gatcaagtca tgaagtccat tgtgcaattt agacataatg aaccattctt 120

tttagattga tggtaggggc tttcctcaat tcaaatttga gccaatgagc caatatagtc 180

atctgggctt tcaatggata gctgtcaagt ggctattttt ttaaagactt attgtgtgtg 240

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtaggtgcc 300

tgtggttgct agaagagggc atcaggttcc ctggacctga agttgtaggt tgttgtaagc 360

acataacatg agaggtgaga accaaactcc agtcttttgc aagaatactg agtcctctta 420

actcttgaac tgtagttggg ggttatttag ggagcaccac tgaactccca aataaataca 480

tggagcctga ttcccactta tgaatgcctg acttagcttg acttatttct agccagcttt 540

tataaaatta tctcatctac tttttgcctc tggaatttta tctttctcca ttctatatac 600

ttttctttct tattctgttg caggttgtgt acctgggtgg ctaccccctg atgtccacct 660

cgccttcttt tgcactcccc tctcctcttt ttctccttct atttattctc tttgcctgtc 720

agccccacct agctagtggc cattcaactc tttattagac gcttctgcta gcaaggcctt 780

agatccc                                                           787

Chm79

gatctaaggc cttgctagca gaagcggaac cacatctcaa cttctccaac aaccaccacg  60

atcaacatgc ctggagagat ctcccagcct gatcatgtgg tctggtccat gttcaatatt 120

ctcttcatga acttctgctg cctgggtttc atagcatatg cctactctgt gaaggtattg 180

tatgtgaacc tcaagtttta cttgctccag tggtacctgg ggtgcagggg agatcttggg 240

tcagtgtgag agtttatatg tattatctcg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 300

tgtgtgtgtg agtgtgtgtg tgtgtgagtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgctcc 360

tatgtggtat aagcatgtgt gtataggttt gtgctcctcc atgttagttg tcttcctcaa 420

ttacttcacc ttattttttg agacaacgtc tcacttcact tgaagtgtgc agtttcattt 480

agattagacc aacttgccta caacaactca ggattggtca atctctgtgc cccagcatgg 540

ggactagcat ggtctgcctg gtccccatct cctgagttac agagtgaaaa gctgtatgtg 600

gatttgatgt gtatgctgag gaggtgaact caggttctca tgtttgcata gcaagccctg 660

taccgagtaa tccatgcccc aaactctaag atgatttaaa gaaacatatg tagttatctt 720

cagtgatgat ttgatttaat ttgtgtaggc taattttgtg cttgaagatt tattactgct 780

catgatctgc ttctgctagc aaggccttag a                                811

Chm120

gatctaaggc cttgctagca gaagctgggc cacgtgtacc ctggaaggtt agctattctt  60

caaaagccac tggaatcagc aaatgccatc agcatttccc cctagcaatt ctgatagacc 120

tttggtcttg agtcttagaa ataaggggtg gtagcactga ctgctgagga gctctgtccc 180

tcgcctgttg tttagcttga actgtgctgg atgtgtcaat ttaatagcct cccagctata 240

aacaacagac tagggcagtg cttcagtccg gaaaacaaaa gagctcacct gcaactaata 300

gaatattaat tacttcaaga gaagctggga taggagggag caaaaggggc aagagaatga 360

aggcatgggg aaggctgtgt gtgtgtgagt gtgtgtatga gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 420

gtgtgtgtgt gtgaacatgt taatcaagtt gttcagacag tgttgaggat gcatgacttt 480

aagggtaaag acaagtcagg ataaagggaa gttacaaaac caccgaacac tatcccctga 540

ctgctctgag gctctcaggg aatggacact caggcacctg gattcttggg agtactgggg 600

cttctgcgca ggggccattg attacaggca catcaaacct ctttgctggg gcagtgaaca 660

tgtctctgag ggactccaga ccacaggccc tctgggttca ggtcccattt ccacccatga 720

ctctttcatc tccaacagcc gtgagtgtgc taaatgtctt gatagaggag gtcatatttg 780

ggaatattct tgggatcaat aggactctgg acaataagtt ttcccctcat tgctccccgg 840

tagatgactt caatcaaatc catgaagtct tgtttggttt tgcttctgct agcaaagcct 900

tagaagcact agtgcggccg cctgcaggtc g                                931

Chm162

gcctttctgg ctattacaaa tagtgccagc attttcctct tgattttgac tattggttct  60

gaaatcaaca ctcagaatct tcccttcaca acccaagcac tgctgtttct gaaaagaact 120

gccattccat aaataaatat gtcctagagt caatcaatat ccaacagtgt gtgtgtgtgt 180

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtacttta agggccctct gagtgctgga 240

gcagaagttt ctttgcaatg gcatcacagg tgaatttctc tattcagatg atgtttcaaa 300

gggcactgct cattgaaatc ctctatgtaa acactccaga acctttttcc taaagagttg 360

aatctagaat tatcatccga tgcaaaggtc ccagagaagg agcctactgt gtgtatgagg 420

atcagtgagg aggttggagt ggcctgcata gagtaagtga gggatgaaga taagaatctg 480

ggaatggaag ggtttgacct cttgccctga gggaggcaag acgcactgga ggaattgtgg 540

gcatatgagt ggcatgcccc aactaggatt gaacaggtca tttgcttctg ctagcaaggc 600

cttaga                                                            606

Chm10

tctaaggcct tgctagcaga agccaccaga gtccaccttc tcttccatgt ttatctattt  60

cctgagtctt tgctcagggc aagttttcag cctaactggg caatgggctt tcccaccgag 120

atcctcagag cagatgcccc acattgtcct gttaaacaga gtttgggaca tattttccct 180

ccaatagttg taggctggtg atttcaatgg ttaggagtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 240

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gcatgtacat acagagacca 300

gaagtcaatg tcagttcctc tattattctc tctaggtttt tttttttttt tttttttgag 360

acagggtctc tccctgaacc cgggcttgct gtttcggccg gactgggtgg cgggtggcta 420

atgtggtccc agggtagatc catttctccc ctttcccaga tgtacccatc tgtgcacaac 480

tcttccatag gggctaggga tccaaactca gggtgtgtgc ttgcacacca            530

Chm108

tgctagcaga agctgataat caaaattctg tgccaggata tctcatttta acattttcca  60

aacgttggct ctccacacta ttaatatctc catttaagaa gaaactgatg ctttgagagc 120

tctgagtcta tgaaatctca acaataccat cacctaaaca agacctgcac attggcaaca 180

ctaactaaca tatcaacaca gatggaagaa atctcccagg gtcttagatg aagaaccata 240

ggttatcaat ggctgctaag agagggagag tcagtcgttc ccagggacaa ggtgatctaa 300

tcccaagaag tctaccctaa acacatatgc ataggatcaa aactaaatgg actccgtagg 360

ttgtatttat ctatgcatat atgtgcctgt atgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 420

gtgtgtgtgt gagagagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga gaattaaaga 480

attggccatt attttgaggg gtacacaagg aaaattgtga gtgggagaga agagatggaa 540

ttgctgtaaa tatagtactc aagtatgaaa ttctcaaaat gagtttaaat ttttaaaata 600

aaaaaaacaa atagcttatg cttctgctag caaggcctta ga                    642

Chm115

catgctccgg cgccatggcc gtaggatcta aggccttgct agcagaagcg atatgtacat  60

caggctggcc atgaactccc taggtaacca aggatgatac tcctgtctcc acctcccaaa 120

ccctgagatg atagatacaa gccaacactc tggatttttt tttacgtgtg gtgtgtgtgt 180

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gcttgtgccc tgtgtatgtc 240

ctatgtgtgc aggtacctgc agagacaaga agagagcata catcccccag agctggagtt 300

acaggcagct acaaaacacc ccagctataa aacaccccac caaacctggg tcctccagaa 360

gagaactgag ctctcctaaa caaccagcca cctctccagc ctgagactat ttttaaggaa 420

taagttccca tccagaggtc tacctccaca ctgggctcca gcgtcctgct gtgcggagtg 480

cctgaaggca aggctgtctt cccactttcc ctttcacaag cagtgccgga aaggcatctc 540

ctgctcaact gaattttact actcactgcc ctgaggaatg aaatctgcag tggtcaaagg 600

gacaacctgg caattctttt aataagcata ccacaagggc tacacccttc tttcacaata 660

tcattgatgg acatatttcc aataaaactg tactacataa ctggactcac gtcttggcag 720

ctgtgcattt caagcctgaa agggttccag acccagacac tgggctctgt ggaaagcaga 780

gaacctctcc tagagtgcac tcccatcccc ctgcacggaa ggaagctagg tgtctgggga 840

tatcaatgaa gagtgtgcta ccaggtatct ggcctcttcg cttctgctag caaggcctta 900

ga                                                                902

Chm124

gatctaaggc cttgctagca gaagcattgt ctgtgtccta aggcagtgtt cttcaaattt  60

cctttagacg atagaatctc ttataaataa aaactaacac agaatcccaa agcaagaagt 120

cgacacagga agggtgcttg tttcatagta agggtggtgg ctcaaacccc tcctaagcag 180

ttcccctggc ccttaagtca cagaagtgaa gacttgggac tctgagagat ctggtatgaa 240

acacagatgc ccaaactctc tccacggggc aggaagcagt aactgtgagt ttcactcatc 300

aggaaaaaca gggatgcatt ttctaaagac ttatttttag taattttgag tgtggtgtgt 360

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtaaatgc aggtgctgtg 420

caggccagag gtgtcggatc ccctaagaac catagttaga gcctgttgtg aaccacaaca 480

ggtgctgcca tgaaaagtgg tgtagtccat ggggtgactt ccaagattag aactaaagca 540

tactatctcg ggttcattac tgtgttctag aatcgagctt tgtgcccttt ccatgtctgc 600

cattgctact gtcctcactc atctgagaga cttaacatga aaatacctta gttttagtat 660

tttgagtcca taaaacttag tgtgttgtca gcttccacac ttgaccatta tagactcata 720

ggcttctgct agcaagacct tagaatgact agtgcggccg cctgcaggtc g          771

Chm134

ggattctaag gccttgctag cagaagcgct cttgagaagc tgagatagga ggattcccga  60

ctaaacagac aagtagggca gtgaggtggc cggagcttgg cctcacccct ccccagagcc 120

cacatggtga gagaagagaa cagactccca caaattatcc tccaatttcc acaatacacc 180

acaacatggt gtacatgtgc ccacatacat gacacaaaat aaatgacaca aaataaatgt 240

taagaaaaag acgagtaatg gtgaaaagta gaaaaaggac atttattcaa tgtgaccaca 300

ttgggaagag aaacagaaaa agagacccag agatccctga attgtgaggg ttaggtttaa 360

agatttgttt tatgttttca attgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 420

tgtgtgtgta catgagcgca ggtacccaca gaggtcagaa gagggtgttg ggattcctgg 480

agctggagtt acaggttagc ttattcctgg gttctgggaa ccaaacccgg gtcctctgaa 540

agacatcact ccagctccag agttggtgta tgtggactat ggggacctcc tggcccttcc 600

ctgaatgctt ctgctagcaa ggccttagaa tgactagtgc ggccgcctgc aggtcga    657

Chm14

tcgacctgca ggcggccgca ctagtgattc taaggccttg ctagcagaag ccttctgaag  60

acacacctac actgatagtt tttaggtact gccagatacc ttcctaagat aaatcatgtg 120

ctgggtctca ggatatcctg ctagttactg acccatgcta gatactgacc ccattcgtaa 180

accagagtgg aacattagga tctggagtgt tatgggtaat gtgagtttat ccctacctaa 240

caacaaaagt actcataaac acacacacac acacacacac acacacacgc acacacaaac 300

acacacacac acacacagag acagagacag agagaactgg ataggtgtca agtactacta 360

ggtatcctgt gtaatctgct taagaaagga gattcctttc agtacaccaa atatagggct 420

gactgtgggg                                                        430

Chm140

ggatctaagg ccttgctagc agaaccgagc tggatttgca gctggttttg agctacctgg  60

cttgagttct gggaatgaac tcaggtcctc tggaagagaa agcaagctag tgatcttagc 120

tgctgctttc tctccagcct cttataggtc tttcaattcc atttaaagtg tgtgtgtgtg 180

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgcata tggaggtcag aagacaacaa tttgtggaag 240

ttttctccta ctttatgggt tccagtgatc aaacaactca ggtcttcagc gttggcaaca 300

ggtgcctttg tggtgcagcc atttcactgg cttgattttt ttagaaaaac aataatctaa 360

aacaaaataa attcagatag ctctgccttc aatcttctat tctattcttc ctttccccag 420

gtaataattt atatttgttt gatttgtctc ttttggggtg gggttcatgc tgaaaatgga 480

atccacggcc tgcacctgtt agctcagcac taaactgcac cccccagccc ctcattggtg 540

tagacggagt ttctgtccca cctgattcca tagccgttta gccccaaata aacacacaga 600

ggcttacatt aattttataa actgtttgat ctatggctta ggcttcttac tggctagctc 660

cctcttaatt attaagcttc tgctagcaag gccttagaat gactagtgcg gccgcctgca 720

gtcg                                                              724

Chm48

agaagctcct ccttcccctc tccaggcatg ccatgaggtc atttcattgc taacgcttgt  60

ttgccattct tgtgccatct gccatgaggt aatgtagcca agggggttct tgccagagcc 120

tgagctacgg tgcttagact ttctgcctcc aaaaccgtaa gttaaataag cctcttttct 180

tcataagtac ccagtttggg gatattttat tataataaag aaaaccaggc taatcaaaag 240

tgagaaaaca ttaggtaaat gatagtcacc aaaacagtgt ttgtgtggct agactgaagg 300

ccaggccaaa ggccttgagg tggagttgga gtaggaggct tcagatgaac gtgaaccacc 360

tgaaccacct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctgtgt gtgtgtgtgt 420

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtcc acacatgtgg atgttagagg atagctgtca 480

gtccctgcct acctctttat tttggacttt cccactcagt ttccgcttct gctagcaagg 540

ccttaga                                                           547

Chm54

gatctaaggc cttgctagca gaagccgaat ttaataaatc tctccaaaag gccacttaca  60

ctcaaatcca ttcactctgg actgttttct caaatatttc ttcagcctct gtgttgagca 120

ccagctgtgc actaggcact gggccaggca cttttgtcct taagatctgt cttatggaag 180

gggcagcaag acagtgcagt gaggaaaggc acctggcacc aagcctgatg gcctgagttt 240

gatgatcccc agcacctaca tggtaggaga agataacaga ctcccacaag ttgttgtcct 300

ctgacctcca cacatgtcgt ggcctacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca 360

cacacacaat tttaaatact aaaaaagacc ccatgaaaga tatttatctt tgcagagaag 420

tgaactcagt gccaacacag gttgctgaga ggggtagatt gaggtaaact tccaagtttc 480

ctgtgataat cacttcatgt cacatagagc acttctatgt taccagagac ttcacaacaa 540

gcactctgaa cagaagagca cgcctggctt cacagagtct gtagcgagga aggaaatgac 600

tacttgctat ggccgaagga ggttcataaa ttgatgcttc tgagcagagt acactggcgt 660

gcccctgtaa tcccagtaat ccagaggcag gtgcaggagg agcagatcct gagttttagc 720

cctcaaacca aaacagagcc taggagatga ctcagcagtt agagcactta ccatgcgctt 780

ctgctagcaa agccttaga                                              799

Chm9

tctaaggcct tgctagcaga agcttactaa gtcttcaagc agctttaaag gaccctggta  60

aagacagatc ccgacccatt taggccttat tattctctct ctctttccct ctctctctct 120

ctctctctct ctctctatct atctatctat ctctccaagt ctctcagaga cactctggcc 180

ttgtctttgc cgctgcaacc tggatgaatg gcagcagctc tggacttgct caggactgtt 240

ctctaccaaa tctgttcaat tgtctgtctg tttgcatgtg tatcccttgc tgtgtgtgtt 300

tctgtctctg tcagagtatt gaagagcatg ctaaaccact ctaaaatggc aaaattaagg 360

tgccttttat tgtcctgtag ataccattct ttttcaaaca tgtgaatgtt ttcagtcaag 420

ttgcttgtat caaaaaggca gctgatgtgt ctccaattta tgtttttggc aaacccaaag 480

ttttcatgta agtacaagtg agatgaatgg gacccatgca aaaaggtcca aagattcact 540

ccagataaac agtattcatc ctctcaacgt tcccacattc ctctcttcct catctggtac 600

ttccctggga aaacactccc tcatctgacc atgcaaccct ctgtcagc              648

Chm91

taaggccttg ctagcagaag cacaaaccaa caaaaaaaat caacttttaa aataaaacca  60

gcaacaagtg gaaattttgg agatgaaaaa ctcaatgaat ccagtgtgtg tgtgtgtgtg 120

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtggcga ggggcgggta gtggacagta tcactaatat 180

actgaccaag cagaagacag aatatcaagg ttaaggacaa ggttgaggaa atactacatg 240

aaaatactaa tcaggaagag aagagcttgg cctcaatgtc taagaattct gagatataac 300

caagaggcaa aatagaagga tccaggggat agaagaggga cctgaaataa aaattaaagg 360

tataagaaat caaactgata tattgtagcc tattccccac ccccccacca ccaaatctga 420

agaaagaatg gtcatttaat gcaagagcat gatcacagaa gaagtgctct atgacatatg 480

atagttagga tgttgacaac ataaagcaaa gaagaaatat taaaaactgt aagaggccag 540

ctatggtggt tcaaactact catcatatga ccagaaggcc aagaggaaga ggaaggcaca 600

gtctgcttta aggaatgtcc cctctattga cctatggacc tcccactatc cgcttctgct 660

agcaaggcct taga                                                   614。

2、根据权利要求1所述的中国地鼠微卫星遗传标记，其特征是编号分别为Chm35、Chm93、Chm147、Chm79、Chm120、Chm162、Chm10、Chm108、Chm115、Chm124、Chm134、Chm14、Chm140、Chm48、Chm54、Chm9、Chm91的微卫星核苷酸序列两端的引物序列分别如下：

Chm35-F：aggctgcttcctaaacccat

Chm35-R：ctgggaaggctgaactcaag

Chm93-F：tctgtgtgtctgtgaatgcg

Chm93-R：ggatgtaagatggctccgaa

Chm147-F：catctgggctttcaatggat

Chm147-R：gctccctaaataacccccaa

Chm79-F：aggggagatcttgggtcagt

Chm79-R：aacatggaggagcacaaacc

Chm120-F：gataggagggagcaaaaggg

Chm120-R：cctgagagcctcagagcagt

Chm162-F：tcttcccttcacaacccaag

Chm162-R：agcagtgccctttgaaacat

Chm10-F：ggctggtgatttcaatggtt

Chm10-R：gttcttaatggatctaccctgggacc

Chm108-F：caatggctgctaagagaggg

Chm108-R：gttctttcccactcacaattttccttg

Chm115-F：tactcctgtctccacctccc

Chm115-R：gttctttctgggggatgtatgctctc

Chm124-F：cagatgcccaaactctctcc

Chm124-R：gttcttgtcaccccatggactacacc

Chm134-F：tgcccacatacatgacacaa

Chm134-R：gttctttcccaacaccctcttctgac

Chm14-F：gaccccattcgtaaaccaga

Chm14-R：gttcttccccacagtcagccctatatt

Chm140-F：gcagctggttttgagctacc

Chm140-R：gttctttgtttgatcactggaaccca

Chm48-F：aaaggccttgaggtggagtt

Chm48-R：gttcttgaggtaggcagggactgaca

Chm54-F：agtttgatgatccccagcac

Chm54-R：gttcttctacccctctcagcaacctg

Chm9-F：gacagatcccgacccattta

Chm9-R：gttcttgtcctgagcaagtccagagc

Chm91-F：gcagaagcacaaaccaacaa

Chm91-R：gttcttaggccaagctcttctcttcc。

3、根据权利要求2所述的中国地鼠微卫星遗传标记，其特征是编号分别为Chm35、Chm93、Chm147、Chm79、Chm120、Chm162、Chm10、Chm108、Chm115、Chm124、Chm134、Chm14、Chm140、Chm48、Chm54、Chm9、Chm91的微卫星核苷酸序列两端的引物的退火温度分别为51℃、58℃、58℃、51℃、58℃、58℃、59℃、59℃、59℃、59℃、59℃、59℃、60℃、60℃、59℃、59℃、59℃。

4、筛选如权利要求1所述的中国地鼠微卫星遗传标记的方法，包括提取中国地鼠的DNA基因组，其特征是对中国地鼠的DNA基因组采用超声波进行打碎，使得超声后的片段大小在500bp-1000bp之间。